微藻细胞破碎方法的研究_王雪青

微藻细胞破碎方法的研究

微藻细胞破碎方法的研究
王雪青，苗惠，翟燕
（天津市食品与生物技术重点实验室，天津商学院生物技术与食品科学学院，天津３０３０１４）摘要：采用反复冻融和超声波破碎法破碎１７种微藻细胞，细胞破碎率和抗茵活性检测破碎效果，通过以选择适合不
ｒｅｉｇａｄｔｗｇｍｅｈｄｄｔｃｃｅｔｅｒｇｎａｉｆｉｎｙｏ－ｐｃｅａｉｃｅｄｏｅ％，ｒｓｉｓＷａｆｅｚｎｎａｎｔｏｕｙｌｃ，ａｍｅｔｔｎｅｃｅｃｆｔｎｓｅｉｓａｇｎｒａｅｖｒ５ｆｕｐｃｅｓｈｉｙｗｉｆｏｉｅｌｓ９ｏｅ
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第２卷２
第１期
２００７年３月
天津科技大学学报
ＪｕｎｌｆｉｒｉｉｅｓｙｏｃｅｃｏｒａａｄｎＵｎｖｒｉｆｉｅ＆ＴｅｈｏｏｙｏＴｔＳｎｃｎｌｇ
Ｖｂ．２Ｎｏ１１２．Ｍａ．２０ｒ０７
ａｄＦｏｃｎｅｉｊｎｖｒｉｏｍｅｃ，Ｔａｊ０１４ｈｎ）ｎｏｄＳｉｃ，ＴａｉＵｉｓｙｏＣｍｒｅｉｉ３０３，Ｃｉｅｎｎｅｔｆｎｎａ
ＡｂｔａｔＦｒｅｃｅｔｒｃｖｒｃｉｅｓｂｔｎｅｆｍｌａｓｖｎｅｎｓｅｉｓｏｇｒｒｓｅｙｕｔｓｎｃｔｎａｄｓｒｃ：ｏｆｉｎｅｏｅｙａｔｕｓｃｒｉｖａｏａｇ，ｅｅｔｅｐｃｅｆａａｗｅｅｃｕｈｄｂｌａｏｉａｉｎｌｒｏｆｅｚｎｎｈｗｉｇａｄｔｅｒｃｓｉｇｅｅｔｓｄｔｒｎｄｂｈｒｓｉｇｅｃｅｃｎｎｉｃｏｉｃｉｉ，ｈｓｒｅｉｇａｄｔａｎ，ｎｉｒｈｎｆｃｓｗａｅｅｍｉｅｙｔｅｃｈｎｆｉｎｙａｄａｔｈｕｕｉｍｉｒｂａａｔｔｔｃｏｅｌｖｙｏ

一种快速检测藻细胞破裂程度的方法[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810074733.8(22)申请日 2018.01.25(71)申请人河海大学地址 210000 江苏省南京市鼓楼区西康路1号(72)发明人谭啸　段志鹏　戴凯文　刘倩倩　舒筱倩　顾惠卉　(74)专利代理机构北京高沃律师事务所 11569代理人刘奇(51)Int.Cl.G01N 21/31(2006.01)(54)发明名称一种快速检测藻细胞破裂程度的方法(57)摘要本发明提供了一种快速检测微藻细胞破裂程度的方法，包括以下步骤：1)制备破碎处理的藻悬液待测样品；2)离心所述破碎藻悬液待测样品，获得上清液；测定所述步骤2)获得的上清液在425～450nm波长处的吸光度A x 或在670～690nm波长处的吸光值A x ’，根据预定的两处波长吸光度值对应的标准曲线计算得到待测样品的微藻细胞破裂程度CD x ；所述标准曲线的获得方法为：测定破碎藻悬液在所述波长处的吸光度值、采用计数法计算得到所述藻悬液细胞的破裂程度，根据所述破碎藻悬液的吸光度值和细胞破裂程度，线性拟合得到标准曲线。

