实验5 诱导细胞融合——聚乙二醇法
细胞融合实验报告
一．实验目的1.了解并掌握细胞融合的方法2.了解细胞融合技术及其在生命科学中所起的作用3.掌握化学融合法，了解电融合法及CRY-3细胞融合仪的使用二．实验原理两个或两个以上的细胞合并成一个双核或多核细胞的现象称为细胞融合，也称细胞杂交，在自然情况下的受精过程即属这种现象。
诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。
1. 病毒诱导融合：有许多种类的病毒能介导细胞融合，最常用的是灭活的仙台病毒（HVJ），为RNA病毒。
病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸附许多病毒粒子，接着细胞发生凝集，几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合，胞浆相互交流，最后形成融合细胞。
2. 化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚已二醇（PEG）。
PEG用于细胞融合至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个打的双核或多核融合细胞。
3. 电融合：是指细胞在电场中极化成偶极子，并沿着电力线排列成串，然后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。
主要过程包括：1.制备原生质体：微生物及植物细胞有坚硬的细胞壁，需要用酶将其降解，而动物细胞无需要去壁处理。
2.诱导细胞融合：两种亲本细胞的悬浮液调到一定密度，滴入高浓度的聚乙二醇（PEG）诱导融合，或用物理方法如电刺激促进融合。
3.筛选杂合细胞：在特定的筛选培养基上，让杂合细胞有选择地生长，除去其他未融合的细胞。
细胞融合技术在基因定位、基因表达产物、肿瘤诊断核治疗、生物新品种培育及单克隆抗体技术等领域有着非常广泛的应用前景。
单克隆抗体技术就是通过细胞融合技术发展起来的，在生命科学研究核应用方面产生了重大影响。
三．实验结果与分析讨论融合细胞的观察实验中发现大部分的融合都是3个细胞的融合，两个相互融合的很少基本没有找到。
实验五：细胞融合与凝集
细胞生物学实验
实验结果
土豆凝集素对兔血红细胞的凝集作用
PBS对照
PEG诱导, 鸡血细胞融合情况
实验报告
细胞生物学实验
绘图或照片表示观察到的细胞融合现象,哪些因素 会影响其融合?（进行多个视野的测定，统计平均 融合率.若进行多个时间的融合实验，请比较融合 时间对融合率的影响，分析可能的原因）
➢ 细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个具有双核 或多核细胞的过程。在自然情况下，体内和体外培养的细胞 均能发生自发融合现象;
➢ 细胞融合可在自然条件下或利用人工条件 (生物的、物理的、 化学的)下进行;
➢ 聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处 质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子 层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用， 从而使细胞发 生融合,形成双核或多核细胞 ;
细胞生物学实验
实验五
细胞融合（聚乙二醇法） 凝集素对细胞的凝集反应
实验目的
细胞生物学实验
通过细胞融合的观察
了解细胞融合的原理 掌握用PEG诱导细胞融合的方法
通过细胞的凝集反应的观察
➢ 了解细胞膜的表面结构 ➢ 了解细胞发生凝集反应的原因 ➢ 学习研究细胞凝集反应的方法
实验原理
细胞生物学实验
细胞融合
染色镜检
➢ 取1滴PEG诱导后血细胞悬液滴于载玻片上,再加入0.2% Janus Green B染液1滴，混匀，盖上盖玻片，染色5-15min 后,显微镜下观察观察细胞融合状况;
➢ 注意辨别融合细胞与重叠的鸡红细胞
计算融合率(%) 融合率 = 融合细胞数/总细胞数 ×100%
细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生融合的细胞核总数与 该视野内所有细胞(包括已融合的细胞)的细胞核总数之比，通常以百 分比表示, 而且要进行多个视野测定，进行统计分析。
动物细胞融合实验实验报告
动物细胞融合实验实验报告
实验目的：1、了解动物细胞融合的常用方法
2、学习化学融合的基本操作过过程
3、观察动物细胞融合过程中的细胞行为和变化
实验材料：鸡血红细胞、50%PEG溶液、0.85%氯化钠溶液、显微镜、离心机、载玻片、盖玻片等
实验原理：聚乙二醇（PEG）能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分
子层的互相亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
实验步骤：1、取鸡血，离心后去除上清液，以0.85%氯化钠溶液制成5%~10%的悬液
2、加入GKN液4ml，混匀
