猴血管缺血性脑损伤模型的建立及评价

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人骨髓间充质细胞脑内移植治疗食蟹猴脑缺血

人骨髓间充质细胞脑内移植治疗食蟹猴脑缺血朱华;冯铭;卢珊;李秦;刘颖;安沂华;赵春华;王任直;秦川【摘要】Objective By using human bone marrow-derived mesenchymal stem cell ( hBMSC) transplantation to treat experimentally induced cerebral ischemia in Macaca fascicularis to examine the effects of hBMSC transplantation on the recovery of neurological function. Methods In 18 Macaca fasciculari, cerebral ischemia was induced by photochemical occlusion to generate the stoke model. The animals were randomly divided into high-dose, low-dose , and control group s. After 4 weeks, 250 μL of hBMSC at 5 × 106, 1 × 106 , or saline were injected respectively at the edge of the hematoma. High field MR scanning and positron-emission tomography (PET) scans were performed every 2 weeks before and after the hBMSC transplant action. Neurological functioning and upper limb motor test were used to evaluate on 24hrs,3 dand 1, 2, 3, 4,5,6,7,8,9,10,12 weeks after the surgery. Results After hBMSC transplantation, neural function scores and upper limb motor test improved significantly in the high-and low-dose groups compared with the control group. 4 and 6 weeks after the transplantation, SUV% of the surrounding area of the lesion had significant difference between dose group and control group (P 〈0. 05). At week 4 and 12, pathological examination showed a large amount of angiogenesis around the lesion. The area of the lesion of low-dose group decreased significant as compared to the control group (P 〈 0.05 ). Conclusions Intracerebral transplantation of human mesenchymalstem cells can improve functional recovery of Macaca fascicularis and can be used to restore neurological deficits in experimentally induced ischemia stroke.%目的评价人骨髓间充质干细胞脑内移植对食蟹猴脑缺血模型的治疗作用.方法健康成年食蟹猴18只,光化学法造模4周后,用脑立体定位法在缺血灶周围植入人骨髓间充质干细胞5×106和1×106,对照组等体积0.9％氯化钠注射液.利用影像学(MRI、PET)、行为学(神经功能评分、精准上肢测试系统)和组织病理学对干细胞移植效果进行评价.结果神经功能评分和精准上肢运动测试分别在在干细胞植入2周和3d后显著降低(P＜0.05).PET结果显示干细胞移植后4、6周高、低剂量组缺血灶周围皮质、基底节核团的SUV％值比对照组显著升高(P＜0.05).MRI显示剂量组缺血灶的修复速度大于对照组.病理检查可见低剂量组坏死灶面积小于对照组(P＜0.05),出血灶周围有大量新生血管生成.结论在缺血灶周围植入hBMSC可促进食蟹猴损伤神经组织的恢复,为进一步研究干细胞治疗神经系统疾病的临床应用提供了参考.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2013(033)001【总页数】6页(P33-38)【关键词】间充质干细胞;脑缺血;移植;食蟹猴【作者】朱华;冯铭;卢珊;李秦;刘颖;安沂华;赵春华;王任直;秦川【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院比较医学中心卫生部比较医学重点实验室,北京100021;中国医学科学院北京协和医院,北京100730;中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所,北京100005;中国医学科学院北京协和医学实验动物研究所Motac合作实验室,北京100021;中国医学科学院北京协和医学院比较医学中心卫生部比较医学重点实验室,北京100021;中国医学科学院北京协和医学院北京神经外科研究所,北京100039;中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所,北京100005;中国医学科学院北京协和医院,北京100730;中国医学科学院北京协和医学院比较医学中心卫生部比较医学重点实验室,北京100021【正文语种】中文【中图分类】R332缺血性脑卒中在脑血管病的发病率居首位［1］，是由各种原因诱发脑血管栓塞引起的脑组织缺血、缺氧，进一步诱发脑神经细胞变性、坏死，最终导致神经功能障碍和功能丧失的一类疾病。

脑卒中动物模型实验原理

脑卒中动物模型实验原理
1.1 缺血性脑卒中
2.1.2 线栓法
实验动物：MCAO大鼠、MCAO小鼠
模型特点：利用线栓闭塞大脑动脉血管，无需开颅，缺血时间和部位易控制，并发症少，是目前使用最广泛的脑卒中模型。

获取方法：可直接购买商品化模型
2.1.2 光化学法
实验动物：大鼠、小鼠
模型特点：无需开颅，重复性较高，病灶部位可控，但缺乏缺血半暗带，无法模拟部分病例的生理变化，适用于慢性脑缺血研究。

获取方法：系统给与光敏剂后，利用高强度光源照射，以激活脑区的光敏剂，产生脑水肿和血小板微血栓，造成局部梗死。

2.1.3 开颅电凝法
实验动物：大鼠、小鼠
模型特点：缺血效果稳定，出血量少，是目前公认的标准大脑中动脉闭塞模型，但开颅存在一定风险。

获取方法：右侧颞下入路进行开颅，采用双极电凝将大脑中动脉闭塞后切断。

1.2 出血性脑卒中
2.2.1 自体注入法
实验动物：ICH大鼠
模型特点：采集自体股动脉血注射至大鼠右侧基底节制作ICH模型，操作简便，出血部位稳定，与人类脑出血病理过程相似。

