甜菊糖HPLC液相谱图(GB 8270-1999)
甜菊糖苷类化合物的质谱行为分析及定量策略初探
第44卷第2期2022年4月Vol.44,No.2Apr.,2022中国糖料Sugar Crops of Chinadoi：10.13570/ki.scc.2022.02.005甜菊糖苷类化合物的质谱行为分析及定量策略初探罗庆云1，印敏2（1.南京农业大学园艺学院，南京210095；2.江苏省中国科学院植物研究所/南京中山植物园，南京210014）摘要：混合体系多组分定量是现代分析科学研究难点，探讨建立利用液质联用（LC-MS）对作物器官所含各化合物进行定量的化学计量方法是化学形态学研究的基础，有利于作物品质育种亲本选配及栽培管理措施评价。
本研究以甜叶菊叶片所含12种主要甜菊糖苷类化合物为例，通过考察归属各甜菊糖苷化合物的质荷比≥M/2的初级和次级裂解离子、分子离子、加和离子、双分子及三分子聚合物离子等各组分及其同位素化合物离子的定量检出信息稳定性及各检出峰面积与化合物浓度梯度之间的相关性，探讨利用LC-MS方法对混合体系——甜菊叶提取液中各甜菊糖苷组分进行定量的策略。
结果表明，LC-MS对归属同一甜菊糖苷化合物的各组分及其同位素化合物的检出受混合体系中甜菊糖苷化合物的浓度影响大，检出峰面积相对占比因甜菊糖苷浓度不同呈不规则波动，以归属同一化合物的各组分及其同位素化合物检出峰面积总和为依据所建立的LC-MS定量体系更适用于化合物浓度差异大的混合体系。
关键词：甜叶菊；甜菊糖苷；化学计量；液质联用；定量分析；同位素化合物；混合体系中图分类号：S566.9文献标识码：A文章编号：1007-2624（2022）02-0028-09罗庆云，印敏.甜菊糖苷类化合物的质谱行为分析及定量策略初探[J].中国糖料，2022，44(2)：28-36.LUO Qingyun,YIN Min.LC-MS analysis of steviol glycosides and preliminary study on quantitative strategy for steviolglycosides in stevia leaves[J].Sugar Crops of China,2022,44(2):28-36.0引言植物化学形态学研究是对目标器官所含化合物的全面分析，是以特定部位所含化合物为依据，对植物资源加以描述和分类的一门形态学与化学相互渗透的学科。
甜菊素中总甜菊糖苷的定量分析方法之比较
Ｃｏｍ ｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｒｍ ｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓｔｅｖｉｏｌ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ ｉｎ ｓｔｅｖｉｏｓｉｎ
ＰＥＮＧ Ｑｉｎｇ－ｒｕｉ，Ｗ Ｕ Ｍ ｅｉ－ｎａ，ＺＡＮＧ Ｔｏｎｇ－ｔｏｎｇ，ＸＩＡ Ｙｏｎｇ－ｍｅｉ
（Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆＣｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｊｉａｎｇｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ ２１４１２２； Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆＦｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉａｎｇｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ ２１４１２２）
用 作 矫 味 剂 ， 其 成 分 一 般 多 为 品 质 略 逊 的 甜 菊 有 限公司 。
甜 菊素中总甜 菊糖 苷的定 量分析方法之 比较
彭庆 蕤 ，吴 美娜 ， 张 童童 ，夏咏 梅
（江南 大学 化学 与 材料 工程 学 院 ，无锡 ２１４１２２ｌ食 品科学 与 技术 国 家重 点实验 室 ，无 锡 ２１４１２２）