3、加入14滴PEG液，静置3~5min后混匀，放于显微镜下观察
实验结果：显微镜下可观察到有些细胞发生质膜融合
分析与讨论：细胞融合的应用有微生物原生质体融合构成新菌株、利用原生质体融合和培养技术培育新植物、细胞杂交瘤技术与单克隆抗体、用于基因定位和绘制人类基因
图谱、用于生产树突状细胞抗肿瘤疫苗、用于动物育种、用于细胞疗法等。
实验5诱导细胞融合——聚乙二醇法
10.进行多个视野的测定，统计细胞平均融合率。
五、结果与分析
1、绘制观察到的融合细胞图，计算观察到的细胞 融合率；
2、简述聚乙二醇法诱导细胞融合的原理及影响融 合的关键因素。
六、注意事项
如抗凝血要保存在冰箱，抗凝剂预先要进行 灭菌，采血在无菌条件下进行。
普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构， 使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组， 由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼 此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。
细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生融 合的细胞其细胞核总数与该视野内所有细胞(包括 已融合的细胞)的细胞核总数之比，通常以百分比 表示。
普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用从而使细胞发生融合
实验五 诱导细胞融合——聚乙二醇法
一、实验目的 了解细胞融合的原理，初步掌握用PEG诱导
细胞融合的方法。 二、实验原理 聚乙二醇（PEG）结构为： CH2(OH)-(CH20CH2)n-CH2OH； 相对分子质量在2000-6000均可用作细胞融合剂。
6.取悬液1mL到7ml离心管中，加入0.5～0.8 mL预热 的50％PEG （慢慢沿着离心管壁逐滴加入，边加边 轻摇离心管,使其混匀），38℃水浴中温浴30min。
7.缓慢加入Hanks液5ml以终止PEG的作用，轻轻吹 打混匀，38℃水浴中静止5min。
8.1000r/min离心5min，去上清，指弹使细胞团分散 9.取细胞悬液1滴滴于载玻片上，盖上盖玻片直接镜
细胞融合的化学方法
细胞融合的化学方法细胞融合是指将两个或多个细胞融合为一个新的细胞。
这一方法在生物学研究和生物工程等领域具有广泛的应用。
细胞融合可以用于研究细胞间的相互作用、合成新的细胞群体、产生新的抗体等。
下面将介绍几种常用的细胞融合方法。
1.化学融合法化学融合法是最早发展起来的细胞融合方法之一、它利用化学物质促进细胞膜的融合，使细胞内的细胞质相互融合。
常用的化学物质有聚乙二醇（PEG）和離子介質抗殺（HVJ）。
聚乙二醇融合法是通过将两个或多个细胞暴露在含有PEG的溶液中，PEG能破坏细胞膜的完整性，使细胞膜互相融合。
该方法适用于多种类型的细胞，如哺乳动物、昆虫和植物细胞等。
HVJ融合法是利用病毒颗粒HVJ作为媒介，将细胞融合在一起。
病毒颗粒与细胞膜相互结合，导致细胞膜的破裂和融合。
这种方法对于一些类型的细胞如哺乳动物细胞和植物细胞等可行。
2.电融合法电融合是利用外加电场的作用使细胞融合的方法。
将需要融合的细胞以适当的密度分散在含有适当浓度的电解质的缓冲液中，然后施加脉冲电场。
电场作用下，细胞膜发生破裂和融合，形成新的细胞。
这种方法适用于多种类型的细胞，如哺乳动物、细菌、酵母菌等。
电融合法操作简单，且可以改变脉冲电场的参数来控制细胞融合程度和效果，具有一定的灵活性。
3.激光融合法激光融合是利用激光束对细胞进行加热，使细胞膜发生破裂和融合的方法。
激光融合法可以实现高效的细胞融合，且对细胞的形态和功能影响较小。
激光融合法适用于不同类型的细胞，包括哺乳动物、细菌和植物细胞等。
激光对细胞的加热过程需要仔细控制温度和时间，以避免对细胞产生不可逆的损伤。
细胞融合实验报告
聚乙二醇介导的细胞融合2012年2月19星期一陈倩倩（118627140313）同作者：郑梦璐谢雨后赵松1、文摘细胞能不受种属的局限可实现种间生物体细胞的融合,使远缘杂交成为可能,因而是改造细胞遗传物质的有力手段。
它的意义在于从此打破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新种的界限,扩大了遗传物质的重组范围。
但融合后获得的杂种细胞具有染色体异倍性,致使细胞株的遗传性不稳定、植株不育性、畸形、生育迟缓等不符合育种要求的性状出现,直接利用杂种细胞作育种材料目前还有许多障碍。
细胞融合技术避免了分离、提纯、剪切、拼接等基因操作,在技术和仪器设备上的要求不像基因工程那样复杂,投资少,有利于广泛开展研究和推广,有着重大的实践意义,正得到科学界的日益重视。
自从20世纪70年代Kao和Michayluk用聚乙二醇( PEG, polyethyleneglycol) 诱导大麦、大豆等植物原生质体融合后PEG 法诱导细胞融合以其容易制备、活性稳定、不需要特别的仪器设备、操作简便等优点, 被普遍地应用于生物、遗传、医药等研究领域. 高体积分数、高相对分子质量的PEG会对细胞产生毒性,是限制其被广泛应用的瓶颈, 此外,由于该方法涉及的影响因素较多, 进一步加大了获得理想细胞融合率的难度.本实验主要研究PEG的浓度和细胞浓度对细胞融合率的影响。