本发明所述的方法简单、快速，并且测定结果稳定可靠。

权利要求书1页说明书6页附图1页CN 108287139 A 2018.07.17C N 108287139A1.一种快速检测微藻细胞破裂程度的方法，包括以下步骤：1)制备破碎处理的藻悬液待测样品；2)离心所述破碎处理的藻悬液待测样品，获得上清液；3)测定所述步骤2)获得的上清液在425～450nm波长处的吸光度A x 或在670～690nm波长处的吸光值A x ’，根据预定的两处波长吸光度值对应的标准曲线计算得到待测样品的微藻细胞破裂程度CD x ；所述标准曲线的获得方法为：测定破碎藻悬液标样在所述波长处的吸光度值、采用计数法计算得到所述破碎藻悬液标样的细胞破裂程度，根据所述破碎悬浮标样的吸光度值和细胞破裂程度，线性拟合得到标准曲线。

三种微藻细胞破碎方法的比较

[7]梅景良,马燕梅,张红星.夏、冬两季黑鲷消化酶活力的比较[J ].中国海洋大学学报,2005,35(6):1001-1004.[8]黎军胜,李建林,吴婷婷.样品处理对罗非鱼和银鲫肠道消化酶活性测定的影响[J ].水产学报,2004,28(6):738-740.[9]M C H idalg o ,E Urea ,A Sanz.C om parative study of digestive enzymes in fish with different nutritional habits.Proteolytic and amylase activities [J ].Aqu aculture ,1999,170:267-283.[10]白东清,乔秀亭,乔之怡.pH 对丁　仔鱼和稚鱼肠及肝胰脏蛋白酶活性的影响[J ].水利渔业,2006,26(1):3-4.[11]王晓梅,戴伟,许童.丁　肠道及肝胰脏组织学研究[J ].水产科学,2005,24(3):13-15.[12]M Fur é,M C H idalg o ,A l ópez ,M G arcia -G alleg o.Digestive enzyme ac 2tivities in Activities sturgeon Acipenser naccaii and rainbow trout Oncorhynchus myliss .A com parative study[J ].Aqu aculture ,2005,250:391-398.[13]Fevzi ,Y ilmaze.Reproductive biology of the tench T inca T inca (L.,1758)inhabiting P orsuk Dam Lake (K utahya ,Turkey )[J ].Fisheries R esearch ,2002,(55):313-317.[14]关胜军,吴锐全,谢骏.大口黑鲈主要消化器官淀粉酶活力的研究[J ].浙江海洋学院学报,2006,25(4):381-383.[15]倪寿文,桂远明,刘焕亮.草鱼、鲤、鲢、鳙和尼罗罗非鱼肝胰脏和肠道蛋白酶活性的初步探讨[J ].动物学报,1993,39(2):160-168.[16]Dhage K P.S tudies of the digestive enzymes in the there species of major Carps of India[J ].Biol .Sci .,1968,11:63-74.[17]周景祥,陈勇,黄权.鱼类消化酶的活性及环境条件的影响[J ].北华大学学报,2001,2(1):70-73.[18]田宏杰,庄平,章龙珍.水温对施氏鲟幼鱼消化酶活力的影响[J ].中国水产科学,2007,14(1):128-131.[19]梅景良,马燕梅.温度pH 对黑鲷消化酶主要消化酶活力的比较[J ].集美大学学报,2004,9(3):226-229.[20]黄耀桐,刘永坚.草鱼肠道、肝胰脏蛋白酶活性初步研究[J ].水生生物学报,1988,12(4):328-333.[21]吴众望,潘鲁青,董双林.9种金属离子对缢蛏消化酶活力的影响[J ].中国水产科学,2003,10(4):297-300.[22]Hai -ying W ang ,Y ue -Jun W ang ,Qing -Y in W ang.Purification and characterization of stomach protease from the turbot (Scophthalmus maximus .L )[J ].Physiol Biochem ,2006,6(10):263-274.[23]杨蕙萍,童圣英,王子臣.皱纹盘鲍淀粉酶和褐藻酸酶的研究[J ].水产学报,1998,22(4):345-351.三种微藻细胞破碎方法的比较陈伟平,陈必链3,张艳燕(福建师范大学生命科学学院,福建福州350108)摘要:目的:获得最佳的微藻藻胆蛋白提取方法。

