HPLC法测定焙烤咖啡中咖啡因的含量

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高效液相色谱法测定咖啡因

高效液相色谱法测定咖啡因
一、实验目的
1.掌握高效液相色谱法的基本原理。 2.了解高效液相色谱仪的使用及日常维护。 3.掌握标准曲线法定量实验技术。

二、实验原理

咖啡因，化学名为1，3，7—三甲基黄嘌呤。它是一种中枢神经兴奋剂，能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋，目前可由茶叶及咖啡中提取，咖啡因的甲醇溶液在270nm波长下有最大吸收，其吸收值的大小与咖啡因浓度成正比，从而进行定量。
五、数据处理及结果
可乐型饮料中咖啡因含量（mg/L）= C/ 20 ×1000 咖啡、茶叶及其制成品中咖啡因含量（μg/g） = C/ m ×稀释倍数（50×1000/20） C— 由标准曲线查得相当于咖啡因的含量，μ g ； m—样品的质量，g

四、实验步骤

2. 标准曲线的绘制准确移取咖啡因标准应用液（0.2 mg/mL）0、5.0、10.0、 15.0、20.0μL分别注入色谱仪中，得到相应的峰高或峰面积，以质量为横坐标，峰高或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 3. 测定流动相：甲醇∶水∶乙睛 = 40∶50∶10（V/V）流速：0.6ml/min 色谱柱：ODSC18 （4.6mm×150mm）紫外检测器（270nm）柱温：40℃
三、仪器与试剂
1. 仪器液相色谱LC—10AVP，紫外检测器，超声波发生器 2.试剂氯仿（GR）甲醇（GR）乙睛（GR）咖啡因标品咖啡因标准储备液（1.0mg/ml）：准确称取50 mg咖

ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
啡因于50mL比色管中，用色谱纯甲醇定容至刻度，摇匀。

咖啡因标准应用液（0.2mg/ml）：移取咖啡因标准储
备液10.0ml于50ml比色管中，用色谱纯甲醇定容至刻度，摇匀。

高效液相色谱法分析(咖啡因)原始记录

高效液相色谱法分析（咖啡因）原始记录
受理号：第1页，共页
检测项目
咖啡因
检测开始时间
年月日
检测依据
GB 5009.139-2014
检测结束时间
年月日
检测方法
高效液相色谱法
温度及相对湿度
℃％
仪器名称及型号
高效液相色谱仪
仪器编号
××/××-
FA2004天平
××/××-074
样品处理情况
按照GB 5009.139-2016（第/法）对样品进行处理。
样品空白值（μg/mL）
计算公式：X=
式中：X--样品中待测组分含量，（mg/kg）; m--样品质量，（g）。
c--由标准曲线得出的样液中待测物的浓度，（μg/mL）；
V--样品定容体积，（mL）；结果保留三位有效数字。
质控
（自控）
情况
样品总数
平行样个数
质控样
仪器使用情况使用前：使用后：
检验人：复核人：审核人：
混合标准使用液名称及浓度
咖啡因标准储备液：2.00mg/mL。
主要仪器
检测条件
检测器：PDA检测器
色谱柱：C18反相柱
柱温：25.0 ℃
流速：1.0 mL/min
进样量：10 μL
波长：272 nm
流动相：甲醇+水= 24+76
标准曲线
序号
1
2
3
4
5
6
标液浓度（μg/mL）
峰面积（A）
回归方程
Y=aX+b a= b= r=
高效液相色谱法分析（咖啡因）原始记录（续页）第页，共页
样品编号
试样质量(g)

食物中的咖啡因含量测定实验

食物中的咖啡因含量测定实验咖啡因是一种常见的刺激性物质，广泛存在于食物和饮料中。

对于喜欢饮用咖啡、茶或者其他含咖啡因饮料的人们来说，了解食物中咖啡因的含量是十分重要的。

本实验旨在通过采用一种简单的萃取和测定方法，测定不同食物中咖啡因的含量。

实验材料：1. 不同食物样本（例如，咖啡豆、茶叶、巧克力等）2. 研钵和研杵3. 乙醇4. 二氯甲烷5. 0.1 mol/L HCl 溶液6. 氯化镁溶液7. 高效液相色谱仪(HPLC)8. 咖啡因标准品实验步骤：Step 1：准备工作1. 将食物样本压碎成细小的颗粒，使用研钵和研杵进行研磨。

