血清胆固醇的定量测定
血清总胆固醇的测定
• 鱼类。乌鱼又称黑鱼性寒味甘，能补脾利水同时 它又是一种高蛋白低脂肪食品。青鱼性平味甘， 能补气健脾化湿。鳆鱼又称鲍鱼，肉性平味甘咸， 蛋白质含量极高，而脂肪含量很低的清补营养品。 黄鳝甘温，古代医家认为它有添精益髓，又有通 血脉、壮筋骨的作用同时它又是一种低脂食品。 另外，如黄瓜、海带、羊栖菜、海藻、槐花等食 物，均有降低血中胆固醇的效果。
操作
项目
测定管
血清/ul
50
胆固醇标准液/ul 蒸馏水/ul
—— ——
酶试剂应用液/ul 1.50
标准管
——
50
——
1.50
空白管
—— ——
50 1.50
• 混合后置于37ºC水浴 中保温15分钟，用空 白管调零，在500nm 波长处测吸光度。
Fra Baidu bibliotek
• 公式：
血清总胆固醇
A测 A标
·5.17
• 氧化酶法测定血清总胆固醇，此方法特 异性好和灵敏度高，既可用于手工操作， 也可自动化分析
注意事项
• 1、最后加酶试剂，各管反应时间应一致； • 2、比色应在30min内完成； • 3、试管在操作前尽量保持干燥； • 4、试剂中酶的质量影响测定结果 ； • 5、若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成
分中去掉胆固醇酯酶即可。
• 此法中血红蛋白高于2g/L时引起正干扰；胆 红素高于0.1g/L时有明显负干扰；血中维生 素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使 结果降低。高TG血症对本法无明显影响。 检测TC的血清(浆)标本密闭保存时，在4℃ 可稳定1周，－20℃可稳定半年以上。
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告
胆固醇是一种脂类物质，它在人体中起着重要的生理作用。然而，当胆固醇水平过高时，就会增加心血管疾病的风险。因此，了解自己的胆固醇水平对于保持健康至关重要。本实验旨在测定血清中的总胆固醇水平，并通过结果分析对参与者的健康状况进行评估。
实验材料和方法：
1. 实验材料：
- 血清样本
- 高精度血清胆固醇测定试剂盒
- 试剂盒使用说明书
- 分光光度计
- 定量移液器和移液枪
- 试管和离心管
2. 实验步骤：
a. 收集参与者的血液样本，并将其离心分离血清。
b. 根据试剂盒使用说明书，准备所需试剂和标准品。
c. 将标准品和血清样本分别加入试管中，并按照说明书中的步骤进行试剂添加和混合。
d. 使用分光光度计测量各试管中的吸光度，并记录结果。
e. 根据标准曲线计算出各样本中的总胆固醇浓度。
实验结果：
通过实验测定，我们得到了参与者血清中的总胆固醇浓度。根据标准曲线和试
剂盒提供的计算公式，我们可以将各样本的吸光度值转换为胆固醇浓度。根据
实验数据，我们将参与者的胆固醇水平分为以下几个等级：
1. 理想范围：
参与者的胆固醇水平在正常范围内，表明其心血管健康状况良好。他们应继
续保持健康的生活方式，包括均衡的饮食、适当的运动和定期体检。
2. 边缘范围：
参与者的胆固醇水平略高于正常范围，但尚未达到危险水平。他们应该注意
饮食结构，减少高胆固醇食物的摄入，并增加运动量。此外，定期监测胆固醇
水平也是必要的。
3. 高风险范围：
参与者的胆固醇水平明显升高，表明他们存在心血管疾病的风险。他们应立
血清胆固醇测定实验报告
血清胆固醇测定实验报告
血清胆固醇测定实验报告
胆固醇是一种脂质，它在人体中起着重要的生理功能。然而，高胆固醇水平与
心血管疾病的风险增加有着密切的联系。为了评估一个人的心血管健康状况，
医生通常会要求进行血清胆固醇测定。本文将介绍一项血清胆固醇测定实验，
并讨论其意义和结果的解读。
实验目的：
本次实验的目的是测定被测者的血清胆固醇水平，以评估其心血管健康状况，
并提供参考依据用于预防和治疗相关疾病。
实验材料和方法：
1. 血清样本采集：被测者需要空腹至少8小时，然后在医生或实验室技术人员
的指导下，采集一定量的静脉血样本。
2. 血清胆固醇测定：采集的血清样本将被送往实验室，经过一系列化学反应和
分析仪器的测量，得出血清胆固醇浓度。
实验结果和解读：
血清胆固醇浓度通常以毫摩尔/升（mmol/L）为单位表示。根据世界卫生组织
的指南，正常血清胆固醇浓度应该低于5.2 mmol/L。而高于此范围的胆固醇水