2、背景介绍细胞融合现象最初是在动物细胞中发现的。
1958年日本学者阅田善雄用紫外光灭活的仙台病毒在体外诱导艾氏腹水红纲胞相互融合。
1965年他和Harris等在此基础上各自分别采用灭活的仙台病毒,诱导产主了第一个种间融合并培养成活。
一年后Yerganzan又进一步使用仙台病毒获得了能够增殖的杂种细胞。
后来Littlefield 用缺陷型细胞HGPRT-XTK-细胞杂交,用HAT 选择培养基选出杂种细胞,开创了细胞工程的新纪元,继而推动了整个生物工程的发展。
1975年英国科学家Milestein 和Kohler在体细胞杂交基础上创立了B淋巴细胞杂交瘤技术,他们将在体外不能长期生存的经绵羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）与在体外能迅速增殖的小鼠骨髓溜细胞在聚乙二醇（PEG）或汕台病毒的作用下融合而产生杂交瘤细胞,所得杂交瘤细咆承袭了两种亲代细胞的遗传特性,既保存了瘤细胞在体外迅速增殖传代的能力,又继承了免疫细胞合成和分泌的能力,即能分泌抗绵羊红细胞的抗体。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理
PEG诱导细胞融合原理
PEG是聚乙二醇的缩写，是一种具有高分子量的线性聚合物。
PEG在
生物学研究中被广泛应用，其中最常见的应用之一就是诱导细胞融合。
细胞融合是指将两个或多个细胞融合成一个单独的细胞。
这种技术被
广泛应用于生物学研究中，例如制备杂交瘤细胞、制备单克隆抗体和
产生转基因动物等。
PEG诱导细胞融合的原理是利用PEG分子与细胞膜相互作用，使得两个或多个不同类型的细胞在PEG存在下发生融合。
具体来说，PEG通过以下机制促进了细胞融合：
1. 破坏细胞膜结构
PEG分子可以与水形成氢键，并且可以与亲水性区域结合。
当PEG溶液与细胞接触时，它会插入到细胞表面，并破坏部分磷脂双层结构，
从而使得两个或多个不同类型的细胞暴露出其内部的细胞质。
2. 促进细胞膜的接触
PEG分子可以通过两种方式促进细胞膜的接触。
首先，PEG可以降低水的表面张力，使得两个或多个细胞之间的距离缩小。
其次，PEG可以与细胞膜表面的亲水性区域结合，从而增加了两个或多个细胞之间的吸引力。
3. 促进细胞融合
当两个或多个不同类型的细胞表面接触时，PEG会形成一个临时性的孔道，使得两个或多个细胞质混合在一起。
这些孔道很快就会关闭，并且新形成的单一细胞会拥有所有原始细胞中所包含的遗传物质和生物学特性。
总之，PEG诱导细胞融合是一种简单、有效、广泛应用于生物学研究中的技术。
它利用PEG分子与细胞膜相互作用来促进不同类型细胞之间发生融合，并且可以产生许多重要的研究工具和应用。
聚乙二醇(PEG)介导的细胞融合实验原理及步骤
实验三：聚乙二醇（PEG）介导的细胞融合【课前预习】1．介导细胞融合的方法有哪些？2．细胞融合技术有哪些方面的应用？【目的要求】掌握细胞融合原理以及应用PEG 诱导细胞融合的方法。
【基本原理】两个以上的细胞合并成为一个双核或多核细胞称为融合细胞。
在通常情况下，两个细胞接触并不发生融合现象，因为各自存在完整的细胞膜，在特殊融合诱导物的作用下，两个细胞膜发生一定的变化，就可促进两个或多个细胞聚集，相接触的细胞膜之间融合，继之细胞质融合，形成一个大的融合细胞。
人工细胞融合开始于五十年代，六十年代到七十年代作为一门新兴的技术发展很快，应用范围极广。
细胞与组织不同，不排斥异类、异种细胞。
不仅能产生同种细胞融合、种间细胞融合，而且也能诱导动植物细胞间产生融合。
因此，融合细胞的研究为生物学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。
这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。
细胞融合(Cell fusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。
人工诱导的细胞融合不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域，如研究核质关系、绘制染色体基因图谱、制备单克隆抗体、育种等。
细胞融合的诱导物种类很多．常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendai virus) ，聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）和电脉冲。
目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。
聚乙二醇(PEG)结构为：HOH2C(CH2OCH2)n CH2OH，相对分子质量在200-6000 均可用作细胞融合剂。
普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。
