高速逆流色谱法从秦艽地上部分制备分离龙胆苦苷
宁夏六盘山产地秦艽龙胆苦苷提取工艺
宁夏六盘山产地秦艽龙胆苦苷提取工艺【摘要】目的优选秦艽的最佳提取工艺。
方法采用正交试验法，以提取物中的龙胆苦苷为考察指标，对影响龙胆苦苷提取工艺的因素进行了研究。
结果龙胆苦苷的最佳提取工艺为 50%乙醇，8倍量，回流提取3次，每次1h。
结论该工艺下的秦艽龙胆苦苷含量提取可达6.3%。
【关键词】正交试验; 秦艽; 龙胆苦苷; 提取工艺秦艽为龙胆科植物秦艽(Gentianna macrophylla Pall)、麻花秦艽(G.straminea Maxim) 、粗茎秦艽(G.crassicaulis Duthieex Burk) 或小秦艽(G. dahurica Fisch)的干燥根[1]，是我国重要的传统中药，具有祛风湿，清湿热，止痹痛的作用，用于风湿痹痛，筋脉拘挛，骨节酸痛，日哺潮热，小儿疳积发热等，主产于陕西、甘肃、宁夏、四川、内蒙古，陕西、甘肃两省是其地道产区[2]。
秦艽主要含有裂环环烯醚萜苷类、生物碱、甾醇苷类等[3]。
龙胆苦苷属于裂环环烯醚萜苷类，是秦艽的主要活性成分。
本次实验根据回流提取方法，就秦艽龙胆苦苷在提取溶剂浓度、溶剂用量、提取时间、提取次数四方面进行四因素三水平的正交设计并通过HPLC对提取物中龙胆苦苷进行含量测定，来确定中药材秦艽中龙胆苦苷的最佳提取工艺。
1 仪器及试药1.1 仪器 LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津)、F W135型中药材粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)、210电子分析天平(日本岛津)、RE-52A真空旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、HH.SYII-NiZ-C电热恒温水浴锅(北京长源实验设备厂)、SHB-III循环式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)、WFO-700W送风定温干燥箱(上海爱郎仪器有限公司)。
1.2 试药秦艽中药材(购自宁夏明德饮片有限公司)、龙胆苦苷标准品(购自中国药品生物制品检定所)、甲醇为色谱纯(天津市瑞金特化学品有限公司)、乙腈为色谱纯(天津福晨化学试剂厂)、无水乙醇为分析纯(天津市盛奥化学试剂有限公司)。
HPLC测定秦艽中的生物碱和龙胆苦苷
HPLC测定秦艽中的生物碱和龙胆苦苷
韦欣;贺宏升;王曙
【期刊名称】《华西药学杂志》
【年(卷),期】2006(21)1
【摘要】目的建立同时测定秦艽中秦艽甲素、秦艽丙索和龙胆苦苷含量的方法。
方法采用HPLC法。
结果秦艽甲素在3．28-16．92μg内线性关系良好
（R^2=0．9991），平均加样回收率为94．42％，RSD=2．04％；秦艽丙素在0．05～4．87μg内线性关系良好（R^2=0．9994），平均加样回收率为95．87％，RSD=1．66％；龙胆苦苷在79—390μg内线性关系良好
（R^2=0．9994），平均加样回收率为92．86％，RSD=2．19％。
结论该法简便、准确、重复性好，为秦艽药材的评价提供了含量测定方法。
【总页数】3页(P84-86)
【关键词】秦艽;高效液相色谱法;秦艽甲素;秦艽丙素;龙胆苦苷;生物碱
【作者】韦欣;贺宏升;王曙
【作者单位】四川大学华西药学院;北京昌平区医院药剂科
【正文语种】中文
【中图分类】R927
【相关文献】
1.HPLC法同时测定秦艽中龙胆苦苷和牛膝中蜕皮甾酮的含量 [J], 阮洪生;苗晶囡;马丁;刘树民
2.HPLC法测定藏药白花秦艽不同部位中龙胆苦苷的含量 [J], 陈静
3.HPLC法测定秦艽总苷提取物中龙胆苦苷的含量 [J], 崔春利;王敏;唐志书;郭东艳;赵海峰
4.HPLC法测定果洛满掌地区粗茎秦艽中龙胆苦苷的含量 [J], 陈湘宏;李向阳
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
应用高速逆流色谱分离中药中有效成分及质谱结构研究
应用高速逆流色谱分离中药中有效成分及质谱结构研究I. 研究背景在中医药学的发展过程中，中药已经成为了人们日常生活中不可或缺的一部分。
随着科技的进步，人们对中药的研究也越来越深入，尤其是对中药中有效成分的提取和分离技术。
高速逆流色谱(HSLC)作为一种高效的分离技术，已经在中药研究领域得到了广泛应用。
本研究旨在通过HSLC技术分离中药中的有效成分，并利用质谱技术对其进行结构解析，以期为中药的现代化研究和开发提供理论依据和技术支撑。
在过去的几十年里，我国中医药事业取得了世界公认的辉煌成果。
然而随着现代医学的发展，中医药面临着前所未有的挑战。
为了更好地传承和发扬中医药文化，我们需要不断地对中药进行创新研究，提高其药效和安全性。
高速逆流色谱作为一种新兴的分离技术，具有操作简便、分离效率高、适用范围广等优点，为中药的有效成分提取和分离提供了有力保障。
质谱技术作为现代分析科学的重要手段，已经在生物医药领域取得了显著的应用成果。
通过对中药中有效成分的结构解析，我们可以更深入地了解其药理作用机制，为新药的研发提供理论依据。
此外质谱技术还可以用于中药的质量控制和评价，确保药品的安全性和有效性。
