制药用水微生物检查方法的验证

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中国药典2020版二部纯化水微生物检查

中国药典2020版二部纯化水微生物检查
【原创实用版】
目录
1.概述
2.纯化水的微生物检查标准
3.微生物检查的方法
4.微生物检查的注意事项
5.总结
正文
1.概述
在中国药典 2020 版二部中，对于纯化水的微生物检查有严格的标准和要求。

纯化水是制药过程中常用的一种水源，其微生物质量直接关系到药品的质量和安全性。

因此，对纯化水的微生物检查是药品生产质量管理的重要环节。

2.纯化水的微生物检查标准
根据中国药典 2020 版二部的规定，纯化水的微生物检查需要符合以下标准：
- 菌落总数：≤10cfu/ml
- 大肠埃希菌：不得检出
- 铜绿假单胞菌：不得检出
- 霉菌和酵母：≤1cfu/ml
3.微生物检查的方法
微生物检查通常采用以下方法：
- 菌落计数法：通过在培养基上培养，观察形成的菌落数来计算菌落总数。

- 试管法：将纯化水分别注入试管，然后在一定条件下培养，观察是否有微生物生长。

- 薄膜过滤法：将纯化水通过薄膜过滤器，然后将滤膜在培养基上培养，观察是否有微生物生长。

4.微生物检查的注意事项
在进行微生物检查时，需要注意以下几点：
- 采样：采样时应遵循无菌操作，避免污染。

- 培养条件：培养时应根据不同微生物的生长要求，设置合适的温度、湿度和时间。

- 结果判断：判断结果时应以菌落总数、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和霉菌酵母的检出情况为主要依据。

5.总结
中国药典 2020 版二部对纯化水的微生物检查有严格的标准和要求，微生物检查的方法有多种，但都需要遵循无菌操作和合适的培养条件。

微生物限度方法学验证

微生物限度方法学验证
微生物限度方法学验证是一种用于确定化妆品和药品中微生物污染水平的方法。

这种验证方法用于确定产品是否符合微生物限度规定，并确保产品的安全性和质量。

微生物限度方法学验证的步骤包括：
1. 根据相关规定选择适当的微生物限度测试项目。

常见的微生物测试项目包括总生菌数、霉菌和酵母菌、大肠菌群等。

2. 准备适当的培养基和培养条件，以促使微生物在培养基上生长。

3. 从样品中获取适当的微生物培养物。

样品可以是产品中的一部分或整个产品。

4. 在适当的培养基上接种微生物培养物。

5. 在适当的环境条件下孵育培养基，以促进微生物生长。

6. 定期检查培养基的生长情况，包括观察菌落形态和计数菌落数量。

7. 将菌落转移到适当的检测方法中，如涂抹法、膜过滤法等。

8. 使用适当的培养基和培养条件，在适当的温度和pH条件下，观察和计算培养基上的微生物生长数量。

9. 比较结果与规定的微生物限度标准，确定产品是否符合要求。

微生物限度方法学验证可以帮助制药和化妆品行业确保产品的微生物质量，并确保产品在使用过程中不会对消费者的健康有害。

这种验证方法需要严格的实验室操作和合理的测试标准，以确保结果的准确性和可靠性。

制药厂纯化水系统GMP验证方案

制药厂纯化水系统GMP验证方案制药厂纯化水系统是制药厂生产过程中的重要环节，用于生产药品、注射液等产品所需的纯化水。

为确保制药产品的质量和安全性，保障患者的用药安全和健康，制药厂需要对纯化水系统进行GMP验证。

GMP（Good Manufacturing Practice）是制药生产中的一种质量管理体系，旨在确保药品质量、安全和有效。

本文将针对制药厂纯化水系统进行GMP验证方案的制定建议。

一、纯化水系统GMP验证的必要性1.保障患者用药安全：纯化水系统用于生产药品及注射液等药品，如果水质不符合GMP标准，可能会导致制成品的品质不合格，对患者用药安全造成威胁。