植物细胞原生质体融合方法
植物细胞原生质体融合方法
植物细胞原生质体融合方法：
聚乙二醇（PEG）介导的融合：使用聚乙二醇（PEG）将原生质体暴露在高渗透性的聚乙二醇溶液中，促使原生质体相互融合。
电脉冲介导的融合：通过将原生质体置于电场中，施加电脉冲使质膜产生短暂的孔隙，使得两个原生质体可以融合。
融合诱导剂介导的融合：一些融合诱导剂，如聚乙二醇和钙离子融合剂，可以在一定程度上促进原生质体的融合。
微操控介导的融合：在实验室条件下，可以使用显微操控技术，如显微注射器或显微操作夹，将两个原生质体精确地放置在一起，使它们发生融合。
基因枪介导的融合：基因枪将DNA或原生质体粒子投射到目标细胞中。
细胞生物学实验报告——动物细胞融合
山东大学细胞生物学实验报告聚乙二醇（PEG ）法诱导的动物细胞融合实验2012/9/11实验目的：了解细胞融合技术的发展过程和主要方法的基本原理，用聚乙二醇(PEG)化学诱导法进行鸡血红细胞的融合实验，掌握实验的基本操作，观察鸡血红细胞融合的不同时期。
实验原理：1. 细胞融合的概念两个或两个以上的细胞或原生质体在自然或人为诱导的情况下细胞质膜相互融合，细胞质相互混合成为一个整体杂合细胞的现象被称为细胞融合。
细胞融合可以发生在同种细胞之间也可以在不同物种间实现。
2. 细胞人工融合的主要方法及基本原理细胞体外融合的主要方法分为病毒诱导，化学诱导和物理诱导。
1953年，M. Kuroya 在临床中第一次分离到仙台病毒（HVJ ）[1]。
1958年，日本学者Okada 发现仙台病毒（HVJ ）能诱导动物细胞融合[2]，其基本原理是仙台病毒的衣壳上有细胞表面受体的结合位点，可以诱导不同细胞凝集，最终使不同细胞的细胞膜相互融合。
1974年，加拿大学者高国楠发明了细胞的聚乙二醇（Polyethyleneglycol ，PEG ）化学融合法，由于该方法对实验条件要求极低，试剂易得，操作简单，成为应用最广泛的细胞融合方法。
化学诱导细胞融合的基本原理是PEG 等化学物质能够诱导细胞膜磷脂分子的极性基团发生结构重排，相互接触的细胞在细胞膜恢复过程中借助磷脂分子的亲和作用和表面张力实现融合。
比之于仙台病毒诱导法，PEG 诱导法的效率提高了几百倍。
80年代，科学家发明了细胞电融合法[4, 5]，电融合法将细胞融合的产率提高到了50%-80%。
电融合法的建立是基于细胞膜表面带电荷的性质。
当在细胞悬液周围加入特定方向的电场时，细胞表面会发生极化现象，相邻的细胞将吸附在一起。
这时突然提高电场强度，细胞间彼此接触的细胞膜会被击穿，细胞膜修复时受到磷脂分子间的亲和作用和细胞膜表面张力的作用将会发生融合。
图2. 以电融合方法得到的3T3-C2融合细胞 （引自J. Teissie 等，1982 )。
实验五 动物血细胞融合实验
实验五 动物血细胞融合实验一、实验目的：掌握利用聚乙二醇为介导物对鸡血细胞的融合方法．二、实验原理：两个或两个以上的细胞合并成一个双核或多核细胞的现象称为细胞融合，也称细胞杂交，在自然情况下的受精过程即属这种现象。
诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。
化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚已二醇（PEG ）。
PEG 用于细胞融合至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个双核或多核融合细胞。
三、实验器具及试剂1．器具显微镜、天平、擦镜纸、普通离心机、载片、盖片、吸管、烧杯2个, 250ml 量筒1个, 滴管20支, 10ml 刻度离心管20支, 试管架5个，移液管，恒温水浴锅, 2ml 离心管20支。
2．材料与试剂(1)材料新鲜鸡血(2)试剂詹纳斯绿染液；0.85％生理盐水；Alsever 溶液：葡萄糖2.05g ，柠檬酸钠0.80g ，NaCl 0.42g ，溶于100ml 双蒸水中。
GKN 溶液：NaCl 8g ，KCl 0.4g ，Na 2HPO4·2H 2O 1.77g ，NaH 2PO4·H 2O 0.69g ，葡萄糖2g ，酚红0.01g ，溶于1000ml 水中。
50％PEG 溶液：称取一定量的PEG （WM ＝4000）放入烧杯中，沸水浴加热，使之熔化，待冷却至50℃时，加入等体积预热至50℃的GKN 溶液，混匀，置37备用。
四、实验步骤1.在公鸡翼下静脉抽取2ml鸡血，加入盛有8ml的Alsever液中，使血液与Alsever液的比例达1∶4，混匀后可在冰箱中存放一周；2.取此储存鸡血0.4ml加入1.6ml的0.85％生理盐水，充分混匀，1500r/min 离心5min，弃去上清，加入2ml的0.85％生理盐水，重复上述条件离心两次。
PEG法诱导细胞融合
实验十PEG法诱导细胞融合一、实验目的1.了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合的基本原理。
2.通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。
