免疫磁珠分离技术及应用
免疫磁珠
⑶IMS法 将样品增菌液分成DICA法阳性和阴性 两组.均取1ml加入1.5ml ep离心管中(离心管事 先已加入20μl免疫磁珠)振摇20~30min,上磁铁 板吸附沉淀免疫磁珠,吸去上清液,反复用PBTT洗涤2次,加50μl PBs-T重悬浮、混匀,分涂于2 块CT-SMAC平板37℃培养18~20h,挑取中等大 小不发酵山梨醇的无色半透明可疑菌落和发酵山 梨醇的红色菌落(防止发酵山梨醇的E.Coil O157, H7,漏检)接种克氏双糖,选取双糖符合者,再进 行形态染色、相关生化反应、E.Coil O157及H7, 诊断血清做玻片凝集.均符合者可判为E.Coil O157:H7。对DICA法阳性.而IMS集菌阴性的增 菌液,再进行第二次IMS集菌分离。
中的应用也越来越广泛,与生物磁珠技术结合后,更是产生了诱人的发展前景,并
广泛地应用于分离纯化RNA、mRNA、核酸片段等及相关研究。
5、用于分型 免疫磁珠法可被应用于临床器官移植供受者的快速选配。在高梯度磁场下,用 免疫磁珠法分离静脉或腹腔血中T、B淋巴细胞,并利用分离的淋巴细胞进行 HLA-ⅠⅡ类抗原分型。如采用磁珠技术和单抗试剂建立起可在1.5h完成HLAⅠⅡ类抗原一类分型的新方法,还可应用免疫磁珠分离技术进行肾移植供受体的 HLA分型、探讨血液病患者反复血小板输注的治疗效果与HLA之间的相关性。
6、 用作靶向释药系统的载体 免疫磁性微球作为靶向释药系统的载体可使免疫磁性微球上的抗癌药物更易 与癌细胞接触,服用这种制剂后,在体外适当部位用一适宜强度的磁铁,将磁性 微球引导到体内特定靶区,提高了杀伤癌细胞的效果。很多研究者使用不同的方 法制成了针对不同癌细胞的免疫磁性微球,作为靶向释药系统的载体并在实验中
免疫共沉淀磁珠法-概述说明以及解释
免疫共沉淀磁珠法-概述说明以及解释
1.引言
1.1 概述
概述部分可以简要介绍免疫共沉淀磁珠法的定义和原理。免疫共沉淀磁珠法是一种利用磁珠载体对特定抗原/抗体进行选择性结合的技术,通过磁场的作用实现对特定分子的快速分离纯化。这种方法在生物学、医学和生物化学等领域有着广泛的应用,并且具有操作简便、效率高、成本低的优势。在接下来的文章内容中,我们将对免疫共沉淀磁珠法的方法介绍、应用领域以及优势和局限性进行详细阐述。
1.2 文章结构
文章结构部分的内容可以包括对整篇文章的结构和内容进行简要介绍,让读者对文章有一个整体的了解。可以包括文章的各个章节内容和重点,以及各个部分之间的逻辑关系和连接。此部分可以是对整篇文章的概述和导读,帮助读者更好地理解和阅读整篇文章。部分的内容
1.3 目的
本文旨在介绍免疫共沉淀磁珠法在生物学和医学领域的应用和发展现状。通过对该方法的详细介绍和分析,旨在帮助读者了解其原理、操作步骤和相关领域的实际应用。同时,通过评估该方法的优势和局限性,旨在为研究人员提供参考,以便更好地应用和改进该方法。最终目的是促进免疫共沉淀磁珠法在生物医学研究和临床诊断中的应用,并为未来的研究方
向和方法改进提供启示。
2.正文
2.1 方法介绍
免疫共沉淀磁珠法是一种利用磁珠载体进行免疫共沉淀的方法,在生物医学领域有着广泛的应用。该方法可以分为直接法和间接法两种。
直接法是指将特异性抗体直接连接到磁珠表面,然后将混合物中的抗原与抗体结合,再利用外加磁场将磁珠与非特异性物质分离。该方法操作简单,灵敏度高,适用于大多数免疫学试验。
磁珠分离细胞技术
需进一步通过阳性选择分选细胞亚群。
非目的细胞滞留在分选柱上,被去除
撤去磁场,将标记的细胞洗出
应用:分选人外周血中的CD4+CD25+ T细胞 应用:分选人外周血中的CD4+CD25+ T细胞
抗生物素磁珠
目标细胞滞留在分选柱内
撤去磁场,将标记的细胞洗出
高纯度,高回收率,操作简单,尤其是富集稀少细胞。 目的细胞磁性标记后,作为阳性的标记组分直接分选出来。
分选或去除用多个抗体混合物标记的多种细胞
应用:分选人外周血中的CD4+CD25+ T细胞
Dynalbeads®
缺点:不能在分选的同时进行分析,分选过程中很难去除死细胞团块的干扰,难于同时进行多种标记物的分选。