中药中有效成分的研究意义及现状在我们的日常生活中，中药已经成为了许多人的日常调理和疾病治疗的重要手段。
而其中最让人着迷的，莫过于中药中那些神奇的有效成分。
这些成分不仅能够治病救人，还能够为我们的生活带来诸多健康益处。
因此研究中药中有效成分的意义不言而喻。
然而尽管中药有着悠久的历史和丰富的经验，但在现代科学技术的发展下，我们对中药中有效成分的认识仍然有限。
这主要是因为中药中的有效成分种类繁多，分离提取难度较大，而且很多成分的结构性质尚不清楚。
因此如何高效、准确地从中药中提取出这些有效成分，成为了一个亟待解决的问题。
近年来随着高速逆流色谱等现代分离技术的不断发展，我们对中药中有效成分的研究取得了一定的进展。
通过对大量中药样品的分析，我们已经发现了许多具有潜在药用价值的化合物。
高效液相色谱法测定秦艽不同部位龙胆苦苷的含量
高效液相色谱法测定秦艽不同部位龙胆苦苷的含量
呼延玲;解娟;陈世虎
【期刊名称】《中国中医药信息杂志》
【年(卷),期】2005(012)010
【摘要】目的测定秦艽不同部位龙胆苦苷的含量.方法以C18反相柱为色谱柱,甲醇-水(1:4)为流动相.检测波长254 nm,用甲醇作提取剂.结果秦艽药材芦头中含有龙胆苦苷,但含量仅为根外皮部的10%,根心材龙胆苦苷约为外皮部的2倍.结论秦艽龙胆苦苷主要集中在根心材部分.
【总页数】2页(P38-39)
【作者】呼延玲;解娟;陈世虎
【作者单位】陕西省人民医院,陕西,西安,710068;陕西省人民医院,陕西,西
安,710068;陕西省人民医院,陕西,西安,710068
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.HPLC法测定藏药白花秦艽不同部位中龙胆苦苷的含量 [J], 陈静
2.HPLC测定管花秦艽不同部位龙胆苦苷的含量 [J], 曹晓燕;王喆之
3.超高效液相色谱法测定四川松潘3种秦艽中马钱苷酸和龙胆苦苷的含量 [J], 张明燕;金琰琰;方成武;王权;马宗华;杨青山;韩燕全;孟楣
4.高效液相色谱法测定六叶龙胆不同部位的龙胆苦苷含量 [J], 孙晓;郭耀武;杨瑞瑞
5.麻花秦艽不同组织部位可培养内生菌群结构及其与龙胆苦苷含量的相关性 [J], CHEN Xin;LI Qi;CAO Qianqian;HUANG Chunping
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
制备型高效液相色谱的实验方法
制备型高效液相色谱的实验方法陈明杰;危凤【期刊名称】《实验科学与技术》【年(卷),期】2012(010)004【摘要】Preparative high performance liquid chromatography has been widely applied in medicine, fine chemical and food, particu- larly applicable to separate high added value and high purity products. Tbis paper introduced the experiment teaching of preparative high performance liquid chromatography in separation of tocopherol, explored how to set up teaching content, and the ways of improving students ＂abilities to analyze and solve problems. The stvdents＇application abilities were strengthened.%制备型高效液相色谱已广泛应用于医药、精细化工、食品等行业,特别适用于分离高附加值、高纯度的产品。
通过制备型高效液相色谱分离生育酚各组分的教学实践,探讨了制备型高效液相色谱实验教学内容的设置,以及通过实验教学提高学生独立分析和解决问题能力的方法,强化了学生的应用能力。
【总页数】3页(P23-25)【作者】陈明杰;危凤【作者单位】浙江大学宁波理工学院生物与化学工程分院,浙江宁波315100;浙江大学宁波理工学院生物与化学工程分院,浙江宁波315100【正文语种】中文【中图分类】O658.11【相关文献】1.高速逆流色谱结合制备型高效液相色谱法分离制备大豆皂苷单体 [J], 黄玉艾;严明霞;赵大云2.制备型高效液相色谱法制备和厚朴酚与厚朴酚 [J], 刘霞;唐骁爽;汪永强;葛红丽;吕海燕;唐玉海3.制备型高效液相色谱法从秦艽中分离制备龙胆苦苷 [J], 张兴旺;陶燕铎;梅丽娟;邵赟;文怀秀;赵晓辉4.制备型高效液相色谱分离纯化天麻素方法研究 [J], 彭礼军;聂昌平;田民义;王慧娟;周英5.实验动物病毒感染监测试剂的研制——Ⅰ、Ⅲ型小鼠肝炎病毒、仙台病毒、Ⅱ型呼肠孤病毒、痘苗病毒抗原和抗体制备方法 [J], 单光辉;姚亚夫;罗翠珍;周崇蓉;黄翔因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
秦艽中龙胆苦苷的提取及分离纯化工艺研究的开题报告
秦艽中龙胆苦苷的提取及分离纯化工艺研究的开题报告