二、实验原理细胞融合（cell fusion）又称体细胞杂交，是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞，随后，异核体同步进入有丝分裂，核膜崩溃，来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞（hybrid cell）。
细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。
依据融合过程采用的助融剂的不同，细胞融合可分为：①病毒诱导的细胞融合，如仙台病毒(hemagglutinating virus of Japan,HVJ);②化学因子诱导的细胞融合，如聚乙二醇（polyethyleneglycol ,PEG）;③电场诱导的细胞融合；④激光诱导的细胞融合。
PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子量的多聚体。
PEG可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，引起细胞融合。
该方法应用相对分子质量为400~6000的PEG溶液引起细胞的聚集和粘连，产生高频率的细胞融合。
融合的频率和活力与所用PEG分子质量、浓度、作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。
三、实验仪器、材料和试剂（１）仪器、用具：注射器、刻度离心管、离心机、血细胞记数板、水浴锅、滴管、显微镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、酒精灯等。
（２）材料：成年家鸡。
（３）试剂1）0.85%NaCl溶液。
2）GKN液：8.0gNaCl，0.4g KCl,1.77 g Na2HPO4·2H2O，0.69 g NaH2PO4·H2O,2.0g葡萄糖,0.01g酚红,溶于1000ml重蒸水中。
3）50%（m/v）PEG溶液：①取50gPEG （相对分子量=4 000）放入100ml瓶中，高压灭菌20min.②让PEG 冷却至50-60℃，勿让其凝固。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理PEG（Polyethylene glycol）是一种聚合物化合物，由重复的乙二醇单元组成。
在生物学中，PEG常被用作诱导细胞融合的工具。
细胞融合是指将两个或多个细胞融合在一起形成一个细胞，使其合并为一个细胞体。
PEG诱导细胞融合的原理是通过PEG的特殊性质，促进细胞膜的融合，使细胞内的物质互相交流和共享。
了解细胞融合的背景是很重要的。
细胞融合在生物学研究中有着广泛的应用，可以用于细胞的混合和杂交，从而产生新的细胞型态，用于研究细胞的功能和特性。
细胞融合还可以用于生物医学领域，例如将癌细胞与正常细胞融合，以研究癌细胞的特性和机制。
此外，细胞融合还可以用于克隆动物和干细胞研究等领域。
在细胞融合实验中，PEG起到了至关重要的作用。
PEG具有一种特殊的性质，即可以在细胞膜上形成孔道，促进细胞膜的融合。
这是因为PEG在水中具有很强的溶解性，可以与细胞膜上的脂质相互作用，改变膜的结构，使细胞膜之间的距离缩短，从而促进融合。
具体而言，PEG诱导细胞融合的过程可以分为以下几个步骤。
首先，将需要融合的细胞分别收集，并用培养基或缓冲液洗涤干净，以去除细胞外的杂质。
然后，将细胞悬浮于含有PEG的溶液中，使PEG 与细胞膜相互作用。
PEG通过与细胞膜上的脂质相互作用，改变细胞膜的结构，使细胞膜之间的距离缩短。
此时，细胞膜上会形成孔道，细胞膜之间的融合就可以发生。
最后，将处理后的细胞培养在适当的培养基中，以促进融合细胞的生长和分裂。
PEG诱导细胞融合的原理并不复杂，但它在细胞融合实验中起到了至关重要的作用。
通过PEG的作用，细胞膜之间的距离缩短，细胞膜上形成孔道，从而促进细胞融合。
细胞融合的应用领域广泛，可以用于研究细胞的功能和特性，以及生物医学领域的应用。
同时，PEG诱导细胞融合的实验过程相对简单，只需要将细胞与含有PEG 的溶液接触即可。
因此，PEG诱导细胞融合成为了一种常用的实验方法。
PEG诱导细胞融合是一种重要的实验方法，通过PEG的特殊性质，可以促进细胞膜之间的融合，实现细胞的融合。
动物细胞融合实验报告
一、实验目的1. 理解动物细胞融合的基本原理和常用方法。
2. 掌握化学融合和电融合的基本操作步骤。
3. 观察动物细胞融合过程中的行为和变化。
4. 通过实验验证细胞融合技术的有效性。
二、实验原理细胞融合是指两个或两个以上的细胞在自发或诱导条件下，合并成为双核或多核细胞的过程。
动物细胞融合技术广泛应用于生物医学、细胞工程等领域。
目前，常见的诱导细胞融合的方法包括病毒诱导融合、化学融合、电融合等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 小鼠脾细胞- 小鼠骨髓瘤细胞- 聚乙二醇（PEG）- 灭活仙台病毒- 电融合仪- 液体培养基- 洗涤缓冲液- 倒置显微镜2. 实验仪器：- 倒置显微镜- 低温冰箱- 恒温培养箱- 超净工作台- 电子天平- 移液器四、实验步骤1. 细胞培养：将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞分别培养在含有10%胎牛血清的液体培养基中，置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。
