姜黄素衍生物在体外的抗肿瘤实验

华西药学杂志
W C J #P S 2006,21(6):552~553
基金项目:四川省重点科技项目(批准号:01SG008-01)作者简介:符
(1982-),女,海南文昌,正攻读药剂学专业的硕士学位。

*
通讯作者(Corres ponden t author),E -m ai:l zrzz@l vi p.si n a .co m
姜黄素衍生物在体外的抗肿瘤实验
符
1
,龚 涛1,刘振谧2,张志荣
1*
(1.四川大学华西药学院,四川成都610041;2.四川大学公共卫生学院,四川成都610041)
摘要:目的 研究姜黄素衍生物对不同肿瘤细胞株生长的影响。

方法 利用体外细胞培养模型,应用M TT 法分析姜黄素衍生物对不同肿瘤细胞生长的影响。

结果 姜黄素衍生物对不同肿瘤细胞生长有一定的抑制作用,且具有剂量依赖性,但较姜黄素的抑制效应弱。

结论 姜黄素衍生物对不同肿瘤细胞生长具有抑制作用。

关键词:姜黄素衍生物;抗肿瘤;细胞培养中图分类号:R 965
文献标识码:A
文章编号:1006-0103(2006)06-0552-02
The anti -tu mor effect of curcu m in derivatives in vitro
FU Yao 1
,GONG Tao 1
,LI U Zhen-m i 2
,Z HANG Zh i-rong
1*
(1.W est China S c hool of P har m acy,S ichuan Universit y,Chengdu 610041,Ch i na ;2.W est Chi na S choo l of PublicH ealt h,S ichuan U-
n i ver sit y,Chengdu 610041,China )
Abstrac t :OB J ECTIVE T o investi gate t he anti-tu m or effic i ency of curcu m i n derivati ves on d ifferent tu mo r ce ll li nes .M ETHODS Based on ce ll cu lture mode l in v itro ,M TT test w as used t o study t he i nhibitory e ffect of curcu m in de ri va ti ves on tu m or ce ll li nes .RE S ULTS T he new ly synthesized curcum in der i vatives sho w ed inh i bitory e ffect to H ep G 2,S MM C-7721,CT 26and H e la cell li nes w it h var i ed G I 50(50%gro w th inhibiti on)va l ues .C ONCLUSI ON Curcu m i n derivati ves can i nh i bit t he ce ll grow th of certa i n ce ll li nes .K ey word s :Curcu m i n de ri va ti ve ;A ntitu m or effic i ency ;Ce ll culture CLC nu m ber :R 965
D ocu m ent code :A
Art i c le I D :1006-0103(2006)06-0552-02
姜黄素是传统中药姜黄Curcum a Longa L .的主要活性成分,其化学结构式见图1。

国内外的研究表明姜黄素具有抗氧化、抗炎特性;可影响肿瘤发
生、发展的各个阶段,抗癌活性强。

但姜黄素水溶性差,在体外容易被氧化,口服给药的姜黄素吸收率很低,大部分在胃肠道内被代谢[1,2]。

为此,我们合成了系列姜黄素衍生化合物(有关化合物的合成另文发表),并考察其体外抗肿瘤活性,以提高其水溶性并为进一步研究其抗癌作用提供基础。

因此,我们采用MTT 法对姜黄素衍生物进行了体外抑瘤活性的初步评价。

图1 姜黄素的化学结构式
F i g 1 Che m ical Structure of C urcu m i n
1 实验部分
1.1 药品、细胞株与仪器
姜黄素衍生物A 、B 、C 、D (本实验室合成)用少许D M SO (美国S i g m a 公司)溶解,制成贮备液,再用
培养基稀释至所需浓度,其中DM SO 浓度应低于1%
[3]
;同法配制姜黄素供试液(成都);阿霉素(深
圳万乐药业有限公司);3-2(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT,美国Sig m a 公司)。

H epG2、S MMC -7721、CT26、H ela 细胞株(中国科学研究院上海生物所)用含体积分数为10%的小牛血清的RP M I-1640或D M E M 培养液在37e 、体积分数为5%的C O 2条件下培养。

培养基RP M I-1640(美国G ibco 公司);新生小牛血清(兰州民海生物工程有限公司);其余试剂为国产分析纯。

二氧化碳培养箱(日本日立公司);无菌超净工作台、酶联免疫检测仪、B io -rad M ode l 550酶标仪(美国)。

1.2 方法
取对数生长期的细胞,将1@104
~5@104
#m l -1
的细胞悬液,以每孔100L l 的密度接种于96孔板内。

待细胞贴壁后,于37e 、5%CO 2孵箱中分别培养24h ,再向各孔中加入供试液。

所考察的供试液浓度为200100、100.00、50.00、25.00、12.50、6.25g #m l -1。

同时考察相同浓度未经修饰的姜黄素供试
液,以不加药的培养基作为阴性对照液。

培养24h,吸出供试液,PBS 洗涤两遍。

加入20L l 5m g #m l
-1
的MTT 液,继续培养4h ,然后吸出上清液,加入100L lDM SO,振荡10m in ,使蓝紫色结晶充分溶解。

用酶联免疫检测仪于570nm 处测定吸光度(C ),采用
RGR =T -C 0C -C 0@100%和G I 50-T 0
C -T 0
@100=50公式计
算相对增殖率和50%抑制率(T 为供试液组各时间段吸光度;T 0为零时间点吸光度;C 为对照组吸光度,不加药组各时间点吸光度;C 0为空白组吸光度,不加细胞和药物,仅有培养基)[3]。