2. 称取适量的样品（约0.5克）并置于研钵中。

Step 2：萃取1. 将约10 mL的二氯甲烷倒入研钵中，与样品充分混合。

2. 将样品与二氯甲烷混合液转移至一个小漏斗中。

3. 在漏斗底部装上一个烧杯，漏液过程中小心控制液位，以防漏液。

收集漏液。

Step 3：咖啡因的萃取回收1. 将漏液转移至一个蒸馏瓶中。

2. 在蒸馏瓶中加入约10 mL的乙醇，并用烧杯盖住蒸馏瓶。

3. 将蒸馏瓶加热至乙醇沸腾，并保持加热10分钟。

Step 4：酸处理1. 用0.1 mol/L HCl 溶液向加热后的蒸馏瓶中加入2-3滴，使溶液呈酸性。

2. 插入玻璃棒并用旋转的方式，搅拌溶液，使咖啡因完全转移到酸性水层中。

3. 将酸性水层的溶液转移至用干净烧杯。

Step 5：提取咖啡因1. 在烧杯中加入适量的氯化镁溶液（约5 mL），并用玻璃棒搅拌。

2. 沉淀碱式氯化镁和水合氯化镁，避免过量溶液。

3. 待沉淀物完全沉淀后，用滤纸过滤。

Step 6：测定咖啡因含量1. 使用高效液相色谱仪(HPLC)进行测定。

2. 通过比较样品在HPLC中柱上的保留时间和咖啡因标准品的保留时间，计算出咖啡因的含量。

结果与讨论：通过本实验，我们测定了不同食物中咖啡因的含量。

根据实验结果，我们可以得出以下结论：1. 咖啡中的咖啡因含量相对较高，茶叶中的咖啡因含量居中，巧克力中的咖啡因含量较低。

咖啡因的测定论文

咖啡中咖啡因的测定前言咖啡因(caffeine)又名咖啡碱，属甲基黄嘌呤化合物，化学名称为1，3，7－三甲基黄嘌呤，具有提神醒脑等刺激中枢神经作用，但易上瘾。

为此，各国制定了咖啡因在饮料中的食品卫生标准。

美国、加拿大、阿根廷、日本、菲律宾规定饮料中咖啡因的含量不得超过200mg/L，南斯拉夫规定不得超过120mg/L，到目前为止我国仅允许咖啡因加入到可乐型饮料中，其含量不得超过150mg/Kg，为了加强食品卫生监督管理，建立咖啡因的标准测定方法十分必要。

紫外分光光度法和高效液相色谱法(HPLC)是可乐型饮料、咖啡和茶叶以及制成品中咖啡因含量的测定方法。

其方法简单、快速、准确。

最低检出浓度：紫外法对可乐型饮料为3mg/L；对咖啡、茶叶及其固体制品为5mg/100g；对咖啡和茶叶的液体制品为5mg/L。

HPLC法对可乐型饮料为0.72mg/L；对茶叶、咖啡及其制品为1.8mg/100g。

第一篇紫外分光光谱法1 仪器分析原理：通过研究物质分子对紫外光的吸收情况进行定性，定量和结构分析的方法。

2原理：咖啡因的三氯甲烷溶液在276．5nm波长下有最大吸收，其吸收值的大小与咖啡因浓度成正比，从而可进行定量。

3试剂(本标准所用试剂均为分析纯试剂，实验用水为蒸馏水)3．1无水硫酸钠。

3．2三氯甲烷：使用前重新蒸馏。

3．31．5％(mz/V)高锰酸钾溶液：称取1．5g高锰酸钾，用水溶解并稀释至100mL。

3．4亚硫酸钠和硫氰酸钾混合溶液：称取10g无水亚硫酸钠(Na2SO3)，用水溶解并稀释至100mL。

另取10g硫氰酸钾，用水溶解并稀释至100mL，然后二者均匀混合。

3．515％(V/V)磷酸溶液：吸取15mL磷酸置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。

3．620％(m/V)氢氧化钠溶液；称取20g氢氧化钠，用水溶解，冷却后稀释至100mL。

3．720％(m/V)乙酸锌溶液：称取20g乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]，加入3mL冰乙酸，用水溶解并稀释至100mL。

HPLC法阿咖片中咖啡因的含量

HPLC法阿咖片中咖啡因的含量
胡秋燕;李凌云
【期刊名称】《中国现代药物应用》
【年(卷),期】2009(003)012
【摘要】目的采用高效液相法测定阿咖片中咖啡因的含量.方法色谱
柱:SymmetryC18(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相:甲醇-水(7:3),检测波长:273 nm.结果咖啡因在0.0094～0.2822 mg/ml浓度范围内线性关系良好(r=1.000 0),平均回收率是100.4%(n=7),RSD为0.8%.结论本方法可行,结果可靠,重现性好.【总页数】2页(P18-19)
【作者】胡秋燕;李凌云
【作者单位】562400,贵州省黔西南州医院;黔西南州药检所
【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.HPLC法测定氨酚咖黄烷胺片中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量 [J], 孙建平;张传霞
2.HPLC法同时测定阿咖片中咖啡因、阿司匹林、游离水杨酸的含量 [J], 张辉;赵爱华;陈乃江
3.HPLC法测定氨酚咖那敏片中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量 [J], 孙大赢;孙建平;张传霞
4.HPLC法测定氨酚咖黄烷胺片中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量 [J], 莫连峰;陈莹;
唐宁
5.改变波长高效液相色谱法测定氨咖敏片中氨基比林和咖啡因含量 [J], 解瑞辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HPLC法测定不同产地咖啡中咖啡因、咖啡酸及绿原酸的含量