2.2.2 自发脑出血
实验动物：大鼠
模型特点：将高血压与出血性脑卒中有机结合，适用于高血压引起的脑出血病理生理机制研究。

获取方法：对SHR（自发性高血压）大鼠进行大脑中动脉结扎处
理
2.2.3 胶原酶注入法
实验动物：大鼠、小鼠
模型特点：操作简便，重复性高，与临床脑出血病理生理相似性高，但实验影响因素较多，稳定性较差。

获取方法：将胶原酶通过微量注射器注射入动物尾壳核内。

基于生物电阻抗技术的无创脑水肿动态监护仪在猕猴脑出血及血肿扩大模型中的监测研究

论著•DOI：10.3969/j.issn.1672-7770.2020.06.015*基于生物电阻抗技术的无创脑水肿动态监护仪在獄猴脑出血及血肿扩大模型中的监测研究邹永杰，张超，陈蔚翔，葛红飞，张水仙，刘丹，何明莲，谭彬彬，陈渝杰，冯华，胡荣，文唐敏【摘要】目的应用獗猴脑出血（ICH）模型,观察基于生物电阻抗技术的无创脑水肿动态监护仪对病情变化的监测能力，明确该仪器在颅脑岀血及后续血肿扩大过程中的数据变化规律，为其在临床脑岀血患者病情监测中的应用奠定基础。

方法健康成年雄性獄猴3只，通过股动脉抽取自体血5mL,采用二次注入法制备獄猴脑出血及血肿扩大模型。

应用有创颅内压监测仪和无创脑水肿动态监护仪同时对造模动物进行病情动态监测，术后通过MRI确认脑出血造模情况。

结果獄猴在脑出血造模后，出现了相应的神经损伤症状,MRI可见脑内血肿位置、大小固定,表明该造模方法较为稳定。

另外,有创颅内压监测指标与无创脑水肿监护仪扰动系数、相位斜率的变化趋势基本一致。

结论本研究建立的獄猴脑出血模型，可以较稳定、可靠地模拟脑出血和血肿扩大的病情及其变化。

无创脑水肿动态监护仪可以比较直观地反映脑内血肿变化情况，结合其操作方法简单、无创伤和可以持续动态监测的优点，为该设备用于临床脑出血患者的病情监测和临床治疗指导提供了重要的实验依据。

【关键词】脑出血；生物电阻抗;獄猴；血肿扩大；病情监测【中图分类号】R-332；R743.34【文献标志码】A【文章编号】1672-7770（2020）064）675亠5Monitorii^study of non-invasive cerebral edema dynamic monitor based on bioelectrical impedance technique in rhesus monkey intracerebral hemorrhage and hematoma enlargementmodel ZOU Yong-jie,ZHANG Chao,CHEN Wei-xiang,et al.Department of Neurosurgery,SouthwestHospital,Army Medical University,Chongqing400038,ChinaCorresponding authors:FENG Hua,HU RongAbstract:Objective The rhesus monkey intracerebral hemorrhage（ICH）model was used toobserve the monitoring ability of non-invasive cerebral edema monitor based on bioelectrical impedance technique.To clarify the change rule of the instrument in the process of ICH and subsequent hematoma enlargement.To lay a foundation for its application in clinical monitoring ofpatients with ICH.Methods In3healthy adult male rhesus monkeys,5mL of autologous bloodwas extracted from the femoral artery.The model of ICH and hematoma enlargement in rhesusmonkey was established by secondary injection.Invasive intracranial pressure monitor and non-invasive cerebral edema monitor were used to continuously mon让or the condition of the model,andthe condition of model was confirmed by MRI after operation.Results The corresponding neurological symptoms appeared after the establishment of the model.MRI showed that the locationand size of ICH were fixed,indicating that the modeling approach was relatively viable.In addition,the changing trends of disturbance coefficient and phase slope of invasive intracranial pressuremonitoring instrument was broadly consistent with that of noninvasive brain edema monitor. Conclusions The study indicates that rhesus monkey model can reliably simulate the condition ofcerebral hemorrhage and hematoma enlargement.The noninvasive dynamic monitor of cerebral基金项目：国家重点研发计划（2017YFC0111900）作者单位：400038重庆,陆军军医大学第一附属医院（西南医院）神经外科（邹永杰，张超，陈蔚翔，葛红飞,张水仙，刘丹，何明莲，谭彬彬,陈渝杰，冯华，胡荣）；中国人民解放军联勤保障部队第908医院神经外科（邹永杰）；重庆市长寿区人民医院神经外科（文唐敏）通信作者:冯华，胡荣edema can directly reflect the changes of bined with the advantages of simple,noninvasive and continuous dynamic monitoring,it provides a basis for the clinical application.Key words:intracerebral hemorrhage；bioelectrical impedance；rhesus monkey；hematoma enlargement;clinical monitoring脑卒中是脑血管循环功能障碍导致以局部中枢神经系统功能缺失为特征的一类疾病，可分为缺血性和出血性脑卒中两大类。