一种藻类细胞的破碎方法[发明专利]

(10)申请公布号 (43)申请公布日 2014.02.05C N 103555709A (21)申请号 201310525033.3(22)申请日 2013.10.22C12N 13/00(2006.01)C12N 1/06(2006.01)C12R 1/89(2006.01)(71)申请人哈尔滨师范大学地址150025 黑龙江省哈尔滨市呼兰区师大南路1号(72)发明人赵丽孙文军彭一良(54)发明名称一种藻类细胞的破碎方法(57)摘要本发明涉及一种藻类细胞的破碎方法，其是将藻类置于针板电晕放电器中，然后进行高压脉冲放电处理。

上述提供的方法具有处理效率高、无选择性，不产生二次污染等特点，而且针对性强，处理时间短，可应用于工业大规模生产、且绿色、环保、节能。

(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书3页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页说明书3页(10)申请公布号CN 103555709 A1/1页1.一种藻类细胞的破碎方法，其是将藻类置于针板电晕放电器中，然后进行高压脉冲放电处理。

2.如权利要求1所述的藻类细胞的破碎方法，其特征在于：高压脉冲放电处理采用针板电晕放电法进行。

3.如权利要求2所述的藻类细胞的破碎方法，其特征在于：针板电晕放电法施加的电压为8～12kV 、频率为50Hz 。

4.如权利要求2所述的藻类细胞的破碎方法，其特征在于：针板电晕放电法的处理时间为1～10min 。

权利要求书CN 103555709 A一种藻类细胞的破碎方法技术领域[0001] 本发明涉及藻胆蛋白提取领域，具体设计一种藻类细胞的破碎方法。

背景技术[0002] 藻胆蛋白是藻类特有的捕光色素蛋白，主要包括藻蓝蛋白、藻红蛋白和别藻蓝蛋白3类。

藻类适应性强，养殖成本低，适宜规模化生产，被联合国粮农组织推荐为人类明天最理想的食品。

藻胆蛋白用途极为广泛，可作为天然色素应用于食品、化妆品、染料等工业，又可制成荧光试剂，用于临床医学诊断和免疫化学等研究领域中，同时藻胆蛋白具有抗氧化、提高机体免疫力和抗肿瘤等重要生理功能，是保健品及药品等的重要资源。

