LipofectAMINE2000 Fugene6转染细胞的效率比较_张宝

基因转染是分子生物学研究常用 的 技 术 ， 将 外 源 基 因 或 有 功 能 的 核 酸 片 段 ， 如 ｓｉＲＮＡ 、 反义寡核苷酸 等导入真核细胞，
［１，２］ ［３］
是研究其功能的一个重要手段。将外源 核 酸 导 入 真 核 细 胞 中 的 方法主要包括两类 ， 即病毒感染和非病毒转染。非病毒转染是指 将外源核酸利用化学试剂或物理方法导 入 细 胞 。 目 前 应 用 的 化 非脂质体 ［５，６］、 纳米材料 （ 如 学试剂层出不穷 ， 如带正电的脂质体 ［４］、 聚 乙 烯 亚 胺 ， ＰＥＩ）
012’3’Y 组 的 YKE 倍 )! Z@K@@E (& 而 <’3#99= 酶 活 性 是 012’3’Y 组
的 EKY 倍 *!Z@K@@Q(+ 与 012’3’Y 组相比 & 磷酸钙共沉淀法转染的
A
讨论
在基因治疗的过程中 & 或在研究基 因 功 能 的 实 验 中 & 常 须 将
0#8’&9: 酶活性在 7 组 间 无 差 别 & 但 <’3#99= 荧 光 素 酶 活 性 是 01[ 2’3’Y 组的 QKY 倍 *!\@K@7 (, 7K7
存在差异 ， 当进行转染实验时 ， 对于不同的细胞须根据情况进行选择。 ［ 关键词 ］
ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ ； Ｆｕｇｅｎｅ６ ； 转染 Ｑ７８
［ 文献标识码 ］
［ 中图分类号 ］
Ａ
Ｔｈｅ Ｔｒ ａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｃｏｍｐａｒ ｉｓｏｎ ｏｆ ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ ａｎｄ Ｆｕｇｅｎｅ６
１．２
ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ 转染
［ 收稿日期 ］ ［ 基金项目 ］ ［ 作者简介 ］ ［ 通讯作者 ］
２００６－ １２－ ０４
中国博士后科学基金项目 （ ２００５０３８１８７ ） 张宝 （ １９７３－ ） ， 男 ， 博士 ， 汕头大学医学院博士后 霍霞 ， （ Ｅ－ ｍａｉｌ ） ｘｈｕｏ＠ｓｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
张宝等 !"#$%&’()V+,-.7@@@ 与 012’3’Y 转染细胞的效率比较 胞按 >?@ 32 质粒 $6"ABCD #E 32 质粒 $<"BFG>/ 与 HIJ !" 7KL
!"#
分 别 用 "#$%&’()V+,-.7@@@ 和 012’3’Y 试 剂 & 将 质 粒 $6"XB
M%9 N " 的 O=O97 混和 $ 然后在 振 荡 过 程 中 加 入 适 量 的 7P5;F $ 静
ＨｅｐＧ２，
ＤＬＤ－ １ ｃｅｌｌｓ ｕｓｉｎｇ
ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ ａｎｄ Ｆｕｇｅｎｅ６ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ａｆｔｅｒ ４８ ｈ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ， ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｌｙｓｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ｄｅ－ ｔｅｃｔｅｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ： Ｉｎ ２９３Ｔ ｃｅｌｌｓ， ｔｈｅ Ｆｉｒｅｆｌｙ ａｎｄ Ｒｅｎｉｌｌａ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ａｓ ｍｏｒｅ ６．５， ５．６ ｆｏｌｄ ａｓ ｔｈａｔ ｏｆ Ｆｕｇｅｎｅ６ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ （ Ｐ＜０．００５ ） P ｗｈｉｌｅ ｉｎ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ， ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｐｏｆｅｃ－ ｔＡＭＩＮＥ２０００ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ａｓ ｍｏｒｅ ４４， ４９ ｔｉｍｅｓ ａｓ Ｆｕｇｅｎｅ６ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ （ Ｐ＜０．００１ ） P ｂｕｔ ｉｎ ＤＬＤ－ １ ｃｅｌｌｓ， ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ： Ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ ａｎｄ Ｆｕｇｅｎｅ６ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｅｌｌｓ． ｏｆ ｃｅｌｌｓ．
１
１．１
材料与方法
材料 脂 质 体 ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ 和 Ｆｕｇｅｎｅ６ 分 别 购 自 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
ｇｅｎｅ６ 比例进行转染 ； 转染 ４８ ｈ 后进行酶活性测定。 １．４
磷酸钙共沉淀转染 细胞接种同上述。 首先制备 ＤＮＡ 与 ＣａＣｌ２ 的复合物 ， 每孔细
和 Ｒｏｃｈｅ 公 司 ； Ｄｕａｌ－ Ｇｌｏ 荧 光 素 酶 分 析 试 剂 盒 购 自 Ｐｒｏｍｅｇａ 公 司 ； 余为国产分析纯试剂。
图!