抗免疫球蛋白磁珠 缺点:不能在分选的同时进行分析,分选过程中很难去除死细胞团块的干扰,难于同时进行多种标记物的分选。
❖ MACS d≈50nm,多聚糖和氧化铁组成的超顺磁化微粒;可被细 胞生物降解而无需解离磁珠;分离丰度极小的细胞(10-8);
❖ Dynal d=4.5um﹑2.8um﹑1um,多聚材料包被的氧化铁超顺磁 微球;均一性好;也适用于细胞活化;
❖ BD d≈200nm,超顺磁化微粒;包被了高质量的BD抗体;
抗链酶亲和素磁珠
阳性组分(滞留在分选柱上的细胞)
免疫磁性微球的制备和应用
免疫磁性微球的制备和应用
免疫磁性微球(Immunomagnctic beads,IMB)是免疫学和磁载体技术结合而发展起来的一类新型材料。IMB是包被有单克隆抗体的磁性微球,可与含有相应抗原的靶物质特异性地结合形成新的复合物。通过磁场时,这种复合物可被滞留,与其它组分相分离,该过程称为免疫磁性分离法(Immunomagnctic Separation)。免疫磁性分离简便易行,分离纯度高,保留靶物质活性,且高效、快速、低毒,可广泛应用于细胞分离和提纯、免疫检测、核酸分析和基因工程、作靶向释药的载体等领域。
磁性微球由载体微球和配基结合而成。理想的磁性微球为均匀的球形、具有超顺磁性及保护性壳的粒子。
一、磁性微球性能介绍
1、磁性材料
γ-Fe2O4、Me-Fe2O4(Me = Co,Mn,Ni)、Fe3O4、Ni、Co、Fe、Fe-Co和Ni-Fe合金等,目前被研究最多且应用最广泛的是铁及其氧化物(Fe、Fe2O4和Fe3O4等)。
2、高分子材料
聚乙烯亚胺、聚乙烯醇、多糖(纤维素、琼脂糖、葡聚糖、壳聚糖等)和牛血清白蛋白等。表面常带有化学功能的基团,如-OH、-NH2、-COOH和-CONO2等,使得磁性微载体就几乎可以偶联任何具有生物活性的蛋白。
3、功能配基
配基必须具有生物专一性的特点,而且载体和微球与配基结合后不影响或改变配基原有的生物学特性,保证微球的特殊识别功能。
磁性高分子微球决定了免疫磁性微球的大小和形状。Hirschein得到外加磁场作用力与磁性微球的关系为:
F=(Xv - Xv0)VH (dH/dX)
免疫磁珠技术ppt课件
13
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O 菌落识别 在CT-SMAC平板上,典型菌落为不发酵山梨醇的圆形、
光滑、较小的无色菌落,中心呈现较暗的灰褐色;发酵山梨醇的 菌落为红色;在改CHROMagar O157弧菌显色琼脂平板上为圆 形、较小的菌落,中心呈淡紫色一紫红色,边缘无色或浅灰色。 初步生化试验:
↓
涂布CT-SMAC平板和改良CHROMagar O157弧菌显色琼脂平板
↓ 36± 1oC
18h~24h
挑取可疑菌落5个~10个,氧化酶阴性,革兰氏阴性杆菌接种TSI
↓
MUG-LST
↓ 36± 1oC
18h~24h
阳性
阴性
↓
非O157细菌
免疫磁珠技术在食品有害微生物检测中应用
小组成员:田理刚、、、朱林韬、赵建秋、董唯
目录
1 免疫磁珠技术的介绍 2 免疫磁珠技术在食品有害微生物检测中的应用 3 小结
免 疫 磁 珠 ( Immunomagnetic bead,
IMB,简称磁珠)技术,是近年发展起来的
将固化试剂特有优点与免疫学反应高度
2.7 IMB技术在微生物检测应用时的主要影响因素
1 免疫磁珠的质量 2 目标菌、 杂菌及磁珠的比例 3 待测标本的性状 4 磁珠与待测标本的反应条件
2.8 IMB技术在食源性致病菌检测中应用进展
1
IMB技术结合显色培养基 对食源性致病菌进行检测
2
IMB技术结合PCR技术 对食源性致病菌进行检测
[10] Petzinger E, Weidenbach A. Mycotoxins in the food chain:erole of ochratoxins[J]. Livestock Production
Science,2002.76(3): 245-250.