三种微藻细胞破碎方法的比较

[7]梅景良,马燕梅,张红星.夏、冬两季黑鲷消化酶活力的比较[J ].中国海洋大学学报,2005,35(6):1001-1004.[8]黎军胜,李建林,吴婷婷.样品处理对罗非鱼和银鲫肠道消化酶活性测定的影响[J ].水产学报,2004,28(6):738-740.[9]M C Hidalg o ,E Urea ,A Sanz.C om parative study of digestive enzymes in fish with different nutritional habits.Proteolytic and amylase activities [J ].Aqu aculture ,1999,170:267-283.[10]白东清,乔秀亭,乔之怡.pH 对丁　仔鱼和稚鱼肠及肝胰脏蛋白酶活性的影响[J ].水利渔业,2006,26(1):3-4.[11]王晓梅,戴伟,许童.丁　肠道及肝胰脏组织学研究[J ].水产科学,2005,24(3):13-15.[12]M Fur é,M C Hidalg o ,A l ópez ,M G arcia -G alleg o.Digestive enzyme ac 2tivities in Activities sturgeon Acipenser naccaii and rainbow trout Oncorhynchus myliss .A com parative study[J ].Aqu aculture ,2005,250:391-398.[13]Fevzi ,Y ilmaze.Reproductive biology of the tench T inca T inca (L.,1758)inhabiting P orsuk Dam Lake (K utahya ,Turkey )[J ].Fisheries R esearch ,2002,(55):313-317.[14]关胜军,吴锐全,谢骏.大口黑鲈主要消化器官淀粉酶活力的研究[J ].浙江海洋学院学报,2006,25(4):381-383.[15]倪寿文,桂远明,刘焕亮.草鱼、鲤、鲢、鳙和尼罗罗非鱼肝胰脏和肠道蛋白酶活性的初步探讨[J ].动物学报,1993,39(2):160-168.[16]Dhage K P.S tudies of the digestive enzymes in the there species of major Carps of India[J ].Biol .Sci .,1968,11:63-74.[17]周景祥,陈勇,黄权.鱼类消化酶的活性及环境条件的影响[J ].北华大学学报,2001,2(1):70-73.[18]田宏杰,庄平,章龙珍.水温对施氏鲟幼鱼消化酶活力的影响[J ].中国水产科学,2007,14(1):128-131.[19]梅景良,马燕梅.温度pH 对黑鲷消化酶主要消化酶活力的比较[J ].集美大学学报,2004,9(3):226-229.[20]黄耀桐,刘永坚.草鱼肠道、肝胰脏蛋白酶活性初步研究[J ].水生生物学报,1988,12(4):328-333.[21]吴众望,潘鲁青,董双林.9种金属离子对缢蛏消化酶活力的影响[J ].中国水产科学,2003,10(4):297-300.[22]Hai -ying W ang ,Y ue -Jun W ang ,Qing -Y in W ang.Purification and characterization of stomach protease from the turbot (Scophthalmus maximus .L )[J ].Physiol Biochem ,2006,6(10):263-274.[23]杨蕙萍,童圣英,王子臣.皱纹盘鲍淀粉酶和褐藻酸酶的研究[J ].水产学报,1998,22(4):345-351.三种微藻细胞破碎方法的比较陈伟平,陈必链3,张艳燕(福建师范大学生命科学学院,福建福州350108)摘要:目的:获得最佳的微藻藻胆蛋白提取方法。

《天津科技大学学报》2007年总目次

不同光质对紫球藻生长及藻胆素含量的影响………………………………………刘洪艳，潘伶俐，施定基（６２）
超声波辐射对酶法制备生物柴油的影响 ……… …… …… ……… ……… …… ……… …… …胡爱军，郑捷（９）２
培养条件对甲醇毕赤酵母异源表达木质素过氧化物酶的影响………………………………王海宽，路福平（３３）
Ｄｅ．２０ｃ０７
《天津科技大学学报》２００７年总目次
第１期
高取代度阳离子淀粉合成反应动力学研究 ……… …… …… ……… ……… ……刘泽华，双金玲，陈夫山，（）等１
氢氧化镁浆料中和酸洗废液的研究………………………………………………衣守志，钟素红，唐鹏，（）等５
带Ｍｒｏ跳跃参数的奇异随机微分方程指数稳定性 …………………………………………………王海萍（７ａｖｋ６）
关于积分中值定理 “ 中值点 ”位置的估计 …… ……… …… ……… ……… …… …… ………… …… …吴天毅（０）７
【应用技术】
模式识别技术在扬声器故障诊断中的应用 ……… …… ……… …… ……… …卢学军，储标，许增朴，等（２）７
第２期
纳米银颗粒增强聚合酶链式反应长片段ＤＮＡ反复扩增的特异性 …… …… …王群，李静，曹小红，（）等１
苦瓜子蛋白的体外抗氧化活性研究 …………………………………………………张泽生，张兰平，郭红莲（）６ｓ聚赖氨酸测定方法的改进 ……………………………………………………曹伟锋，．谭之磊，袁国栋，等（）９山药胡萝卜复合饮料的研制 …………………………………………………………王丽霞，舒不同品种淀粉接枝共聚物的性能……………………………………………… 王怀硕，商媛，刘安军（２１）平，宋诗莹，（６等１）