猕猴大脑中动脉缺血后海马CA1区结构改变及胰岛素样生长因子-1的表达

Ｍｏｋｙｎｅ
生长因子家族在缺血性脑损伤中具有重要的作用，胰岛素样生长因子一（ＧＦ１是生长因子家族中重要的一员，１Ｉ一）参与许多生理功能及行为的调节，具有很强的神经保护作用．机体在脑缺血再灌注导致神经细胞损伤的同时可引发是的自我保护机制。是，Ｆ１在脑缺血后的表达尚存争议【但Ｉ一Ｇ１Ｊ，因此，我们在猕猴ＭＣＡＯ模型上采用免疫组化方法观察脑缺血Ｉ一ＧＦ１蛋白质的表达，析ＩＦ１在脑缺血损伤中可能分Ｇ一的作用。由于实验条件的限制，目前研究多用大鼠、、、兔猪猫和狗，而灵长类动物很少。但这些动物与人差别巨大，猕猴而
ＳＵＮＺｅｇｃｕｎＧｈｎ－ｈａ，Ａ０ａ —ｍｉＨｕｎｎ
（ｅａｔｎｆａｏｏｙａｄＮｕｏｏ，ｏｆｌｔｄＨｏｐｔｌｆｉｇａｎｖｒｉｄｃｌｏｅｅＱｎｄｏ２６２ＤｐｒｍｅｔｔｌｇｎｅｒｌｇＮ．ＡｆｉｅｓｉｎｄｏＵｉｅｓｔＭｅｉａＣｌｇ，ｉｇａ６０，ｏＰｈｙ２ｉａａｏＱｙｌ４
ｏＧＦ—１ｐｏｅｎｆｌｗｉｇ２ｈＭＣＡＯｎ４ｈｒｐｒｓｏｎ１ｏｎｎｅｓｅｔｅｆｓｘＲｅｕｔ：ｔｕｔｒｈｎｅｆＩ — ｒｔｉｏｌｎｏａｄ２ｅｅｆｉｎｉ３ｙｕｇｍｏｋｙｉｒｏｅ．ｓｌｓＳｒｃｕａｃａｇｓｕｈｌａｄｎｕｎｌｓｒｂｅｖｄｉｉｐｃｍｐｎｅｒｏｓｗｅｅｏｓｒｅｎｈｐｏａｕｓＣＡ１ｒｇｏ．Ｔｅｎｍｂｒｏｏｅｉｎｈｕｅｆｉｍｍｕｏｐｓｔｖｅｒｎｒｅｒａｅｆｅｎ — ｏｉｅｎｕｓｗｅｅｄｃｅｓｄａｔｒｉｏ

脑缺血MCAO模型制作及注意事项

脑缺血MCAO模型制作及注意事项广州佳灵生物技术有限公司术前准备：线栓：目前市场上主要有硅胶和多聚赖氨酸两种材质的线栓，另外还有不多的石蜡线栓和指甲油等线栓。

强烈建议大家采用硅胶线栓（可购买广州佳灵生物技术有限公司的硅胶线栓，质量堪比进口线栓，模型质量高），国外很少看到有用多聚赖氨酸线栓的。

这是因为多聚赖氨酸对血管内皮细胞损伤严重，容易引起血小板聚集，导致血栓形成，因此拔出线栓后，用多普勒血流仪检测血流的恢复程度，每只动物血流恢复的程度差异很大（0-70%之间），最终导致梗死差异大。

也有部分动物模型是非再灌模型。

体重与栓线直径：参照佳灵公司的产品介绍（附件1）。

麻醉剂：常用的麻醉剂有：异氟烷（安全性高，撤去麻醉面罩后，动物2分钟可清醒，但是需要配麻醉机，并且异氟烷损耗大，成本较高）、水合氯醛（安全性较好，控制好量可以连续麻醉3 h，缺点是误打入肠道后可引起肠梗阻，导致动物死亡；对动物的提问下降比较明显，需要控制好动物的体温）。

手术器械：工欲善其事必先利其器，实验专配的镊子、剪刀等器械可大大提高实验效率（有些人30分钟一只模型，有些人5分钟一只模型，除了技术水平的差异外，也与手术器械是否顺手有莫大关系）。

广州佳灵生物技术有限公司为脑缺血模型实验准备了专用的器械包，可购买。

保温设备：60W白炙灯照射或者放置于保温垫上，使肛温保持在 37℃。

温度对梗死大小影响非常显著（温度越低，梗死越小），北方的实验室，尤其是冬天做实验的时候，一定要注意保温。

TTC的配制：用0.2mol/L磷酸缓冲液（PBS）配成0.5-2% TTC溶液（pH7.5），避光保存。

实验方法：动物用10％水合氯醛（400 mg/kg）腹腔注射麻醉。

仰卧位固定，颈正中线切口，沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，分离左侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA），在CCA 远心端和近心端及ECA处挂线备用。

用微动脉夹暂时夹闭ICA，然后近心端结扎CCA、ECA。

全脑缺血动物模型制作步骤及方法

全脑缺血动物模型制作步骤及方法1两动脉阻断法(occlusion of bilaterial carotis communis artery) (1)复制方法 SD大鼠，雌雄不拘，体重为250～300g。

经腹腔注射水合氯醛(350～400mg/kg体重的剂量)或戊丨巴丨比丨妥丨钠(50～60mg/kg体重的剂量)麻醉后，仰卧位固定，剃除颈部毛发，手术区域皮肤常规消毒。

颈前正中切口，分离双侧颈总动脉(carotis communis artery, OCA)，夹闭双侧CCA，同时合并低血压以减少脑血流量，造成急性脑缺血。

由于啮齿动物(沙土鼠除外)脑血液循环有较人类丰富的侧支循环，仅结扎双侧CCA不足以明显降低脑血流量(CBF)，因此结合降压药三丨甲噻吩、酚妥拉明或静脉放血等方法使动脉血压降低至50mmHg(6.7kPa)，使CBF降低至正常的5％～15％。