平被认为是高胆固醇血症，与心血管疾病的风险增加相关。
高胆固醇血症可能是由于多种因素引起的，包括遗传、饮食习惯、生活方式和
其他疾病。饮食中高胆固醇和高脂肪含量的食物，如动物内脏、奶制品和肉类，以及缺乏运动和肥胖，都可能导致胆固醇水平升高。
对于高胆固醇血症患者，医生通常会建议采取一系列措施来降低胆固醇水平，
以减少心血管疾病的风险。这些措施包括改变饮食习惯，减少高胆固醇和高脂肪食物的摄入；增加体育锻炼，促进脂肪燃烧和代谢；戒烟和限制饮酒等。此外，对于存在高胆固醇血症的患者，医生还可能会考虑药物治疗。常用的药物包括他汀类药物，通过抑制胆固醇合成酶的活性，降低胆固醇的合成和血液中的胆固醇水平。
血清胆固醇的定量测定
血清胆固醇的定量测定
摘要：目的：定量测定人血清胆固醇。方法：采用磷硫铁法测定胆固醇含量。结果：该人血清胆固醇为132mg/ml。结论：该人的胆固醇含量正常。
关键词：胆固醇；磷硫铁法
胆固醇参与血浆蛋白的组成，是细胞膜的结构成分，胆汁酸盐，肾上腺皮质激素，维生素D等的前体。胆固醇的测定方法包括化学显色法（磷硫铁法和邻苯二甲醛法）和酶学法（试剂盒），本实验采用磷硫铁法测定血清胆固醇。血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇则溶在无水乙醇中。在乙醇提取液中加入磷硫铁试剂，胆固醇和试剂会产生紫红色化合物，呈色度与胆固醇含量成正比，可用比色法测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器 721型分光光度计；离心机；试管；EP管；
1.2 药品与试剂人血清；10%三氯化铁溶液；磷硫铁试剂；胆固醇标准溶液；无水乙醇
2 方法
2.1 胆固醇的提取取人血清约100μL，分装到两个EP管中，每个管中分别加入200μL无水乙醇，摇匀，每个管中加入无水乙醇1000μL，摇匀，静置10min，离心（3000rpm，5min），得到上清液备用。
2.2 比色测定取三支试管，分别按照表1加入如下试剂。摇匀，室温静置10min。将混合溶液加入比色皿中，若比色皿过大，可加入无水乙醇稀释，放入分光光度计中进行测定吸光度。
表1
试管编号1（测定管）2（标准管）3（空白管）胆固醇提取液 1.0ml ————
胆固醇标准液—— 1.0ml ——无水乙醇———— 1.0ml
磷硫铁试剂 1.0ml 1.0ml 1.0ml
2.3 计算人血清胆固醇=(OD
实验三血清总胆固醇的测定
0.05
0
邻苯二甲醛试剂
(mL)
0.20
0.20
0.20
0.20
0.20
0.20
0.20
0.20
0.20
混合酸(mL)
4.00
4.00
4.00
4.00
4.00
4.00
4.00
4.00
4.00
相当于未知血清中
总胆固醇量(mg%)
0
A550
加毕，温和混匀，20〜37C下静置10分钟，在550nm波长处测定
正常人血浆和血清中含有酯类虽多，但却清澈透明？
实验三 血清总胆固醇的测定
目的要求
了解并掌握胆固醇测定的原理和方法。
实验原理
血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、 临床诊断和 营养研究的重要指标。正常人血清胆固醇含量范围为100 ~250mg/mL。
胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成， 而且也是细胞的必要结构成分， 还可以转化成胆汁酸盐、 肾上腺皮质 激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式 存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。 本实验采用前一种方法。
4.00
A550
加毕，温和混匀，20〜37C下静置10分钟，在550nm下测定光吸
收值。然后，从标准曲线上可查出样品中总胆固醇的含量。
血清脂类测定
血清脂类测定
血浆中的脂类包括胆固醇、胆固醇脂、甘油三酯、磷脂和非酯化脂肪酸等。
目前，对有关脂类代谢疾患的诊断和治疗过程，均必须检测血浆（清）中的脂类，通过其含量的变化，对临床疾患提供协助诊断的依据。有关医学科研工作，脂类的定量检测也是一项必备的研究项目。
1．胆固醇测定