[11] Petzinger E, Ziegler K. Ochratoxin A from a toxicologica1 perspective[J]. Vet Phamacol,2000,23(2):91-98.
苏惠玉等人应用 “ 山羊抗黄曲霉菌血清的免疫磁珠 ” 捕获食品中的黄曲 霉菌,不需要进行增菌培养,应用磁捕获-荧光聚合酶链式反应(LMC-FPCR) 技术快速检测鉴定食品中的黄曲霉菌。结果:IMC-FPCR方法检测黄曲霉菌的 最低检测值为2cfu/mL。结论:建立了黄曲霉菌的磁捕获-荧光聚合酶链式 反应法 (IMC-FPCR) ,该方法可用于食品中黄曲霉菌的快速检测及鉴定。
免疫磁珠分离技术
磁珠分离技术
一、原理
免疫磁珠法分离细胞基于细胞表面抗原能与连接在磁珠上的特异性单抗相结合,在外磁场中,通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中,无该种表面抗原的细胞由于不能与相连着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性,不在磁场中停留,从而使细胞得以分离。免疫磁珠法分正选法和负选法,也称阳性分选法和阴性分选法。正选法-磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞;负选法-磁珠结合的细胞为不需要细胞。一般负选法分选较为常见,因为此方法获得的所需要的细胞表面不含有抗体及磁珠的干扰。现以两步法分选小鼠CD4+ CD25+ T 细胞的分选为例分别介绍负选法、正选法如下。
1、材料试剂:
<1>、生物素化的,小鼠CD4阴性分选抗体混合物[cocktail ,内含抗B 细胞(CD45R ,B220)、CD8+T 细胞(CD8a ,Ly-2)、造血细胞(CD11b,Mac-1),NK 细胞(CD49b,DX5)等非CD4+T 细胞表面标志的抗体]。
<2>、结合有磁珠的抗生物素抗体(Scimall 科学在线提供);含0.5%BSA (或0.5%FCS )及2mmol/L EDTA 的PBS 缓冲液;抗小鼠CD25-PE 抗体;结合有磁珠的抗PE 抗体(Scimall 科学在线提供);磁珠分离器或分离柱。
2、实验步骤
<1>、负性分选小鼠CD4+T 细胞
<2>、阳性分选小鼠CD25+ T 细胞
二、注意事项:
1、如果分离细胞用作培养,全过程注意无菌操作。
2、磁珠分离系统分离的细胞纯度可以达到80%-99%,得率在60%-90%左右,仅次于或相当于流式细胞仪的分选效率,与FACS相比,MACS设备简单,耗时极短,故而应用广泛。设定不同的程序(细胞得率或纯度不可兼得),连续两次过柱分选可进一步提高分选细胞纯度,通常可达到95%-95%。
免疫磁珠技术及其在食品微生物检测中的应用
免疫磁珠技术及其在食品微生物检测中的应用随着食品安全问题的日益严重,对食品微生物检测的需求也越来越高。传统的微生物检测方法存在着操作繁琐、时间长、灵敏度低等问题,因此需要开发一种更加快捷、准确的检测方法。免疫磁珠技术作为一种新兴的分离和检测技术,具有操作简便、快速、灵敏度高等优点,在食品微生物检测中得到了广泛的应用。
一、免疫磁珠技术的原理及特点
免疫磁珠技术是将磁性珠子与特异性抗体结合,通过磁性珠子的快速分离和富集目标微生物,从而实现对微生物的检测。磁性珠子具有较强的磁性,可以通过外加磁场的作用来实现珠子与微生物的快速分离。其特点是操作简单、快速、灵敏度高、重复性好、不受样品复杂性的影响,适用于多种样品类型和微生物种类的检测。
二、免疫磁珠技术在食品微生物检测中的应用
1.肠道致病菌检测