放血方法：由颈静脉插管至右心房，供放血并连续记录EEG。

采用抽血的方法放血，失血达80mmHg(10.7kPa)时结扎双侧颈动脉，再继续抽血，使血压降至6.7kPa。

(2)模型特点此方法的优点是操作简便，用一次性手术即可完成，阻断可逆，可人为控制动物呼吸。

采用这种方法复制的模型，能进行缺血再灌流损伤的研究，模拟了临床上休克、心功能不全、脑血管严重狭窄或阻塞合并血液低灌流引起的脑循环障碍，造成不同程度的脑组织缺血损伤。

因而，对于探讨人类缺血性脑损伤的发病规律，评价抗脑缺血药物的疗效等有价值。

缺点是：①模型不能在清醒动物上复制，无法研究血管狭窄后行为学的变化。

②常因存在侧支循环而造成缺血不，部位不宜确定。

③脑缺血时限长，有时导致脑缺血后抽搐、癫癎等并发症的发生。

且由于低血压状态，可干扰其他器官、组织的供血和实验结果。

此方法除可用于大鼠外，也可用于兔、猫和猴的性脑缺血。

2四动脉阻断法(occlusion of four blood vessels)(1)复制方法 SD大鼠，雌雄不拘，体重为250～300g。

脑卒中动物模型的建立与比较

Chinese Journal of Rehabilitation Medicine, Aug. 2011, Vol. 26, No.8
物质对脑梗死的作用，也可以用于抑制血小板集聚及神经保护药物的研究。还可用于缺血再灌注损伤的研究以及各种脑保护药物防治效果的评价；Ⅳ型可用于多发性脑梗死及抗血小板集聚药物的研究，但不利于长期脑缺血模型的研究。目前应用于临床药物研究的主要是Ⅰ型和Ⅲ型。
光化学法脑缺血模型的优点有：①动物模型的成功率高，在严格控制实验条件的情况下基本可达 100%，其中Ⅳ型的死亡率较高；②无需开颅，损伤相对较小且死亡率较其他模型低；③因损伤的程度与光照的强度程正相关，可通过控制实验参数任意改变梗死灶的大小、位置和严重程度，且梗死灶的重复性和稳定性较好；④通过对实验模型的选择，可用于对缺血再灌注损伤、抗血小板药物及缺血半暗带等的研究；⑤四种模型从不同方面模拟了人类的脑卒中，需根据实验目的进行选择。此法适于研究抗血小板、抗血栓形成药物和血管内皮细胞保护剂的疗效。这种模型无须开颅，动物存活时间长适于慢性脑缺血研究而且皮质梗死部位可任意选择，为皮质功能定位研究提供了条件。其缺点是：它与人类常见的脑栓塞存在差异，而且是终末动脉永久性闭塞，妨碍扩血管药的治疗观察。 1.4 微栓子栓塞法
780
2011 年，第 26 卷，第 8 期
脑出血模型已被广泛采用。将 SD 大鼠麻醉局部消毒后固定于脑立体定位仪上，颅骨钻孔，定位右侧尾壳核，颅骨钻孔将微量注射器针头垂直插入脑组织右侧尾壳核内，用微量注射器缓注 0.5μl 胶原酶到尾壳核内[29—30]。适用于研究血肿及脑水肿在脑出血中的作用及评价脑出血后神经功能的恢复状况和药物的治疗效果。
该模型具有以下优点：①适于做长期的皮质及皮质下结构的病理观察，同时该模型造成皮质缺血的部位、大小恒定；

脑缺血损伤及其体外细胞模型

脑梗塞按栓子来源分类
心源性：占60%~75%, 栓子主要来源是风湿性心瓣膜病、心内膜炎赘生物及附壁血栓脱落等，以及心肌梗死、心房粘液瘤、心脏手术、心脏导管、二尖瓣脱垂和钙化，先天性房室间隔缺损等。
非心源性：如动脉粥样硬化斑块脱落、肺静脉血栓或凝块、骨折或手术时脂肪栓和气栓、血管内治疗时血凝块或血栓脱落等;颈动脉纤维肌肉发育不良(女性多见);肺感染、败血症、肾病综合征的高凝状态等可引起脑栓塞。来源不明：约30%的脑栓塞。
炎症反应
对于体外培养的小胶质细胞或脑组织，可给予脂多糖诱导小胶质细胞活化，从而产生多种炎症效应：肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis facto-α ，TNF-α )等炎性因子的释放，激活诱导型一氧化氮合酶合成NO，下调谷胱甘肽的表达等。也可直接给予外源性炎性因子，如TNF-α .
脑梗塞易发人群
脑梗塞临床治疗方法
0小时
0-3小时
3-6小时
6-48小时
评价、诊断和接诊
紧急药物治疗：静脉溶栓
可能的药物治疗: 动脉溶栓抗凝治疗降纤治疗神经保护其他非药物方法
预防复发防止并发症康复
急性脑缺血级联反应
在正常生理状态下，成人每100 g脑组织血流量
约为50 ml／min。
细胞模型
内皮细胞模型
1. 原代内皮细胞培养：一般从成年动物大脑皮质取材，剪刀破碎成1 mm 大小，胶原酶消化后，经密度梯度离心或过筛方法获得，然后接种至Ⅳ型胶原包被的培养板内，培养4～5 d后融合形成紧密连接的单层细胞。内皮细胞单层或由内皮细胞层构成的体外BBB模型，经OGD 诱导缺血后，内皮细胞问紧密连接遭到破坏，通透性增加，跨内皮电阻(transendothelial electrical resistance，TEER)减小，与体内状态相似。