血浆中胆固醇及其酯的含量检测，从方法学上可分为两大类：一类是化学法包括抽提法和直接测定法，这类方法目前仍在沿用；另一类是酶法测定，方法敏感特异快速，并能自动化分析，已常规应用。化学测定法种类多，由于显色反应的特异性不同，其结果有一定的差异。目前公认的参考方法是Abell-Kendall(L-B反应)法。另外，三氯化铁-硫酸反应法（Zak法）具有显色稳定法、操作简便、灵敏度约5倍于L-B反应法，胆固醇酯与游离胆固醇显色程度比较接近等优点，缺点是特异性差，干扰因素比L-B法多，如冰醋酸中含有的乙醛酸，血清样品中的血红蛋白，胆红素以及硫酸的质量等因素均可影响Zak方法的准确性，Zak法更适合于科研使用。酶法测定血清胆固醇的方法已被广泛采用，国产试剂已能满足临床的需要。胆固醇测定用的标准品，按美国国家标准局（NBS）出品纯度达99.8%,是国际公认的参考物，国内李健斋等已纯化制成符合这一要求的胆固醇纯品，已供临床检测血清胆固醇使用。
2．甘油三酯测定
血浆甘油三酯的测定，目前多以化学法和酶法定量。化学法测定甘油三酯是以脂蛋白变性，水解成甘油，并以甘油为计算依据。酶法是以特异酶水解甘油三酯，除去脂肪酸，再测定甘油，方法特异，准确而快速，临床广为应用。目前甘油三酯测定的方法主要以定量甘油为依据，然而血清样品中存在有游离甘油，如何从反应过程中的总甘油中减去游离甘油，多年来一直在研究讨论这一问题。若不减去，其测定值将会高于血清样品中的真值，如果要减去，就必须先测出血清样品中的游离甘油，甘油三酯的测定方法将增加一个繁杂的步骤，实际工作中难以做到。有报道血清样品中的游离甘油实际量是0.07～0.13mmol/L，相当于甘油三酯的0.5～6.0mmol/L，为此建议，实测的甘油三酯量减去一个校正系数即：
血清总胆固醇测定PPT课件
-
9
低密度脂蛋白胆固醇 LDL-C
低密度脂蛋白把胆固醇从肝脏运送到全身组织， 过量时，它携带的胆固醇便积存在动脉壁上，久了 容易引起动脉硬化。因此低密度脂蛋白被称为“坏
的胆固醇”。
高密度脂蛋白胆固醇HDL-C
高密度脂蛋白扮演清道夫角色，它将周边组织 多余的胆固醇送回肝脏，排出体外，达到抗血管硬 化的目的。它还有维护血管内皮细胞功能，及保护 血管免于血栓的形成。高密度脂蛋白增加，动脉壁 被胆固醇囤积的机会就减少。因此它是“好的胆固 醇”。
-
10
（二）血液 组成：血细胞（有形体）
血浆（包含血清及纤维蛋白原） 血浆是血液的重要组成分，呈淡黄色液体， 水分占90～92％，溶质以血浆蛋白为主 。 血浆总胆固醇的1/3以游离形式存在，2/3为 与脂肪酸结合之胆固醇酯。
血液中胆固醇含量过高，表示胆固醇代谢 可能发生障碍。冠状动脉粥样硬化患者的血 清胆固醇含量往往偏高。因此临床化验上测 定血清胆固醇含量将有助于诊断某些疾病。
-
7
人体胆固醇来自食物及体内合成两个途径。
1. 2/3由肝脏制造出 2.其余的1/3来自食物，尤以肥肉﹑内脏、 蛋黄含量较高。
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8
机体的胆固醇以两种形式存在: 游离的胆固醇 胆固醇酯
实验十四--血清胆固醇测定(胆固醇氧化酶法)
实验十四血清胆固醇测定
（胆固醇氧化酶法）
胆固醇的测定方法很多；通常可分为化学试剂比色法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法五大类。化学试剂比色法中有直接法和间接法；前者可用血清直接测定，后者是用溶剂或其它方法提取胆固醇后再作定量。酶法由于操作简便、结果准确，试剂无腐蚀性，而且因使用特异性酶，大大减少了血液中其它成分的干扰，目前已成为测定胆固醇的主要方法。
【目的】
1．了解胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇的原理，能进行血清胆固醇测定的操作。
2.掌握血清胆固醇测定的临床意义。
【原理】
血清中总胆固醇（TC）包括胆固醇酯(CE)和游离型胆固醇(FC),酯型占70%，游离型占30%。胆固醇酯酶（CEH）先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶（COD）的作用下氧化生成Δ4-胆甾烯酮和过氧化氢。后者经过氧化物酶（POD）催化氢与4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应，生成红色的醌亚胺，其颜色深浅与胆固醇的含量呈正比，在500nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血清胆固醇的含量。反应式如下：