随着现代医学的不断发展，从天然植物中提取有效成分已成为一种重要的研究方向。
秦艽是传统中药之一，具有清热解毒、凉血止血、消肿止痛等功效，被广泛应用
于临床。
其中，中龙胆苦苷是秦艽的主要成分之一，具有良好的药理学效应，已成为
现代药物研发中备受关注的成分。
因此，本项目旨在研究秦艽中龙胆苦苷的提取及分离纯化工艺，为后续的药物研发提供有力的支持。
首先，本项目将采用超声波辅助提取技术，通过优化提取条件，提高提取效率。
具体步骤如下：将秦艽粉末加入适量的乙醇水溶液中，按照一定降温升温的曲线进行
超声波处理，最终得到提取液。
通过响应面法优化实验条件，获得最佳提取条件。
接下来，将对提取液进行初步纯化，采用活性炭吸附和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行分离，获得较纯的龙胆苦苷。
最后，采用制备高效液相色谱技术进行氧化分离，对初步分离得到的龙胆苦苷进行纯化，获得高纯度的龙胆苦苷。
通过本项目的研究，可以建立起较为完整的秦艽中龙胆苦苷提取及分离纯化工艺，为进一步药物研发提供有力的支持。
同时，本项目也为中药材的深加工提供了新的思
路和方法。
高速逆流与制备色谱技术在射干有效成分分离中的应用的开题报告
高速逆流与制备色谱技术在射干有效成分分离中的应用的开题报告一、研究背景射干作为一种常见的中草药，广泛应用于临床中，具有清热解毒、活血化瘀等功效。
然而，射干中含有多种活性成分，如黄酮类化合物、多糖等，这些成分具有不同的结构和性质，因此需要采用有效的分离提取技术进行分离纯化。
高速逆流色谱（HSCCC）作为一种新兴的分离技术，具有无需固定填料、高分离效率、不破坏样品等优点，已经被广泛应用于中草药有效成分的分离纯化中。
另外，制备色谱也是常用的中草药有效成分分离技术之一，可以通过优化条件获得高纯度的有效成分。
二、研究内容和意义本次研究的内容为采用HSCCC技术和制备色谱技术对射干中的有效成分进行分离纯化，并对所得到的纯化产物进行结构分析和生物活性研究，旨在探讨这两种技术在中草药有效成分分离中的应用，并为射干的深入研究提供基础数据。
三、研究方法和步骤1、样品制备：选取干燥的射干样品，粉碎并筛选过滤得到粉末状样品。
2、HSCCC分离：采用对流式高速逆流色谱对射干样品进行分离纯化，考察流速、回转速度和两相体积比等条件对分离效果的影响。
3、制备色谱分离：采用制备色谱对HSCCC所得产物进行进一步纯化，考察柱填料种类、洗脱剂种类及浓度对分离效果的影响。
4、结构分析和生物活性研究：通过质谱和核磁共振进行纯化产物的结构鉴定，通过抑菌试验等进行生物活性评价。
四、预期结果通过采用HSCCC和制备色谱技术对射干中的有效成分进行分离纯化，预期可以得到高纯度、高产率的有效成分，并对其结构和生物活性进行分析研究，为射干的深入开发利用提供基础数据，同时探讨并发展中草药有效成分分离纯化的技术和方法。
不同提取方法对秦艽中龙胆苦苷提取率的影响
不同提取方法对秦艽中龙胆苦苷提取率的影响张兴旺1,2,于瑞涛1,2,梅丽娟1,邵斌贝1,陶燕铎1* (1.中国科学院西北高原生物研究所,青海西宁810008;2.中国科学院研究生院,北京100049)摘要 [目的]建立R P -H P L C 法研究不同提取方法对秦艽中龙胆苦苷提取率的影响,为秦艽药材的合理开发利用提供理论依据。
[方法]采用C 18色谱柱(4.6m m ×250m m,5μm ),以甲醇∶0.3%H 3PO 4=30∶70(V /V )为流动相,流速:1.0m l/m in,柱温:30℃,检测波长:270nm 。
[结果]龙胆苦苷在0.9～2.1μg 范围内呈良好的线性关系,r =0.9991,平均回收率为97.6%,R SD 值为1.02%。
[结论]动态热回流提取法的提取效率最高。
关键词 秦艽;提取方法;龙胆苦苷;提取率中图分类号 S567.23+9 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2009)17-07984-02S tud y on th e E ffe c ts o f D iffe re n t E x tra c t ion M e th o d s on th e E x tra c t ion R a te o f G e n t iop ic ro s id e from G en tiana stra m inea M a x i m.ZHANG X in g -w an g e t a l (N o r thw e st In s titu te o f P la teau B io log y ,C h in ese A cadem y o f S c ien ces ,X in in g ,Q in gh a i 810008)A b s tra c t [O b je ctive]T h e re sea rcha i m ed to s tudyth e e ffe cts o f diffe ren t e x tra ction m e th od s onth e e x tra ctionra te o f gen tiop icros ide by es tablish in g R P -H P L C m e th od an d p ro v ide th eo re tica l fou nda tionfo r u tiliza tiono f G en tiana str am in ea M ax i m.