摘 要 ：甜 菊糖苷在药用辅料 中被称为甜菊 素 ，其总甜菊糖苷 的定量分析依 据中国药典的容量分析法 ；而 在食 品应用 中，总甜 菊糖苷 的定量分析依 据国标 ＧＢ８２７０－２０１４的反相 ＨＰＬＣ法 。两类方法 的检测原理和 结果 不尽 相 同，因而会 给实 际应用带 来困扰 。本文分 别采用容 量分 析法 、正相 ＨＰＬＣ法 和反 相 ＨＰＬＣ法测定 七种 市售甜菊 素和一种葡萄糖基甜菊糖苷 中的总甜菊糖 苷含量 ；并 以红外光 谱分可能有外加其他甜 味剂。分别依据药典和 国标的方法分析所试样 品的总 甜菊糖 苷含量 ，依据药典所得结果相对 依据国标所得结果基 本为负偏差 ，最 大相对偏 差可达 －１６．０４％。容量 分 析法 因为 其最 终结果 以斯替夫苷当量计算 ，所 以 比较适用于测定平均分子量 接近斯替夫苷分子量 的产 品 ；而液 相 色谱法 由于考 虑了 １１种甜菊糖苷 ，与实际结果 将较为接 近。建议用 反相 ＨＰＬＣ法 检测甜菊 素 中总甜菊糖 苷 的含量 。
高效液相色谱法测定甜菊糖苷中甜菊醇的含量
高效液相色谱法测定甜菊糖苷中甜菊醇的含量胡林;寇彦杰;翁永京;万小玲【摘要】建立高效液相色谱法测定甜菊糖苷中甜菊醇的含量.色谱条件:色谱柱为Phenomenex C18(4.6mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水(50∶50);流速1.0 mL/min;检测波长213nm;柱温30℃;进样量10 μL.线性范围为1.046μg/mL～52.3μg/mL(r=0.9997),加标平均回收率为96.60％,RSD为0.51％(n=6).本方法准确度高、精密度高、重复性好、简捷易操作,可以作为甜菊糖苷中甜菊醇含量的测定方法.【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2014(026)010【总页数】3页(P1644-1646)【关键词】甜菊醇;甜菊糖苷;高效液相色谱法【作者】胡林;寇彦杰;翁永京;万小玲【作者单位】四川泰华堂制药有限公司,广汉618300;成都华高药业有限公司,成都610059;四川泰华堂制药有限公司,广汉618300;四川泰华堂制药有限公司,广汉618300【正文语种】中文【中图分类】TS202.3甜叶菊(Stevia rebaudiana Bertoni)为菊科(Composital)斯台比亚属(Stevia)多年生草本植物。
甜菊糖苷(steviol glycosides，SGs)是一种从甜叶菊的叶和茎中提取出来的高甜度、低热量天然甜味剂，它主要含九种不同甜味成分［1］，其中甜菊苷(Stevioside)为主要成分，甜菊醇(Steviol)为甜菊苷的苷元，分子具有对映贝壳杉烯型四环二萜骨架结构，具有广泛的生理活性，如清热解毒、抗菌消炎、抗肿瘤等作用［3，4］。
本方法采用高效液相色谱法测定甜菊糖苷中甜菊醇的含量，为甜菊糖苷产品质量控制提供科学检测依据。
1 仪器与材料1.1 仪器Agilent 1100 高效液相色谱仪(配备在线脱气机、四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器);CP225D 型电子分析天平(Sartorius 公司);DHG-9140 型电热恒温鼓风干燥箱;KQ-250B 型超声波清洗器。
食品中甜菊糖甙检测方法研究进展
食品中甜菊糖甙检测方法研究进展作者：尤继明等来源：《安徽农学通报》2013年第06期摘要：介绍了甜菊糖甙的分子结构和理化性质，并综述食品中甜菊糖甙的检测方法，如薄层层析法、分光光度法、毛细管电泳法、液相色谱法等，并展望了食品中甜菊糖甙检测的前景。
关键词：甜菊糖甙；食品；检测方法中图分类号 TS201.1 文献标识码 B 文章编号 1007-7731（2013）06-140-03甜菊糖甙（Stevia）又称作甜菊糖（Stevia sugar），为甜叶菊叶子提取物，不含糖分和热量；色泽白色至微黄色，口感适宜、无异味，是发展前景广阔的新糖源。
甜菊糖苷是目前世界已发现并经我国卫生部批准使用的甜味剂，其天然低热值并且非常接近蔗糖口味，是继甘蔗、甜菜糖之外第3种有开发价值和健康推崇的天然甜味剂，被国际上誉为“世界第三糖源”，其具有高甜度、低热量、安全无毒等特点，是一种可替代蔗糖的非常理想的甜味剂[1-3]。
甜叶菊糖苷的物理、化学性能稳定，无发酵性，无代谢性，长期食用不会使人发胖，特别适宜高血压、糖尿病、肥胖病、龋齿病患者使用，由此甜菊糖甙广泛应用于食品、饮料、调味料、酿酒、医药、日用化工、酿酒、化妆品等行业。
甜菊糖主要含有甜菊糖苷（stevioside，SS）、莱鲍迪苷A（rebaudioside A，RA）、莱鲍迪苷C[7]（rebaudioside C，RC）等8种成分[4]，莱鲍迪苷A 是其中品质最好的成分。