CEH
胆固醇酯胆固醇 ＋ 脂肪酸
胆固醇 ＋ O2△4-胆甾烯酮 ＋ H
O2
2
2H2O2 ＋ 4-氨基安替比林 ＋ 酚红色醌亚胺【器材】
试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计。
【试剂】
酶法测定胆固醇多采用市售试剂盒。
1. 酶应用液胆固醇酶试剂的组成为：
pH6.7磷酸盐缓冲液 50mmol/L
胆固醇酯酶≥200U/L
胆固醇氧化酶≥100U/L
过氧化物酶≥3 000U/L
实验九血清胆固醇测定(胆固醇氧化酶法)
实验九血清胆固醇测定（胆固醇氧化酶法）实验十四血清胆固醇测定
(胆固醇氧化酶法)
胆固醇的测定方法很多;通常可分为化学试剂比色法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法五大类。化学试剂比色法中有直接法和间接法;前者可用血清直接测定，后者是用溶剂或其它方法提取胆固醇后再作定量。酶法由于操作简便、结果准确，试剂无腐蚀性，而且因使用特异性酶，大大减少了血液中其它成分的干扰，目前已成为测定胆固醇的主要方法。
【目的】
1(了解胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇的原理，能进行血清胆固醇测定的操作。
2.掌握血清胆固醇测定的临床意义。
【原理】
血清中总胆固醇(TC)包括胆固醇酯(CE)和游离型胆固醇(FC),酯型占70%，游离型占30%。胆固醇酯酶(CEH)先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固
4醇氧化酶(COD)的作用下氧化生成Δ-胆甾烯酮和过氧化氢。后者经过氧化物酶(POD)催化氢与4-氨基安替比林(4-AAP)和酚反应，生成红色的醌亚胺，其颜色深浅与胆固醇的含量呈正比，在500nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血清胆固醇的含量。反应式如下:
CEH胆固醇酯胆固醇，脂肪酸
COD胆固醇， O42?-胆甾烯酮， HO22
POD2HO ， 4-氨基安替比林，酚22红色醌亚胺
【器材】
试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计。
【试剂】
酶法测定胆固醇多采用市售试剂盒。
1. 酶应用液胆固醇酶试剂的组成为:
pH6.7磷酸盐缓冲液 50mmol/L
胆固醇酯酶 ?200U/L
实验九血清胆固醇测定(胆固醇氧化酶法)
实验九血清胆固醇测定（胆固醇氧化酶法）实验十四血清胆固醇测定
(胆固醇氧化酶法)
胆固醇的测定方法很多;通常可分为化学试剂比色法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法五大类。化学试剂比色法中有直接法和间接法;前者可用血清直接测定，后者是用溶剂或其它方法提取胆固醇后再作定量。酶法由于操作简便、结果准确，试剂无腐蚀性，而且因使用特异性酶，大大减少了血液中其它成分的干扰，目前已成为测定胆固醇的主要方法。
【目的】
1(了解胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇的原理，能进行血清胆固醇测定的操作。
2.掌握血清胆固醇测定的临床意义。
【原理】
血清中总胆固醇(TC)包括胆固醇酯(CE)和游离型胆固醇(FC),酯型占70%，游离型占30%。胆固醇酯酶(CEH)先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固
4醇氧化酶(COD)的作用下氧化生成Δ-胆甾烯酮和过氧化氢。后者经过氧化物酶(POD)催化氢与4-氨基安替比林(4-AAP)和酚反应，生成红色的醌亚胺，其颜色深浅与胆固醇的含量呈正比，在500nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血清胆固醇的含量。反应式如下:
CEH胆固醇酯胆固醇，脂肪酸
COD胆固醇， O42?-胆甾烯酮， HO22
POD2HO ， 4-氨基安替比林，酚22红色醌亚胺
【器材】