肠道致病菌是食品中最常见的致病微生物之一,其检测对于食品安全至关重要。传统的肠道致病菌检测方法通常需要进行培养、分离、鉴定等多个步骤,耗时长且容易出现假阳性结果。而免疫磁珠技术可以通过特异性的抗体富集目标微生物,避免了传统方法中的多个步骤,大大缩短了检测时间。同时,免疫磁珠技术具有较高的灵敏度和特异性,可以检测到低浓度的微生物,并且不会产生假阳性结果。
2.食品中的真菌和酵母菌检测
真菌和酵母菌是常见的食品污染源,其检测对于保障食品安全至关重要。传统的真菌和酵母菌检测方法通常需要进行培养、分离、鉴定等多个步骤,耗时长且容易出现假阳性结果。而免疫磁珠技术可以通过特异性的抗体富集目标微生物,避免了传统方法中的多个步骤,大大缩短了检测时间。同时,免疫磁珠技术具有较高的灵敏度和特异性,可以检测到低浓度的微生物,并且不会产生假阳性结果。
免疫微珠分选技术及应用(“细胞”相关文档)共69张
MACS® 磁性分选示意图
MACS 微珠
MACS 分选柱
MACS 分选器
MACS微珠进行磁性标记
未标记的细胞 先行流出
洗脱阳性分选的细胞
MD0651.01
MACS技术
设备与试剂
• MACS微珠:
MACS 微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒。
• 特性:
(1)50nm磁珠,无毒性,可生物降解
– e.g. Anti-FoxP3, CD4, CD25, CD39...
• Treg suppression Inspector
CD4+CD25+ Treg Isolation Kit, human
Treg isolation
Example of a separation
Before separation
CD4富集后CD25分选前
CD4+CD25+细胞
(b)多选微珠再阳选:
多选微珠标记
MACS 分选
磁性颗粒的酶解离
终止解离反应
根据第二标志进行磁珠标 记
MACS 分选
MD0652.01
CD4多选微珠分选CD4+细胞亚群
CD4多选微珠磁性标记 MACS技术阳性分选 解离磁性颗粒 根据标志进行MACS微珠标记
Purity: 85% (Ø 83% ±4%, n=4).
免疫磁珠分离技术及应用
免疫磁珠分离技术及应用
一、前沿
免疫磁珠分离技术(Immunomagnetic beads sep—aration techniques,IMB) 是将免疫学反应的高度特异性与磁珠特有的磁响应性相结合的一种新的免疫学技术;是一种特异性强、灵质纯化敏度高的免疫学检测方法和抗原纯化手段。是近年来国内外研究较多的一种新的免疫学技术。
目前该项技术在细胞分离、蛋白、免疫学及微生物学检测等方面均取得了较大的进展,是目前最有推广价值的技术之一。
二、免疫磁珠分离技术介绍
1、免疫磁珠分离技术原理
利用人工合成的内含铁成分,可被磁铁磁力所吸引,外有功能基团,可结合活性蛋白质(抗体)的磁珠,作为抗体的载体。当磁珠上的抗体与相应的微生物或特异性抗原物质结合后,则形成抗原-抗体-磁珠免疫复合物,这种复合物具有较高的磁响应性,在磁铁磁力的作用下定向移动,使复合物与其他物质分离,而达到分离、浓缩、纯化微生物或特异性抗原物质的目的。
2、免疫磁珠法分类
⑴、阳性分离法
磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞
⑵、阴性分离法
磁珠结合不需要的细胞,游离于磁场的细胞为所需细胞。一般而言,阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大,阳性分离法用的更多。磁性微珠是以金属离子为核心,外层均匀包裹高分子聚合体的固相颗粒。磁性微珠上既可标记针对某种细胞表面抗原的特异性抗体(直接法); 也可标记羊抗鼠IgG抗体(间接法),使分离细胞的范围大大扩大。
3、免疫磁性微球的制备
基本技术路线:制成磁性材料的微球,再在微球表面引入活性基团,通过载体表面偶联反应可将抗体结合到载体上,形成免疫磁性微球。