光化学栓塞法建立缺血性脑卒中动物模型

光化学栓塞法建立缺血性脑卒中动物模型马浚宁;高俊玮;侯博儒;任海军;刘吉星;陈四化;严贵忠【摘要】背景:实验性缺血性脑卒中动物模型是研究缺血性脑卒中病理机制以及研究开发新治疗方案必不可少的工具,光化学栓塞法制作缺血性脑卒中动物模型操作简便,稳定性好,重复性高,可有针对性的控制梗死灶的位置以及大小,是研究缺血性脑卒中病理机制的良好选择.目的:建立光化学栓塞法缺血性脑卒中动物模型,对比不同性别小鼠缺血性脑卒中后梗死体积以及行为学表现的异同.方法:62只昆明小鼠依据检测内容分为病理学检测6只、梗死体积测试16只和行为学测试40只.其中病理学检测小鼠分为假手术组和模型组,各3只;梗死体积测试小鼠分为雌性模型组和雄性模型组,各8只;行为学测试小鼠分为雌性模型组、雌性假手术组、雄性模型组和雄性假手术组,各10只.模型组(含雌性模型组和雄性模型组)小鼠采用光化学栓塞法制备局部缺血性卒中模型,假手术组(含雌性假手术组和雄性假手术组)小鼠不注射孟加拉玫瑰红染料.结果与结论:尼氏染色显示模型组小鼠梗死中心出现神经元变性坏死,空泡样病理改变,Fluoro-Jade C染色可见模型组小鼠梗死中心中出现变性神经元,且雌性小鼠脑梗死体积显著小于雄性小鼠,模型组小鼠行为运动功能受损程度显著大于假手术组小鼠,其中雌性小鼠运动功能受损程度小于雄性小鼠.表明光化学栓塞法可以成功建立缺血性脑卒中动物模型,且相同条件下缺血性脑卒中对于雄性造成的神经功能损伤更为严重.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2015(019)049【总页数】7页(P7951-7957)【关键词】实验动物模型;脑及脊髓损伤动物模型;光化学法;缺血性脑卒中;动物模型;尼氏染色;Fluoro-Jade C染色;行为学;疲劳转棒;前肢抓力;甘肃省自然科学基金【作者】马浚宁;高俊玮;侯博儒;任海军;刘吉星;陈四化;严贵忠【作者单位】兰州大学第二临床医院神经外科,甘肃省兰州市730000;兰州大学生命科学院,甘肃省兰州市730000;兰州大学第二临床医院神经外科,甘肃省兰州市730000;兰州大学生命科学院,甘肃省兰州市730000;兰州大学第二临床医院神经外科,甘肃省兰州市730000;兰州大学第二临床医院神经外科,甘肃省兰州市730000;兰州大学生命科学院,甘肃省兰州市730000;兰州大学第二临床医院神经外科,甘肃省兰州市730000;兰州大学第二临床医院神经外科,甘肃省兰州市730000;兰州大学第二临床医院神经外科,甘肃省兰州市730000【正文语种】中文【中图分类】R318文章亮点：采用光化学栓塞法建立缺血性脑卒中动物模型，并对比不同性别小鼠缺血性脑卒中后梗死体积以及行为学表现的异同，证实光化学栓塞法可以成功建立缺血性脑卒中动物模型，且相同条件下缺血性脑卒中对于雄性造成的神经功能损伤更为严重。

血脑屏障模型的建立与评价

血脑屏障（ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎｂａｒｒｉｅｒ，ＢＢＢ）是由脑微血管内皮细胞（ｂｒａｉｎｍｉｃｒｏｖｅｓｓｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ，ＢＭＥＣ）、基膜和星形胶质细胞足突组成的重要结构。它限制血液中的成分自由出人脑组织，通过选择性通透作用维持中枢神经系统内环境的稳定和神经元的正常功能。１８８５年ＢＢＢ首次被发现，在之后的９０多年时间里，有关ＢＢＢ的研究一直是在动物体内或手术切除的脑组织标本进行的。但是要深入了解ＢＢＢ，从细胞和分子水平认识其结构、生理、生化机制，探讨病理状态如缺血、炎症、中毒等对ＢＢＢ的影响，特别是研究药物通过ＢＢＢ的动力学，仅仅依靠在体的研究是远远不够的，一种理想的离体血脑屏障模型（ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎｂａｒｒｉｅｒｍｏｄｅｌ，ＢＢＢＭ）在ＢＢＢ的研究中具有不可替代的重要作用。在ＢＢＢ的三个组成结构中，ＢＭＥＣ具有不同于其他器官微血管内皮的独特结构和功能，即细胞缺少窗孔结构、泡饮作用弱、细胞问存在广泛的紧密连接。这些特点使其成为’ＢＢＢ的主要结构基础。所以，获得接近在体状态的离体培养的ＢＭＥＣ也就成为建立ＢＢＢＭ关键。１ＢＢＢＭ发展的三个阶段１．１脑微血管碎段模型
滤膜的上面，共同培养直至细胞融合。多孔滤膜的
主要技术指标是其孔径的大小，常用的有０．４５ｉｘｍ
和３．０¨ｍ孔径两种。星形胶质细胞足突可以通过
３．０ｔｘｍ微孔与内皮细胞直接接触，但不能通过
０．４５Ｉｘｍ微孔。目前尚没有充分资料证明哪种孔径更
为合适。星形胶质细胞诱导血管内皮细胞表达血脑
屏障特性的机制尚未完全阐明，多数研究者认为其
ＢＢＢＭ应用于实验研究已有近３０年的历史。但是不同研究者建立ＢＢＢＭ的方法仍存在很大差异，不同实验室对同一模型的评价结果也不尽相同，甚至还有矛盾之处。但概括说来目前已基本有如下共识：①原代培养的ＢＭＥＣ保留了其主要的在体状态下的特性。利用单独培养的原代ＢＭＥＣ建立ＢＢＢＭ的关键是细胞的纯化。但是随着细胞的传代，许多特性逐渐丧失，如１谷氨酰转肽酶活性减弱，紧密连