试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计。
【试剂】
酶法测定胆固醇多采用市售试剂盒。
1. 酶应用液胆固醇酶试剂的组成为:
pH6.7磷酸盐缓冲液 50mmol/L
胆固醇酯酶 ?200U/L
血清总胆固醇测定操作规程
血清总胆固醇测定操作规程
《血清总胆固醇测定操作规程》
一、目的
本规程旨在规范血清总胆固醇测定的操作步骤，确保测定结果准确可靠。
二、适用范围
本规程适用于各医疗机构进行血清总胆固醇测定的操作。
三、仪器与试剂
1. 仪器：分光光度计
2. 试剂：血清总胆固醇测定试剂盒
四、操作步骤
1. 准备工作
a. 开机预热分光光度计，确保仪器处于工作状态。
b. 取出血清总胆固醇测定试剂盒，检查试剂有效期和存储条件。
c. 准备标准品和样本待测血清。
2. 操作流程
a. 取出试剂盒中的标准品，按照说明书稀释成不同浓度。
b. 加标准品和待测血清分别加入试剂管中，混匀后置于恒温水浴中反应一定时间。
c. 反应结束后，使用分光光度计在特定波长下测定吸光值。
3. 结果计算
a. 使用标准品的吸光值绘制标准曲线。
b. 读取待测血清的吸光值，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
五、结果判定
根据患者血清总胆固醇的测定值，参照相关标准进行结果判定和医疗建议。
六、注意事项
1. 操作人员应熟练掌握仪器和试剂使用方法，严格按照操作规程进行操作。
2. 试剂及仪器的质量控制应在每次实验前进行验证。
3. 操作过程中应注意个人防护，避免污染试剂和样本。
七、记录与保存
1. 对每次测定的操作步骤、结果和质控记录进行详细记录，确保测定结果可追溯。
2. 相关记录资料应按规定保存，以备查。
八、附则
对于特殊情况的处理和异常结果的分析，应根据实际情况进行相应操作，并记录详细的处理过程。
以上即为《血清总胆固醇测定操作规程》，希望操作人员严格按照规程执行，确保测定结果的准确性和可靠性。
血清总胆固醇的测定实验报告
血清总胆固醇的测定实验报告
一、实验目的。
本实验旨在通过测定血清中的总胆固醇水平，了解被检测者的心血管健康状况，为预防和治疗心血管疾病提供参考依据。
二、实验原理。
血清总胆固醇是指血液中所有脂蛋白和游离胆固醇的总和，通常以毫摩尔/升（mmol/L）为单位进行测定。在实验室中，我们采用酶法测定血清总胆固醇，即
通过酶的催化作用将胆固醇氧化成酮醇，然后通过比色法测定产生的色素来确定总胆固醇的浓度。
三、实验步骤。
1. 采集被检测者的静脉血样本，放置于离心管中，离心10分钟后取上清液。
2. 将上清液放入试剂盒中，按照说明书的操作步骤进行样本处理和试剂添加。
3. 使用分光光度计测定样本吸光度，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
四、实验结果。
根据实验测定，被检测者的血清总胆固醇水平为X mmol/L。
五、实验分析。
根据血清总胆固醇的测定结果，结合被检测者的年龄、性别、生活方式等因素，可以初步判断其心血管健康状况。若总胆固醇水平偏高，可能存在心血管疾病的风险，需要进一步进行相关检查和干预措施。若总胆固醇水平正常，被检测者的心血管健康状况良好。
六、实验注意事项。
1. 在采集血样和进行实验操作时，要严格遵守无菌操作规范，确保实验结果的准确性和可靠性。
2. 实验过程中要注意化学试剂的使用安全，避免接触皮肤和吸入气体，必要时戴上防护手套和口罩。
3. 实验设备的使用和维护要符合相关规定，保证设备的正常运转和数据的准确性。
七、实验结论。
通过本次实验测定，我们成功得出了被检测者的血清总胆固醇水平，并对其心血管健康状况进行了初步分析。实验结果对于预防和治疗心血管疾病具有一定的参考价值。
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告
一、实验目的。
本实验旨在通过测定血清中的总胆固醇含量，了解被测者的血脂代谢情况，为临床诊断和治疗提供参考依据。
二、实验原理。
总胆固醇是人体内的一种脂质物质，主要存在于血浆中。在正常情况下，总胆固醇主要由低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL-C）三部分组成。总胆固醇的测定是通过酶法或化学法测定血清中总胆固醇的含量，以反映被测者的血脂代谢情况。
三、实验步骤。