[M e th od]E xper i m en ts w e re pe r fo rm ed on C 18(4.6m m ×250m m,5μm )co l um n ,w ith CH 3O H ∶0.3%H 3PO 4(30∶70)a s m ob ile ph ase a t a flowra te o f 1.0m l/m i n.T h e co lum ntem pe ra tu re w a s 30℃and th e de ter-m in a tion w a ve len g th w a s 270nm.[R esu lt]T h e lin ea r ran ge w as 0.9-2.1μg (r =0.9991)an d th e ave rage re cove ry w a s 97.6%(R SD =1.02%).[C on clu sion]T h e e x tra ction o f g en tiop icro side from G en tiana stra m inea M ax i mby re flu x w ith M agn e tic S tir w a s th e m os t e fficien t .K e y w o rd s G entiana stra m inea M ax i m.;E x traction m e th od s ;G en tiop icros i de ;E x tractionra te基金项目 国家科技攻关项目(0713351611)。
一种从秦艽中提取龙胆苦苷的分离纯化工艺[发明专利]
![一种从秦艽中提取龙胆苦苷的分离纯化工艺[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/238476c6dd36a32d72758126.png)
专利名称：一种从秦艽中提取龙胆苦苷的分离纯化工艺专利类型：发明专利
发明人：吴丽君,张丽娟,李建林,杨仲科
申请号：CN201810946249.X
申请日：20180821
公开号：CN109053830A
公开日：
20181221
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种从秦艽中提取龙胆苦苷的分离纯化工艺，属于龙胆苦苷的提取分离纯化技术领域，首先进行提取溶剂的选择、提取温度的控制，通过对不同提取溶剂和不同提取温度进行正交试验确定出最佳的提取溶剂为纯化水，利用大孔树脂对提取液进行初步的分离纯化时应选用何种树脂，利用大孔树脂进行粗分离时，洗脱剂的种类的选择，洗脱剂浓度的确定，洗脱剂用量的确定，洗脱液收集开始点和结束点的确定，利用D101大孔树脂对洗脱液进行进一步除杂和脱水处理，在对得到的洗脱液进行重结晶，本发明利用D101大孔树脂的分离能力和有效成分在溶剂中溶解度不同分离纯化得到高纯度的龙胆苦苷，提高了龙胆苦苷的提取率，分离纯度并提高总体收率。
申请人：宁县恒瑞康生物科技有限公司
地址：745000 甘肃省庆阳市宁县焦村乡任村村
国籍：CN
更多信息请下载全文后查看。
不同溶剂对秦艽中龙胆苦甙提出率的影响
不同溶剂对秦艽中龙胆苦甙提出率的影响
刘力
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】1996(018)009
【摘要】用不同溶剂作为秦艽的提取溶媒，通过热提与冷浸，用高效液相色谱法
测定秦艽提取液中龙胆苦甙的含量，比较它们对龙胆苦甙提出率的影响。
结果表明，秦艽中龙胆苦甙提出率，醇提高于水提，冷浸高于热提。
７０％乙醇冷提取最为适宜。
【总页数】2页(P46-47)
【作者】刘力
【作者单位】上海曙光医院
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.不同提取方法对秦艽中龙胆苦苷提取率的影响 [J], 张兴旺;于瑞涛;梅丽娟;邵谮;
陶燕铎
2.薄层扫描法测定黑皮秦艽中龙胆苦甙的含量 [J], 叶基荣;赖东美;张金龙
3.不同提取方法对宁夏六盘山栽培秦艽中龙胆苦苷提取率的影响 [J], 郝彩琴;冷晓红;郭鸿雁;刘美杰
4.秦艽药材中龙胆苦甙的含量测定 [J], 孙文基
5.粗茎秦艽不同部位龙胆苦甙含量的分析 [J], 李建民;李福安;李向阳;张华;魏全嘉;王祖训;弥兰青;肖长宁
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC法测定秦艽总苷提取物中龙胆苦苷的含量