HPLC法测定不同产地咖啡中咖啡因、咖啡酸及绿原酸的含量李莎莎;于娟;谭淑瑜;梁洁【期刊名称】《江西中医学院学报》【年(卷),期】2017(029)001【摘要】目的:建立咖啡豆中咖啡因、咖啡酸和绿原酸的含量测定方法.方法:采用HPLC法同时测定不同产地咖啡豆中咖啡因、咖啡酸和绿原酸的含量,以Phenomenex Luna C18为色谱柱,流动相为甲醇-0.5％甲酸水,流速1mL/min,柱温30℃,检测波长285nm,梯度洗脱.结果:咖啡因、咖啡酸、绿原酸分别在250 ～15.6μg/mL(r=0.9997)、20～0.02μg/mL(r=0.9999)、300～3.2μg/mL(r=0.9999)的浓度范围内与峰面积线性关系良好,加样回收率在98.28％～99.23％.结论:方法简便、准确、重复性好,为咖啡豆的质量控制研究提供了一定参考.【总页数】4页(P90-93)【作者】李莎莎;于娟;谭淑瑜;梁洁【作者单位】广东省中医院广州510120;广东省中医院广州510120;广东药科大学广州510006;广东药科大学广州510006【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.HPLC法测定蒲公英中绿原酸、咖啡酸及阿魏酸的含量 [J], 黄志恒2.RP-HPLC法测定不同pH条件下藏药余甘子干果中柯里拉京、没食子酸、绿原酸、咖啡酸的含量变化 [J], 左晓霜;陈平;张建博;马定乾;华杰;范源3.HPLC法测定不同采收期茵陈中绿原酸和咖啡酸的含量 [J], 刘媛媛4.HPLC法测定不同产地咖啡中咖啡因、咖啡酸及绿原酸的含量 [J], 李莎莎;于娟;谭淑瑜;梁洁;5.HPLC法测定蒲公英中绿原酸和咖啡酸的含量 [J], 夏琴;张新选因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

咖啡咖啡因含量的测定

用苯基改性二氧化硅微柱将全部抽提液纯化。使用配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定其咖啡因含量。
4 试剂除非另有规定，只能使用确认的分析级试剂，以及蒸馏水或脱矿物质水或与之等效纯度
的水。 4.1 甲醇，液相色谱级。 4.2 氨溶液(0.3mol/L)：甲醇，90∶10 体积混合液。 4.3 洗提溶剂，纯化柱用，甲醇∶水∶乙酸，75∶25∶1 体积混合液。 4.4 流动相，甲醇∶水，30∶70 体积混合液。取 600mL 甲醇(4.1)倒入 2L 单标容量瓶内，加水至刻度，混合后混合液用孔径为 0.45μm 过滤器过滤。 4.5 乙醇∶水，1∶4 体积混合液。 4.6 氧化镁。 4.7 咖啡因储备液：相当于每升含 0.5g 咖啡因溶液。称取 125mg 咖啡因，精确至 0.1mg，放入 250mL 棕色玻璃容量瓶内，并用乙醇∶水(4.5)加至半满，咖啡因溶解后，再加相同的乙醇∶水混合液到刻度。
将储备液(4.7)加热至室温后，用吸移管(5.12)吸取 5mL 移入 50mL 单标容量瓶内，并用水补充至刻度并摇匀。
5 仪器普通实验室仪器，特别是下列各项。
5.1 高效液相色谱仪，配有紫外检测器，允许使用的波长在 254nm 至 280nm 之间。装有一台带刻度记录纸的记录仪。测定时最好选择接近 280nm 处，因为咖啡因最大吸收波长是在 272nm。 5.2 高效液相色谱用的色谱柱 C18 型，最好是微球粒，并至少具有 5 000 个理论塔板数的性能。
9 结果的表示样品中咖啡因含量以每 100g 干物质所含的克数表示：
9.1 用于普通焙炒咖啡、生咖啡或速溶咖啡粉：
式中： Ax——从试液中得到的咖啡因峰的面积； Ac——从标准咖啡因溶液中得到的咖啡因峰的面积； c1——标准咖啡因溶液的浓度(4.9)，单位为克每升(g/L)； m0——试料的质量，单位为克(g)； Rs——试样(见 8.1)干物质含量的质量百分率。

高效色谱法测定咖啡因含量

一.实验步骤1. 精密配制含咖啡因浓度为约1mg·mL-1的咖啡因甲醇溶液。

2.. 将上述溶液用甲醇稀释为含咖啡因浓度分别为20、40、80、160、320 μg·mL-1等5份对照品溶液。

3. 根据前述色谱条件，将仪器调节至进样状态，待仪器流路与电路条件达到平衡状态后，色谱工作站记录的基线呈平直，即可进样分析。

4.待仪器稳定后，按标准溶液浓度递增的顺序，由稀到浓依次等体积进样5微升（每个标样重复进样3次），准确记录各自的保留时间。

4. 同样取5微升待测饮料试液进色谱分析（重复3次），准确记录各个组分的保留时间。

5. 根据标准物的保留时间确定饮料中的咖啡因组分峰。

6. 计算系列咖啡因标准物和待测咖啡因的峰面积（3次平均值）。

7. 以标准物的峰面积对相应浓度做工作曲线。

8. 从工作曲线上求得饮料中咖啡因的浓度。

9.实验完成后，按要求关好仪器。

二.实验数据处理1.记录实验条件2.处理色谱数据，将系列对照品溶液与饮料试样的咖啡因色谱峰保留时间及峰面积列于下表中●绘制咖啡因色谱峰面积-对照品溶液浓度的回归曲线，并计算回归方程和相关系数。