磁珠免疫富集技术在蛋白质检测中的应用
磁珠免疫富集技术在蛋白质检测中的应用磁珠免疫富集技术是一种在蛋白质检测中广泛使用的方法。该方法利用特定抗体与磁性珠子的结合,可以高效、快速地富集并纯化目标蛋白质分子。本文将介绍磁珠免疫富集技术的基本原理和在蛋白质检测中的应用。
一、磁珠免疫富集技术的原理
磁珠免疫富集技术通过在磁性珠子表面固定特定抗体,利用抗原与抗体的特异性结合,将目标蛋白质从复杂的生物样品中高效地富集出来。该技术利用了磁性珠子的磁性质,使得在加磁场的作用下,磁珠可以被很方便地分离和洗涤。同时,磁珠的大比表面积和高亲和性受体的多价结合,使得该技术具有高选择性和灵敏度。
二、磁珠免疫富集技术在蛋白质检测中的应用
1. 蛋白质组学研究:磁珠免疫富集技术在蛋白质组学研究中扮演着重要的角色。通过富集目标蛋白质,可以降低复杂样品的复杂度,提高蛋白质检测的灵敏度和特异性。该技术在富集血浆中低丰度蛋白、标记蛋白组学和糖基化蛋白质组学等方面的应用广泛。
2. 蛋白质定量分析:磁珠免疫富集技术结合质谱分析,成为常用的蛋白质定量方法之一。通过将目标蛋白质富集到磁珠上,可以消除样品中的干扰物质,提高检测灵敏度和准确性。此外,该技术还可以用于生物标记物的探索和发现,对于疾病的早期诊断和治疗具有重要意义。
3. 蛋白质相互作用研究:磁珠免疫富集技术在蛋白质相互作用研究中发挥着重要作用。通过将抗体固定在磁珠上,并结合共免疫沉淀、串联亲和纯化等技术,可以高效地富集并研究蛋白质复合物、信号通路和蛋白质结构等。
4. 转化医学研究:磁珠免疫富集技术在转化医学研究中具有广泛的应用前景。通过富集和检测肿瘤标志物、细胞外囊泡和循环肿瘤细胞等,可以为肿瘤的早期诊断、治疗和预后评估提供重要依据。此外,该技术还可以用于药物研发、基因治疗和个性化医疗等方面。
免疫磁珠分离技术专利
免疫磁珠分离技术专利
免疫磁珠分离技术是一种基于抗原-抗体相互作用的分离技术,广泛应用于细胞分离、蛋白质纯化、核酸检测等领域。该技术原理是将特异性抗体连接在磁珠上,通过抗原-抗体反应,将目标物质与磁珠结合,然后在磁场作用下,将结合了目标物质的特异性磁珠分离出来。免疫磁珠分离技术具有简单、快速、高效、无污染等优点,已成为生物医学研究领域的重要工具。
近年来,全球范围内免疫磁珠分离技术的专利申请量逐年增加。以下是关于免疫磁珠分离技术专利的简要概述:
1. 专利申请数量
根据检索数据,自2000年以来,全球范围内免疫磁珠分离技术专利申请量呈上升趋势。尤其在2010年以后,专利申请数量快速增长,表明该技术领域的研究和应用取得了显著成果。
2. 专利申请人
从专利申请人来看,国内外许多企业和研究机构均对免疫磁珠分离技术进行了研究开发,并申请了相关专利。其中,部分专利申请人具有较强的研发实力和市场竞争力。
3. 专利技术分布
免疫磁珠分离技术的专利涉及多个方面,包括磁珠制备、抗体修饰、目标物质检测、应用领域等。其中,磁珠制备方面的专利较多,其次是抗体修饰和目标物质检测。这些专利技术为免疫磁珠分离技术的发展提供了丰富的技术支持。
4. 专利地域分布
免疫磁珠分离技术的专利地域分布较广,涉及美国、德国、日本、中国等多个国家。其中,美国、德国和日本的专利数量较多,表明这些国家在免疫磁珠分离技术领域具有较强的研发实力和市场竞争力。
5. 发展趋势
近年来,免疫磁珠分离技术的发展趋势主要体现在以下几个方面:
(1)磁珠材料的研究与开发:新型磁珠材料的研究,如纳米磁珠、磁性纳米颗粒等,以提高磁珠的性能和应用范围。
免疫磁珠细胞分选
免疫磁珠细胞分选
免疫磁珠细胞分选方法可以在几分钟内从复杂的细胞混合物中分离出很高纯度的细胞。把细胞用超级顺磁性的 MACS MicroBeads (MACS微型磁珠)特异性地标记,磁性标记完后,把这些细胞通过一个放在强而稳定磁场中的分选柱。分选柱里的基质造成一个高梯度磁场。被磁性标记的细胞滞留在柱里而未被标记的细胞则流出。当分选柱移出磁场后,滞留柱内的磁性标记细胞就可以被洗脱出来,这样就完全可以获得标记和未标记的两个细胞组份。