1. 采集被测者静脉血标本，禁食12小时以上。
2. 将采集的血清标本离心，取上清液用于测定。
3. 使用生化分析仪器，按照厂家提供的试剂盒说明书进行总胆固醇的测定。
4. 记录测定结果，并进行数据分析。
四、实验结果。
经测定，被测者血清中总胆固醇含量为XXX mmol/L（参考范围，2.85-5.69 mmol/L），属于正常范围。
五、实验分析。
根据实验结果，被测者的总胆固醇含量处于正常范围内，说明其血脂代谢情况良好。但在临床实际操作中，还需结合被测者的其他临床指标进行综合分析，以全面了解其健康状况。
六、实验注意事项。
1. 采集血样时需遵守无菌操作规范，避免污染。
2. 实验过程中需严格按照试剂盒说明书进行操作，避免误差。
3. 实验结束后，及时清洗和消毒实验用具，保持实验环境整洁。
七、实验总结。
本次实验通过测定血清总胆固醇含量，了解了被测者的血脂代谢情况。实验结
果显示，被测者的总胆固醇含量处于正常范围内，说明其血脂代谢情况良好。实验过程中，我们严格遵守了操作规范，保证了实验结果的准确性和可靠性。实验结果为临床诊断和治疗提供了重要参考依据。
血清胆固醇测定方法
血清胆固醇测定方法
血清胆固醇测定方法包括下面几种常见的方法：
1. 酶测法：使用胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶，将血清中的胆固醇转化为胆酮和Peroxidase，通过测定产生的Peroxidase的活性来确定血清胆固醇水平。
2. 光度法：使用胆固醇草酮胆固醇草酮胆酰和草酮巯酸酯，通过测量产生的草酮巯酸酯的颜色强度来确定血清胆固醇水平。
3. 脂质染色法：使用思維染料等染料，将血清中的胆固醇与染料结合成一个染色复合物，通过比色法或荧光法来测定复合物的浓度，从而确定血清胆固醇水平。
4. 气相色谱法：将血清中的胆固醇与浓硝基苯甲酸酐反应生成苯甲酰胆固醇，然后使用气相色谱进行分离和定量测定。
请注意，这些方法都需要在实验室环境中进行，需要专业的设备和操作技术。
血清胆固醇的定量测定
血清胆固醇的定量测定
（磷硫铁法）
实验目的
掌握磷硫铁法测定血清胆固醇的原理和方法。
实验原理
（一）胆固醇的生理功能：
–参与血浆蛋白的组成；
–细胞膜的结构成分；
–胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等的前体。
(二)测定原理：
总胆固醇的测定有化学比色法(磷硫铁法和邻苯二甲醛法)和酶学方法(试剂盒)两类。本实验采用磷硫铁法测定血清胆固醇含量。
血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇及其酯溶解在无水乙醇。在乙醇提取液中，加磷硫铁试剂，胆固醇及其酯与试剂形成比较稳定的紫红色化合物，此物质在560nm波长处有特征吸收峰，可用比色法作胆固醇的定量测定。正常血清中胆固醇的含量有随年龄增大而增加的趋势，其平均正常值在110～220mg/100ml。
胆固醇含量在400mg/100ml内，与A（或OD）值呈良好线性关系。
试剂
（一）10％三氯化铁溶液：10gFeCl3.6H2O(A.R)溶于磷酸(A.R)，定容至100ml。储于棕色瓶，冷藏。
（二）磷硫铁试剂：取10％FeCl3溶液1.5ml于100ml棕色容量瓶内，加浓硫酸(A.R)至刻度。
（三）胆固醇标准储液：准确称取胆固醇80mg，溶于无水乙醇，定容至100ml。
（四）胆固醇标准溶液：将储液用无水乙醇准确稀释10倍即得。每毫升含0.08mg 胆固醇。
操作
（一）吸取血清0.1ml于干燥离心管，先加无水乙醇0.4ml，摇匀后再加无水乙醇2.0ml，摇匀，10分钟后离心（3000rpm5分钟），上清夜备用。（分两次加入乙醇的目的是使作用完全）
（二）取干燥试管3支，编号，分别加入 无水乙醇1.0ml （空白管）、胆固醇标准溶液1.0ml （标准管）、上述乙醇提取液1.0ml （样品管），各管皆加入磷硫铁试剂1.0ml ，摇匀，10分钟后，分别转移至0.50cm 光径的比色杯内，用分光光度计560nm 比色。 计算
实验七、血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法）
实验七、血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法）