●根据试样中咖啡因色谱峰面积值，计算试样中的咖啡因浓度。

流动相的选择： 1.以水为溶剂，0.03mol\L醋酸铵溶液—甲醇为流动相2．甲醇一水作流动相3.甲醇+0．04mol／L乙酸钠缓冲液(55+45)；分别来考察分析物的洗脱分离情况，流动相为甲醇水溶液20%甲醇+ 80%二次蒸馏水在上述色谱条件下，本实验分别选择了3种不同的流动相：甲醇－水（30∶70）、乙腈－水（12∶88）、甲醇－乙腈－水（10∶10∶80）。

结果表明使用3种不同流动相对照品分离均较好，考虑到甲醇较乙腈廉价，选择甲醇－水（30∶70）作为流动相。

高效液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量

高效液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量在日常生活中，饮料是我们常见的饮品之一。

而咖啡因作为许多饮料中的一种重要成分，其含量的测定具有重要的意义。

高效液相色谱法（HPLC）是一种广泛应用于分析化学领域的技术，它能够准确、快速地测定饮料中咖啡因的含量。

咖啡因，化学名称为1,3,7-三甲基黄嘌呤，是一种天然存在于咖啡、茶、可可豆等植物中的生物碱。

由于其具有兴奋神经中枢、提高警觉性和缓解疲劳等作用，被广泛添加到各种饮料中，如咖啡、茶饮料、可乐等。

然而，过量摄入咖啡因可能会对人体健康造成一定的影响，如失眠、焦虑、心悸等。

因此，准确测定饮料中咖啡因的含量对于保障消费者的健康和权益至关重要。

高效液相色谱法是一种基于液体流动相和固定相之间的分配作用来分离混合物中各组分的方法。

它具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高、重复性好等优点，适用于各种复杂样品的分析。

在测定饮料中咖啡因的含量时，高效液相色谱法通常采用反相色谱模式，即以非极性的固定相和极性的流动相进行分离。

首先，样品的前处理是测定的关键步骤之一。

对于饮料样品，一般需要进行适当的稀释和过滤，以去除其中的杂质和颗粒物，避免对色谱柱造成堵塞和污染。

对于一些含有较多色素和糖分的饮料，可能还需要进行萃取或固相萃取等净化处理，以提高分析的准确性和可靠性。

在进行高效液相色谱分析时，需要选择合适的色谱柱、流动相、检测波长等条件。

常用的色谱柱有 C18 柱，其具有良好的分离性能和稳定性。

流动相通常由水和有机溶剂（如甲醇、乙腈）组成，并添加适量的酸（如磷酸、乙酸）来调节 pH 值，以改善色谱峰的形状和分离效果。

检测波长一般选择在 270 280nm 之间，因为咖啡因在这个波长范围内有较强的吸收。

仪器设备方面，高效液相色谱仪主要由输液系统、进样系统、色谱柱、检测系统和数据处理系统组成。

输液系统负责输送流动相，使其以稳定的流速通过色谱柱；进样系统用于将样品准确地引入色谱柱；色谱柱是分离的核心部件；检测系统用于检测分离后的组分，并将其转化为电信号；数据处理系统则对检测信号进行采集、处理和分析，最终给出样品中咖啡因的含量。

研究生实验一：HPLC测定咖啡因含量

实验一、高效液相色谱法测定饮料中咖啡因含量一、实验目的：1、了解高效液相色谱法测定咖啡因的基本原理；2、掌握高效液相色谱仪的操作；3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量的基本方法；4、掌握标准曲线定量法。

二、实验原理：咖啡因又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称1,3,7-三甲基黄嘌呤，可由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱。

它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。

咖啡中含咖啡因1.2%－1.8％，茶叶约含2.0%－4.7％。

可乐、APC 药片中均含有咖啡因。

其分子式为C 8H 10O 2N 4，分子量为结构式： N NN N CH 3CH 3CH 3OO用反相高效液相色谱法将饮料中的咖啡因与其他组分（如：单宁酸、咖啡酸、蔗糖等）分离后，将已配制的浓度不同的咖啡因标准溶液进入色谱系统，以紫外检测器进行检测。

在整个实验过程中，流动相流速和泵的压力是恒定的，测定他们在色谱图上的保留时间和峰面积后，可直接用保留时间定性，用峰面积作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定饮料中的咖啡因含量。

三、仪器和试剂1、仪器Agilent 1200高效液相色谱仪；色谱柱（C 18）：4.6mm ×150mm ）粒径5μm ；平头微量进样器：10μl2、试剂：① 咖啡因（A.R.）、甲醇（色谱纯）、超纯水、可口可乐（瓶装）、雀巢咖啡② 1000μg/mL 咖啡因储备液：将咖啡因在110℃下烘干1小时，准确称取0.1000g 咖啡因，用超纯水溶解，转移至100mL 容量瓶中，定容至刻度，待用。