超顺磁性的MACS MicroBeads 的体积很小,其直径约为50nm,体积约小于真核细胞的一百万份之一,可与病毒的大小相比。标记细胞上的微型磁珠即使在扫描电镜照片上也几乎看不到。磁性抗体和磁性标记物间的反应可在几分钟内完成。
由于微型磁珠的体积极小,所以不会对细胞造成机械性压力,而且使孵育时间短,操作过程快。MicroBeads 形成一个稳定的胶体液,它们在磁场中既不沉淀又不凝聚。微型磁珠的大小和它的组成成份(氧化铁和多糖)使其可被生物降解,且不会激活细胞或影响细胞的功能和活力,细胞的生理功能也不变。磁珠不需要去除,因此,阳性分选出的细胞(即磁性标记细胞)可立即用于分析和随后的实验。
用MACS 细胞分选系统可以分离出非常纯的细胞群体,而且有极好的回收率和存活率。依据细胞频率和标记表达水平的不同,MACS分离细胞的纯度可达95%-99.9%,回收率>90%[1]。
免疫磁珠法分离细胞原理:
免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合,在外加磁场中,通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中,无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性,不在磁场中停留,从而使细胞得以分离。
免疫磁珠分离技术(IMB)及应用
1.磁性微球 2.磁性微球结构、分类及特点 3.磁性微球的制备 4.磁性微球分离技术 5.免疫磁株 6.免疫磁珠结构与性质 7.免疫磁株的特点 8.免疫磁珠的分类 9.免疫磁珠的制备 10.免疫磁珠分离技术 11.免疫磁珠技术的应用 12.免疫磁珠在食品安全检测中的应用 13.免疫磁珠与其它检测手段的联用 14.免疫磁珠技术在其他领域的应用 15.免疫磁珠技术的优缺点及发展望
导电聚合磁微球
聚合磁微球
对磁性微球的要求:粒径均匀、大小合适、比表面积大、 吸附力强、具有强的超顺磁性、悬浮均匀稳定性好、不易 聚集沉淀、表面具有多种活性基团、理化性质稳定、具有 较好生物相容性、对细胞、机体、活性物质损伤小。 由于环氧基、氯甲基功能基团非常活跃,不需连接其他活 性基团即可与生物配基(如抗体、抗原等)偶联,及其他 基团的微型磁珠在生物学、医学方面应用较为广泛。
免疫磁珠(IMB)也称免疫磁性微球, 是在磁性微球表面偶联上免疫配基的一 种磁性微球,是将磁性微球技术和免疫 学相结合的特殊磁性微球。
六 免疫磁珠的结构与性质
免疫磁珠核心为顺磁性粒子,核心外层包裹一层 高分子材料, 最外层是免疫配基。
免疫配基
免疫配基通过生物高分子的功能基团结合到磁性载体微球 上形成免疫磁珠。由于载体微球制备材料和方法不同,其 表现出的物理性质也不同, 从而可结合不同的免疫配基, 如抗原、抗体、凝集素、DNA 和RNA 等。配基必须具有 生物专一性的特点, 而且载体微球与配基结合要不影响或 改变配基原有的生物学特性, 保证磁珠的特殊识别功能。
免疫磁珠分离法
免疫磁珠分离法
一、概述
免疫磁珠分离法是一种利用特定的抗体与目标分子结合后,通过磁珠
的磁性作用将目标分子从混合物中分离出来的方法。该方法具有操作
简便、高效快速、无需特殊设备等优点,在生物医学领域得到广泛应用。
二、原理
免疫磁珠分离法的原理基于抗原与抗体之间的特异性结合。首先,将
具有特异性的抗体固定在表面经过改性处理后的磁珠上,形成免疫磁珠。然后将样品加入反应体系中,待抗体与目标分子结合后,通过外
加磁场作用使得免疫磁珠与目标分子一起被吸附在反应管壁上,而其