HPLC法测定秦艽总苷提取物中龙胆苦苷的含量崔春利;王敏;唐志书;郭东艳;赵海峰【摘要】Objective To establish a quantitative method for determination of gentiopicroside in the total iridoid giucosidcs (TIG) extracted from Genliana macrophylla Pall. Methods HPLC analysis was performed on a Hypcrsil C18 column (250 mmX4. 6 mm, 5 |im| with isocraticc1ution,mcthano1-water (25 : 75) as the mobile phase at a flow-rate of 1. 0 ml Min~' , with detection at 272 nm. Results The regression equations revealed good linear relationships between the ratios of peak-area to concentrations. Gentiopicroside was good linearity in the range of 0. 657-3. 942 jng(r = 0. 999 3) ,and the average recovery was 98. 14% , with RSD 0. 87% (re= 6). Conclusion The method was simple,accurate, reliable,and suitable for the quantitative evaluation of gentiopicroside in the TIG of Genliana macrophylla Pall.%目的建立HPLC测定秦艽总苷提取物中龙胆苦苷的含量.方法采用HPLC法,以C18柱为色谱柱,以甲醇-水(25∶75)为流动相,检测波长为272 nm,流速为1.0 mL·min-1.结果龙胆苦苷在0.657～3.942 μg范围内线性关系良好,相关系数为0.999 3;平均回收率为98.14%,RSD为0.87%.结论该方法简便、准确,结果可靠,可用于秦艽总苷提取物的质量控制.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2012(027)002【总页数】3页(P106-108)【关键词】秦艽总苷提取物;高效液相色谱法;龙胆苦苷【作者】崔春利;王敏;唐志书;郭东艳;赵海峰【作者单位】陕西中医学院,咸阳,712046;陕西中医学院第二附属医院,咸阳,712000;陕西中医学院,咸阳,712046;陕西中医学院,咸阳,712046;陕西中医学院,咸阳,712046【正文语种】中文【中图分类】R284.1秦艽系龙胆科植物秦艽(Gentiana macrophylla Pall.)的干燥根;味辛、苦，性平，入胃、肝、胆经；具有祛风湿、清湿热、止痹痛、退虚热之功；主要用于治疗风湿痹痛、中风半身不遂、筋脉拘挛、骨节酸痛等。
HSCCC法分离制备龙胆有效成分龙胆苦苷
Ｐｒ ｐａ ａｔｖ ｐ ｒ ｔｏ ｏ ｎ ｉ ｉ ｒｎ ｆ ｏ Ｇｅ ｔａ ｃ ｒ ｎｇ ｅ ｒ ｉ ｅ Ｓｅ ａ ａ ｉ ｎ ｆＧｅ ｔｏｐ ｃ ｉ ｒ ｍ ｎ ｉｎａ ｓ ａｂ ａ Ｂｕ ｅ ｂ ｇ Ｓｐ ｅ Ｃｏｕ ｅ ｒ ｅ ｙ Ｈｉｈ ｅ ｄ ｎｔ ｒ Ｃｕ ｒ ｎｔＣｈｒ ｍ ａ ｏ ｒ ｐ ｏ ｔ ｇ ａ ｈｙ
血症 大 鼠血 管 内皮 的 保 护 作 用 ．中 药 材 ，０ ６ ２ （ ） ２０ ，９ ８ ：
８ｌ ８】 ０— ３．
８ ］武彩霞 ， 丽 ， 徐 魏欣 冰， ．生姜有效部位对实验性 高 等
脂 血痱大 鼠血清血 栓素 Ａ 、 ２ 前列环 素和脂 质过 氧化 的
影 响 ．中 国 药 学 杂 志 ，０ ６ ４ （４ ：０ ６１６ ． ２０ ， １ １ ） １６ —０ ８
摘 要 目的： 采用高速逆流 色谱技术 （ Ｓ Ｃ ） Ｈ Ｃ Ｃ 从龙胆 中分离制备 高纯度 龙胆苦 苷。方法 ： 利用 制备 型高速逆
流 色谱 仪， 以氯仿 一 甲醇一 正丁醇一 ５４ ２４ 为溶剂系统 对龙胆 甲醇粗 提物进 行分 离 ， 相为 固定相 ， 水（ ： ： ： ） 上 下相 为流动
Ａｂｔ ｃ Ｏ ｊｃ ｖ ：Ｈｇ ｐｅ ｏｎｅ ｅｒ ｎ （ｒｍ ｔ ｒｐｙｗ ｓｓｃｅｓ ｌ ｐ ｌ ｄｔ ｔｅｐｅａａ ｖ ｅａａｏ ｆｔ ｓｒ ｔ ｂ ｔ ｅ ｉ ｓｅｄｃｕ ｔｌ ｕｒ ｔ￣ ｏ ａ ｇａ ｈ ａ ｕｃｓｆ ｌ ａｐｉ ｚｐｒｔ ｅｓｐ ｒｔｎｏ ｅ ａ ｅｉ ｈ ’ ｅ ｈ ｏ ｕｙ ｅ ｏｈ 。 ｉ ｉ ｈ
高速逆流色谱法在中药有效成分分离中的应用研究
高速逆流色谱法在中药有效成分分离中的应用研究高速逆流色谱是近几年发展起来的新型色谱技术，由于其独特之处已被广泛应用于各个领域，本文就人们关心的热点中药有效成分的分离，采用新的色谱技术高速逆流色谱技术分离取得的成就进行总结，并展望未来的前景。
标签：高速逆流色谱法；中药有效成分；分离；应用近年来，随着中国经济的高速发展，中草药已经越来越受到人们的关注。
而中药的有效成分复杂，如何获得高效的有效成分，分离效果成为研究的热点。
高速逆流色谱法（high-speed countercurrent chromatography，HSCCC）具有分析能量大、分离效率高、结果重现性好等其他色谱无法替代的优点。
现高速逆流色谱技术这种新型的液-液分配色谱已广泛应用于医药、农林、化工等各领域[1]。
应用新型的高速逆流色谱分离成分复杂的中药有效成分可取得良好的效果，具体总结如下。