慢性缺血性脑血管病(教学及宣教)

慢性缺血性脑血管病疾病概述缺血性脑血管病（ischemic cerebrovascular disease）又称脑缺血性疾病（ischemic cerebral diseases），是一不同程度的缺血性脑血管疾病的总称。

脑缺血见于多种神经外科疾病的病理过程中，如脑血管病、脑肿瘤等，也可见于心脏骤停，休克等全身性病理过程，脑缺血可表现为不同形式，有局灶性和弥漫性脑缺血、永久性和暂时性脑缺血之分，但不论以何种方式出现，脑缺血的病理生理机制和生化改变基本相似，且与脑缺血的程度和持续时间相关。

脑缺血性病是一缓慢进行的病，并有突发性事件出现的可能.单纯用扩血管药物，其作用比较有限，甚至在用药的情况下还可能发生隐性脑梗死。

慢性缺血性脑血管病发病机制（一）发病原因造成脑缺血的病因是复杂的，归纳起来有以下几类：①颅内、外动脉狭窄或闭塞；②脑动脉栓塞；③血流动力学因素；④血液学因素等。

脑缺血性疾病1.脑动脉狭窄或闭塞大脑由两侧颈内动脉和椎动脉供血，两侧颈内动脉供血占脑的总供血量的80%～90%，椎动脉占10%～20%。

当其中一条动脉发生足以影响血流量的狭窄或闭塞时，若是侧支循环良好，可以不发生临床缺血症状，如果侧支循环不良，或有多条动脉发生足以影响血流量的狭窄时，则会使局部或全脑的脑血流（CBF）减少，当CBF减少到发生脑缺血的临界水平[18～20ml/（100g·min）]以下时，就会产生脑缺血症状。

轻度的动脉狭窄不至于影响其血流量，一般认为必须缩窄至原有管腔横断面积的80%以上才足以使血流量减少。

从脑血管造影片上无法测出其横断面积，只能测量其内径。

动脉内径狭窄超过其原有管径的50%时，相当于管腔面积缩窄75%，即可认为是足以影响血流量的狭窄程度，也就是具有外科意义的狭窄。

多条脑动脉狭窄或闭塞对脑血流的影响更大，因为可能使全脑血流处于缺血的边缘状态[CBF 为31ml/（100g·min）]，此时如有全身性血压波动，即可引发脑缺血。

脑缺血动物模型具体步骤及详细方法

脑缺血动物模型具体步骤及详细方法原型物种人来源脑缺血再灌注（MCAO线栓法）模式动物品系Balb/c 小鼠，SPF级，雄性，健康，体重25g~30g实验分组随机分组：对照组，模型组，阳性药物组和药物组，每组15只实验周期24 hours, 3 days or 7 days建模方法1. 3%戊巴比妥钠麻醉小鼠，颈部备皮，消毒，插入肛温探头，保持体温在37±0.5℃。

2. 颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉，颈内动脉和颈外动脉。

使用7-0丝线在距离颈总动脉分叉2mm处结扎颈外动脉远心端，在颈外动脉穿入另一根7-0丝线，在靠近颈总动脉分叉处打一个活结。

3. 使用动脉夹夹闭颈总动脉。

在距离颈总动脉分叉处1.5mm处的颈外动脉上剪一个小口，将一根头端处理过的0.18mm直径的尼龙线从小口中插入，进入颈内动脉，并向内插入大脑中动脉，尼龙线的插入深度距离颈总动脉分叉处约9±1mm。

4. 缺血后60min拔掉线栓，用7-0丝线结扎外动脉近心端，用5-0丝线缝合颈部伤口，活力碘消毒伤口，将小鼠放在加热垫上，待清醒后放入恒温抚养箱饲养。

5. 术后24h，对小鼠进行神经功能评分，然后麻醉小鼠，取大脑进行TTC染色和病理染色。

应用疾病模型1.神经功能缺失体征评分参考Longa及Bederson的5分制法在动物麻醉清醒后24h进行评分，分值越高,说明动物行为障碍越严重。

0分:无神经损伤症状1分:不能完全伸展对侧前爪2分:向对侧转圈3分:向对侧倾倒4分:不能自发行走,意识丧失2.TTC染色麻醉小鼠后，取小鼠脑组织，放入-20℃冰箱冷冻30min。

用PBS配置1% TTC（W/V），37℃水浴至TTC溶解，将冻好的脑组织切片，置于10ml TTC 溶液中，37℃恒温孵育10min。

不时翻动脑片，使组织均匀染色。

正常脑组织染色后呈鲜红色，而梗死区呈苍白色。

取脑后用4%多聚甲醛溶液固定，蔗糖溶液脱水后，经OCT包埋做冰冻切片，切片10um，做尼氏染色，可做梗死面积的评价。

应用孕鼠腹腔注射脂多糖合并缺氧方法制作脑瘫动物模型的实验研究

前言（Introduction）小儿脑性瘫痪(cerebral palsy,CP)简称脑瘫,是指从出生前到出生后一个月内，因各种原因所致脑发育早期产生的非进行性脑损伤,主要表现为中枢性运动障碍及姿势异常,同时经常伴有其他如智力低下、癫痫、语言障碍、行为异常及感知觉等并发障碍[1]，远期观察会出现不同程度的神经发育障碍。