1.3 结果
不同细胞株在不同姜黄素衍生物(200.00,100100,50.00,25.00,12.50,6.25g #m l -1
)作用下的增殖率见表1。

对于不同细胞株,各个衍生物的抑制作用随浓度增高而增强。

姜黄素衍生物A 、B 、C 、D 对H epG2、SMMC -7721、CT26、H ela 4种肿瘤细胞系均有一定抑制作用,但作用强度不及姜黄素本身(图2)。

计算所得的姜黄素衍生物GI 50值也均较姜黄素要低(表2)。

表1 不同细胞株在姜黄素衍生物A 、B 、C 、D 作用下的相对增殖率
(x ?s ,n =3)
Tabl e 1 The relati ve grow t h rate t he different cells on curcu m in
derivati ves A,B ,C,D (x ?s ,n =3)
Cell li nes
Re l ati v e gro w t h ra t e /%
curcu m i n A
B
C
D
H e pG20.5?0.2
3.0?0.211.1?1.10.6?0.2*9.1?0.50.9?0.13.2?0.315.5?1.22.1?0.312.6?1.31.5?1.510.8?0.818.2?1.52.8?0.52
4.6?1.519.0?1.526.5?1.550.1?3.614.1?1.428.6?2.129.9?2.163.7?2.271.6?2.533.9?2.551.0?4.440.1?2.7
92.0?3.483.8?2.854.9?2.284.7?2.6S MMC77210.05?0.01
1.2?0.21
2.6?1.55.5?1.225.5?1.70.5?0.52
3.6?2.125.2?3.11
4.9?1.534.9?2.514.6?1.733.5?2.54
5.4?2.845.0?2.278.8?2.622.4?2.564.9?3.778.4?3.553.2?2.585.9?3.829.0?3.589.7?2.895.0?4.268.4?3.492.2?64.135.9?3.1
98.8?3.594.2?3.673.7?4.094.5?3.4
CT260.1?0.1
0.2?0.2**0.1?0.1*4.7?0.30.3?0.2
*0.6?0.26.6?1.52.4?1.812.6?2.14.7?1.99.4?3.126.6?2.69.9?1.525.7?2.29.5?2.512.1?2.585.4?3.231.7?2.233.3?3.012.3?2.915.8?2.490.0?2.833.4?2.775.0?3.455.8?3.326.0?1.7
102.6?3.348.0?3.599.6?3.265.5?5.0H el a 0.5?0.5
0.3?0.20.3?0.20.5?0.1*0.9?0.10.9?0.43.0?0.50.4?0.211.6?0.18.3?0.11.3?0.742.0?4.511.1?0.119.0?0.115.9?0.111.1?2.865.1?4.323.4?0.332.5?0.224.8?0.919.0?3.581.0?2.958.0?2.254.2?6.150.9?5.046.0?4.694.2?4.8
66.9?3.0
77.9?9.8
66.8?5.9
Co m pared w it h curc um i n :*P >0.
05
图2 姜黄素衍生物A 、B 、C 、D 和姜黄素的浓度与H ep G 2(A )、S MM C-7721(B)、CT26(C )、H ela(D)细胞的相对增殖率关系(24h ,n =3)F i g 2 I nhi bitory effects of curcu m i n deri va tives and curcum i n on H ep G 2(A ),S MM C-7721(B),CT26(C)and H el a (D )cells(24h ,n =3)表2 姜黄素与姜黄素衍生物作用于不同细胞株的G I 50值Table 2 G I 50of curcum i n and its deri va tives C ell li n es GI 50/L g #m l -1
A B C D cu rcum i n H epG218.1423.887.3217.586.09S MM C -772137.7753.0822.8388.338.36CT2637.459.4332.4310.994.99H el a
70.78
8.15
13.89
12.22
5.08
2 讨论
实验利用MTT 法对新合成的姜黄素衍生物A 、
B 、
C 、
D 和姜黄素进行体外细胞毒性考察。

实验结果表明,姜黄素衍生物A 、B 、C 、D 对肝癌细胞株H epG2、S MM C-7721、结肠癌细胞株CT26及宫颈癌细胞株H e la 等均表现出一定抑制作用,其抑制效应具有浓度依赖的特征。

但衍生物的抑制效应较姜黄
素低。

由于化合物的改造是在姜黄素的两个酚羟基
上进行,封闭了姜黄素可能的活性基团而导致其抑制效应的降低。

因此,我们还需进行更深入研究,以阐明其抗肿瘤的效应及机理。

还应该进一步研究其构效关系、抗氧化活性与抗肿瘤效应之间的关系,并对抗肿瘤效应进行分子水平的研究。

参考文献:
[1]
Toshihiko K a w a m or,i Ronal d Lubet ,Vernon E,et al .Che m op re -venti ve eff ect of curcum i n ,a naturally occu rri ng anti-In fl a mm a -t ory agent ,
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cancer[J].Cancer Res ,1999,59:597-601.
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Ires on CR ,Jon es D J L ,Orr S a mantha .M etabolis m of the cancer ch e mopreven ti ve agen t cu rcum i n in hum an and rat intes ti ne[J].C ancer Ep i de m i ol B i o m arkers Prev ,2002,11(1):105-111.
收稿日期:2006-09
553第6期符 ,等。

姜黄素衍生物在体外的抗肿瘤实验。