2.提高生产效率：通过对纯化水系统进行GMP验证，可以更好地控制水质质量，提高生产的稳定性和效率。

3.符合法规要求：制药企业需要遵守国家相关法规和标准，对纯化水系统进行GMP验证是其合规生产的基本要求。

二、纯化水系统GMP验证方案制定1.确定验证的范围：包括纯化水系统的设计、安装、运行、维护和清洁等方面。

2.制定验证计划：确定验证的主要内容、时间节点、负责人和参与人员等。

3.设计验证实验：制定验证实验方案，包括样品采集点、采集频率、检测项目和方法等。

4.进行验证实验：按计划进行验证实验，对纯化水系统进行全面检测。

5.分析验证数据：对验证实验的数据进行分析，评估纯化水系统是否符合GMP要求。

6.提出改进建议：针对验证结果，提出纯化水系统存在的问题和不足之处，并提出改进建议。

7.完成验证报告：编写纯化水系统GMP验证报告，包括验证的目的、范围、方法、结果和结论等。

8.确保验证结果的可追溯性：确保验证过程中采集的数据和结果具有可追溯性，便于监管部门的审查和审核。

三、纯化水系统GMP验证的重点内容1.水质检测：对纯化水系统的水质进行检测，包括COD（化学需氧量）、TOC（总有机碳）、微生物总数、重金属等。

2.设备验证：对纯化水系统的设备进行验证，包括水处理设备、管路、阀门、过滤器等的安装和运行状态。

制药用水微生物限度检验方法学确认2015.11

制药用水-微生物限度检验方法学确认目录一、引言1、概述2、验证的目的二、验证方法合格标准三、主要材料确认1、仪器设备确认2、辅助材料确认3、人员确认4、商品培养基及灭菌培养基确认5、菌种及菌液的制备四、样品制备1、稀释液2、供试液制备3、操作方法五、方法验证1、需氧菌总数的计数方法验证2、计算菌回收率公式六、验证结果及评价七、再验证周期八、验证结论批准一、引言1、概述：根据《中国药典》2015年版三部通则“1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”（以下简称《药典》）的要求，对内控标准中有“微生物限度”检查项的产品进行该项验证。

根据《中国药典》2015年版三部纯化水进行方法学确认。

2、验证目的：确保药品微生物限度检查实验的准确性，在建立药品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌总数计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该样品的需氧菌总数的测定。

二、验证方法合格标准1.前提条件：培养基适用性实验应符合规定，即：被检R2A培养基上菌落平均数与对照培养基上菌落平均数比值应为0.5~2，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。

2.计数方法适用性试验：在3次独立的平行试验中，若试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值与菌液对照组的平均菌落数的比值）均在0.5～2范围内，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的需氧菌总数。

三、主要材料确认1、仪器、设备确认检查结果：检查人：复核人：日期：2、辅助材料确认2.1移液器、接种环、酒精灯、记号笔、酒精棉球、试管架、试管、玻璃平皿、止血钳等2.2需灭菌物品见《微生物限度检查法验证记录》2.3一次性无菌用具见下表检查结果：检查人：复核人：日期：3、人员确认化验员经设备操作、微生物检验技术和实验室生物安全等方面的培训，考核合格后上岗。

4、商品培养基及灭菌培养基4.1 所用培养基均不得有结块、吸潮、异味、颜色发生改变等现象。

培养基检查结果，如下检查结果：检查人：复核人：日期：4.2已灭菌培养基的检查结果及结论见《微生物限度检查法验证记录》。

制药用水的消毒和微生物控制技术研究

《中华人民共和国药典》２０１０版中规定，注射用水检查ｐＨ值、氨、硝酸盐与亚硝酸盐、电导率、总有机碳、不挥发物与重金属、细菌内毒素、微生物限度。与２００５
版相比，增加了电导率和总有机碳的要求。
１．３制药用水的应用范围
１．３．１饮用水
ｐＨ值和温度等影响因素。在不锈钢系统中，必须检查所使用的垫片与消毒方法的相容性。目前，广泛使用的垫片材质是ＰＴＦＥ或ＥＰＤＭ，这２种材质都有较好的热弹性和极好的耐高温、
射用水的质量标准。
附录二：原料药第１ｌ条规定，非无菌原料药精制工
艺用水应至少符合纯化水的质量标准。附录五：中药制剂第３２条规定，中药材洗涤、浸润、
须符合现行中华人民共和国国家标准《生活饮用水卫提取用工艺用水的质量标准不得低于饮用水标准，无
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
摘
要：介绍《中华人民共和国药典））２０１０版对制药用水的定义、水质要求和应用范围要求；从系统设计和实际生产
操作方法２个方面研究了国内外制药用水在消毒和微生物控制方面的技术进展，为今后更好地应用及研究制药用水的
《中华人民共和国药典》２０１０版中规定，纯化水检查项目包括酸碱度、硝酸盐、亚硝酸盐、氨、电导率、总

制药用水系统微生物检测和验证

细菌性热原污染

热原是指可能致热的微生物的代谢产物外源性和内源性污染都可能导致热原污染革兰氏阴性杆菌存在于细胞壁外壁层上的内毒素－磷脂多糖与蛋白质的复合物－是热原反应的主要因素
水系统微生物控制的手段