2. 细胞收获：将培养至对数生长期的细胞用胰酶消化，收集细胞，用洗涤缓冲液洗涤，调整细胞浓度为1×10^6个/mL。
3. 化学融合：- 将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞混合，加入适量PEG，充分混合后静置5分钟。
- 加入洗涤缓冲液，终止反应，洗涤细胞。
4. 电融合：- 将混合后的细胞放入电融合仪的电极槽中，设定电压和时间参数。
- 启动电融合仪，进行电融合实验。
5. 细胞培养：将融合后的细胞接种于含有10%胎牛血清的液体培养基中，置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。
6. 细胞观察：利用倒置显微镜观察融合细胞的形态和细胞核的变化。
五、实验结果与分析1. 在化学融合实验中，观察到部分细胞发生融合，形成双核或多核细胞。
2. 在电融合实验中，观察到部分细胞发生融合，形成双核或多核细胞。
3. 融合细胞的细胞核呈现明显的核仁，且核膜清晰。
六、实验结论本实验成功实现了小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞的融合，验证了细胞融合技术的有效性。
细胞融合技术常用的方法和聚乙二醇作促融剂的原理
细胞融合技术常用的方法和聚乙二醇作促融剂的原理细胞融合技术常用的方法问题的提出细胞融合技术是细胞工程中的一项核心基础技术。
细胞融合技术在基因定位、基因表达产物、肿瘤诊断核治疗、生物新品种培育及单克隆抗体技术等领域有着非常广泛的应用前景。
单克隆抗体技术就是通过细胞融合技术发展起来的，在生命科学研究和应用方面产生了重大影响。
生物技术发展也很快，细胞融合技术也在发展，到底哪一种技术是最常用，教材也没有统一说法，所以也很难说哪种最常用。
问题：常用的细胞融合技术有哪些？聚乙二醇（P E G）诱导细胞的机理是怎么样的？01诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。
1.病毒诱导融合有许多种类的病毒能介导细胞融合，最常用的是灭活的仙台病毒（H V J），为R N A病毒。
病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸附许多病毒粒子，接着细胞发生凝集，几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合，胞浆相互交流，最后形成融合细胞。
2.化学融合剂诱导融合化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚乙二醇（P E G）。
P E G用于细胞融合至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个打和的双核或多核融合细胞。
聚乙二醇是人工合成药剂，它具有高融合性，且每批融合活性始终如一，融合效率稳定，对细胞毒性亦较低，使用简单，成为细胞触合的良好促融剂。
3.电融合是指细胞在电场中极化成偶极子，并沿着电力线排列成串，然后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。
优点：融合率高、重复性强、对细胞伤害小；装置精巧、方法简单、可在显微镜下观察或录像观察融合过程；免去P E G诱导后的洗涤过程、诱导过程可控性强。
植物细胞杂交过程示意图02聚乙二醇是一种用于原生质体融合中的优良化学促融剂。
实验指导——精选推荐
实验指导实验⼀：特殊显微镜的原理及其使⽤ 4实验⼆：电⼦显微镜的原理及使⽤ 8实验三：细胞膜的渗透性 18 实验四：细胞的凝集反应 20 实验五：诱导细胞融合—聚⼄⼆醇法 23 实验六：线粒体和液泡系的超活染⾊ 26 实验七：叶绿体和细胞核的荧光观察 29 实验⼋：细胞⾻架的观察 31 实验九：细胞中DNA、RNA的显⽰ 33 实验⼗：细胞培养的准备⼯作 37 实验⼗⼀：细胞的原代培养 42 实验⼗⼆：细胞的传代培养 45实验⼀特殊显微镜的原理及其使⽤I.暗视野显微镜的原理和使⽤⼀、实验⽬的1.了解暗视野显微镜观察活细胞的基本原理；2.了解暗视野显微镜的特殊组件和位置；3.掌握调节暗视野显微镜的基本步骤。
⼆、原理和结构特点在⽇常⽣活中，室内飞扬的微粒灰尘是不易被看见的，但在暗的房间中若有⼀束光线从门缝斜射进来，灰尘便粒粒可见了，这是光学上的丁达尔现象。
暗视野显微镜就是利⽤此原理设计的。
它的结构特点主要是使⽤中央遮光板或暗视野聚光器，常⽤的是抛物⾯聚光器，使光源的中央光束被阻挡．不能由下⽽上地通过标本进⼊物镜。
从⽽使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发⽣反射或散射，散射的光线投⼊物镜内，因⽽整个视野是⿊暗的。