小于胎龄儿、低出生体重儿、窒息复苏、低氧血症及辅助通气等均为早产儿脑损伤的高危因素[2]。

其中早产、低出生体重儿是目前公认的最主要的脑瘫致病因素之一，且孕龄越小,出生体重越低,脑瘫患病率就越高。

在这些出生早产儿中，其中5%～10%患儿表现出运动能力的不协调性,通常是痉挛性一侧肢体的偏瘫,除此之外,25%～50%高危儿将会出现细微的精细运动和认知记忆障碍[3-4]，CP 的发生以严重影响了我国小儿成长中的日常生活和学习，以及生活质量和人口素质的提供。

近年来, 随着科学技术的快速发展和应用，新生儿围产医学和新生儿重症监护技术的不断提高和改善,使得我国更多的早产儿、低体重儿、多胎儿的存活率和救治成功率明显提高，而新生儿的死亡率也呈逐年下降趋势发展。

然而,与之相伴随的小儿脑瘫痪患病率不仅没有减少,反而呈上升趋势。

全国的一项脑瘫调查资料显示,我国0-6岁患儿达31万之多,CP的患病率为1.86‰-1.92‰。

2003年，洪世欣等人报道[5]，我国六个地区的流行病学调查示脑瘫患病率为1.2‰～2.7‰。

这一数据比起亚洲一些国家4.1‰患病率，则要低得多[6],但比一些发达国家却要高很多,比如瑞典在1998年对儿童中CP患病率调查的结果为0.27‰[7]。

我国是一个多名族的人口大国,CP的绝对数仍然很大,全国约有近60万脑瘫患儿,如连同儿童期以后发展的CP患儿就多达100多万左右,而这一数字并以每年新增脑瘫患儿4万～5万的速度递增，肢体致残疾率高达 42%～45%,且脑瘫在患儿的一生中都存在,目前尚无有效的预防措施和治疗方法，所以，CP以成为儿童肢体功能致残的最主要疾病之一，也是小儿神经系统的常见病之一，这给社会、家庭和个人带来了极大的心理压力和经济负担,同时也严重影响了我国人口素质的提高和优生优育这一基本国策的贯彻落实。

“十二五”国家科技支撑计划

附件“十二五”国家科技支撑计划“脑血管疾病危险因素防控、诊疗、康复关键技术研究”项目课题申请指南中华人民共和国卫生部二○一一年四月第一章申请须知一、项目总体目标根据我国脑血管疾病防治急需解决的关键技术问题和防治体系建设，在“十一五”科技支撑计划相关研究的基础上，“十二五”计划期间将重点加强社区与住院注册登记体系建设，建立我国脑血管病具有代表性的流行病学与临床研究网络及公共平台。

获得我国急需的脑卒中发病率、患病率和死亡率等基础流行病学的准确数据，建立标准化的脑卒中急性期诊疗与二级预防的评价、改进登记模式。

多学科相结合开展脑血管病早期防控、诊断、治疗、康复技术的应用研究，重点开展关键诊疗技术研发及转化应用，开发和推广用于不同时期脑血管病患者的整体康复适宜技术。

推动脑血管病图像监护系统、介入材料及器械、脑脊液臵换治疗等技术和产品的国产化、产业化。

二、课题设置本项目共设臵15个课题，如下：三、项目实施期限及资金来源本项目实施年限为2011年9月-2015年12月，项目经费预算为14000万元，其中拟安排中央财政资金为10000万元，企业自筹资金为4000万元。