四、实验内容：1、色谱条件：柱温：室温；流动相：甲醇／水＝60：40流量：1.0mL/min 检测波长：275nm2、咖啡因标准系列溶液配制：分别用吸量管吸取1000μg/mL 咖啡因储备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL 于5只50mL 容量瓶中，用超纯水定容至刻度，浓度分别为20、40、60、80、100 μg/mL3、样品前处理：①将25mL 可口可乐置于100mL 烧杯中，剧烈搅拌30min 或用超声波脱气5min ，以赶净二氧化碳。

高效液相色谱法测定咖啡因的含量

高效液相色谱法测定咖啡因的含量
葛昌宏;贺天笙
【期刊名称】《职业与健康》
【年(卷),期】2001(17)8
【摘要】早在20世纪初有关咖啡因慢性中毒的报道就不断出现,当每天咖啡因的摄入量达1 200～1 500mg时,出现焦虑、眩晕、易怒及头痛,因此大剂量的咖啡因容易引起中毒的症状.本文利用高效液相色谱法测定饮料中咖啡因含量,并对色谱分离条件进行了改进,经过对流动相的数十次组合变化试验,改善了分离效果,提高了方法的检出灵敏度,具有方法简便,分离速度快,分析结果准确等优点.
【总页数】1页(P44-44)
【关键词】微孔滤膜;反相色谱;精密度;回收率;咖啡因;含量
【作者】葛昌宏;贺天笙
【作者单位】江苏省连云港市卫生防疫站
【正文语种】中文
【中图分类】R115
【相关文献】
1.反相高效液相色谱和超高效液相色谱法测定饮料中咖啡因含量的比较研究 [J], 曾诚;赵文惠
2.高效液相色谱法测定能力验证样品(饮料)中咖啡因含量不确定度评定 [J], 汤丽昌; 梁国华; 陈高健
3.高效液相色谱法测定复方氨酚烷胺胶囊中咖啡因和对乙酰氨基酚含量 [J], 肖月
4.高效液相色谱法测定Fapas能力验证样品中咖啡因含量的不确定度评定 [J], 李彬
5.高效液相色谱法测定奶茶中表儿茶素和咖啡因的含量 [J], 徐皖玉;冯珣;宋曼铜;张卓;王主
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超高效液相色谱法快速测定食品中的咖啡因研究

超高效液相色谱法快速测定食品中的咖啡因研究摘要采用超高效液相色谱测定食品中的咖啡因,采用ACQUITY UPLC?誖BEH C18色谱柱分离,以甲醇-水溶液为流动相进行洗脱,流速为0.4 mL/min,柱温30 ℃,检测波长为272 nm。

结果表明,咖啡因与其他杂质均能达到基线分离,咖啡因的浓度在2～200 mg/L时与峰面积成良好的线性关系。

回收率为95.0%～99.1%,精密度测试结果的RSD为1.02%。

该方法简便、准确、快速、重现性好、回收率高,适用于食品中咖啡因的测定。

关键词超高效液相色谱;食品;咖啡因;测定SimultaneousDeterminationofCaffeineinFoodbyUltraPerformanceLiquidChroma tographyXIAO HanLIANG WeiZHOU BoTAO Jian(Henan Institute of Product Quality Supervision and Inspection,Zhengzhou Henan 450004)AbstractUltra performance liquid chromatography(UPLC)was used for the simultaneous determination of caffeine in food.Chromatographic separation was performed on ACQUITY UPLC?誖BEH C18 column.The mobile phase was a mixture of methanol and deionized water at a flow rate of 0.4 mL/min and the column temperature was 30℃.The UV detection wavelength was fixed at 272 nm.Results showed that caffeine and other compounds were separated well and the standard curve of caffeine had good linearity in the concentration range of 2~200 mg/L.The recovery rate was 95.0%～99.1%.The RSD was 1.02%.This method was proved to be simple,accurate,rapid with good reproducibility and high recovery rate.It was suitable for the determination of caffeine in food.Key wordsultra performance liquid chromatography(UPLC); food;caffeine;determination咖啡因又称咖啡碱,白色粉末或六角棱柱状结晶,属于甲基黄嘌呤的生物碱,化学名是1,3,7-三甲基黄嘌呤或3,7-二氢-1,3,7-三甲基-1H-嘌呤-2,6-二酮,溶于水、乙醇、氯仿等溶剂。

HPLC法测定不同产地咖啡中咖啡因、咖啡酸及绿原酸的含量

江西中医药大学学报2017年2月第29卷第1期JOURNAL OF JIANGXI UNIVERSITY OF TCM2017 Yol. 29 No. 1H PL C法测定不同产地咖啡中咖啡因、咖啡酸及绿原酸的含量★李莎莎于娟1谭淑输2梁洁(1.广东省中医院广州510120;2.广东药科大学广州510006)摘要：目的：建立咖啡豆中咖啡因、咖啡酸和绿原酸的含量测定方法。

方法:采用HPLC法同时测定不同产地咖啡豆中咖啡因、咖_酸和绿原酸的含量，以Phenomenex Luna (]18为色谱柱,流动相为甲醇-0. 5%甲酸水，流速lmL/min,柱温30丈，检测波长285nm,梯度洗脱。