20世纪50年代人工种植甜叶菊成功后，日本、马来西亚、中国、韩国、阿根廷、巴拉圭、巴西等20多个亚洲和拉美国家开始批准使用[5]，美国食品药品管理局2008年批准使用甜叶菊提取物莱鲍迪苷A后，甜叶菊产业受到广泛关注，我国卫生部颁布的《食品安全国家标准食品添加剂使用卫生标准》（GB2760-2011） [6]规定甜菊糖甙的使用范围为蜜饯、坚果及其仔类、糖果、膨化食品、糕点、调味品、饮料等食品，最大使用量按照生产需要适量使用。
高效液相色谱法测定甜叶菊中甜菊糖总苷的含量
高效液相色谱法测定甜叶菊中甜菊糖总苷的含量关键词：利用高效液相色谱法对甜叶菊干叶中甜菊糖总苷含量开发出一种新的检测方法，通过单因素试验，确立了检测方法，即样品经30%乙腈超声提取、孔径为0.45μm的有机滤膜过滤后，选择C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱；以78%的0.1%磷酸水溶液+22%乙腈（体积比）为流动相，1.0mL/min的流速进行洗脱。
在210nm 波长及40℃柱温下利用DAD检测器检测，用外标法定量。
得出的图谱峰形尖锐，结果回收率高、检测结果准确、精密度高、重复性良好。
说明此方法开发具有较强的可行性。
关键词：高效液相色谱法；甜叶菊；甜菊糖总苷Determination of stevioside in stevia rebaudiana byhigh performance liquid chromatography Absrtact:a new detection method for stevioside content in stevia rebaudiana dry leaves was developed by high performance liquid chromatography. through single factor test, the detection method was established, in other words,C18(250mm×4.6mm, 5μm) chromatographic column was selected after the sample was ultrasonically extracted with 30% acetonitrile and filtered by 0.45μm organic filter membrane. Elution was carried out at a flow rate of 1.0mL/min with 78% 0.1% phosphoric acid aqueous solution +22% acetonitrile (volume ratio) as mobile phase. At 210nm wavelength and 40℃ column temperature, DAD detector was used for detection and external standard method was used for quantification. The obtained chromatogram has sharp peak shape, high recovery rate, accurate test results, pinpoint accuracy and beautiful repeatability. This shows that the development of this method is feasible.Key words:high performance liquid chromatography; Stevia rebaudiana; Stevioside total glycoside贺州学院本科毕业设计（论文）1 前言食物是人类得以生存的必备保障，食物的主要成分与构成人体的基本物质相同，人类可从食物中获取人体生长的营养物质及能量。
高效液相色谱法同时检测糕点中几种天然甜味剂的探索研究
甜菊糖 苷 （ｔｖ ｓ ｅ Ｓ ｉ ｉ ，简写 为 Ｓ ） （ ｅ ｏｄ Ｔ 分子 式
收稿 日期 ：２ １ Ｏ ０ ２一 １—０ ４ 通讯作者
ｃ。 、甜菊 双糖苷 （ ｅａｄｏｉｅＡ，简写 。 。 ） Ｈ Ｏ。 Ｒ ｂｕｉｓ ｄ
项 目基金：福建省科技厅项 目 社会发展重点项 目 （０ ０ ０ ０ ） 中国 ２ １Ｙ ０ １ 认证认可监督管理委员会 行业标准项 目 （０ ９ ５ ４ ２０ Ｂ ５ ）