1工作原理高速逆流色谱HSCCC是应用不同物质在固液两相中的分配系数不同进行分离。
一台高速逆流色谱仪是由输液泵、分离柱、检测器、工作站、数据采集系统及馏分收集器等组成。
首先选择固定相，是将两相预先平衡好的溶剂中的一相填充满螺旋管柱，将流动相以一定的流速泵入高速旋转的螺旋管柱内。
在有液体流动相流出时，说明体系达到平衡，此时将样品注入高速逆流色谱体系中，螺旋管分离柱将依据不同成分在固液两相中的分配系数不同达到分离，依据工作站和数据采集系统将分离后的结果进行记录并积分处理。
在仪器运行的时候，可调节溶剂、固定相、流动相、样品浓度、柱温、洗脱方式、进样方式、流动相的流速及转速等使分离效果达到最好。
还需要根据所检测样品的特点，选择不同的检测器，UV-VIS（紫外-可见光检测器）、ELSD（蒸发光散射检测器）或者质谱检测器等[2]。
2中药的有效成分各种植物中所含的有效成分分类为生物碱、黄酮、苷、萜、蒽醌、木脂素、香豆素、有机酸等。
3高速逆流色谱分离各类中药有效成分3.1生物碱类中药的有效成分中生物碱是重要的一类化学成分，其中的天然含氮化合物是重要的疾病治疗和药物发展的物质。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
高速逆流色谱法从秦艽地上部分制备分离龙胆苦苷皇甫泽坤 倪士峰 孙文基3(西北大学陕西省生物医药重点实验室,西安710069)摘 要 采用高速逆流色谱法分离纯化秦艽地上部分中的龙胆苦苷。
溶剂系统为V (氯仿)∶V (甲醇)∶V (水)=4∶4∶2,上相为固定相,下相为流动相,转速为800r/m in,流速为2mL /m in 。
所得产物经LC 2MS 分析为龙胆苦苷,纯度经高效液相色谱分析为94.0%(峰面积归一化法)。
在保证分离效果的前提下,增大进样量,摸索制备分离龙胆苦苷的高速逆流色谱条件,为用高速逆流色谱法大量制备龙胆苦苷提供了一个可行方法。
关键词 高速逆流色谱法,龙胆苦苷,秦艽 2006209204收稿;2006212212接受3E 2mail:huaiyi1013@1 引 言秦艽为龙胆科植物大叶秦艽(Gen tiana m acrophylla Pall )、麻花秦艽(Gentiana stram inea M axi m ),粗茎秦艽(Gentiana crassicaulis D u thie ex B u rk )和小秦艽(Gentiana dahurica F isch )的总称,是我国重要的传统药材。
《神农本草经》列其为中品,“秦艽主寒热邪气,寒湿风痹肢节痛,下水,利小便。
”[1]其主要成分龙胆苦苷有抗炎、镇痛、保肝、利胆等作用[2],是在研中药的一类新药,需求量较大。
目前,秦艽属于濒危药材[3],资源匮乏,因此寻找其代替品及扩大用药部位成了一个需要解决的问题。
研究发现,龙胆苦苷不只存在于根中,地上部分亦含有大量龙胆苦苷[4],而传统柱色谱法分离龙胆苦苷周期长,试剂消耗量大,所用固定相对样品有不可逆性吸附作用,并且不容易提纯。
高速逆流色谱不用任何固体支撑或载体,克服了传统分离方法对样品的不可逆性吸附作用的缺点,因而样品回收率高。
同时,还具有应用范围广、仪器操作简单、分离量大等优点,因此被广泛应用于天然产物的分离制备[5]。
本实验采用高速逆流色谱法,优化了分离龙胆苦苷的最佳溶剂体系,最终从秦艽地上部分粗提物中一次性分离得到纯度94.0%以上的龙胆苦苷150mg,达到了制备分离的目的。
2 实验部分2.1 仪器与试剂T BE 2300A 高速逆流色谱仪(深圳同田生化技术有限公司);聚四氟乙烯管缠绕在3个水平轴上形成的螺旋管(2.6mm i .d .,分离体积300mL );20mL 进样圈;柱塞式泵(S 系列,北京圣益通技术开发有限公司);HX 21050恒温循环器(北京博医康实验仪器有限公司);N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所);LC 2MS/MS 分析仪(W aters );H I T ACH I 高效液相色谱仪(UV 2V I S Detect or L 2720,Pu mp L 27110);D 2101型大孔树脂(西安蓝深公司)。
秦艽地上部分采自陕西省陇县八渡镇,经西北大学王亚洲教授鉴定为龙胆科植物大叶秦艽(Gentiana m acrophylla Pa ll );甲醇、氯仿为分析纯,水为纯净水。
2.2 样品制备秦艽地上部分500g 加15倍水煎煮,过滤,药渣如法煎煮2次,合并滤液并浓缩。
浓缩液过装有300g D 2101型大孔树脂的柱子,依次用水、30%乙醇洗脱,洗脱液用薄层色谱法检验是否含有龙胆苦苷,将薄层色谱法检出含有龙胆苦苷的洗脱液合并,浓缩至干即为样品。
2.3 两相溶剂的选择选择通用体系氯仿2甲醇2水(4∶X ∶2,X =1～4,V /V )[6]及其相近体系V (氯仿)∶V (甲醇)∶V (水)=第35卷2007年6月 分析化学(FE NX I HUAXUE ) 研究简报Chinese Journal of Analytical Che m istry 第6期883～8864∶4∶2为考察体系,分配系数的测定方法为“摇瓶法”。
参照文献[7],先配制一定比例的两相溶剂体系,并充分振荡,静置过夜后,分别取出1mL 的上相和下相,置于已装入约2mg 待分离样品的离心试管中,轻微振荡使其完全溶解。