他非目标成分则被洗去。最后通过改变环境条件(如pH值)或者使
用洗脱缓冲液使得目标物从免疫磁珠上脱离下来。
三、步骤
1. 免疫磁珠制备:将具有特异性的抗体固定在表面经过改性处理后的
超顺磁性磁珠上,形成免疫磁珠。
2. 样品制备:将需要分离的样品进行处理,如细胞裂解、血清去除等。
3. 反应:将样品加入反应管中,加入免疫磁珠并充分混合反应。
4. 磁珠分离:通过外加磁场作用使得免疫磁珠与目标分子一起被吸附
在反应管壁上,而其他非目标成分则被洗去。
5. 洗涤:使用洗脱缓冲液进行洗涤,去除非特异性结合的物质。
6. 洗脱:通过改变环境条件(如pH值)或者使用洗脱缓冲液使得目标物从免疫磁珠上脱离下来。
四、优点
1. 高效快速:与其他常规方法相比,免疫磁珠分离法具有高效快速的特点,可在较短时间内完成大量样品的处理。
2. 特异性强:由于抗体具有高度特异性,因此该方法可对目标物进行高度选择性纯化和富集。
3. 操作简便:该方法无需特殊设备,操作简便,适合于实验室规模的研究。
磁珠分选原理及应用
人类干细胞分选微珠与试剂盒
• CD34微珠及多选微珠:用于从骨髓、外周血、 脐带血中分选
造血干细胞、内皮前体细胞 • CD133微珠:用于从骨髓、外周血、脐带 血中分选
造血干细胞、内皮前体细胞、多能成体干细胞 (MAPC)
• CD117微珠:用于从骨髓、外周血、脐带 血中分选
造血干细胞、骨髓间充质细胞 • CD45/GlyA去除分选试剂盒:用于从骨髓中阴
• MACS分选柱: 》填充有不同规格的铁珠。
》铁珠表面有亲水包被,不损 伤细胞。 》无菌包装。 》可用于分选多种细胞及亚细 胞物质、 细菌、病毒、mRNA和蛋白质 。 • 专利产品
在MS柱中产生的强大磁场
MD0061
MACS技术 设备与试剂
• MACS分选柱:
MACS技术
设备与试剂
• MACS分选器:从手动到自动,从实验室到 临床
CD8+ DC (“lymphoid“ DC)
CD11c CD8a
CD4+ DC (“myeloid“ DC)
CD11c CD4
CD11c+ B220+ Gr-1 (Ly-6C/G)+ DC Plasmacytoid DC (PDC)
CD11c B220 Gr-1
mPDCA-1
MACS® 技术分选与分析大鼠DC细胞 New
MACS技术主要优势
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免疫磁珠分离技术及应用
一、前沿
免疫磁珠分离技术(Immunomagnetic beads sep—aration techniques,IMB) 是将免疫学反应的高度特异性与磁珠特有的磁响应性相结合的一种新的免疫学技术;是一种特异性强、灵质纯化敏度高的免疫学检测方法和抗原纯化手段。是近年来国内外研究较多的一种新的免疫学技术。
目前该项技术在细胞分离、蛋白、免疫学及微生物学检测等方面均取得了较大的进展,是目前最有推广价值的技术之一。
二、免疫磁珠分离技术介绍
1、免疫磁珠分离技术原理
利用人工合成的内含铁成分,可被磁铁磁力所吸引,外有功能基团,可结合活性蛋白质(抗体)的磁珠,作为抗体的载体。当磁珠上的抗体与相应的微生物或特异性抗原物质结合后,则形成抗原-抗体-磁珠免疫复合物,这种复合物具有较高的磁响应性,在磁铁磁力的作用下定向移动,使复合物与其他物质分离,而达到分离、浓缩、纯化微生物或特异性抗原物质的目的。
2、免疫磁珠法分类
⑴、阳性分离法
磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞
⑵、阴性分离法
磁珠结合不需要的细胞,游离于磁场的细胞为所需细胞。一般而言,阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大,阳性分离法用的更多。磁性微珠是以金属离子为核心,外层均匀包裹高分子聚合体的固相颗粒。磁性微珠上既可标记针对某种细胞表面抗原的特异性抗体(直接法); 也可标记羊抗鼠IgG抗体(间接法),使分离细胞的范围大大扩大。