列检测器 ） ；Ｍｉｉ Ｑ Ｓ ｓ ｍ 超 纯 水 制 备 器 （ ｌ— ｙｔ ｌ ｅ 美
国 Ｍ ｌ ｏ 公司 ） ｉｐ ｒ ｉ 。
甲醇 （ 谱 纯 ，Ｍ ｒ ） 色 ｅ ｋ 、乙 腈 （ ｃ 色谱 纯 ， Ｍｅｃ ） ｒｋ 、磷 酸 （ 优级纯 ，上 海试 一 化 学试 剂 有 限
释成 ５ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ． ｔ ／ ．Байду номын сангаас、１． 、２ ． 、５ ． 、１０ Ｏ￣ ｍＬ的标 ｇ 准 工作液 。 １ ４ 样 品处理和 制备 ．
相色谱 法简 便快 捷 ，应 用 也较 为 普 及 ，本 文 最 终 选 择 液相色 谱法进 行 检 测 。 目前 国 内外 尚未 见 同
要 ：主要探讨应用 高效液相色谱法 同时检测月饼 、饼 干 、面包等糕点食 品中的甜菊 糖苷 、甜菊双糖
苷 、甘草酸 、甘 草次酸 。以 Ａ ｉｅｔ Ｏ Ａ ｅｐ Ｄ １ （ ５ ４ ６ ｇ ｌ Ｂ Ｘ Ｅｌ ｓ ＢＣ ８ ２ ０× ．ｍｍ，５ ）色谱 柱为分析 柱 ，确立 了 ｌｎ Ｚ ｉ Ｘ 糕点 中的天然甜味剂甜菊糖苷 、甜 菊双糖苷 、甘草酸 、甘草次酸 的高效液相色谱 检测法。通过三 水平六平行
（ ５ ×４ ６ ２０ ． ｍｍ，５ｘ １ ｍ） 色 谱 柱 ；流 速 ：１Ｏ Ｌ ．ｒ ／ ａ ａ ；检 测 波 长 ：２ ０ ｍ 和 ２ ４ ｍ；柱 温 ：３ ℃ ； ｒｎ ｉ １ｎ ５ｎ ０ 进样 量 ：Ｉ Ｉ ；流动 相 ：见表 １ Ｏ￣ Ｌ 。
高效液相色谱法检测运动饮料中甜菊糖苷
高效液相色谱法检测运动饮料中甜菊糖苷
周文清
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2017(038)001
【摘要】建立一种用高效液相色谱-PDA检测法测定运动饮料中甜菊糖苷的检测方法。
样品前处理采用硅胶固相萃取小柱进行富集和净化，氮气吹干后用流动相复溶上机检测。
采用Waters RP C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm）分离，以乙腈∶水=30∶70（体积比）作为流动相，用PDA检测器检测，外标法峰面积定量。
结果表明，9种甜菊糖苷组分在20.0μg/mL~200.00μg/mL浓度范围内线性良好，相关系数r2为0.991~0.999，检出限在1.0μg/mL~3.0μg/mL，定量限为3.0μg/mL~9.0μg/mL，加标回收率达到81.4%~90.5%。
【总页数】4页(P161-164)
【作者】周文清
【作者单位】景德镇陶瓷大学，江西景德镇333000
【正文语种】中文
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3.高效液相色谱法测定饮料中甜菊糖苷的不确定度评定 [J], 李卓;舒蕊华;张亚锋;商珊;郭端
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来
5.高效液相色谱法测定液体运动饮料中的烟酸和烟酰胺 [J], 傅红雪;陈万勤;周霞;罗金文
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食品安全地方标准食品中甜菊糖苷的测定高效液相色谱法编制说明
吉林省食品安全地方标准《食品安全地方标准食品中甜菊糖苷的测定高效液相色谱法》编制说明(征求意见稿)吉林省疾病预防控制中心2012年5月24日目录一、研究背景……………………………………………………二、任务来源…………………………………………………三、制定标准的必要性和意义………………………………四、标准制定的主要过程………………………………………五、制定标准的原则和依据……………………………………六、标准方法建立的依据………………………………………1、标准的名称…………………………………………………2、标准的范围……………………………………………………3、方法原理……………………………………………………4、前处理条件…………………………………………………5、仪器分析条件…………………………………………………6、线性范围…………………………………………………7、检出限…………………………………………………8、精密度和准确度………………………………………………七、方法验证……………………………………………………八、验证结论……………………………………………………九、本标准作为强制性地方标准的建议……………………………十、贯彻标准要求和措施建议…………………………………十一、参考文献……………………………………………………《食品安全地方标准食品中甜菊糖苷的测定高效液相色谱法》编制说明一、研究背景甜菊糖，俗称甜菊糖甙（Stevioside）, 是从菊科草本植物甜叶菊中精提而得，原产于南美洲的巴拉圭、巴西、阿根廷等地。