约2h 后,分离上、下相。
用高效液相色谱法测定上相和下相中龙胆苦苷的浓度,龙胆苦苷在各溶剂上相和下相的浓度之比即为分配系数K 。
2.4 高效液相色谱分析采用高效液相色谱法分析样品成分和经过HSCCC 分离纯化后的龙胆苦苷纯度。
HP LC 分析条件为:大连江申Y WJ C 18色谱柱(5μm ,250mm ×4.6mm i .d .);检测波长为254n m;流动相为甲醇2水(25∶75,V /V ),流速1.0mL /m in 。
2.5 LC 2M S 色谱及质谱条件色谱柱:XTerra (C 18,5μm ,2.1mm ×150mm i .d .);流动相为甲醇2水(20∶80,V /V );仪器为Quattr o Pre m ier 质谱仪。
电离方式为ESI 选择性正离子检测;扫描方式为全程扫描,子离子扫描。
2.6 高速逆流色谱分离条件在2000mL 分液漏斗中配制氯仿2甲醇2水(4∶4∶2,V /V ),充分振摇后静置24h 分相。
上相为固定相,下相为流动相。
上下相以超声波脱气15m in,主机转速为800r/m in,流动相流速为2.0mL /m in,检 图1 秦艽地上部分粗提物HP LC 分析图谱Fig .1 Chr omat ogra m of the crude extract of the aerial part of Gentiana m acrophylla测波长为254n m 。
2.7 最大进样量考察进样量以50mg 起,以50mg 为梯度,逐次加大进样量,直到样品不能达到基线分离为止。
3 结果与讨论3.1 样品的高效液相色谱图30%乙醇洗脱物的色谱图(图1)显示,洗脱物中除龙胆苦苷外至少含有4种化合物。
面积归一化法测定龙胆苦苷含量为5112%。
3.2 溶剂体系选择测得龙胆苦苷在6种体系中的分配系数K 如表1。
表1 GPS 在6种溶剂系统中的分配系数(K )Table 1 Partiti on coeficient (K )of genti op icr oside (GPS )in six s olvent syste m s体系(氯仿∶甲醇∶水)Syste m (chl or of or m ∶methanol ∶water )4∶1∶24∶2∶24∶3∶24∶4∶24∶5∶35∶5∶3龙胆苦苷KK value of GPS 01046010860122017501360132 在高速逆流色谱法的应用中,最关键和最难解决的问题是溶剂系统的选择。
不同的溶剂系统具有不同的上、下相之比,并且粘度、极性、密度等性质的差异,均会对相同的成分产生不同的溶解、分配能力,形成分配系数的差异,对分离效果产生一定的影响。
根据色谱理论,利用HSCCC 进行样品分离的必要条件是样品在互不相溶的两相中具有合适的分配系数。
理想的分配系数应在0.67～1.50之间[8],可利用HP LC 、EC 、T LC 来测定。
本研究采用HP LC 测定,经过实验,最终选择了一种较为满意的溶剂系统,即:氯仿2甲醇2水(4∶4∶2,V /V )体系。
3.3 最大进样量考察进样量从50mg 递增至300mg 时均分离良好;进样量达到350mg 时主峰与杂质峰达不到基线分离。
故确定最大进样量为300mg,色谱图如图2所示。
3.4 产物鉴定图3为对照品及产物的总离子流图。
由图3可知,样品的保留时间与对照品保留时间一致,图4为488 分析化学第35卷对照品和样品主峰的质谱扫描图,质谱数据表明:对照品和样品主峰组分均为龙胆苦苷。
图2 HSCCC 进样量对分离的影响Fig .2 Effect of the quantity of sa mp le on high s peed counter current chr omat ographic (HS CCC )separati on进样量(quantity of sa mp le ):a .100mg;b .300mg;c .350mg 。
图3 对照品(a )和样品(b )的总离子流图Fig .3 Total i on chr omat ogra m s of reference substance (a )and the sa mp le (b )图4 龙胆苦苷对照品(a )和样品(b )主峰的质谱图Fig .4 M S s p rctra of genti op icr oside (GPS )of reference substance (a)and the sa mp le (b )3.5 产物纯度每次分离所得主峰,与龙胆苦苷对照品一致。
以高效液相色谱检测其纯度,面积归一化法测1～6 图5 GPS HP LC 纯度分析图谱(254n m )Fig .5 The HP LC chr omat ogra m of GPS 所得主峰纯度均为94.0%。
3.6 结论(1)样品在上相溶解度较大。
为保证较大进样量,使用上相作为溶样溶剂,将样品溶于20mL 上相中进样;(2)转速越高,固定相保留值越大[9],但是该溶剂体系容易乳化,乳化后固定相保留减少。
因此,转速不可太高。