3、免疫磁性微球的制备
基本技术路线:制成磁性材料的微球,再在微球表面引入活性基团,通过载体表面偶联反应可将抗体结合到载体上,形成免疫磁性微球。
优质微载体的性能:合适且均一的磁响应强度,较小且均一的粒径,稳定均一、特异吸附的表面性能。
4、该技术的主要优点
⑴、细小而均一的微球为配基与受体的反应提供了较大的接触面积
⑵、磁珠的磁性使其可以用磁力收集器方便快速地获得分离,且对被分离物无损伤
⑶、检测复杂的生物样本和食品样本等时受到颗粒性杂质等的影响较小
⑷、作为一种流动性的固相支持物,其洗涤和反应都进行得更加充分
三、免疫磁分离技术的应用
1、用于细胞分离和提纯
使用IMB进行分离细胞有两种方式;直接从细胞混合液中分离出靶细胞的方法,称为阳性分离;用免疫磁珠去除无关细胞,使靶细胞得以纯化的方法称为阴性分离。免疫磁珠技术可用来分离人类各种细胞如红细胞、外周血嗜酸/碱性粒细胞,神经干细胞、造血细胞、T淋巴细胞、γδT淋巴细胞,人类关节滑膜细胞,树突状细胞,内皮细胞、及多种肿瘤细胞等。
2、体外细胞扩增
树突状细胞(Dendriticcells,DC)、造血干、祖细胞等细胞在科研及临床上都具有巨大的应用价值,但是在体内含量较少而且分布广泛,难以获得大量高纯度的细胞,限制了该领域的发展。体外扩增辅以免疫磁珠技术有望解决这一难题。在这一过程中,用免疫磁性微球分离纯化出待扩增的细胞,用特定的因子组合培养,许多研究者用这样的方法寻找扩增的最佳细胞因子组合和移植的最佳时机。
3、免疫检测
免疫磁性微球可以简单快速地从血液或者骨髓中富集、清除癌细胞,广泛地应用于疾病检测、癌症治疗和自身骨髓移植中,还被用于从母体外周血中分离胎儿细胞进行无创性产前诊断。免疫磁珠分离技术用在微生物检测方面能准确快速地检测出样品中的Coli O 157,这对于食品卫生和预防疾病的传播具有重要的意义。PCR技术与免疫磁珠技术结合在分子生物学、医学诊断学等方面有非常重要的作用,这方面的研究在医学检测方面的应用,可以简便快速地诊断膀胱癌、乳腺癌、前列腺癌、腹膜胃癌、上皮肿瘤细胞等,使免疫磁性分离技术的应用更加广泛。
4、在核酸与基因工程上的应用
免疫磁球可以看作是亲合层析技术中的微型配基裁体,借助亲合素-生物素(Biotin-Avidin)系统免疫磁球可与非蛋白质结合,生物素和亲合素间有着高度的亲和力,两者的结合迅速、专一、稳定,在分子生物学、医学、免疫组织化学等领域中的应用也越来越广泛,与生物磁珠技术结合后,更是产生了诱人的发展前景,并广泛地应用于分离纯化RNA、mRNA、核酸片段等及相关研究。河南惠尔纳米科技有限公司很早就在从事该方面的研究,并且已经研发出多款磁珠法核酸提取试剂盒,性能相当稳定。有兴趣的研友们可以登录了解一些具体信息。下面是核酸提取的一般流程:
5、用于分型
免疫磁珠法可被应用于临床器官移植供受者的快速选配。在高梯度磁场下,用免疫磁珠法分离静脉或腹腔血中T、B淋巴细胞,并利用分离的淋巴细胞进行HLA-ⅠⅡ类抗原分型。如采用磁珠技术和单抗试剂建立起可在1.5h完成HLA-Ⅰ
Ⅱ类抗原一类分型的新方法,还可应用免疫磁珠分离技术进行肾移植供受体的HLA分型、探讨血液病患者反复血小板输注的治疗效果与HLA之间的相关性。
6、用作靶向释药系统的载体
免疫磁性微球作为靶向释药系统的载体可使免疫磁性微球上的抗癌药物更易与癌细胞接触,服用这种制剂后,在体外适当部位用一适宜强度的磁铁,将磁性微球引导到体内特定靶区,提高了杀伤癌细胞的效果。很多研究者使用不同的方法制成了针对不同癌细胞的免疫磁性微球,作为靶向释药系统的载体并在实验中证实这种释药载体具有良好的功效。