甜菊糖甜度为蔗糖的200~350 倍，而热量只有蔗糖的1/300，是一种高甜度、低热量、新型、保健、天然甜味剂。
甜菊糖具有热量低、甜度高、味质好、耐高温、稳定性好等特点，在人体内无残留、安全无毒，有利于调节血糖，促进脑力活动，对心脑血管病、肥胖病、糖尿病患者有辅助治疗功能，更有助于防治龋齿，并可作为苯丙尿酮症（PKU）病人的糖类替代物。
高效液相色谱法分离和测定甜菊甙
上图系甜菊 甙提 纯 品在波数 ６０ ５ ４０ｃ － 范 围内红外吸收图谱，与其标准 ００ｍ １
图谱一致。
２ ．液相色谱法鉴定： （ 图３
仪 器：上海分析仪器厂高压液相色谱仪 检侧器：２０ ４０ｍ可变波长紫外检测器（ ０ ０ｎ 上
海分析 仪器 厂试 制）
高压泵： Ｈ－４１ ０ 型恒流泵 （ 上海化工专科
展开剂 ２７：氯仿：甲 ， 醇：水（０６： ９： ９ ５ 体积／ 体积） 在上述条 件薄层展开后，用碘蒸气显色，甜菊甙提纯
品显示单 一的斑点。
（ 三）甜菊甙测定工作曲线的制作 配制Ａ Ｂ 、标准液：
Ａ液 （ 甜菊甙提纯品溶液）：在５ 毫升容量瓶 ０ 中准确称入约１０ ５毫克甜菊甙提纯品 （ Ｗｉ，加入溶 剂 （ 甲醇和水以７ ：５的体积比配制后并脱气）， ５２ 稍稍加热使样品溶解，待冷却后再用溶剂定容。 Ｂ液 （ 苯乙醇内标液） ：在２０ 升容量瓶中准 ０毫 确称入约６毫克苯乙醇 （ ） ０ Ｗ８，加入溶剂 （ 同上）
定 容。
甜菊式％ ィ
式 中：
Ｗ：待测甜菊糖甙样品重量，毫克； Ｗｓ ：内标物苯乙醇重量，毫克； ｉ Ａ ：待测样品中甜菊甙组分的峰面积； Ａ ：内标物苯乙醇峰面积； ｓ ｔ ｇ：甜菊甙测定工作曲线斜率。
从Ａ液中分别吸取１ ，． ２ ，． ３ 毫升溶液 ． ２ ，． ２ ，． ６ ０ ４ ８ ２ 于清洁的５ 个青霉素小瓶中 （ 或者用移液管吸取后 再准确称取重量）。再用移液管顺次各加入２ 毫升 Ｂ液，并摇匀， 当仪器进入正常工作状态后，以微 量注射器进样测定。５ 个工作点的进样 量 分 别为 ３ ，． ３ ，．， ． ． ３ ，． ３ ４ ２ ４ ６ ８ ０微升，以使响应值达到记录仪 满刻度４ ８％为宜，每个工作点进样测定重复三 ０ ０
食品安全地方标准食品中甜菊糖苷的测定高效液相色谱法编制说明
吉林省食品安全地方标准《食品安全地方标准食品中甜菊糖苷的测定高效液相色谱法》编制说明(征求意见稿)吉林省疾病预防控制中心2012年5月24日目录一、研究背景……………………………………………………二、任务来源…………………………………………………三、制定标准的必要性和意义………………………………四、标准制定的主要过程………………………………………五、制定标准的原则和依据……………………………………六、标准方法建立的依据………………………………………1、标准的名称…………………………………………………2、标准的范围……………………………………………………3、方法原理……………………………………………………4、前处理条件…………………………………………………5、仪器分析条件…………………………………………………6、线性范围…………………………………………………7、检出限…………………………………………………8、精密度和准确度………………………………………………七、方法验证……………………………………………………八、验证结论……………………………………………………九、本标准作为强制性地方标准的建议……………………………十、贯彻标准要求和措施建议…………………………………十一、参考文献……………………………………………………《食品安全地方标准食品中甜菊糖苷的测定高效液相色谱法》编制说明一、研究背景甜菊糖，俗称甜菊糖甙（Stevioside）, 是从菊科草本植物甜叶菊中精提而得，原产于南美洲的巴拉圭、巴西、阿根廷等地。
甜菊糖甜度为蔗糖的200~350 倍，而热量只有蔗糖的1/300，是一种高甜度、低热量、新型、保健、天然甜味剂。
甜菊糖具有热量低、甜度高、味质好、耐高温、稳定性好等特点，在人体内无残留、安全无毒，有利于调节血糖，促进脑力活动，对心脑血管病、肥胖病、糖尿病患者有辅助治疗功能，更有助于防治龋齿，并可作为苯丙尿酮症（PKU）病人的糖类替代物。