经测试,在800r/m in 的转速及2mL /m in 的流速下,固定相保留可达5014%;(3)随着进样量的逐步加大,分离度越来越差;样品的最大进样量以300mg 为宜;(4)使用半制备性高速逆流色谱仪一次分离过程可得纯度在94.0%的龙胆苦苷588第6期皇甫泽坤等:高速逆流色谱法从秦艽地上部分制备分离龙胆苦苷 688 分析化学第35卷150mg。
与传统柱色谱法相比,本方法的分离效率高,成本低。
References1 State Ad m inistrati on of Medicine and D rug of PRC(Comp ilati on Comm ittee of Zhonghua Bencao)(国家医药管理局《中华本草》编委会).Zhonghua B encao(中华本草).Shanghai(上海):Shanghai Scientific&Technical Publishers,1999: 6th volu me2312 Zhang Xiling(张西玲),J in L ing(晋 玲),L iu L isha(刘丽莎).Research&Infor m ation on Traditional Chinese M edicine (中药研究与信息),2003,5(9):27～293 Zhang Yong(张 勇).Yunnan M ed.(云南医药),1991,12(5):3044 Sun W enji(孙文基),Sha Zhenfang(沙振方),Gao Hai(高 海).Chin.J.Phar.A nal.(药物分析杂志),1994, 14(1):41～435 Dai Deshun(戴德舜),W ang Yi m ing(王义明),Luo Guoan(罗国安).Chinese J.A nal.Che m.(分析化学),2001, 29(6):586～5916 Yuan L M,ZiM,A i P,Chen X X,L i Z Y,Fu R N,Zhang T Y.J.Chro m atogr.A,2001,927(122):91～967 It o Y,Con way W D(Eds.).Che m ical A nalysis,vol.132,W iley/I nterscience,Ne w York,1996:36(Chap ter1)8 America Chem ical Society.M ode m Counter2Current Chro m atography ACS Sym posium Series593.1995:78～869 Zhang Tianyou(张天佑).Counter2Current Chro m atography Teehnology(逆流色谱技术).Beijing(北京):Beijing Science& Technol ogy Press(北京科学技术出版社),1991Prepara ti ve Separa ti on of Gen ti op i crosi de fro m Aer i a l Part of G en tianaM acrophylla Pa ll by H i gh Speed Coun ter2Curren t Chro ma tographyHuangfu Ze2kun,N i Shi2Feng,Sun W en2J i3(B iology and M edicine Key L aboratory of Shannxi Province,N orthw est U niversity,X i′an710069)Abstract H igh s peed counter2current chr omat ography(HSCCC)was successfully app lied t o the p reparative separati on of genti op icr oside fr om the crude extract of the aerial part of Gentiana m acrophylla Pall using a t w o2 phase s olvent syste m composed of chl or ofor m methanol and water(4∶4∶2in volu me rati o)with the fl ow rate of 2mL/m in and the detecti on wavelength of254nm.The range of sa mp ling quantity was fr om50mg t o300 mg,the separated fracti on was genti op icr oside as identified by LC2MS,every separati on yields genti op icr oside at94%purity as deter m ined by HP LC.Keywords H igh s peed counter2current chr omat ography,genti op icr oside,Gen tiana m acrophylla Pall(Received4Sep te mber2006;accep ted12December2006)《化学计量学方法》(第二版)简介 《化学计量学方法》(第二版)在第一版的基础上补充了最新出现的化学计量学研究方法和最新的研究成果。