结果:咖啡因、咖啡酸、绿原酸分别在250 ~ 15.6(jL g/mL(r= 0.9997)、20 ~ 0_ (EijLg/mM r= 0_ 9999)、300 ~ 3. 2jjL g/m L(r = 0.9999)的农度范围内与峰面积线性关系良好,加样回收率在98.28% ~99.23%。

结论:方法简便、准确、重复性好，为咖啡豆的质量控制研究提供了一定参考。

关键词：咖啡豆；高效液相色谱法;含量测定中图分类号:R284.1 文献标识码:BDetermination of Caffeine, Caffeic Acid and Chlorogenic Acid in Coffee Beans from Different Origins by RP - HPLCLI Sha - sha1, Y U Juan1 ,TAN Shu - yu2, L IANG Jie21. Guangdong Province Hospital o f Chinese Medicine, Guangzhou 510120, China；2. Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006 f ChinaA bstract：Objective ：A high - performance liquid chromatography (HPLC) method was established for the detection and quantification of caffeine, caffeic acid and chlorogenic acid in coffee beans. Method：Chromatographic separation was performed on Phenomenex Luna Clg column (4.6mm x250mm,5(jLm) ,using 0.5% formic acid in water as mobile phase A and methanol as mobile phaseB with gradient elution. The flow rate was 1 mL/min at 30 ^ , and the detection wavelength was set at 285 nm. Results ： There were linear relationships between the peak area and contents of caffeine, caffeic acid and chlorogenic acid in the ranges of 250 ~ 15. 6(jLg/mL (r = 0. 9997) , 20 ~0.02|xg/mL ( r = 0.9999) and 300 ~ 3. 2(xg/mL ( r = 0. 9999) , respectively. The extraction recoveries varied from 98. 28% to 99.23%. Conclusion： The method was simple, accurate, reliable, and can be used as a quality control method for coffee beans.Key words：Coffee Beans；HPLC；Content Determination咖啡豆为茜草科(Rubiaceae)咖啡属（coffea)植物小果咖啡am6fca L、中果咖啡C.caziep/iora Pierre ex Froehn 及大果咖啡C. liberica Bull. Ex ffien 的种子,主要产自巴西、蓝山、哥伦比亚等地[1]。