杀灭
物理消毒法
热消毒法（巴氏消毒，蒸汽灭菌），紫外辐照化学消毒法一般采用氧化剂次氯酸钠，二氧化氯臭氧，过氧化氢，高锰酸钾，过氧乙酸
储罐水泵热交换器管道阀门接口

制药用水的质量构成

化学：
纯化阶段决定

微生物：
更注重从设计到运行和监测的整个过程
水系统微生物污染的来源
原料水外源性污染内源性污染

外源性污染
外源性污染主要指来自于水系统外部的原因对系统造成的污染，例如：

系统未与外界空气隔绝
中国、美国和欧盟药典纯化水、注射用水部分指标
1、纯化水
中国药典
微生物＜100cfu/ml ……
美国药典
内毒素不控制总有机碳：（TOC）＜0.5mg/l 微生物＜100cfu/ml 电导率＜1.3μs/cm
欧洲药典
内毒素＜0.25EU/ml 总有机碳: 同美国
微生物: 同美国电导率＜1.3μs/cm
制药用水系统微生物检测和验证
本次培训的目的

制药用工艺用水
定义? 用途? GMP的要求?

水系统基本构造水系统微生物污染的来源及控制水系统验证
制药用水的定义

Water is the most widely used substances, raw material, or ingredient in the production, processing, and formulation of compendial articles. (USP General Information section 1231)

中国药典2020版二部纯化水微生物检查

中国药典2020版二部纯化水微生物检查摘要：I.引言- 介绍中国药典2020 版二部- 阐述纯化水微生物检查的重要性II.纯化水微生物检查的标准- 引用《中国药典》2020 年版二部中有关纯化水微生物检查的标准- 详细解析标准中的关键要点III.检查方法- 描述纯化水微生物检查的具体步骤- 介绍所需的实验材料和设备- 详细说明实验操作流程IV.结果处理与分析- 介绍如何处理和分析检查结果- 阐述如何根据检查结果判断纯化水是否合格V.结论- 总结纯化水微生物检查的关键要点- 强调实施纯化水微生物检查的重要性正文：引言中国药典2020 版二部对药品的生产、质量控制等方面做出了严格的规定。

其中，纯化水微生物检查是确保药品生产过程中水质安全的重要环节。

纯化水在药品生产中有着广泛的应用，如制药工艺中的溶剂、清洗剂等。

因此，对纯化水微生物进行检查，可以有效防止微生物污染，保证药品的质量和安全。

纯化水微生物检查的标准根据《中国药典》2020 年版二部，纯化水微生物检查的标准如下：1.检查项目：总细菌数、霉菌和酵母菌数、大肠埃希氏菌。

2.检查方法：采用薄膜过滤法，将纯化水样品过滤后，在适当的培养基上进行微生物培养。

3.检查频率：每批纯化水进行一次微生物检查。

4.合格标准：纯化水中总细菌数不得超过100CFU/mL，霉菌和酵母菌数不得超过10CFU/mL，大肠埃希氏菌不得检出。

检查方法纯化水微生物检查的具体步骤如下：1.取样：从纯化水储存和使用系统中分别取样。

2.过滤：采用薄膜过滤法，将样品过滤至滤膜上。

3.培养：将滤膜放入适当的培养基中，恒温培养一定时间。

4.计数：对培养后的菌落进行计数，并计算各项指标。

结果处理与分析1.对于检查结果，应按照《中国药典》2020 年版二部的要求进行判定。

2.若纯化水中的总细菌数、霉菌和酵母菌数或大肠埃希氏菌有一项不合格，则该批纯化水视为不合格。

3.根据检查结果，对纯化水进行处理，如重新制备、消毒等。

微生物控制菌检查方法验证方案

微生物控制菌检查方法验证方案一、背景介绍在制药、食品、医疗器械等行业中，微生物控制是非常重要的环节之一。

为了确保产品的安全性和合规性，对微生物的检查方法进行验证就显得尤为重要。

本文旨在提出一种可行的微生物控制菌检查方法验证方案。

二、方法验证目的本方案的目的是验证微生物控制菌检查方法的准确性、重复性、中间值和检测限度等关键指标，以确保该方法在实际应用中的可靠性。

三、验证方案1. 选择验证样品- 针对待验证的微生物控制菌检查方法，选择适当的微生物控制菌株作为验证样品。

验证样品应包含革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌等常见微生物类型。

- 确保验证样品的纯度和活性，并按照国际、行业规定的标准方法进行检测。

2. 实验设计- 确定验证实验的设计方案，包括样品分组、样品数量、重复次数等。

- 考虑到实验条件对验证结果的影响，应合理设置对照组和正试验组。

3. 数据采集与处理- 在验证实验中，记录样品的检测结果、测试方法和环境因素等重要信息。

- 利用统计学方法对验证结果进行分析，计算实验数据的平均值、标准差、变异系数等，并进行显著性分析。

4. 验证指标- 准确性：评估该微生物控制菌检查方法的准确性，即其与已知标准方法结果的一致性。

- 重复性：通过对同一样品在相同条件下进行多次测试来评估方法的重复性，计算重复测定之间的变异程度。

- 中间值：通过对同一样品在不同批次进行测试来评估方法的中间值，计算不同批次之间的变异程度。

- 检测限度：确定该方法能够可靠地检测到微生物的最低浓度水平。

五、验证结果分析根据数据采集和处理的结果，对所验证的微生物控制菌检查方法进行评估，如准确性、重复性等指标是否符合要求。

若验证结果不符合要求，则需对该方法进行优化或调整，重新进行验证。

六、验证报告根据验证结果编写验证报告，并包括实验设计、数据采集与处理、验证结果分析等内容。

报告应具备准确性、完整性和清晰度，以便他人能够理解和复现验证过程。

七、验证结果的应用验证结果应用于实际微生物控制菌检查方法的应用中，作为判定产品合格与否的依据。

制药用水系统验证

制药用水系统验证制药用水系统的验证，是为了证实整个工艺用水系统能够按照设计的目的进行出产和可靠操作的过程。

验证工作需要从设计阶段就开始，通过监按建造、使用过程，收集和组织相关的文件资料，最终形成完善的验证文件。

通常，工艺用水系统的验证程序分为三个方面，即确认系统中采用的所有关键的硬件和软件安装是否符合原定的要求(IQ)；确认工艺用水系统中使用的设备或系统的操作是否能够满足原定的要求(OQ)；确认工艺用水系统采用的工艺是否能够按照原定的要求正常的运转(PQ)。

1 验证的筹办在针对一个指定的工艺用水系统，进行验证以前应该做好验证前的筹办工作，包罗下述使用文件所规定的有关内容。

使用文件是由建造工艺用水系统的工程公司、设备制造厂、使用者共同制作的。

要求这些文件必需以适宜的形式组织起来，更便于接受药政办理部分(SDA、FDA等)的查抄和批准。

系统的使用测试和文件将满足多种资格要求。

使用文件包罗以下六个方面。

(1)文件清单①系统内设备，包罗设备出厂标签号、出产厂商、样品序号和设备尺寸大小；②PC／PLC／DOS／WINDOWS输入，输出和警告；③阀门，包罗标签号、位置、类型、尺寸；④关镀的和非关键的设施，包罗标签号、位置、类型、作用／目的、范围和测定日期；⑤管道，包罗节段号、类型、尺寸和完成情况；⑥滤膜，包罗标签号、位置、品种、尺寸、制造用的材料、出产商、型号和孔径大小；⑦工艺过程和配套公用工程，包罗系统名、提供压力、温度和所需电力；⑧采购、安装合同中所需的原材料；⑨零部件清单；⑩尺度操作程序(适用于系统设备的操作、维护、测定，运行办理)。

(2)工厂测试程序①设备测试程序，测定程序和数据表；②压力测试，PLC／PC测试；③安然查抄，制动设备的操作测试步调。

(3)焊接文件①焊接管道材料的质量包管书，材料成分陈述书；②焊工证书确认，焊接质量的查抄记录；③焊接设备合格证书，焊接口抽样查抄的百分比；④焊接记录，焊接查抄百分比；⑤焊接程序，焊接查抄证书和仓储。

制药用水系统验证及日常监控-葛均友1

– 在分析试剂、美国药典收载品种、原料药/中间体、药物的生产、加工及制备过程中，水是用量最大、使用最广的一种原料、成分和溶剂。
生活饮用水卫生标准-GB5749
• 饮用水为天然水经净化处理所得的水，其质量必须符合现行中华人民共和国国家标准《生活饮用水卫生标准》
纯化水药典标准概要比较
项目
来源
2010版药典附录ⅩⅥ 制药用水 • 水是药物生产中用量大、使用广的一种辅料，用于生产过程及药物制剂的制备。 • 本版药典中所收载的制药用水，因其使用的范围不同而分为饮用水、纯化水、注射用水及灭菌注射用水。一般应根据各生产工序或使用目的与要求选用适宜的制药用水。药品生产企业应确保制药用水的质量符合预期用途的要求。 • 制药用水的原水通常为饮用水。
•
•
新版GMP的要求 • 纯化水、注射用水储罐和输送管道所用材料应无毒、耐腐蚀；储罐的通气口应安装不脱落纤维的疏水性除菌滤器；管道的设计和安装应避免死角、盲管。 • 应对制药用水及原水的水质进行定期监测，并有相应的记录。 • 纯化水、注射用水的制备、贮存和分配应能防止微生物的滋生，如注射用水可采用70℃以上保温循环。 • 应按照书面规程消毒纯化水、注射用水管道，必要时包含其它供水管道，并有相关记录。操作规程还应详细规定制药用水微生物污染的警戒限度、纠偏限度和应采取的措施。
欧盟关于制药用水的法规
• 法规(药典)
纯化水高纯水注射用水
• 法规 (EMEA)
确定需求：何处使用何种水
USP制药用水指南
• USP《1231》
– Water is widely used as a raw material, ingredient, and solvent in the processing, formulation, and manufacture of pharmaceutical products, active pharmaceutical ingredients (APIs) and intermediates, compendial articles, and analytical reagents • USP《1231》

纯化水的微生物限度检查方法验证

纯化水的微生物限度检查方法验证//////////// 制药有限公司微生物限度检查方法验证验证方案制定人：部门：日期：验证方案审核人：部门：日期：验证方案批准人：部门：日期：1//////////// 制药有限公司1验证目的：当建立纯化水的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌和酵母菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于纯化水的细菌、霉菌和酵母菌检查。

2验证方案：照《中国药典》2021版二部附录Ⅺ J 方法。

2.1仪器与试药2.1.2仪器：STV3无菌检查薄膜过滤器（浙江宁海白石药检仪器厂），微孔滤膜（孔径0.45um,直径50mm）。

2.1.3试药：2.1.4培养基：营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基，营养肉汤培养基。

来源：北京三药科技开发公司生产中国药品生物制品检定所监制 2.1.5试液：生理盐水，pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。

（均按照《中国药典》2021版二部附录Ⅺ H、J要求配制）2.1.6对照菌株：大肠埃希菌[CMCC(B) 44 102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26 003]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63 501]、白色念珠菌[CMCC(F) 98 001]、黑曲霉 [CMCC(F) 98 003]。

来源：广州药物研究中心 2.2对照菌液的制备：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的营养琼脂斜面新鲜培养物各1环分别接种于15ml 营养肉汤培养基内，于30～35℃培养18～24小时后，稀释至1：10～1：10，，取1ml注入平皿中，注入约45℃的营养琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后置30～35℃培养48h，进行活菌计数。

取白色念珠菌的玫瑰红钠琼脂斜面新鲜培养物1环接种于改良的马丁琼脂培养基内，于25～28℃培养24～48小时后稀释至1：10～1：10，取1ml注入平皿中，注入约45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后置25～28℃培养72h，进行活菌计数。

制药用水检测项目及注意事项

制药用水检测项目及注意事项第一部分、制药用水所检项目有哪些？制药用水根据不同的使用范围分为饮用水、纯化水、注射用水和灭菌注射用水。

这里我们只针对纯化水（PW）和注射用水（WFI）进行分析讨论。

根据中国药典规定，PW需检验项目为：性状、酸碱度、氨、硝酸盐、亚硝酸盐、电导率、总有机碳（TOC）、不挥发物、重金属、微生物限度。

WFI所需检验项目与PW相比，将酸碱度更换为pH值，增加了细菌内毒素控制，其余检验项目与PW基本相同，但是微生物的控制标准要严于PW的标准。

第二部分、微生物限度检测方法的确认根据非无菌产品微生物限度检测方法的要求，应进行培养基适用性检查和计数方法适用性试验。

纯化水培养基适用性检查方面，相应进行R2A琼脂培养基的适用性检查，菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌。

以及无菌培养试验。

方法：取不大于100cfu菌液，于购买的R2A琼脂培养基，快速涂布，每一菌株平行2个平板。

同样操作涂布与中检院购买的对照培养基，培养5天。

无菌培养试验：取2平皿，作为阴性对照培养。

标准：被测培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数比值应在0.5-2之间，菌落形态、大小一致。

无菌培养，培养基上无微生物生长。

纯化水计数方法适用性方面，水作为无抑菌作用的溶剂，进行微生物回收试验意义不大，因此，应不进行计数方法适用性试验。

R2A培养基，营养欠丰富，有利于损伤微生物的回收，培养时间不低于5天。

第三部分、准备工作注意哪些？（1）仪器设备及耗材：检测前要根据所要检测的项目，检查所用仪器/设备（如天平、pH计、电导率仪、培养箱等）是否经过了校准，是否在校准效期内，有些仪器还需要使用前校准或日校，比如天平，pH计。

微生物限度检验所用的生物安全柜（或超净工作台）、微生物过滤系统和培养箱应保证在确认效期内。

用到的关键耗材，如微孔滤膜及滤杯等物料应保证其无菌性，可购买一次性无菌过滤器，也可在经验证的灭菌程序下灭菌，并在经验证的有效期内使用，但微孔滤膜不建议用户自行湿热灭菌，因为湿热灭菌可能会引起滤膜孔径的改变，除非有充分的证据证明灭菌后的滤膜仍满足使用需求。

微生物学检查方法验证与评价要求

微⽣物学检查⽅法验证与评价要求微⽣物学检查⽅法验证与评价要求审评三部霍秀敏宁黎丽成海平魏农农摘要：本⽂系统阐述了微⽣物限度和⽆菌检查法验证的内容和技术评价要求，⽬的是规范微⽣物限度和⽆菌检查⽅法验证⼯作，供注册申请⼈在进⾏微⽣物限度和⽆菌检查研究时参考，微⽣物限度和⽆菌检查的评价要求，可⽤于具体的审评⼯作。

关键词：微⽣物学检查；⽅法验证；评价要求。

⼀、概述本⽂中的微⽣物学检查⽅法包括微⽣物限度检查法和⽆菌检查法。

微⽣物限度检查法系检查⾮规定灭菌制剂及其原料药、辅料受微⽣物污染程度的⽅法；包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。

⽆菌检查法系⽤于检查药典要求的⽆菌药品、原料药、辅料等是否⽆菌的⽅法；若检查结果符合规定，表明在该检验条件下未发现微⽣物污染。

中国药典2000年版及以前的版本虽然收载了微⽣物限度检查法和⽆菌检查法，但在如何保证检验⽅法的科学性及检验结果的准确性⽅⾯存在⼀些问题，与国外药典的相关要求⽐较有⼀定差距，关键是未明确对检验⽅法进⾏必要的⽅法学验证。

以前品种的申报资料中⼀般仅提供微⽣物限度检查或⽆菌检查的检查结果，⽆⽅法学验证内容。

但从保证药品安全性的实际出发，不同品种需要选择建⽴各⾃适当的检查⽅法，即使是仿制药，由于不同⽣产企业采⽤的⼯艺、辅料等的不同，其产品可能表现出不同的抑菌特性，进⾏微⽣物限度检查或⽆菌检查时，具体的检查⽅法也不能简单地照搬，需要通过试验验证核实已有的试验⽅法和检测系统是否适⽤，因此，也需要进⾏必要的⽅法验证。

中国药典2005年版对微⽣物限度检查法和⽆菌检查法进⾏了修订完善，明确规定进⾏药品微⽣物限度检查或⽆菌检查时应进⾏⽅法验证，⽬的是确认试验中应选择药典收载的何种供试液制备⽅法、何种测定⽅法，以及验证确定的检测系统是否适⽤于该药品的检验。

如果供试品有抑菌性，影响测定结果，则应采⽤适当的⽅法消除供试液的抑菌活性后再进⾏检查。

也就是说，只有通过⽅法验证，才能确定针对具体品种的具体的检验⽅法，保证采⽤的⽅法的科学性和检验结果的准确性。

中、美、英、欧药典制药用水微生物检查法对比研究

中、美、英、欧药典制药用水微生物检查法对比研究杨晓莉;李辉;绳金房【摘要】Objective In order to provide a reference for the revision of Chinese Pharmacopoeia (Ch .P .) and offer a rational propos-al to promote the microbiological test of pharmaceutical water .Method Different media and cultural conditions were used to detect samples 20 pharmaceutical water .The difference among different methods was inspected and statistically analyzed by a paired t-test .Result The results exhibited that using R2A medium ,30-35 ℃ ,120 h ,membrane filtra tion method to examine the microbi-ological of pharmaceutical water was better than other methods .Meanwhile ,the method recorded in Ch .P of 2010 was reasona-ble .Conclusion Using R2A medium ,30-35 ℃ ,120 h ,and membrane filtration method is workable for microbial limit tests .%目的比较中、美、英、欧药典制药用水微生物检查法，为《中国药典》的修订提供参考，为推动制药用水微生物检查法与国际接轨提供合理化建议。

纯化水微生物限度检查方法

纯化水微生物限度检查方法1. 纯化水微生物限度检查方法纯化水是指经过特殊处理后去除了多种杂质和微生物的水，主要用于实验室、制药、电子工业等领域。

为确保纯化水的质量，需要进行微生物限度检查。

以下为纯化水微生物限度检查方法及其详细描述。

2. 样品采集要选择好样品采集点。

在采集前要将取样的操作员的手洗净，然后用70%的酒精或其他消毒剂在取样点上喷洒并擦拭，等待其干燥。

样品可以用无菌的容器，如无菌烧杯或无菌注射器采集。

3. 检查项目常规情况下，对于纯化水的微生物限度检查主要包括大肠杆菌、菌落总数和霉菌的检测。

4. 大肠杆菌检测大肠杆菌是一种重要的致病菌，其检测可以反映样品是否受到粪便污染。

根据GMP规定，1毫升纯化水中的大肠杆菌不应超过10个。

5. 菌落总数检测菌落总数是指在一定条件下，菌落形成的总数。

对纯化水进行菌落总数检测，可以评估其细菌含量及其污染情况。

普遍认为，1毫升纯化水中的细菌菌落总数不应超过100CFU （菌落形成单位）。

6. 霉菌检测霉菌是一种常见的微生物，常常伴随着水污染。

过多的霉菌会对人体健康造成危害。

对于纯化水，检测霉菌可以评估其存在程度和可能的污染源。

GMP规定，1毫升纯化水中的霉菌不应超过10CFU。

7. 检测方法目前，常用的检测方法有培养法、分子生物学方法和流式细胞仪法。

培养法是一种较为传统的方法，通常通过在培养基上进行菌落总数检测，可以获得较为准确的结果。

分子生物学方法则是一种新兴的技术，可以通过检测DNA、RNA或蛋白质，进行微生物的检测。

流式细胞仪则是一种高通量的技术，可以进行密集的细胞计数和分类。

8. 注意事项在进行微生物限度检查时，要特别注意以下几点。

所有的操作应当严格按照GMP要求进行，确保检测的结果准确可靠。

其次要加强检测设备的维护及保养，确保设备的准确性和稳定性。

最后需要注意的是，纯化水的质量与检测方法密切相关，应根据不同领域的需求，选择相应的检测方法和标准。

中、美、英、欧药典制药用水微生物检查法对比研究

际接轨提供合理化建议。方法通过采用不同的检查方法、培养基、培养条件对２Ｏ个样本进行实验，并对不同实验条件进行两两配对的ｔ检验，统计分析比较方法的差异性。结果采用Ｒ２Ａ培养基，３０～３５℃ ，１２０ｈ，薄膜过滤法，培养效果较好。同时，《中国药典｝２０１０年版的方法可行。结论可以采用Ｒ２Ａ培养基、３０～３５℃、１２０ｈ、薄膜过滤法对制药用水进行微生物限度
西北药学杂志
２０１３年９月第２８卷
第５期
中、美、英、欧药典制药用水微生物检查法对比研究
杨晓莉，李辉，绳金房（陕西省食品药品检验所，西安７１００６１）
摘要：目的比较中、美、英、欧药典制药用水微生物检查法，为《中国药典》的修订提供参考，为推动制药用水微生物检查法与国
ａｌｔｏｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｍｉｃｒｏｂｉｏ１０ｇｉｃａ１ｔｅｓｔｏｆｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｗａｔｅｒ．ＭｅｔｈｏｄＤｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉａａｎｄｃｕｌｔｕｒａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔＯｄｅｔｅｃｔ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＩｎｏｒｄｅｒｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｒｅｖｉｓｉｏｎｏｆＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ（Ｃｈ．Ｐ．）ａｎｄｏｆｆｅｒａｒａｔｉｏ பைடு நூலகம் ａｌｐｒｏｐｏｓ —

制药用水微生物限度检查新方法

制药用水微生物限度检查新方法【摘要】目的围绕制药用水微生物限度，制定全新的检查方法，为企业制药用水微生物污染控制提供指导。

方法以美国药典、欧洲药典、中国药典为对象，就其中的制药用水微生物限度检查方法进行对比，经数据分析，从中将最优条件给予明确，即选择R2A琼脂培养基，采用薄膜过滤法，培养≥5d（30~35℃）。

结果与现行中国药典制药用水微生物检验方法相比较，在污染菌的检出率上，新方法要明显更高。

结论所构建的新方法检出率更高，可以将制药用水微生物污染情况更加准确、真实的反映出来，可当作增补本收载方法（中国药典）。

【关键词】微生物限度；制药用水；薄膜过滤法在生产药品时，制药用水是其中的一种重要敷料，使用最广且用量最大，在生产、制备药物制剂的全程中均需要用到。

本文以多家制药企业为研究对象，围绕其所产生的纯化水系统水样，调查微生物的污染情况。

在实际操作中，与中国药典制药用水微生物检验标准实际执行中所遇问题相结合，且对比于国外的一些主流药典，从中剖析二者在一些方面所存在的差异，如污染菌检出率、培养体系等，为修订中国药典制药用水微生物检验方法提供支撑与依据。

需指出的是，在控制制药用水微生物的检验方法上，欧洲药典（EP）、中国药典（ChP）、美国药典（USP）之间存在较大差异，多体现在检测方法、培养体系上，本文就此作一深入剖析，从中明确最优条件，找寻新方法、新思路，现探讨如下。

1.材料与方法1.1材料（1）水样来源。

针对本次调查而言，选取多家制药企业（13家），对其所采用的纯化水系统进行进行抽查，共得到水样90个。

在这些企业当中，国内制药企业7家，中外合资制药企业、外资制药企业各1家，医院制剂室4家。

（2）培养基。

选用北京三药科技公司生产的RA培养基、NA培养基；另采用美国BD公司生产的R2A琼脂培养基、TSA培养基。

1.2实验方法（1）对比各培养体系对制药用水中微生物检出率所产生的影响。

选用平皿法进行检测，培养体系以USP35、EP7.0、ChP2010的规定为参照，测定上述样本。

制药用水系统的设计测试和确认

制药用水系统的设计测试和确认
其次，制药用水系统的测试是确保水质符合要求的关键环节。

制药用
水系统的测试应包括常规测试和特殊测试。

常规测试包括测定水中的微生
物和化学污染物浓度，如菌落总数、大肠菌群、重金属、有机物等。

特殊
测试包括制药工艺所需的特殊水质要求，如去离子水的电导率、超纯水的
溶解氧等指标。

测试结果应与相应的国家和行业标准进行对比，确保水质
符合要求。

最后，制药用水系统的确认是对系统进行评估和验证，以确保系统能
够稳定可靠地运行。

制药用水系统的确认应包括原水质量、水处理过程、
仪器设备、监测方法和记录等方面。

确认的方法包括验证采样、测定方法
的准确性和灵敏度，以及系统可靠性的评估。

确认的结果应被记录和归档，以备日后的质量审核和监管。

总而言之，制药用水系统的设计、测试和确认是保证制药产品质量和
安全性的重要环节。

通过科学合理地设计制药用水系统，对水质进行全面、准确的测试，并对系统进行彻底的确认，可以有效地降低水质污染风险，
提高药品质量，保护公众的健康。

制药企业应充分重视制药用水系统的设计、测试和确认工作，建立有效的质量管理体系，并不断优化和改进制药
用水系统的运行。

制药用水微生物限度检查

1．饮用水⑴取样于500ml玻璃瓶中加入2毫升1.5%硫代硫酸钠溶液，加盖后高压蒸汽灭菌。

（121℃，30分钟）。

取样前，先用酒精灯将水龙头烧灼消毒，然后把水龙头完全打开，放水1～3分钟后取样。

⑵细菌数检查（不得过100个/ml）①以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml 已融化并冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，每个水样应倾注二个平皿，待培养基冷却后将平皿置于37℃恒温箱内培养24小时。

②菌落计数按微生物限度检查法菌落计数项进行计数。

③菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。

⑶大肠菌群（不得检出）①取10ml水样接种到10ml双料乳糖蛋白胨培养液中，取1ml水样接种到10ml单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1ml水样注入到9ml灭菌生理盐水中，混匀后吸取1ml（即0.1ml 水样）注入到10ml单料乳糖蛋白胨培养液，每一稀释度接种5管。

对已处理过的出厂自来水，可直接种5份10ml水样双料培养基，每份接种10ml水样。

②分离培养将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于36℃±1℃培养箱内培养18h～24h，观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落作革兰氏染色，镜检和证实实验。

深紫黑色，具有金属光泽的菌落；紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；淡紫红色，中心较深的菌落。

③证实实验经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，同时接种乳糖蛋白胨培养液，置36℃±1℃培养箱中培养18h～24h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。

④结果报告根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml水样中的总大肠菌群最可能数（MPN）值。

5管法结果见表表2 用5份10ml水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（MPN）2.纯化水⑴测定：取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，取10ml，照薄膜过滤法，过滤，取出滤膜，菌面朝上，分别贴于营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基平板上培养，每种培养基至少制备一张滤膜。