在暗视野中所观察到的是被检物体的衍射光图像．并⾮物体的本⾝，所以只能看到物体的存在和运动，不能辨清物体的细微结构。
但被检物体为⾮均质时，并⼤于1/2波长，则各级衍射光线同时进⼊物镜，在某种程度上可观察物体的构造。
⼀般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结构，但却可分辨0.004µm以上的微粒的存在和运动，这是普通显微镜(最⼤的分辨⼒为0.2µm)所不具有的特性，可⽤以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。
三、仪器、材料与试剂（⼀）仪器：具有暗视野聚光器的显微镜（⼆）材料⽛垢微⽣物，洋葱内表⽪细胞，载玻⽚，盖玻⽚，⽛签，尖头镊⼦，滤纸条，指甲油，擦镜纸等。
（三）试剂：⽣理盐⽔四、实验步骤1.样品制备：在⼀张⽆划痕、清洁的载玻⽚上滴⼀滴⽣理盐⽔，⽤⽛签取⽛垢或⽤镊⼦撕洋葱内表⽪细胞与载玻⽚上的⽣理盐⽔混合均匀，盖上⼀⽚⽆划痕、清洁的盖玻⽚，⽤滤纸条吸取盖⽚四周多余的⽔分，⽤指甲油封⽚（或不封⽚）。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理- 引言在生物学和医学领域，细胞融合是一项重要的技术，其应用广泛，包括胚胎学研究、克隆技术、组织重建和干细胞研究等。
近年来，一种名为PEG诱导细胞融合的方法受到了广泛关注和应用。
本文将深入探讨PEG诱导细胞融合原理的多个方面，从基本概念到应用领域，以期帮助读者更好地理解这一重要技术。
1. PEG诱导细胞融合的基本原理PEG，全称聚乙二醇（Polyethylene glycol），是一种无机化合物，在细胞融合中被用作诱导剂。
PEG能够在一定条件下促使细胞膜的融合，从而使细胞融合成为可能。
2. PEG诱导细胞融合的条件在进行PEG诱导细胞融合时，需要考虑一些关键条件。
细胞必须处于活跃状态，以确保融合的成功性。
PEG的浓度和温度也是非常重要的参数，过高或过低的浓度和温度都会影响融合效果。
融合细胞的类型和比例也对融合结果有一定影响。
3. PEG诱导细胞融合的作用机制PEG诱导细胞融合的作用机制尚不完全清楚，但目前的研究认为其主要是通过对细胞膜的作用来促使细胞融合。
PEG可以改变细胞膜的性质，增加膜的可塑性，从而使细胞融合点的形成成为可能。
PEG还可能通过改变膜蛋白的构象和作用，进一步促进细胞融合。
4. PEG诱导细胞融合的应用领域PEG诱导细胞融合在多个领域具有广泛的应用。
在胚胎学研究中，利用PEG诱导的细胞融合可以用于制造嵌合胚胎，以研究胚胎发育过程和基因调控机制。
在克隆技术中，PEG诱导的细胞融合可以用于制造嵌合胚胎，进一步获得胚胎干细胞。
PEG诱导细胞融合还可以应用于组织重建和干细胞研究等领域。
5. 我对PEG诱导细胞融合的观点和理解在我看来，PEG诱导细胞融合是一种非常有潜力的技术，可以在多个领域带来重要的突破和进展。
通过PEG诱导细胞融合，我们可以更好地理解细胞融合的机制，揭示细胞发育和生命过程中的重要信息。
PEG诱导细胞融合还可以应用于医学研究和治疗，如干细胞治疗和组织工程等。
鸡细胞融合实验报告
一、实验目的1. 了解PEG诱导细胞融合的基本原理。
2. 通过细胞融合实验，初步掌握细胞融合技术。
3. 观察鸡细胞融合过程中的细胞行为与变化。
二、实验材料与用品1. 实验材料：鸡红细胞、Hanks液、PEG（聚乙二醇）。
2. 实验用品：生物显微镜、离心机、恒温水浴箱、试管、离心管、滴管、酒精灯、载玻片、盖玻片、生理盐水、剪刀、镊子等。
三、实验方法1. 准备鸡红细胞悬液：取新鲜鸡血，用生理盐水稀释至10%的悬液。
2. 制备PEG溶液：称取0.5克PEG（分子量4000）放入试管内，在酒精灯上融化，迅速加入0.5ml预热的Hanks液混匀，制成50%的PEG溶液。
放入37℃水浴中待用。
3. 处理鸡红细胞：取10%的鸡红细胞悬液1ml放入离心管中，加入5ml Hanks液混匀，以1000rpm离心5分钟，小心弃去上清，用指弹法将细胞团块弹散。
4. 诱导细胞融合：取上述50%的PEG溶液0.5ml，在1分钟内滴加到鸡红细胞悬液中，边加边轻轻摇动混匀。
待PEG全部加入后静置1分钟左右。
此过程均在37℃水浴中进行。
5. 终止PEG作用：缓慢滴加9ml Hanks液以终止PEG的作用，在37℃水浴中静置5分钟。
6. 离心弃上清：离心弃去上清，取一滴融合后的细胞悬液滴片，加盖片镜检。
四、实验结果与分析1. 镜检观察：在显微镜下观察，可见鸡红细胞融合后的细胞呈现球形，细胞膜较厚，细胞质较为均匀。
2. 实验结果分析：本实验成功诱导鸡红细胞融合，说明PEG诱导细胞融合技术在鸡细胞融合实验中具有可行性。
鸡红细胞融合后的细胞形态较为规则，细胞膜完整，细胞质均匀，说明细胞融合过程较为顺利。
五、讨论1. 鸡红细胞融合实验的成功，为细胞融合技术的研究提供了实验依据。
本实验采用PEG诱导细胞融合技术，具有操作简便、效果显著等优点。
2. 鸡红细胞融合实验过程中，PEG的浓度、处理时间等因素对细胞融合效果有较大影响。
实验中，PEG浓度为50%，处理时间为1分钟，能够获得较好的融合效果。
细胞融合_实验报告
一、实验名称：细胞融合实验二、实验目的：1. 了解细胞融合的基本原理和过程。