微拟球藻油脂提取动力学研究

收稿日期：２０１７—０６—２９；修回日期：２０１７—１２—２５基金项目：微藻燃油关键技术研发与中试（兀Ｙ一２０１４一Ｏ１）作者简介：陈国忠（１９８０），男，讲师，博士，研究方向为海洋微生物资源开发与利用（Ｅ－ｍａｉｌ）ｇｕｏｚｈｏｎｇｃｈ＠１２６．ｃｏｍ。通信作者：邹宁，教授，博士（Ｅ—ｍａｉｌ）ｎｉｎｇｚｏｕ７６＠１２６．ｃｏｍ。
ｏｃｕｌａｔａｗａｓ２４．６８％，１．４４ｔｉｍｅｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（ｓｔａｔｉｃｔｒｅａｔｍｅｎｔ），ａｎｄｔｈｅｅｆｅｃｔｉｖｅｄｉｆ－
ｆｕｓｉｏｎｒａｔｅＤｅｆｆｒｅａｃｈｅｄ１．１５８６ ×１０一ｍ。／ｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓｏｃｕｌａｔａ；ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ；ｏｉｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｋｉｎｅｔｉｃｅｑｕａｔｉｏｎ
ＫｉｎｅｔｉｃｓｏｆｏｉｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｒｏｍＮａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓｏｃｕｌａｔａＣＨＥＮＧｕｏｚｈｏｎｇ，ＣＨＥＮＣｈｅｎ，ＬＵＲｕｉ，ＹＡＮＸｕｅｃｈｕｎ，
ＳＵＮＤｏｎｇｈｏｎｇ，ＺＯＵＮｉｎｇ（ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＬｕｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｔａｉ２６４０２５，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）
微拟球藻（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓｓｐ．）广泛分布于世界各个海域，具有重要的生态学和经济学价值，已被作为优良饵料大量应用于水产养殖，也是目前公认的最有希望用于工业化的高产油海水藻ＨＪ。微拟球藻生物量高、生长速率快，油脂富含ＥＰＡ（二十碳五烯酸），可达总脂肪酸含量的４０％，且几乎不含

不同方法对微藻细胞破碎及油脂提取效果的影响

不同方法对微藻细胞破碎及油脂提取效果的影响章莹颖;邓春芳;崔岩;成家杨【摘要】将溶藻菌(Kordia sp.)运用于富油微藻的细胞破碎预处理(生物法),并与传统的高速匀浆法、反复冻融法、超声法、酸热法进行对比.结果表明:对于小球藻,细胞破碎率由高到低依次为酸热法(84％)＞超声法(63％)＞反复冻融法(60％)＞高速匀浆法(57％)＞生物法(51％);油脂提取率由高到低依次为超声法、生物法(35％)＞酸热法(27％)＞反复冻融法(23％)＞高速匀浆法(21％).对于杜氏盐藻,酸热法及超声法的细胞破碎率达到100％,其次为生物法达到94％,反复冻融法和高速匀浆法的细胞破碎率相对较低,分别为84％和45％;油脂提取率由高到低依次为超声法(26％)＞生物法(22％)＞高速匀浆法(17％)＞酸热法(16％)＞反复冻融法(10％).综合以上结果可知:超声法和生物法相比于其他方法更适合用于对小球藻和杜氏盐藻的破碎预处理从而提高油脂提取率,而其中生物法具有能耗低的特点,因此在大规模生产中极具潜力.【期刊名称】《中国油脂》【年(卷),期】2016(041)003【总页数】5页(P61-65)【关键词】微藻;细胞破碎;油脂提取;生物法;超声法【作者】章莹颖;邓春芳;崔岩;成家杨【作者单位】北京大学环境与能源学院,广东深圳 518055;北京大学环境与能源学院,广东深圳 518055;北京大学环境与能源学院,广东深圳 518055;北京大学环境与能源学院,广东深圳 518055【正文语种】中文【中图分类】TS225.6;TQ644微藻具有油脂含量高且生长速度快等特点，被认为是最具潜力的第三代生物能源原料[1]。

但由于成本及能耗高等原因，微藻油脂提取工艺至今仍难达到规模化生产[2]。

在微藻生物柴油的生产工艺中，油脂提取被认为是重要的耗能环节，因此降低该环节的能耗对降低整体生产成本有显著影响。

研究表明，对藻细胞进行破碎预处理能够有效提高油脂的提取率[3]。