四、申请资格（一）申报单位的条件和要求。

1．凡在中华人民共和国境内注册，具有较强科研能力和条件、运行管理规范的企业、事业单位、科研院所、高等院校等，均可单独或联合申报，不接受个人申请。

课题申报必须以某一课题整体研究内容为申请单元，积极鼓励科研单位和企业以“产、学、研、用”相结合的方式联合申报课题，实现责任和风险共担、知识产权和利益共享。

每个课题的申报单位与主要参加单位须签订共同申请协议，明确规定各自所承担的工作和责任。

申报单位应结合“申请课题研究内容与目标”部分的基本要求，针对拟申请课题，细化研究内容和技术路线，提出具体的考核指标体系，上述内容将作为课题评审的主要依据之一。

2．课题申报单位应具有承担相应国家级科研课题的综合能力，资产负债率低于2/3，无行政处罚或违法记录。

脑卒中风险预测模型

脑卒中风险预测模型脑卒中是一种严重的心血管疾病，对患者的身体和生活造成严重影响。

因此，构建一个准确的脑卒中风险预测模型对于提前预防和治疗非常重要。

本文将讨论脑卒中风险预测模型的背景、相关方法和应用。

背景：脑卒中是由于脑部供血不足引起的脑组织损伤，其主要类型包括缺血性脑卒中和出血性脑卒中。

根据世界卫生组织的数据，在全球范围内，每年有超过13万人死于脑卒中。

因此，脑卒中的风险预测模型的研究受到了广泛关注。

相关方法：构建一个准确的脑卒中风险预测模型需要考虑多种因素，包括个体特征、生活方式、家族史、疾病史等。

以下是一些常用的方法和指标：1. 年龄：年龄是脑卒中发生的关键因素之一，随着年龄的增长，脑卒中的风险也会增加。

2. 性别：男性比女性更容易患脑卒中，因此，性别也是一个重要的预测指标。

3. 吸烟和饮酒：吸烟和饮酒是两个常见的脑卒中危险因素，它们可以导致血管狭窄和高血压。

4. 高血压：高血压被认为是脑卒中的主要危险因素之一。

因此，监测血压的变化对于预测脑卒中风险非常重要。

5. 糖尿病：糖尿病会导致血管病变和高血压，从而增加脑卒中的风险。

6. 心脏病和血脂异常：心脏病和血脂异常也是脑卒中的危险因素，这些疾病会导致血管壁损伤和血栓形成。

应用：脑卒中风险预测模型可以用于筛查患者，进行早期干预和治疗。

通过将已知的风险因素与个体的特征进行比较，可以给出一个评估脑卒中风险的概率。

除了个人的风险评估，脑卒中风险预测模型还可以用于制定公共卫生政策。

通过对大量人群的数据分析，可以确定脑卒中的高风险人群，并制定针对性的健康管理措施。

然而，构建一个准确的脑卒中风险预测模型仍然面临一些挑战：1. 数据质量：模型的准确性和可靠性取决于数据的质量。

因此，为了构建和验证模型，需要大量的高质量数据。

2. 特征选择：选择合适的特征对模型的准确性至关重要。

然而，在大量可能相关的因素中进行选择是一项复杂的任务。

3. 模型验证：构建一个模型只是第一步，如何验证模型的准确性和可靠性也是一个重要的问题。

猴脑缺血模型的研究进展

来．改进仍然是目前最直接、ｒ率最低、灌注经北．再时间可以控制的局灶性脑缺血模型３１３血管外气囊充气阻断血流法．．为了减少血管夹法的损伤．人使用气震压迫有ＭＣＡ以形成闭塞。将特制的气囊（ａｏｎｃｆ）ｂｌｏｕｆ置于ｌ狒狒ＭＣＡ主十．充气后阻断有侧ＭＣｈ然后再Ａ３．灌注１ｈ观察微血管的变化，
维普资讯
ｌ７・２
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综述・
猴脑缺血模型的研究进展
高焕民
摘要
程介士
文章论述ｒ的全脑缺血、猴半球缺血和局灶性缺血的制作．着重分析了各种大脑中动脉闭
塞模型，对闭塞再灌注模型存在的问题进行了较为详细的总结：关键词大脑巾动脉；闭塞再灌注：缺血；脑猴
围区和外周带
１２弥散性不完全性脑缺血．
３１２血管夹闭法．．
大面积心肌梗死、心室颤动等可以导致全身血压降低，从而诱发脑缺血，这种情况在人类相对多见，然而压迫向脑部供血的大血管并不能制作理想
的模型模拟这种情况
作者单位：００２海，２０３复旦太学神经生物学教研室医学神经生物学国家重点宴噎审
通。经眶入路法目前已经有较多的改进，优点很多，但需要精细的眼眶内操作，容易损伤ＭＣＡ管壁上的神经襻导致脑脊液漏。对血管的操作可能引起血管痉挛从而难以再通，不能预见梗死灶的大小，不能

神经系统疾病相关动物模型

2. 旋转大鼠模型 [造模机制] 利用神经毒剂6-羟基多巴胺（6-OHDA)破坏黑质的多巴胺能神经元。 [造模方法] 利用立体定向仪以微量注射器向黑质内注入6-羟多巴，两周以后皮下注射Apomorphine 0.25mg/kg诱发大鼠旋转。模型成功的标准：连续两周测试平均转速〉7次/min，持续旋转〉40min。 [模型特点] 操作简单成功率高、观察方便。但与灵长类动物相比不能完整准确的反应PD的特征。
（二）全脑缺血动物模型（Animal model of whole
cerebral ischemia）
1. 沙鼠全脑缺血模型： [造模机制] 结扎双侧颈总动脉可造成全脑缺血模型，开放双侧颈总动脉可方便地恢复血流，已广泛地应用于脑缺血及再灌注损伤研究。 2. 大鼠四条血管关闭全脑缺血模型： [模型简述] Pulsimelli法适用于脑缺血的急性和慢性实验研究。关键之处在于对双侧椎动脉的处理。模型成功的标志为大鼠应出现意识障碍。
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犬常用于灵活型和迟钝型的神经实验；对红绿色盲，因而以红色刺激进行的条件反射实验不能选择犬。
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绵羊的蓝舌病和人的脑积水相似，适宜于脑积水研究。
• 青蛙和蟾蜍的腓肠肌和坐骨神经很容易获得，且制作方便，适于观察药物对外周神经、横纹肌或神经肌肉接头的作用。蛙的大脑很不发达，可用来作简单的神经反射弧实验。 • 树枸是地球上幸存下来的灵长类原型之一，在进化上处于一种特殊的地位，是神经生物学良好的实验材料。 • 猴的高级神经活动发达，常用于行为学的研究；小儿麻痹症优选动物。 • 黑猩猩的智力发育和人类幼儿及智能低下的成年人相近，对黑猩猩学习行为所取得的数据，可应用于人类婴幼儿教育，对智能低下的成年人的教育也有参考价值。
二、转基因动物技术方法（transgenic animal techniques）是常规分子生物学技术的延伸和拓展，使动物和人体基因工程研究由以往的单基因离体水平的操作，发展到了离体和在体相配合的崭新阶段。 1. 显微注射技术：通过显微注射直接将外源基因导入受精卵，再移植到受体，使其发育成转基因动物的一种方法。