食品中咖啡因含量的测定与分析

食品中咖啡因含量的测定与分析咖啡因是一种广泛存在于各种食物和饮品中的生物碱，常见于咖啡、茶叶、可可和一些软饮料中。

人们通常将咖啡因视作提神醒脑、增强注意力的物质。

然而，过量摄入咖啡因可能对健康造成一定的负面影响。

因此，对食品中咖啡因含量的测定与分析变得至关重要。

咖啡因的测定与分析可以采用多种方法，其中一种常用的方法是高效液相色谱法（HPLC）。

该方法的原理是利用咖啡因在固定相和流动相交互作用的差异导致其在色谱柱中的分离。

通过测定峰面积或峰高，可以准确计算出样品中咖啡因的含量。

在进行高效液相色谱法分析之前，需要先进行样品的制备。

一般来说，样品制备可以分为提取和净化两个步骤。

提取是将样品中的咖啡因与其他干扰物分离出来，常用的提取溶剂包括乙酸乙酯和乙酸乙酯-正己烷的混合溶剂。

净化则是为了去除残留的有机溶剂和杂质，常用的净化方法包括固相萃取和薄层色谱。

经过样品制备后，就可以进行高效液相色谱法的分析了。

在实际分析中，首先需要选择适合咖啡因分离的色谱柱，并设置合适的流动相和流速。

常用的流动相一般为水和有机溶剂的混合物。

然后，将制备好的样品注入到色谱柱中，通过控制流动相的温度、压力和流速，实现咖啡因的分离和检测。

除了高效液相色谱法外，还有其他一些常用的测定方法。

比如，紫外分光光度法可以通过测量咖啡因在特定波长下的吸光度，来确定其含量。

另外，还可以使用气相色谱法和质谱法等仪器分析方法进行咖啡因的测定。

食品中咖啡因含量的测定与分析不仅仅是为了控制咖啡因的摄入量，还有助于评估食品安全性和质量。

例如，对于咖啡生产商来说，测定咖啡豆中的咖啡因含量可以帮助他们判断豆子的品质和口感。

对于茶叶生产商来说，测定茶叶中的咖啡因含量可以帮助他们选择合适的产品类型和加工工艺。

此外，咖啡因测定与分析还有助于人们了解咖啡因摄入对健康的影响。

研究表明，咖啡因摄入过多可能导致失眠、心血管疾病和肾脏问题等。

因此，科学地测定食品中咖啡因的含量，有助于制定合理的膳食建议和食品安全标准。

高效液相色谱法测定咖啡因的含量

实验四
高效液相色谱法测定咖啡因的含量
实验目的
1．学习高效液相色谱仪的基本结构和基本操作。 2．了解反相色谱法的原理、优点和应用。 3．掌握采用高效液相色谱法进行定性和定量分析的基本方法。
实验原理
高效液相色谱法是以液体作为流动相的色谱法，它是利用样品中各组分在色谱柱中固定相和流动相相间分配系数或吸附系数的差异，将各组分分离后进行定性、定量分析。本实验以咖啡因为测定对象，以反相HPLC来分离检测未知样中咖啡因的含量。用反相液相色谱法将咖啡因分离。以咖啡因标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度做工作曲线。再根据样品中咖啡因的峰咖啡因标准溶液。 2．打开电脑，开仪器（由上至下）点开Instrument Online调整流动相流量，打开Purge阀，排气泡，然后调小流量，观察基线是否平稳。 3．待基线平稳后，选择参数，设定方法。用待进样溶液清洗过的平头微量注射器，吸取25μL溶液，进样。由小到大测定标准溶液的浓度，以色谱峰面积对其浓度做工作曲线。 4．测定两个未知浓度样品的峰面积，从工作曲线上求出未知浓度样品的浓度。 5．关机。先关仪器（从下至上），再依次关工作站和电脑。 6．数据处理。
仪器与试剂
1．Agilent 1100高效液相色谱仪；XDB-C8色谱柱（4.6 mm×150 mm）；填料粒径 5μm；25μL平头微量注射器。 2.容量瓶（100mL、10mL）；移液管 3．系列咖啡因标准溶液准确称取25mg咖啡因标准试剂置于100mL烧杯中，定容至100mL容量瓶中，摇匀。分别吸取1mL、2mL、3mL、4mL标准溶液于10mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀。未知浓度咖啡因溶液2组。 4．流动相 20%甲醇 + 80%二次蒸馏水

高效液相色谱法检测食品中咖啡因含量

４、定期设标准管做校准对照。可甩厂家提供的标准液或已知ＴＳＧＦ的含量血清。综上所述，ＴＳＧＦ不论从广谱性、灵敏性、特异性、准确性、快速性或简便性来说均有较好的性能，特别是早期性和广谱性有着其它标志物无法比较的优越．在癌症普查和临床诊断上有着显著的优势，是一项可供选用的肿瘤标志物。参考文献
３监剥方法对同一样本洗涤液标本，用ＰＣＲ检测ＨＢＶ，
万方数据
ｌ材料与方法
１ｌ
器械表面采样
实验组，选取①０１％新洁尔灭浸泡消毒
的１３镜、探针、镊子、钻针、调和刀、洁治器头和②７０％酒精擦拭消毒的手机、水枪共８类口腔器械９２件．用高压消毒的中性生理盐水将高压消毒的棉拭子沾湿，反复擦拭上述器械表面，即得到口腔器械表面采样样本。对照组．选取经高压消毒的拔牙钳子和手术刀柄各１０件，按上述方法采集样本。
康莉仲岳桐陈春晓
（深圳市卫生防疫站广东５１８０２０）
中囤分类号］０５５７７。２・ＴＳ来自０７（文献标示码］Ｂ咖啡因，化学名为１，３，７一三甲基黄嘌呤，是一种生物碱，目前由茶叶及咖啡中提取，可添加到可乐等饮料中。它是一种中枢神经式奋剂，能兴奋大脑皮层．使人精神兴奋。
图．可见在该条件下标准峰形好，干扰少
３精密度试验将不同浓度样品各进样６次，相对标准偏差为０８５“～
１．９６％．说明本法重复性好，达到分析要求．见表１。裹１精密度制定结果
２
４准确度实验对可乐型饮料及固体样品分别加标。在样品中分别加入低
１卫生部食品卫生监督检验所－食品卫生标准使用手册理化检验方
法ＧＢ／Ｔ１６３４４一１９９６
９０２
刘耀敏扬亚平薛承岩
（承德医学院附属医院承德０６７０００）
中图分类号］Ｒｌ

实验二 HPLC法测定咖啡因的含量

实验二高效液相色谱法测定咖啡因的含量一、实验目的1．熟悉高效液相色谱仪的基本结构和操作方法。

2．熟悉高效液相色谱的定量方法（标准曲线法）。

二、实验原理液相色谱法就是同一时刻进入色谱柱中的各组分，由于在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用的不同，随流动相在色谱柱中运行时，在两相间进行反复多次（103～106次）地分配过程，使得原来分配系数具有微小差别的各组分，产生了保留能力明显差异的效果，进而各组分在色谱柱中的移动速度就不同，经过一定长度的色谱柱后，彼此分离开来，最后按顺序流出色谱柱而进入信号检测器，在记录仪上或色谱数据机上显示出各组分的色谱行为和谱峰数值。

测定各组分在色谱图上的保留时间（或保留距离），可直接进行组分的定性；测量各峰的峰面积，即可作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定相应组分的含量。

高效液相色谱仪是实现液相色谱分离分析过程的装置。

高效液相色谱仪系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。

本实验采用十八烷基化学键合相作固定相，甲醇/水或乙醇/水作流动相，采用标准曲线法进行咖啡因的定量测定。

咖啡因为白色或带极微黄绿色、有丝光的针状结晶；无臭，味苦；为中枢兴奋药。

三、实验仪器与试剂液相色谱仪（岛津2010），50uL微量注射器，ODS C18柱，重蒸水，色谱甲醇，含咖啡因水样品。

四、实验步骤1．实验条件固定相：ODS C18柱；流动相：甲醇-水(60-40)；流速 1.0 ml/min；检测波长：254nm；柱温：室温。

五、咖啡因含量测定（1）标准曲线的绘制在5只50ml容量瓶中，分别加入一定量的1000 mg/L咖啡因标准溶液，以重蒸水定容至刻度线，摇匀，得到20mg/L 、40mg/L、80mg/L、160mg/L和320mg/L 标液浓度。