实验七、血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法）
实验目的：
掌握磷硫铁法测定血清胆固醇的原理、方法及临床意义。
实验原理：
总胆固醇的测定有化学比色法(磷硫铁法和邻苯二甲醛法)和酶学方法(试剂盒)两类。本实验采用磷硫铁法测定血清胆固醇含量。
用无水乙醇提取血清中的胆固醇，再与硫磷铁试剂作用，产生颜色反应，呈色度与胆固醇含量成正比，可用比色法测定血清中胆固醇含量。
血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇及其酯溶解在无水乙醇。在乙醇提取液中，加磷硫铁试剂，胆固醇及其酯与试剂形成比较稳定的紫红色化合物，此物质在560nm 波长处有特征吸收峰，可用比色法作胆固醇的定量测定。正常血清中胆固醇的含量有随年龄增大而增加的趋势，其平均正常值在110～220mg/100ml。
胆固醇含量在400mg/100ml内，与A（或OD）值呈良好线性关系。
实验讲授：
722型分光光度计的使用
722型分光光度计的使用
测量原理
分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律：当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。但物质对光的吸收是有选择性的，各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。所以根据定律当一束单色光通过一定浓度范围的稀有色溶液时，溶液对光的吸收程度A与溶液的浓度c（g/l）或液层厚度b (cm) 成正比。其定律表达式A = abc（a是比例系数）。当c的单位为mol/l时，A = εbc，比例系数用ε表示，称为摩尔吸光系数。其单
位为L·mol-1·c m-1，它是有色物质在一定波长下的特征常数。
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移液枪的养护及注意事项
1.当移液器吸嘴有液体时切勿将移液器水 平或倒置放置，以防液体流入活塞室腐蚀 移液器活塞。 2.移液器使用完毕后，把移液器量程调至 最大值，且将移液器垂直放置在移液器架 上。 3.如液体不小心进入活塞室应及时清除污 染物。
4.平时检查是否漏液的方法：吸液后在液 体中停1- -3 秒观察吸头内液面是否下降； 如果液面下降首先检查吸头是否有问题， 如有问题更换吸头，更换吸头后液面仍下 降说明活塞组件有问题，应找专业维修人 员修理。
总胆固醇的测定方法： 磷硫铁法 化学比色法 醋酸酐法 邻苯二甲醛法 酶学方法（试剂盒）
用无水乙醇提取血清中的胆固醇， 再与磷硫铁试剂作用，产生颜色反应， 呈色度与胆固醇含量成正比，可用比 色法测定血清中胆固醇含量。
血清经无水乙醇处理后蛋白质被沉 淀，胆固醇及其脂则溶解在无水乙醇中。 在乙醇提取液中加入硫磷铁试剂（即浓 硫酸和三价铁溶液），胆固醇及其脂与
5.吸取液体时一定要缓慢平稳地松开拇指， 绝不允许突然松开，以防将溶液吸入过快 而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气。
7.吸取血清蛋白质溶液或有机溶剂时，吸 头内壁会残留一层“液膜”，第二次吸取 时的体积会大于第一次的体积。 8.卸掉的吸头一定不能和新吸头混放，以 免产生交叉污染。
四、实验试剂
1、10%三氯化铁溶液：10.0g FeCl3· 6H2O 溶于浓 磷酸中，定容至100ml； 2、磷硫铁试剂(P-S-Fe 试剂)：取10%三氯化铁溶 液1.5ml于100ml棕色容量瓶内，加浓硫酸至刻 度； 3、胆固醇标准贮液：准确称量胆固醇80mg，溶于 无水乙醇，定容至100ml； 4、胆固醇标准溶液：将贮液用无水乙醇准确稀释 10倍即得，此标准液含0.08mg/mL胆固醇。 5、无水乙醇
6.缓慢取出吸嘴，确保吸嘴外壁无液体。
排液
1.将吸嘴以一定角度抵住容量内壁； 2.缓慢将控制钮按至第一档并等待约1－3 秒； 3.将控制钮按至第二档过程中，吸嘴将剩 余液体排净，可反复在1,2档间按压，确保 排净； 4.慢放控制钮； 5.按压弹射键弹射出吸嘴。
移液