2. 掌握聚乙二醇（PEG）诱导细胞融合的方法。
3. 观察细胞融合过程中细胞的行为与变化。
三、实验材料与用品：1. 细胞：小鼠成纤维细胞、小鼠胚胎成纤维细胞2. 试剂：胎牛血清、DMEM培养基、0.25%胰酶、50%聚乙二醇（PEG）溶液、无菌水3. 器材：显微镜、离心机、水浴箱、离心管、滴管、载玻片、盖玻片四、实验原理：细胞融合是指两个或多个细胞通过质膜融合形成单个双核或多核细胞的现象。
细胞融合在生物体内和生物技术领域都有广泛的应用，如制备单克隆抗体、研究细胞信号传导等。
聚乙二醇（PEG）是一种常用的诱导剂，可以促进细胞融合。
五、实验步骤：1. 将小鼠成纤维细胞和小鼠胚胎成纤维细胞分别培养于DMEM培养基中，待细胞生长至80%融合时，收集细胞。
2. 将收集的细胞用0.25%胰酶消化，再用DMEM培养基清洗两次，制成细胞悬液。
3. 将两种细胞悬液等体积混合，在室温下静置5分钟，使细胞聚集。
4. 加入50%聚乙二醇（PEG）溶液，使溶液终浓度为1.5%，混合均匀，静置5分钟。
5. 加入无菌水，终止PEG诱导，充分混匀。
6. 将混合细胞悬液接种于载玻片上，用盖玻片覆盖。
7. 将载玻片放入二氧化碳恒温培养箱中培养，观察细胞融合情况。
六、实验结果：1. 在显微镜下观察到，细胞在PEG诱导下发生聚集，部分细胞开始融合，形成双核或多核细胞。
2. 经过一段时间培养，部分双核或多核细胞进一步融合，形成更大的细胞。
七、实验讨论：1. 细胞融合实验中，PEG诱导剂的作用是促进细胞质膜发生可逆性改变，使细胞易于融合。
2. 细胞融合过程中，细胞的行为与变化包括细胞聚集、质膜融合、细胞核融合等。
3. 实验结果表明，PEG诱导细胞融合效果较好，可以应用于细胞融合研究。
八、实验总结：本次实验成功实现了小鼠成纤维细胞和小鼠胚胎成纤维细胞的融合，掌握了PEG诱导细胞融合的方法。
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一、实验目的
了解细胞融合的原理，初步掌握用PEG诱导
细胞融合的方法。
二、实验原理 聚乙二醇（PEG）结构为： CH2(OH)-(CH20CH2)n-CH2OH；
相对分子质量在2000-6000均可用作细胞融合剂。
普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构， 使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，
பைடு நூலகம்
50％PEG混合液配置：称取少许PEG放人刻度离心 管内，在沸水浴中加热， 使其溶化，待冷却至50℃
时，加入预热至50℃的等体积的GKN液，混匀。注
意使用前配制。
6.取悬液1mL到7ml离心管中，加入0.5～0.8 mL预热
的50％PEG （慢慢沿着离心管壁逐滴加入，边加边
轻摇离心管,使其混匀），38℃水浴中温浴30min。
箱，电炉， 量筒，离 心管，注射器，试管， 移液管，烧杯， 吸管， 载玻片，盖玻片，显微
镜
四、实验步骤
1.鸡血红细胞悬液的制备：
用注射器吸入 1mL Alsver液后从鸡翼下静脉取鸡血 2mL，注 入刻度离心管内，按照3：1(V/V)加入 6mL Alsver液混匀，放入4℃冰箱内可保存3~4天。
7.缓慢加入Hanks液5ml以终止PEG的作用，轻轻吹 打混匀，38℃水浴中静止5min。 8.1000r/min离心5min，去上清，指弹使细胞团分散 9.取细胞悬液1滴滴于载玻片上，盖上盖玻片直接镜 检；或加入台盼蓝溶液1滴，染色3分钟盖上盖玻片， 显微镜下观察细胞融合现象。
10.进行多个视野的测定，统计细胞平均融合率。
由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼
此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。
细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生融
合的细胞其细胞核总数与该视野内所有细胞(包括
已融合的细胞)的细胞核总数之比，通常以百分比
表示。
三、实验材料与用品
材料：鸡血红细胞 试剂： 仪器：离心机，水浴
（1）Alsver液： （2）0.85％生理盐水： （3）GKN液： （4）Ringer溶液： （5）Hanks液： （6）50％PEG混合液 （7）0.2%次甲基蓝
五、结果与分析
1、绘制观察到的融合细胞图，计算观察到的细胞
融合率；
2、简述聚乙二醇法诱导细胞融合的原理及影响融 合的关键因素。
六、注意事项
如抗凝血要保存在冰箱，抗凝剂预先要进行
灭菌，采血在无菌条件下进行。
PEG有毒，请操作过程中勿沾到皮肤上。
2.取细胞悬液1mL，移人7mL离心管， 加入4mL
0.85％生理盐水混匀；2000r/min离心5 min。
3.弃上清液（用吸管吸去），加0.85％生理 盐水至
5mL，混匀后2000r/min离心5min。
4.重复上述条件，再离心洗涤1次。 5.收集最后1次离心沉淀的血细胞，加入 适量的 GKN液溶液，按压积红细胞体积配成10％的红细胞 悬液。