然后用微量注射器准确抽取5.0 μL溶液，注射入进样口。

注意不要将气泡抽入针筒。

在相同的色谱条件下，分别测定各标准溶液。

实验4 咖啡因的HPLC分析

湖南工程学院化学化工系实验指导书色谱分析实验4 可乐、咖啡、茶叶中咖啡因的HPLC分析一、实验目的1.掌握反相色谱的优点及应用。

2.学会外标法定量方法。

二、基本原理咖啡因是一种生物碱，可由茶叶、咖啡中提取。

样品在碱性条件下，用氯仿定量提取，采用C18柱分离，用紫外检测器进行检测，以咖啡因标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度做工作曲线，再根据样品中的咖啡因峰面积，由工作曲线算出其浓度。

三、仪器与试剂仪器：高效液相色谱仪、紫外检测器（254nm）、C18柱、微量注射器。

试剂：咖啡因、氯仿、均为分析纯；甲醇（色谱纯）；可乐、咖啡、茶叶。

二次蒸馏水；四、实验步骤1. 色谱条件柱温：室温；检测器波长：254nm；流动相：甲醇/水=60/40；流量：1.0ml/min。

2. 咖啡因标准溶液配制将咖啡因在110℃下烘干1小时，准确称取0.0500克咖啡因，用氯仿溶解，在50毫升容量瓶中用氯仿定容，制得咖啡因标准储备液。

分别用移液管吸取0.40、0.80、1.20、1.60毫升咖啡因准储备液于四只10毫升容量瓶中，用氯仿定容至刻度，浓度分别为40、80、120、160mg/L。

3. 样品处理（1）将约100毫升可乐置于250毫升烧杯中，用超声波脱气5分钟，除二氧化碳。

（2）准确称取0.254克咖啡因，用蒸馏水溶解，定量转至100毫升容量瓶中，定容。

（3）准确称取0.30克茶叶，用30毫升蒸馏水煮沸10分钟，冷却后将上层清液转至100毫升容量瓶中，重复两次，定容。

将上述三种溶液分别过滤，取后面的过滤液。

分别吸取上述三种溶液25.00毫升于125毫升分液漏斗中，加入1.0毫升氯化钠溶液，1毫升1mol/LNaOH溶液，再用20毫升氯仿分三次萃取。

萃取液经硫酸钠脱水处理，用25毫升容量瓶定容。

4. 绘制工作曲线基线平稳后，分别注入不同浓度的标准溶液20微升，用色谱工作站绘制工作曲线。

5. 样品测定注入样品20μl，在色谱工作站中由工作曲线求取样品浓度。

高效液相色谱法测定咖啡因

实验 7 高效液相色谱法测定咖啡中的咖啡因含量一、目的要求1．理解反相色谱的原理和应用。

2．掌握标准曲线定量法。

二、原理高效液相色谱的分离原理：见理论课教材高效液相色谱的定性与定量：见理论课教材高效液相色谱的仪器：见理论课教材咖啡因又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称为1, 3, 7-三甲基黄嘌呤，可由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱。

它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。

咖啡中含咖啡因约为1.2%~1.8%，茶叶中约含2.0%~4.7%。

可乐饮料、APC药片等中含咖啡因。

其分子式为C8H10O2N4，结构式为：采用C-18柱反相液相色谱法进行分离，以紫外检测器进行检测，以咖啡因标准系列溶液外标法定量，可测定各类食品、药品中咖啡因的含量。

但实际样品成分往往比较复杂，如果直接进样，虽然操作简单，但会影响色谱柱寿命。

根据咖啡因的极性和酸碱性，采取萃取分离的方法进行前处理，可有效消除共存的干扰物，对提高定量准确度和保护色谱柱都有较大的益处。

三、仪器与试剂仪器试剂1．甲醇（色谱纯）；二次蒸馏水；氯仿(A.R.)；6 mol•L-1盐酸；饱和碳酸钠溶液；咖啡因(A.R.)；咖啡豆（磨成粉状）或速溶咖啡。

2．1000 mg•L-1咖啡因标准贮备溶液；将咖啡因在110℃下烘干1 h。

准确称取0.1000 g咖啡因，用氯仿溶解，定量转移至100 mL容量瓶中，用氯仿稀释至刻度。

四、实验步骤1．按操作说明书使色谱仪正常工作，色谱条件为：柱温：室温；流动相：甲醇/水= 60/40；流动相流量：1.0 mL•min-1；检测波长：275 nm 2．咖啡因标准系列溶液：浓度为10.0~100 mg•L-1。

3．样品处理：准确称取0.25 g咖啡粉试样，用30 mL蒸馏水煮沸10 min，冷却后，将上层清夜转移至100 mL容量瓶中，并按此步骤再重复二次，最后用蒸馏水定容至刻度。

将上述样品溶液分别进行干过滤（即用干漏斗、干滤纸过滤），收集25.0mL滤液。

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