一是前进移液法。用大拇指将按钮按下至第一停 点，然后慢慢松开按钮回原点。接着将按钮按至 第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二 停点吹出残余的液体。最后松开按钮。 二是反向移液法。此法一般用于转移高粘液体、 活性液体、易起泡液体或极微量的液体。其操作 是先按下按钮至第二停点，慢慢松开按钮至原点。 接着将按钮按至第一停点排出设置好量程的液体， 继续保持按住按钮位于第一停点（千万别再往下 按），取下有残留液体的枪头，弃之。
六、计算
100ml血清中胆固醇的质量（mg） A 1C 0 m= ÷0.04×100 A0
注意事项：
1、颜色反应与加磷硫铁试剂混合时的产热 程度有关，因此，所用试管口径和厚度要 一致；加磷硫铁试剂必须与乙醇分成两层， 然后混合，不能边加边摇，否则显色不完 全；磷硫铁试剂要加一管混合一管，混合 的手法、程度也要一致；混合时试管发热， 注意勿使试管内液体溅出，以免损伤衣服、 皮肤和眼睛。
实验二 血清胆固醇的定量测定 （磷硫铁法）
一、实验目的
1、学习并掌握磷硫铁法测定血清中 总胆固醇含量的原理及操作； 2、学会制备无蛋白血清 ； 3、了解血清总胆固醇的正常值范围 及临床意义 。
二、实验原理
胆固醇的分子结构
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胆固醇主要存在于动物细胞，参 与膜的组成，质膜中的含量比细胞器 膜中的多。胆固醇也是血中脂蛋白复 合体的成分；并与粥样硬化有关，它 是动脉壁上形成的粥样硬化斑块成分 之一。胆固醇也是类固醇激素和胆汁 酸的前提。 1784年，从胆石中提取出胆固醇。
管号/试剂 无水乙醇 胆固醇标准液
乙醇抽提液 磷硫铁试剂 A560
空白管 1.0ml
标准管
测定管
1.0ml
1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml
注：磷硫铁试剂须沿管壁缓缓加入，
与乙醇液分成两层，立即迅速振 摇20次，放置10分钟（冷却至室
温）后，于560nm进行比色，以
空白管调零读取各管吸光度。
正确操作：将移液器垂直插入枪头中，稍 微用力左右微微转动即可使其紧密结合。
设定容量
Βιβλιοθήκη Baidu注意事项
1、移液器要在规定的容量内使用，切勿超 量程使用，否则会卡住内部机械装置而损 坏了移液器。
2、调整容量时，如果从大到小时，可以直 接调到想要的容量；如果从小到大时，一 定要调超三分之一圈，然后再调回来，这 样做可以使弹簧完全放开,而且移液器总是 在顺时针运转可以延长移液器的使用寿命。
五、操作
1、胆固醇的提取 吸取血清0.1ml置干燥离心管 内，先加无水乙醇0.4ml，摇匀后 再加无水乙醇2.0ml，摇匀，10min 后离心（3000r/min-6000r/min） 5min，取上清夜备用。
2、比色测定 取干燥试管3支，编号，分别加入 无水乙醇1.0ml（空白管），胆固醇标 准溶液1.0ml（标准管），上述乙醇提 取液1.0ml（样品管），各管皆加入磷 硫铁试剂1.0ml，摇匀，10min后，分 别转移至比色杯内，用可见分光光度 计在560nm处比色。
移液
1.连接恰当的吸嘴；
2.按下控制钮至第一档（在空气中）； 3.将移液器吸嘴垂直进入液面下1- -6mm （视移液器容量大小而定）注：为使测量 准确可将吸嘴预洗3 次，即反复吸排液体3 次。
4.使控制钮缓慢滑回原位；
5.移液器移出液面前略等1- -3秒；1000ul 以下停顿 1 秒；5- -10ml停顿2- -3秒
试剂反应形成比较稳定的紫红色化合物，
呈色程度与胆固醇含量成正比，可于
560nm 波长下进行比色测定。
正常血清中胆固醇的含量有随年
龄增大而增加的趋势，其平均正常值 在110～220mg/100mL。 胆固醇含量在400mg/100ml内， 与A值成良好线性关系。
三、实验器材
1、人血清 2、可见分光光度计 3、台式离心机（4000r/min） 4、离心管 5、试管 6、移液管。
2、所用试管和比色杯均须干燥，浓硫 酸的质量很重要，放置日久，往往因 为吸收水分，而使颜色反应降低。 3、空白管应接近无色，如带橙黄色， 表示乙醇不纯，应用去醛处理。
移液枪的使用
吸嘴的安装
散装吸嘴安装
盒装吸嘴安装
注意事项
错误操作：在将枪头套上移液枪时，很多 人会使劲地在枪头盒子上敲几下。这样会 导致移液枪的内部配件（如弹簧）因敲击 产生的瞬时撞击力而变得松散，甚至会导 致刻度调节旋钮卡住，严重的情况会将白 套筒折断。