HPLC法测定陕北地区甜菊叶中甜菊糖苷含量
分析检测HPLC法测定陕北地区甜菊叶中甜菊糖苷含量祁春雷，刘月霞，高 强，文 钰（榆林合力生物科技有限公司，陕西榆林 719000）摘 要：采用HPLC法测定陕北地区佳县、定边、米脂3个产地的甜菊叶样品中甜菊糖苷含量。
通过超声提取得到甜菊叶中甜菊糖苷样品液，使用高效液相色谱仪检测甜菊糖苷样品液。
采用C18反相色谱柱 （250.0 mm×4.6 mm，5 m），流动相为乙腈-磷酸钠缓冲液（30∶70，体积比），梯度洗脱，流速1 mL/min， 柱温40 ℃，测定波长210 nm，进样量10 μL。
结果表明，HPLC法操作简便、高效快速、稳定性好。
关键词：甜菊叶；甜菊糖苷；高效液相色谱法Determination of Stevioside in Stevia Leaves in NorthernShaanxi by HPLCQI Chunlei, LIU Yuexia, GAO Qiang, WEN Yu(Yulin Heli Biotech Co., Ltd., Yulin 719000, China)Abstract: The content of stevioside in Stevia leaves from Jiaxian, Dingbian and Mizhi in Northern Shaanxi was determined by HPLC. Stevioside sample solution in Stevia leaves was obtained by ultrasonic extraction, and stevioside sample solution was detected by high performance liquid chromatography. HPLC was performed on a C18 reversed-phase column (250.0 mm × 4.6 mm, 5 m), the mobile phase was acetonitrile sodium phosphate buffer (30∶70, volume ratio), gradient elution, flow rate was 1 mL/min, column temperature was 40 ℃, determination wavelength was 210 nm, and injection volume was 10 μL。
一种甜菊糖转化产物分析检测方法的建立
佳值后进行定量分析。
PAD 类检测器尽管具有较高的灵敏度，但是与单波长吸收检测方法相比，其灵敏度和线性范围均不如单色光高。
主要是单波长检测器所用的光敏元件检测效率高，如果采用光电倍增管放大效率更为显著；同时，多波长吸收与单波长吸收所得到的结果也有差别。
因此，目前的检测器灵敏度可调波长检测器比二极管阵列高约一个数量级左右。
在低浓度样品分析时，采用单波长检测器获得的定量结果更加准确。
本实验所用的HPLC 为Waters 2695 系统，软件为Empower 。
该仪器由Waters 2695分离单元、2996型二极管阵列检测器、2420蒸发光散射检测器、色谱管理工作站和打印机等部分组成。
1.2 色谱柱的选择色谱是一种分离分析手段，因此，色谱柱是高效液相色谱仪的核心部件。
柱效高、选择性好、分析速度快是对色谱柱的一般要求。
目前市售的高效液相色谱分离柱的内径有4.6mm 和3.9mm 两种规格，柱长一般用100～300mm 就能满足复杂混合物的分析要求。
本实验用HPLC 来分析甜菊糖转化产物的情况，故属于分离糖类物质[3]，同时应用反相液相色谱的分离方法，选用了一根Waters Sunfire C18(4.6×150mm 5μm)柱，该柱填料为球形硅胶键合C18并采用了新型的键合和端基封尾技术，能够提供完美的色谱峰型。
2 色谱条件的确立在进行正式的实验之前，首先需要确立色谱检测条件，主要是对流动相流速、流动相配比、色谱柱长度、色谱柱温度等因素进行优化，以便得到最好的检测效果。
对于Waters2695来说，开机之前首先需要对样品和流动相进行过滤(通常过0.22μm 滤膜)，过滤完毕再超声脱气10min 左右。
更换四元泵流动相，通常A 为甲醇、B 为乙腈、C 为水、D 为缓冲盐。
整个实验过程结束后，要冲洗系统、色谱柱。
冲洗原则：C18柱先用水(90％左右，具体需根据色谱柱要求)冲洗水溶性物质，逐渐增加有机相比例，最终色谱柱保存于100％乙腈(或其它有机相)。