"#$%&’()*+,-.!/// 和 012’3’4 转染 5’$67 细胞的酶活性比较 * !0#8’&9: 荧光素酶活性 "; !<’3#99= 荧光素酶活性
６４０
ＬＥＴＴＥＲＳ ＩＮ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ Ｖｏｌ．１８ Ｎｏ．４ Ｊｕｌ．， ２００７
生
物
技
术
通
讯
图 ３ ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ 和 Ｆｕｇｅｎｅ６ 转染 ＤＬＤ－ １ 细胞的酶活性比较 Ａ： Ｆｉｒｅｆｌｙ 荧光素酶活性 ； Ｂ： 荧光素酶活性
异 *!^@K@L (,
$6"XBCD ’ 启 动 子 为 胸 苷 激 酶 ( 和 $<"BFG>@ 转 染 7UAC 细 胞 & 于 >T R 后测定 0#8’&9: 和 <’3#99= 荧光素酶活性 & 结果如图 Q % 7 种酶
的 活 性 均 以 "#$%&’()V+,-.7@@@ 为 最 高 & 其 中 0#8’&9: 酶 活 性 是
６３８
文章编号 ： １００９－ ０００２（２００７）０４－ ０６３８－ ０３
ＬＥＴＴＥＲＳ ＩＮ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ Ｖｏｌ．１８ Ｎｏ．４ Ｊｕｌ．， ２００７
生
物
技
术
通
讯
研究报告
ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ 与 Ｆｕｇｅｎｅ６ 转染细胞的效率比较
张宝 １ ， ２ ， 霍霞 １ ， 徐锡金 １ ， 齐宗利 １ ， 郑谨 １ ， 彭琳 １
的脂质体主要为 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎｅ 公 司 开 发 的 ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ 等 ； 非 脂 质 体 型 的 转 染 试 剂 ， 以 Ｒｏｃｈｅ 公 司 的 Ｆｕｇｅｎｅ６ 为 代 表 ； 而 磷 酸钙共沉淀的方法是经典的基因转移的方法。 为了获得好的转染效果 ， 我们 采 用 荧 光 素 酶 活 性 测 定 的 方 法 ， 比较了上述 ３ 种转染方法。首先选择常用的 ２９３Ｔ 细胞 ， 该细 胞株生长旺盛 ， 容易被转染。 Ｆｕｇｅｎｅ６ 与 ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ 与
［７，８］
ｐＧＬ３－ ＴＫ ／ｐＧＬ３－ Ｅｎ Ⅱ ［ 含 萤 火 虫 （ Ｆｉｒｅｆｌｙ） 荧 光 素 酶 基 因 ］ 、 ５ ｎｇ
质 粒 ｐＲＬ－ ＳＶ４０ （ 含 Ｒｅｎｉｌｌａ 荧 光 素 酶 基 因 ） 与 ２ μ Ｌ Ｌｉｐｏｆｅｃ－
ｔＡＭＩＮＥ２０００ 比例进行转染 ； ６ ｈ 后更换培养液 ， 转染 ４８ ｈ 后应
7
7KQ
结果
转染 7UAC 细胞的酶活性分析 分别用 "#$%&’()V+,-.7@@@#O=O97 和 012’3’W 试剂 & 将质粒
7KX
转染 ]"]BQ 细胞的酶活性分析 分 别 用 "#$%&’()V+,-.7@@@ 和 012’3’Y 试 剂 & 将 质 粒 $6"XB
CD 和 $<"BFGS@ 转 染 ]"]BQ 细 胞 & 于 ST R 后 测 定 0#8’&9: 和 <’3#99= 荧光素酶的活性 & 结果见图 X&7 种转染方法无统 计 学 差
（ Ｐ＜０．００５ ） ； 在 ＨｅｐＧ２ 细胞中 ， ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ 转染组的 Ｆｉｒｅｆｌｙ 和 Ｒｅｎｉｌｌａ 荧 光 素 酶 活 性 分 别 是 Ｆｕｇｅｎｅ６ 转 染 组 的 ４４ 和
４９ 倍 （ Ｐ＜０．００１ ） ； 而在 ＤＬＤ－ １ 细胞中 ， 两者无差别。结论 ： 转染试剂 ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ 和 Ｆｕｇｅｎｅ６ 对不同细胞的转染效果
用 Ｄｕａｌ－ Ｇｌｏ 荧光素酶分析试剂盒进行酶活性测定。
等 。 本 研 究 的 主 要 目 的 ， 是 比 较 Ｌｉｐｏｆｅｃ－
１．３
Ｆｕｇｅｎｅ６ 转染
细胞接种与 ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ 转染相同。１２ ｈ 后 ， 每孔细
ｔＡＭＩＮＥ２０００ 和 Ｆｕｇｅｎｅ６ 的转染效果。
胞 按 ４９０ ｎｇ 质 粒 ｐＧＬ３－ ＴＫ、 ５ ｎｇ 质 粒 ｐＲＬ－ ＳＶ４０ 与 ２ μ Ｌ Ｆｕ－
１． 汕头大学 医学院中心实验室 ， 广东省免疫病理学重点实验室 ， 广东 汕头 ５１５０３１P ２． 南方医科大学 生物化学教研室 ， 广东 广州 ５１０５１５
［ 摘要 ］ 目的 ： 比较 ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００ 与 Ｆｕｇｅｎｅ６ 转染细胞的效果。方法 ： 将含有 Ｆｉｒｅｆｌｙ 和 Ｒｅｎｉｌｌａ 荧光素酶基因的质粒
［ Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ］
Ｔｈａｔ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ｎｅｅｄｅｄ ｔｏ ｃｈｏｏｓｅ ｐｒｏｐｅｒ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ａｇｅｎｔｓ ｄｅｐｅｎｄｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｔｙｐｅ