自动化分析 (免疫比浊)
自动化分析-(免疫比浊)
自动化免疫比浊
➢免疫比浊分析技术发展
两测定Biblioteka 原抗体形成后的阶段 个 测定抗原抗体结合的峰值
散射(终点)比浊
阶
段
速率散射比浊
散射比浊法:
当一束光
在光源的光路方向（50-960）
免 疫 比 浊
线通过溶 液受到光 散射和光 吸收两个
角的方向上测量透射光强度 和被检测溶液中微粒浓度关 系的方法。
法
因素的影
➢对抗原过量进行阈值限定 先测定预反应时段抗原-抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。
三、速率散射比浊分析
三、速率散射比浊分析 （一）基本原理
— 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。
— 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。
平光线
散射光θ
透射光
检测器 检测器
光源 透镜 滤光片
散射比浊、透射比浊光路图
实验要求（了解）
❖ 溶液中形成的复合物分子应足够大(35-100nm) ❖ 溶液中形成的复合物分子要足够多 ❖ 控制抗原抗体反应的温度和时间 ❖ 加促凝剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间 ❖ 应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量 ❖ 将标准品稀释至少5个浓度测定，以吸光度值(A)
Rayleigh原理：即散射光的强度与复合物的量 呈正比，与散射光的夹角呈正比，与波长呈反 比。
在散射比浊中，增加抗原-抗体复合物的体积， 减小入射光的波长，扩大散射光夹角等因素， 均可增加检测的敏感度。
（二）反应物含量与散射浊度
Heidelberger曲线
免疫自动分析技术
镧系元素荧光特点：
荧光寿命极长 镧系元素螯合物（60~900 us) <铕：714us> 普通荧光免疫中荧光团：1~100us 样本中蛋白质荧光：1~10us，易猝灭。
Stokes位移大（大约280nm） 铕：发射光613nm、激发光340nm， 荧光素的Stokes位移为280nm
荧光特异性强（发射光谱带很窄：615± 5nm） 解离-增强技术可使其荧光性提高100万倍
免疫自动分析技术
免疫自动化分析系统 （automation of immunoassays）
免疫自动化分析
免疫自动化分析结构
主要内容
一、概述 二、自动化免疫浊度分析系统 三、自动化发光免疫分析系统 四、自动化免疫荧光分析系统 五、自动化酶联免疫分析系统 六、免疫自动化仪器选择与应用
第一节 自动化免疫浊度分析系统
➢肿瘤标志物检查 AFP、CEA、CA-50、PSA、hTg、β2-micro、NSE PAP、CA-242、PSA（total/free）、PSA EQM CA-199*、CA-125*、CA-153*、CA-724*
➢ 妇产科检查 FSH、LH、hCG、Prolactin、E3、E2、 Testosterone、Progesterone、SHBG
• Eu3+在游离状态下，荧光信号很弱，并容 易被水淬灭。
解离-增强技术
➢ Eu3+解离后迅速与β-二酮体螯合，进入胶 束内核，形成一个大分子微囊--新的稳定螯 合物。
➢大分子微囊个外端是亲水基团，内端是疏 水基团。
➢激发后荧光信号增强可达100万倍。
七、方法学评价
1、灵敏度高。 2、线性宽，4~5个数量级。 3、稳定，有效期长。 4、安全，无放射性污染。 5、易于自动化。 缺点：对环境要求高、易受环境、试剂和容 器中的镧系元素离子污染。
《免疫比浊分析》课件
案例三
总结词
辅助诊断、判断病情
详细描述
自身免疫性疾病是一类复杂的疾病，免疫比 浊分析可以检测出自身抗体，辅助医生进行 诊断和判断病情。通过检测自身抗体水平， 有助于了解疾病的活动度和治疗效果。
THANKS
感谢观看
06
案例分享：免疫比浊分析在疾病 诊断中的应用
案例一
总结词
准确、快速、敏感
详细描述
免疫比浊分析在乙肝病毒检测中表现出高准确性和高敏感性，能够快速检测出乙肝病毒 的抗原和抗体，为乙肝的诊断和治疗提供了有力支持。
案例二
总结词
早期发现、监测病情
VS
详细描述
免疫比浊分析用于检测肿瘤标志物，有助 于肿瘤的早期发现和病情监测。通过定期 检测肿瘤标志物水平，可以及时发现肿瘤 复发或转移，为制定治疗方案提供依据。
结果解读
根据实验结果，结合专业知识，对结果进行解读 和解释，为临床诊断和治疗提供依据。
03
免疫比浊分析的仪器与试剂
仪器介绍
仪器类型
介绍免疫比浊分析中常用的仪器 类型，如分光光度计、全自动生 化分析仪等。
工作原理
阐述仪器的工作原理，如光线通 过溶液时发生散射、吸收等现象 ，用于测量物质浓度。
仪器参数
研究进展与展望
• 自动化程度提高：仪器设备的自 动化程度不断提高，减少了人为 误差和操作时间。
研究进展与展望
标准化和规范化
建立统一的检测标准和方法，提高不同仪器 和试剂间的可比性。
智能化发展
结合人工智能、大数据等技术，实现检测结 果的自动分析和解读。
应用拓展
拓展免疫比浊分析在临床诊断、生物医药等 领域的应用范围。
实验注意事项
仪器维护
免疫沉淀类试验——免疫比浊
微生物与免疫教研室
沉淀反应（precipitation）
可溶性抗原与相应抗体在适 当条件下发生特异性结合所出现 的沉淀现象。
分类
絮状沉淀试验 液体内沉淀试验 环状沉淀试验
沉
免疫浊度测定
淀
反 应
单向免疫扩散试验 免疫扩散验
免疫电泳
火箭免疫电泳 对流免疫电泳
免疫浊度测定
1 抗原抗体比例
1. 高剂量钩状效应（high dose hook effect )
2. 海德堡（heidelberger）曲线理 论
2 抗体的质量
（1）特异性高 （2）效价高 （3）亲和力高 （4）抗血清来源
3 抗原抗体反应的溶液
• pH 6.5~8.5
• 电解质 离子强度、种类（磷酸盐缓冲液）
（二）类型
1. 透射免疫比浊法
通过检测光被吸收、衍射、反射和折射后光 线减弱的变化来衡量抗原抗体的复合物。
2、散射免疫比浊法
通过检测光折射和衍射而形成的散射光强度 来定量抗原抗体的复合物。
3、免疫胶乳比浊法
以胶乳作为载体对小分子免疫复合物进行微 量测定，进一步提高了免疫浊度测定的灵敏 度。
1 透射免疫比浊法
概念：将现代光学测量仪器与自动化分析 检测系统相结合应用于沉淀反应，可以 对各种液体介质中的微量抗原、抗体和 药物及其他小分子半抗原物质进行定量 测定。
（一）免疫浊度分析的基本原理：
• 抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成 小分子免疫复合物(<19S)，在增浊剂(如聚乙 二醇( PEG)、NaF等)的作用下，迅速形成免 疫复合物微粒(>19S)，使反应液出现浊度。 在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫 复合物量随抗原量增加而增加，反应液的浊度 亦随之增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度 呈正相关。用一系列已知浓度的抗原标准品同 时进行试验，制备剂量反应曲线，即可计算出 标本中抗原的含量
临床免疫学：第七章 免疫比浊技术
絮状沉淀试验
液体内沉淀反应
环状沉淀试验
沉淀反应
单向扩散试验
凝胶内沉淀反应 双向扩散试验
免疫电泳
免疫电泳技术
免疫固定电泳
免疫比浊技术
免疫比浊技术的分类
• 所检测的光信号性质
透射免疫比浊 散射免疫比浊
终点法 • 测定时间
速率法
无增敏 • 增敏剂 PEG增敏
胶乳增敏
透射免疫比浊法
• 基本原理
• 一定波长的光线通过抗原抗体反应的溶液时，由 于抗原抗体复合物的形成使入射光被反射、吸收， 透射光减少，光吸收量增多。
• Mie散射(d ＞λ)
散射免疫比浊法
散射免疫比浊法
• 免疫复合物形成的散射光多数属于Rayleigh散射， 其光强度计算公式为：
适当增加抗原-抗体的体积，减少入射光的波长，减 小检测角度，以及使用激光、较短波长等高强度光 源作为入射光，都可提高检测灵敏度。
（θ=0 ？）
散射免疫比浊法的类型
• 5、抗体亲和力好、效价高，且保证过量；
透射免疫比浊法
• 方法评价
• 1、操作简单，重复性好，结果较准确； • 2、能用全自动或半自动化仪器进行检测； • 3、灵敏度比单向免疫扩散法高5～10倍，但
是比散射免疫比浊法低； • 4、要求抗原抗体复合物分子应足够多、足
够大，故耗时长。
根据透射光减弱的原理来定量，分子太小则入射光 直接通过，只能测定抗原-抗体反应的第二阶段。
累计时间（s） 形成IC总量 速率
5
8
－
10
13
5
15
25
12
20
60
35
25
150
90
免疫比浊检验技术原理
自动化检测
免疫比浊检验技术可以与自动化仪器配合使用， 提高检测效率和准确性。
免疫比浊检验技术的原理
在免疫比浊检验技术中，检测物质与特异性抗体结合形成免疫复合物，这些 复合物会在溶液中形成可见的浑浊度，浑浊度与物质浓度呈正相关。
免疫比浊检验技术的步骤
3
样本准备要求高
样本的预处理对测量结果有一定影响，样本准备要求较高。
免疫比浊检验技术的未来发展方向
未来，免疫比浊检验技术有望进一步发展，结合新的成像和数据处理技术，实现更高的灵敏度和准确度，以满 足更多领域的需求。
在药物研发过程中，可以 用于评估药效和药代动力 学。
3 环境监测
用于检测环境中的毒性物 质，保护人类健康和环境 安全。
免疫比浊检验技术的优点
准确度高
相对传统的比色法和酶联免疫吸附法，免疫比浊检 验技术具有更高的准确度。
快速得出结果
免疫比浊检验技术通常只需要几分钟到几小时，可 以得到快速的检测结果。
免疫比浊检验技术原理
免疫比浊检验技术是一种基于光学原理的生化分析方法，通过测量溶液中悬 浮颗粒的浑浊度来确定其对应的分析物浓度。
免疫比浊检验技术的定义
快速、灵敏
通过相对简单的操作流程，可以快速检测样本 中微量物质的浓度。
数量测定
可以准确测定血液、尿液、唾液等生物样本中 的特定分析物的浓度。
广泛应用
1
样本预处理
将待测样本进行预处理，如离心、稀释等，以提高结果的准确性。
2
免疫反应
将样本与特异性抗体一起反应，允许免疫复合物形成。
3
测量浑浊度
利用光学仪器测量样品溶液的浑浊度，得到测量结果。
自动生化分析仪的分析参数设置
自动生化分析仪的分析参数设置自动生化分析仪是一种把生化分析中的取样、加试剂、去干扰物、混合、恒温反应、自动监测、数据处理以及实验后清洗等步骤进行自动化操作的仪器，它完全模仿并代替了手工操作，目前已经成为医疗机构进行临床诊断所必可不少的仪器之一。
它的应用大大提高了生化检验的准确性、精密度和工作效率，适应了临床医学发展对检验医学的要求，然而这一切不仅需要生化分析仪的技术基础，也需要仪器内每个项目都有一组最优化的分析参数。
并且目前大多数生化分析仪为开放式，封闭式的仪器一般也会另外留一些检测项目的空白通道由用户自己设定分析参数，因此我们有必要了解生化分析仪各个分析参数的基本含义以及设置方法。
1.试验名称常以项目的英文缩写来设置，如总蛋白设置为TP，白蛋白设置为ALB等。
2.方法类型生化分析仪常用的方法有终点法、连续监测法、比浊法等，根据被检物质的检测原理等选择其中一种分析方法。
2.1终点法又称为平衡法，是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小对物质进行定量分析的一类方法，有一点终点法和两点终点法两类。
一点终点法的特点是使用一种或两种试剂，当待测物与试剂反应达到终点时，测定混合溶液的吸光度来计算待测物的浓度，该法常用的有总蛋白双缩脲法、白蛋白溴甲酚绿法、葡萄糖氧化酶法等，手工操作的大多数方法都是一点终点法。
两点终点法也称固定时间法，如果是单试剂分析，当测定波长同干扰物质的吸收光谱有重叠时，通过选用两点终点法可消除样品空白引起的干扰，其分析过程是在样品与试剂混合后经过一段延滞期读取一个点A1，一定时间后再读取A2，然后比较标准和测定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待测物的浓度。
肌酐苦味酸法就是一个典型的单试剂两点法的例子。
如果是双试剂分析，选用二点终点分析法除了可消除样品空白引起的干扰外，还可消除内源性干扰物质的干扰，其分析过程是加入试剂1后读取A1，加入试剂2后读取A2，A1相当于读出样品空白值，A2才是实际呈色反应，然后比较标准和测定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待测物的浓度。
散射免疫比浊法
目
录
第一节 免疫比浊技术原理 第二节 自动化免疫比浊分析
第三节 小结
第一节
免疫比浊技术原理
免疫比浊技术分类：
透射免疫比浊法
（turbidimetric immunoassay）
散射免疫比浊法
（nephelometry immunoassay）
终点散射比浊法 速率散射比浊法
一、透射免疫比浊法
8 13 25 60 150 230 300 360 415 450 480 500 — 5 12 35 90 80 70 60 55 45 30 20
（二）技术要求
速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓度及 纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力交高的试 剂。此外，要保证待测样本血清的性状符合要求， 如严重脂血等即为不合格样本。
（三）方法学评也小，因此结果稳定、可靠， 特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器 设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪 或散射比浊仪均可使用。
返回章目录
第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种
（三）方法学评价
该法具有快速、敏感度及精密度高的特点， 其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体 达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测 标本数十份；敏感度高，最小检出量达微克/ 升水平。
四、免疫胶乳比浊法
（一）基本原理 将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒 上，制成致敏的胶乳颗粒，当遇到相应抗原时， 发生交联反应，形成抗原抗体复合物，胶乳颗
抗原抗体反应曲线
二、散射免疫比浊法
（一）基本原理
散射比浊法是指一定波长的光沿水平轴照射，
免疫比浊检验技术原理与进展
新型免疫比浊法研究动态
纳米颗粒增强免疫比浊法
01
利用纳米颗粒的高比表面积和光学性质，提高抗原抗体复合物
的浊度变化，从而提高检测灵敏度。
均相免疫比浊法
02
在反应体系中直接加入抗原抗体复合物，通过浊度变化检测待
测物，无需分离步骤，简化实验操作。
多重免疫比浊法
03
同时检测多个目标物，提高检测通量和效率，满足临床多样化
需求。
存在问题与挑战分析
抗原抗体复合物稳定性
复合物在反应体系中的稳定性直接影响浊度变化的准确性和可重复性，需要优化复合物制备和保 存条件。
非特异性干扰
血清等样本中的非特异性物质可能干扰免疫比浊反应，导致结果误差，需要采取相应措施降低干 扰。
自动化与标准化
当前免疫比浊法操作仍较为繁琐，需要进一步提高自动化程度，同时推动标准化进程，以确保结 果的准确性和可比性。
肿瘤标志物检测中的应用
01
肝癌
通过检测甲胎蛋白（AFP）等肿 瘤标志物，可辅助诊断肝癌及判 断其预后。
卵巢癌
02
03
前列腺癌
免疫比浊法可检测癌抗原125 （CA125），用于卵巢癌的诊断 和病情监测。
通过检测前列腺特异性抗原 （PSA），有助于前列腺癌的早 期发现和诊断。
05 免疫比浊法研究进展及挑 战
探讨了免疫比浊检验技术在临床实验室中的应用，如特定蛋白的 测定、药物监测等，并强调了质量控制的重要性和实施方法。
对未来发展趋势的展望
自动化与智能化
多项目联合检测
随着科技的进步，未来免疫比浊检验技术 将更加自动化和智能化，提高检测效率和 准确性。
开发能够同时检测多个项目的免疫比浊试 剂盒，以满足临床实验室对于高通量、高 效率的检测需求。
临床医学检验技术(士)：免疫检验自动化仪器分析考点
临床医学检验技术(士)：免疫检验自动化仪器分析考点1、单选测定内分泌激素、肿瘤标志物和治疗性药物浓度方面应用最广泛的新技术为（）A.免疫散射比浊分析B.时间分辨荧光免疫分析C.速率散射比浊分析D.免（江南博哥）疫透射比浊分析E.化学发光免疫分析正确答案：E参考解析：免疫散射比浊法是最早应用于临床的自动化免疫分析技术；速率散射比浊分析是以沉淀反应为基础，最早应用于检测抗原抗体反应第一阶段的自动化免疫分析技术；化学发光免疫分析是测定内分泌激素、肿瘤标志物和治疗性药物浓度方面应用最广泛的新技术。
2、单选特种蛋白免疫分析仪是基于抗原-抗体反应原理，不溶性免疫复合物可使溶液浊度改变，再通过浊度检测标本中微量物质的分析方法。
产生伪浊度的主要因素（）A.抗体的非特异性交叉反应性B.增浊剂浓度过低C.反应时间不合适D.仪器故障E.抗原过剩正确答案：A3、单选特种蛋白免疫分析仪是基于抗原-抗体反应原理，不溶性免疫复合物可使溶液浊度改变，再通过浊度检测标本中微量物质的分析方法。
免疫浊度分析的必备试剂不包括（）A.多抗血清（R型）B.高分子物质增浊剂C.20%聚乙二醇D.浑浊样品澄清剂E.校正品正确答案：C4、单选免疫比浊分析的影响因素包括（）A.抗原抗体比例和抗体的质量B.增浊剂的使用C.伪浊度D.入射光光源和波长E.以上均是正确答案：E参考解析：免疫比浊分析的影响因素包括：抗原抗体比例；抗体的质量；增浊剂的使用；伪浊度；入射光光源和波长；结果报告中的计量单位；标准曲线制备与质量控制。
5、单选化学发光酶免疫分析的反应中，对鲁米诺起催化作用的酶是（）A.HRPB.ALPC.AHPPDD.PR3E.β-Gal正确答案：A参考解析：对鲁米诺起催化作用的酶是HRP。
用HRP标记抗原或抗体，与待测标本反应后形成酶标记抗原-抗体复合物，作用于鲁米诺产生发光效应。
6、单选目前临床治疗药物监测最常采用的方法为（）A.FPIAB.荧光酶免疫分析C.TRFIAD.ELISAE.免疫比浊分析正确答案：A参考解析：荧光偏振免疫分析法(fluorescence polari-zation immunoassay，FPIA)是一种定量免疫分析技术，其基本原理是荧光物质经单一平面的蓝偏振光(485nm)照射后，吸收光能跃入激发态，随后回复至基态，并发出单一平面的偏振荧光(525nm)。
第二十章免疫检验自动化仪器分析
第二十章免疫检验自动化仪器分析一、选择题(一)单项选择题(A型题)1.目前免疫比浊分析中最常用的方法是A.散射比浊法B.速率透射比浊法C.分光光度计比色法D.免疫透射比浊法E.肉眼比浊法2.免疫检测自动化的首要目的是A.提高工作效率和检测的精密度B.减低操作者劳动强度C.减少操作程序D.自动检测及校对E.提高检测的可靠性3.散射比浊分析中,多采用e原理B.Rayleigh原理C.Fahey原理D.Mancini 原理E.Sternberg原理4.抗原抗体结合反应遵守典型的A. Mancini 曲线B. Fahey曲线C.Heidelberger 曲线e曲线E.Rayleigh曲线5.定时散射比浊分析应保证A.抗原过量B.抗体过量C.抗体与抗原处于最适比D.抗原与抗体比例为1:1E 抗原与抗体比例为2:16.定时散射比浊分析时,如果待测标本抗原浓度过高,则应A. 照常进行反应B.将待测标本稀释后重新测定C. 进行全量样本检测D.测量结果更可靠E 增加抗体的浓度后重新检测7.首先应用速率散射比浊法进行免疫测定的是A.SternbergB. RayleighC. MileD.ManciniE.Fahey8.速率散射比浊分析设计的前提是A.抗原过量B.抗体过量C.抗体与抗原处于最适比D.抗原与抗体比例为1:1E 抗原与抗体比例为2:19.免疫透射比浊分析中,检测测器与透射光的夹角为A.00B.50C.150D.450E.90010.免疫比浊分析主要用于检测A.免疫球蛋白、补体等B.内分泌激素C.病毒血清标志物D. 肿瘤标志物E.细胞表面标志11.免疫透射比浊分析应保证A.抗原过量B.抗体过量C.抗体与抗原处于最适比D.抗原与抗体比例为1:1E 抗原与抗体比例为2:112.化学发光免疫测定最常用的反应体系为A.气相B.液相C.固相D.半固体E.气溶胶13.化学发光反应中,产生发光的重要条件是A.足够的激发能B.抗原过量C.抗体过量D.足够的触酶E.合适的载体14.需通过ALP催化才能产生发光效应的物质是A.吖啶酯类B. 鲁米诺类C. 三丙胺D.三联吡啶钌E.AMPPD15.电化学发光免疫分析中,最常使用的标记物为A.吖啶酯类B.三丙胺C.鲁米诺类D.三联吡啶钌E.三氧乙烷16.电化学发光免疫分析中,最常使用的方法为A.双抗体夹心法B.竞争法C.间接法D.直接法E.补体参与的结合法17.可与蛋白质、半抗原激素及核酸等物质结合的标记物为A.吖啶醇类B.三丙胺C.鲁米诺类D.三联吡啶钌E.三氧乙烷18.FITC的荧光寿命约为A.15nB.20nsC.30nsD.45nsE.60ns19.哪种物质产生的荧光为长寿命荧光A.FITCB.RB200C.血清白蛋白D.镧系金属离子E.胆红素20.stakes 位移最大的是A.FITCB.RB200C.血清白蛋白D.镧系金属离子E.异氰蒽21.目前时间分辨荧光检测系统最常用的激发光源为A.脉冲钨灯B.脉冲氙灯C.高压汞灯D.卤素灯E.氖灯22.实验本身即可避免内源性非特异荧光干扰的检测方法为A.TRFIAB.FPIAC.荧光酶免疫分析D.直接法荧光抗体染色E.间接法荧光抗体染色23.目前临床治疗药物监测最常采用的方法为A.FPIAB.荧光酶免疫分析C.TRFIAD.ELISAE.免疫比浊分析24.目前最有发展前途的超微量分析技术为A.解离增强镧系元素荧光免疫B.荧光偏振免疫测定C.荧光酶免疫分析D.双标记法荧光抗体染色E.定时散射比浊分析25.堪称免疫比浊分析伟大革命的技术为A.散射免疫比浊分析B.定时散射比浊分析C.速率散射比浊分析D.免疫透射比浊分析E.肉眼比浊分析26.在速率散射比浊分析中,反应介质中加入的促聚剂最常用的是A.PEGB.95%乙醇C.稀盐酸D.硫酸铵E.丙三醇27.免疫透射比浊分析制备标准曲线时,标准品至少应设A.2 个浓度点B.3个浓度点C.4个浓度点D.5 个浓度点E.1 个浓度点即可28.化学发光自动免疫分析中,化学发光反应系统的基础为A.产生足够激发能的化学反应B.处于激发态的中间体C.固相的反应载体D.快速的酶促反应E.产生足够激发光的化学反应29.双抗体夹心法微粒子化学发光免疫分析中,将抗原-磁珠抗体复合物与非特异性物质快速分离的机制为A.磁力的作用B.电场力的作用C.PEG 的凝聚作用D.洗涤E.超速离心法30.关于荧光酶免疫分析的放大系统正确的是A.ALP与H2O2B.ALP与4-MUPC.HRP与4-MUPD.HRP与4 甲基伞酮-β-半乳糖苷E.ALP与4 甲基伞酮-β-半乳糖苷31.关于微粒子化学发光免疫分析的放大系统正确的是A.ALP与4-MUPB.ALP与4 甲基伞酮-β-半乳糖苷C. HRP与AMPPDD.ALP与AMPPDE. HRP与4-MUP32.电化学发光免疫分析与其他标记发光免疫分析原理的不同之处在于A.化学发光反应在电极表面进行B.化学发光反应在磁珠表面进行C.化学发光反应在容器表面进行D.化学发光反应在液相中进行E.由电能导致发光（二）、配伍题问题1～3A.时间分辨荧光免疫分析B.散射免疫比浊分析C.速率散射比浊分析D.免疫透射比浊分析E.化学发光免疫分析1.最早应用于临床的自动化免疫分析技术为2.以沉淀反应为基础,最早应用于检测抗原抗体反应第一阶段的自动化免疫分析技术为3.测定内分泌激素、肿瘤标志物和治疗性药物浓度方面应用最广泛的新技术为问题4～6A.吖啶酯类B.三丙胺C.鲁米诺类D.三联吡啶钌E.三氧乙烷4.在化学发光免疫分析中，常作为标记物的发光物质为5.哪种物质的发光反应须在电极表面进行6.需通过辣根过氧化物酶催化才能产生发光效应的物质是问题7～9A.FITCB.RB200C.4-甲基伞酮磷酸盐D.Eu3+螯合物E.TRITC7.可应用于荧光酶免疫分析的物质为8.经激发光照射后产生荧光的强度最低的是9.可应用于时间分辨荧光免疫测定的是二、填空题1.各种自动化免疫分析仪的仪器结构有共同的特点，即主要由（）和（）两大部分组成。
自动化分析 (免疫比浊)
自动化分析 (免疫比浊)自动化分析 (免疫比浊)一、引言免疫比浊是一种自动化分析方法，通过测量免疫反应中形成的免疫复合物的浊度来检测样品中特定抗原或抗体的存在或浓度。
本文档旨在提供关于自动化分析 (免疫比浊)的详细信息和操作指南。
二、背景1. 免疫比浊的原理：免疫比浊基于免疫反应导致的免疫复合物形成的特性，即抗原和抗体相互结合产生可见的浊度。
测量这种浊度可以提供关于抗原或抗体的定量信息。
2. 仪器设备：免疫比浊分析通常使用细菌二联体仪器或其他具有浊度测量功能的仪器进行测量。
3. 样品处理：样品在进行免疫比浊分析之前需要进行适当的处理，如稀释、去除干扰物质等。
三、方法1. 样品准备：根据需要的抗原或抗体浓度范围，选取适当的稀释倍数来稀释样品。
确保样品中不含有干扰物质。
2. 试剂准备：准备好所需的抗体或抗原溶液，并按照说明书中的指导来配制试剂。
3. 仪器操作：将稀释后的样品和配制好的试剂加入到测量池中，按照仪器操作指南进行测量。
4. 数据分析：根据仪器的测量结果，结合相应的标准曲线或计算方法，计算出样品中抗原或抗体的浓度。
四、注意事项1. 严格按照操作指南进行操作，避免出现误差；2. 样品稀释倍数要根据实际情况选择，确保在仪器的测量范围内；3. 遵循试剂的储存和使用要求，确保试剂的活性；4. 仪器的保养和校准要定期进行，以保证数据的准确性。
五、附件本文档涉及的附件详见附件清单。
六、法律名词及注释1. 免疫反应：免疫系统对抗原的特异性应答，包括抗体的和细胞免疫反应等。
2. 免疫复合物：抗原和抗体结合形成的复合物，通常可导致可视的浊度。
3. 抗原：能够诱导免疫反应的物质，通常为细菌、病毒、蛋白质等。
4. 抗体：免疫系统产生的一种特异性蛋白质，能够与特定的抗原结合并参与免疫反应。
常用免疫学检验检测技术
• 6、捕获法测IgM抗体
IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。间 接ELISA一般仅适用于检测IgG抗体。如用酶标记的抗 人IgM作为二抗进行间接ELISA测定IgM抗体，标本中 同时存在的不同浓度的IgG抗体将与IgM抗体竞争，而 使结合在固相抗原上的IGM抗体相应减少。另外标本 中如含有类风湿因子、也会产生干扰。因此用一般的 间接法测定IgM抗体不能得到准确的结果。
• （二）酶联免疫电转移印斑法
• Burnette于1981年建立酶联免疫电转移印斑法 （enzyme linked immunolectrotransfer blot, EITB），并称之为西部印斑(Western blot). EITB分三个阶段进行。
第一阶段为SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳（SDSPAGE）。抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷， 在聚丙烯酞胺凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量 越小，泳动速度越快。此阶段分离效果肉眼不可 见（只有在染色后才显出电泳区带）．
• （4）加底物显色。夹心式复合物中的酶催化底物 成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原 的定性或定量。
• 在临床检验中，此法适用于检测各种蛋白质等 大分子抗原，例如乙型肝炎病毒表面抗原 （HBsAg）、甲胎蛋白（AFP）、促绒毛膜性腺 激素（HCG）等。双抗体夹心法只适用于二价或 二价以上较大分子抗原的检出和定量分析，而 不能用于半抗原等小分子的测定。
速率散射比浊法有三大特点： • 一、时间快，一般在30-60s之内就可完成测试； • 二、比较准确，因其测定形成速率，抗原多，
速率快； • 三、节省试剂。
• （三）粒子强化免疫浊度测定法
粒子强化免疫浊度测定法的基本原理是，选择 一种大小适中，均匀一致的胶乳颗粒吸附或交联抗 体后，当遇到相应抗原时，则发生聚集，单个胶乳 颗粒在入射光波长之内，光线可透过。当两个胶乳 颗粒凝聚时，则使透射光减少，这种减少的程度与 胶乳凝集成正比，当然也与抗原量成正比。
免疫比浊分析
（三）技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。
• 抗原抗体复合物数量足够多。 • 具有充分的反应时间，只能测定抗原抗 体反应的第二阶段。 • 高亲和力的抗体，并保证抗体过量。
（四）方法评价
优点: 灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确 不足: ①抗体用量较大； ②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大 ③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。
1．抗原抗体比例 抗原抗体比例要适当。 诊断试剂应尽可能 溶液中免
颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝
聚 ，使透射光和散射光即出现显著变化。
三、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的 一种改良。以发光二极管作为光源，检测前
向角13～24度的散射光，然后利用硅化光电
二、免疫散射比浊法
(一) 原理 粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到 光线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成 散射光。 悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的 大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因 素密切相关。
不同大小的微粒形成的散射光分布不同。
当微粒直径小于入射光的波长的十分之一时，
(二) 技术要求 应选择适当的光源强度、反应时间、测量角 度及光源的波长。 另外，要注意保证抗原浓度合适。 此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。
(三)速率散射比浊法（rate nephelometry） 速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的一种动 态测定方法。
所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免
自动化免疫分析仪
0
150／0 5000 2000 >1000 500／3500 275／2500
431／0
600／300 5000 2000 >1000 >600／>4000 >200／>2000
>800／0
>600／>1500 5000 3000 >2000 >600／>4000 >200／>2000
1200／800
10
15.6 <15.6 18 15 15 30 16 16
68-120
200 1200 240 100 100 60 250 165－700
Immulite
Immulite2000 Vitros Elecsys 2010 Elecsys 1010
15
35 24 9 9
120
200 90 88 55
自动化免疫分析仪
2006.6.6
自动化免疫分析仪
什么是自动化免疫分析仪 目前市场上的主要机型及临床应用情况 主要试验流程及要求
市场上的主要机型及临床应用情况（一）
雅培公司
– Axsystem: 基于粒子的荧光偏振技术。 – Architect系列：基于磁分离的化学发光检测。
拜尔公司
一些问题
– 磁分离选择：交变磁场还是永磁？底布分离还是侧分离？ – 洗涤：是否带超声洗涤？ – 样品针和试剂针分离？
DPC公司
– Immulite系列：基于粒子离心分离技术的化学发光检测。
强生公司
– Vitros系列：管式包被的化学发光检测技术。
罗氏公司
– Elecsys系列：基于磁分离的电化学发光检测技术。
06第六章 免疫比浊分析
返回章目录
人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种
改良。以发光二极管作为光源，检测前向角
13～24度的散射光，然后利用硅化光电二极 管接收散射光信号，经过微电脑处理，与标 准曲线进行比较，最后转换成待检物质的浓 度。
复合物产 产生速率 生总量
8 13 25 60 150 230 300 360 415 450 480 500 — 5 12 35 90 80 70 60 55 45 30 20
人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
（二）技术要求 速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓 度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力 交高的试剂。此外，要保证待测样本血清的性 状符合要求，如严重脂血等即为不合格样本。
4
人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
在抗原或抗体量一定的条件下，可以利用比 浊仪在光源的光路方向上测定透射光强度与 入射光强度的比值或吸光度，来判断待测抗 原的量，这种方法称为透射比浊法 。
人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
透射免疫比浊法光路图
人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
（二）技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。
影响检测结果，因此需要选择均匀一致的
胶乳颗粒。此外，试剂需要加保护剂以提
高其稳定性，所用器皿要洁净，避免杂质 微粒的干扰。
人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
（三）方法学评价 该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复 合物对结果影响也小，因此结果稳定、可 靠，特异性好，精确度高，且不需要特殊
免疫比浊法检测免疫球蛋白
浊度产生与测量原理
浊度产生
浊度测量
当抗原与抗体发生特异性结合时，形 成的抗原-抗体复合物会在反应体系 中产生浊度，浊度的高低与复合物的 数量成正比。
通过测量反应体系的浊度变化，可以 间接推断出抗原或抗体的含量。常用 的浊度测量方法包括透射比浊法和散 射比浊法。其中，透射比浊法是通过 测量光线通过反应体系后的透射光强 度来计算浊度；散射比浊法则是通过 测量光线在反应体系中散射的光强度 来计算浊度。
作用机制
不同类型的免疫球蛋白在机体免疫应答中发挥不同作用。例如，IgG是血清中主要的免疫球蛋白，参与体液免疫 ；IgA主要分布于粘膜表面，参与粘膜免疫；IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是早期体液免疫应答中产生的主 要抗体；IgD的生物学功能尚不完全清楚，可能与B细胞活化有关；IgE则与过敏反应相关。
疫苗接种效果评估
接种疫苗后，体内会产生相应的免疫球蛋白，通过检测可以评估 疫苗接种的效果。
健康状况评估
免疫球蛋白水平可以反映机体的免疫状态，通过检测可以评估个 体的健康状况。
个性化健康管理
根据免疫球蛋白的检测结果，可以为个体提供个性化的健康管理 建议，如饮食、运动等方面的调整。
THANKS
感谢观看
Chapter
在疾病诊断中的应用
01
02
03
感染性疾病
通过检测免疫球蛋白水平 ，可以辅助诊断各种感染 性疾病，如病毒、细菌和 寄生虫感染。
自身免疫性疾病
免疫球蛋白的异常表达与 多种自身免疫性疾病相关 ，如类风湿性关节炎、系 统性红斑狼疮等。
肿瘤
某些肿瘤会导致免疫球蛋 白水平异常，通过检测可 以辅助肿瘤的诊断和预后 评估。
试剂选择与配制
选择高质量的免疫比浊法检测试 剂盒，确保试剂的稳定性和准确
1.2免疫浊度法
1.2免疫浊度法比浊法中文名称：比浊法英文名称：turbidimetry定义：悬浮颗粒在液体中造成透射光的减弱，减弱的程度与悬浮颗粒的量相关，据此可定量测定物质在溶液中呈悬浮状态时浓度的方法。
定义又称浊度测定法。
为测量透过悬浮质点介质的光强度来确定悬浮物质浓度的方法，这是一种光散射测量技术。
运用本法主要是用于测定能形成悬浮体的沉淀物质,例如微量磷、硫、氯和钙等的测定,生物碱沉淀试剂形成的混浊也可用此法测定。
这是根据悬浮体的透射光或散射光的强度以测定物质组分含量的一种分析方法。
当光线通过一混浊溶液时,因悬浮体选择地吸收了一部分光能,并且悬浮体向各个方面散射了另一部分光线,减弱了透过光线的强度。
在水质监测和管理过程中，比浊法常用于测量饮用水、工业用水、废水的透明度；也用于测量空气及其他各种气体中悬浮固体的含量，是空气和水污染研究的一种工具。
在酿造工业中，比浊法常用于各种饮料澄清过程的控制和过滤过程的监控。
在分析化学上，可通过生成悬浮沉淀的反应产物来测定某些元素的浓度,例如,通过生成硫酸钡悬浮物来测定Ba2+ 或SO2-,以及在煤、焦炭、油、橡胶中的总硫量；通过生成硫化银和氯化银悬浮物来测定Ag+或Cl-；在容量分析中,浊度测量也可用于确定滴定终点，如用钙盐滴定氟化物、用银盐滴定溴化物、用钡盐滴定硫酸盐等。
在生物化学中，比浊法广泛用于测定液体食品中细菌的生长量及氨基酸、维生素和抗生素等。
根据悬浮体系中粒子的沉降速度与其半径的平方成正比的原理，比浊法可用于不同大小粒子沉降速度的监测和粒子大小的分类。
分析过程当光束通过一含有悬浮质点的介质时，由于悬浮质点对光的散射作用和选择性的吸收，使透射光的强度减弱。
在比浊法中，透光度和悬浮物质浓度的关系类似于朗伯－比尔定律（见紫外-可见分光光度法）的数学式：数学式式中s为浊光度（或浊率）,表示由于悬浮物的散射作用而引起的光强度衰减;I0和I分别为入射光强度（通过纯溶剂）和透射光强度(通过混浊样品)；b为光程长度；c为悬浮质点的浓度；K为常数，有时又叫浊度系数,其值与粒子的大小、形状、入射光的波长、悬浮物和介质的折射率有关。
第六章-免疫比浊分析
小结
经典的免疫沉淀反应通常是在抗原抗体 反应的终点进行结果判断，存在操作繁琐、费 时、敏感度低及难以自动化等缺陷。自动化免 疫比浊分析仪器的问世解决了以上的诸多问题。
目前，透射免疫比浊法和散射免疫比浊等方 法已常规运用于临床特定体液蛋白质的检测，相 关仪器已广泛应用于国内各级医院，成为临床免 疫检测的重要手段之一。
二、免疫散射比浊法
(一) 原理
粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光 线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散 射光。
悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的大 小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因素 密切相关。
不同大小的微粒形成的散射光分布不同。
当微粒直径小于入射光的波长的十分之一时， 散射光的强度在各个方向的分布均匀一致 ，称Rayleighae散射。
当微粒直径大于或等于入射光的波长时，前
向散射光远远强于后向散射光，称Mile散射。
整理版ppt
14
其中光线偏转的角度与发射光的波长和抗 原抗体复合物的大小和多少密切相关。
当固定检测角度与发射光的波长时，散射 光的强度与复合物的含量成正比，即待测的抗 原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。
(二) 技术要求 应选择适当的光源强度、反应时间、测量角
一种改良。以发光二极管作为光源，检测前 向角13～24度的散射光，然后利用硅化光电 二极管接收散射光信号，经过微电脑处理， 与标准曲线进行比较，最后转换成待检物质 的浓度。
2.仪器基本组成
系统由分析仪、计算机、条码读取器、打 印机四部分组成，其中分析仪是主要组成部分， 包括散射测浊仪、自动加样系统、运输装置和 比色杯装置。
5. 离子强度 PBS是较好的反应液 。
返回章目录
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
溶液中形成的复合物分子应足够大(35-100nm)
溶液中形成的复合物分子要足够多
控制抗原抗体反应的温度和时间 加促凝剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间
应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量
将标准品稀释至少5个浓度测定，以吸光度值(A) 为纵坐标，浓度为横坐标，在半对数纸上绘出标
概括：免疫比浊测定原理，以及影响免疫 比浊的因素。
原理：免疫当可溶性抗原与相应抗体特异结合，二者比例
合适时，在特殊的缓冲液中它们快速形成一定大小的抗原 抗体复合物，使反应液体出现浊度。利用现代光学测量仪 器对浊度进行测定从而检测抗原含量。
影响因素：抗原抗体的比例，反应体系中保持抗体过量； 抗体的质量，要选择特异性强、效价高、亲和
临床免疫学检验
吉林医药学院检验学院
免疫检验自动化分析仪
免疫比浊分析的临床应用பைடு நூலகம்
血浆、体液中特种蛋白
如免疫球蛋白IgG、IgA、IgM
检 范 围 测
、；补体C3、C4； 血浆蛋白AAT、TRF、A1M、 CER、HPT、PAB、ALB； 炎性反应蛋白 SAA、CRP； 载脂蛋白 APO、ABI； 尿蛋白系列 小分子治疗药物
即当抗体量恒定时，形成的抗原抗体复合物的反应与散射 信号响应值的上升呈正比。同时，散射信号随抗原抗体 反应时间增加而曲线上升。 当抗原量与响应值上升到一极限时，再增加抗原量， 使散射响应值迅速下降
散射比浊测定时，一定要保证抗体过量。
二、定时散射比浊分析
（一）基本原理
1.是将沉淀反应与散射比浊分析相结合，“在抗原抗体反 应几秒钟后开始测定峰值信号”。 2.目的是排除抗原抗体反应的不稳定性，降低检测误差。 3.采用抗体过量，以获得颗粒产生的最强的散射光信号。
检 测时 分间 两 个
在预反应时段， 加小量样本与 抗体反应， 测定第一次散 射光信号值
加全量样本， 约反应 2分 钟后，第二 次测定散射 光信号
信号峰值
计算机处理 转换为样 品浓度
（二）抗原过量检测
采用两项保证措施：
抗体过量
在检测中抗体结合抗原的能力可达到相当于正常 血清的50倍以上，以保证高浓度样本中的抗原与 抗体的结合。
Mile散射
颗粒直径接近入射光的波长， 其散射光的分布呈明显不均匀
Rayleigh原理：即散射光的强度与复合物的量
呈正比，与散射光的夹角呈正比，与波长呈反
比。 在散射比浊中，增加抗原-抗体复合物的体 积，减小入射光的波长，扩大散射光夹角等因 素，均可增加检测的敏感度。
（二）反应物含量与散射浊度
Heidelberger曲线
水平轴照射在粒子颗粒上时，光线被颗粒吸收或 折射，发生偏转.散射光的强 度与复合物的含量成正 比，即待测抗原越多，
影响散射信号的因素(了解) 如入射光的波长、偏振、
形成的复合物越多，散
射光就越强。
微粒大小、浓度、质量、
以及检测点的距离。
（一）散射颗粒与散射光
Rayleigh散射
颗粒直径比入射光波长小的多， 散射光的分布比较均匀。
散射比浊法: 在光源的光路方向（50-960） 角的方向上测量透射光强度 和被检测溶液中微粒浓度关 系的方法。
透射比浊法: 在光源的光路方向（00） 测量透射光强度和被检测 溶液微粒浓度关系的方法。
一、散射免疫比浊分析原理
散射比浊法：在液相中可溶性抗原、抗体特异性
结合，形成一定大小的复合物粒子，当入射光沿
准曲线，
力强的多抗； 抗原抗体反应的溶液，合适的PH（6.5～8.5） 和离子强度； 使用增浊剂可增强检测信号。
自动化免疫比浊
免疫比浊分析技术发展 两 个 阶 段
测定抗原抗体形成后的阶段 散射(终点)比浊
测定抗原抗体结合的峰值 速率散射比浊
免 疫 比 浊 法 分 类
当一束光 线通过溶 液受到光 散射和光 吸收两个 因素的影 响而使光 的强度减 弱
四、免疫透射比浊分析 （一）基本原理 当光源的光路（角度与正前方夹角为00时），通 过一定体积的溶液，由于溶液中抗原抗体结合复 合物粒子对入射光因反射、吸收或散射而衰减。 透射光的强度和形成的复合物的量呈反比。
平光线 射光 散
检测器 检测器
θ
透射光 光源 透镜 滤光片
散射比浊、透射比浊光路图
实验要求（了解）
对抗原过量进行阈值限定
先测定预反应时段抗原-抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。
三、速率散射比浊分析
三、速率散射比浊分析 （一）基本原理
— 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。 — 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。 — 当仪器测定到某一时 间内形成速率下降时， 即出现速率峰，该峰 值的高低，即代表所 测抗原的量。