级本科实验2w凝集反应课件
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《凝集反应双扩》课件
药物研发与检测
凝集反应双扩技术可用于 药物筛选、药效评估以及 药物代谢产物检测，加速 新药研发进程。
在环境监测领域的应用
01
02
03
检测污染物
凝集反应双扩技术可用于 检测水体、土壤、空气中 的有害物质，为环境治理 和保护提供科学依据。
生态毒理学研究
通过凝集反应双扩技术检 测生物体内有害物质的积 累和代谢，有助于生态毒 理学研究。
合物中沉淀物较少。
结果三
在载玻片上进行血型鉴定时，A 型红细胞与抗B血清混合后呈明 显凝块，B型红细胞与抗A血清混 合后呈明显凝块，O型红细胞与 抗A、抗B血清混合后均不出现凝
集。
Part
03
凝集反应双扩影响因素
温度影响
温度对凝集反应双扩的影响主要 体现在酶的活性上。
随着温度的升高，酶的活性逐渐 增强，反应速度加快，但当温度 过高时，酶的结构可能会发生变
Part
02
凝集反应双扩实验操作
实验准备
实验器材
试管、滴管、离心机、显微镜等。
实验试剂
抗A、抗B血清，A型、B型、O型红细胞。
实验材料
载玻片、盖玻片。
实验步骤
步骤一
取A型、B型、O型红细胞 各一滴，分别置于三支试 管中。
步骤五
在载玻片上进行血型鉴定 ，观察红细胞与抗A、抗 B血清的凝集情况。
实验二 凝集、沉淀反应ppt课件
直接凝集反应玻片法--菌种鉴定
原理 玻片凝集试验是一种快速简便的检测方法，即抗
原抗体的反应在玻片上进行，是一种定性的试验。用 已知抗体检测未知抗原。
本试验用已知的伤寒杆菌标准诊断血清鉴定未知 细菌。
材料
伤寒杆菌诊断血清、伤寒杆菌菌液、生理盐水、 载玻片、接种环、蜡笔、酒精灯等。
精品课件
直接凝集反应玻片法--菌种鉴定
直接凝集反应玻片法--菌种鉴定
结果及判断
❖ 盐水侧无凝集颗粒； ❖ 血清侧出现肉眼可见的凝集块为阳性，仍为均匀一致乳浊
液者为阴性。
注意事项
1、接种环在伤寒菌液取菌前后均需严格灭菌，以免出现假阳性。 2、注意涂菌时，先涂生理盐水侧，以免污染血清产生错误结果。 3、摇动玻片时不要把两凹内液体混在一起。
实验二
凝集、沉淀反应
精品课件
实验目的
1.熟悉凝集反应、沉淀反应的概念。 2.了解单向琼脂扩散实验的原理、方法及应用。 3.掌握直接凝集反应玻片法的原理、方法及其
用途。 4.掌握双向琼脂扩散实验的原理、方法、结果
判断。
精品课件
实验原理
1.直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体结合后所呈 现的肉眼可见的凝集现象。 。
精品课件
凝集反应与沉淀反应的比较
精品课件
思考题
❖ 1、凝集反应的原理及直接凝集反应玻片法的 用途是什么？
实验二抗体制备和凝集反应沉淀反应PPT参考课件
实验二 抗体制备和凝集反应 (2) &沉淀反应
1
实验二 抗体制备和凝集反应 (2) &沉淀反应
2
1. 原理:
抗原抗体反应
直接凝集反应
玻片凝集
试管凝集
定性
半定量
3
1) 玻片凝集反应:
? 已知抗原 + 未知抗体
凝集团块 混浊
百度文库
2) 试管凝集反应：
定量抗原
+
系列稀释抗体
不同程度的凝集反应 确定抗体的滴度
Ag1 Ag2
Ag2 Ag1
Ab
15
注意：
✓ 琼脂板一定平整、光滑 (无气泡). ✓ 琼脂不可过厚 ✓ 孔中液体不可过满
16
Test 3 再次免疫
17
2. 方法: 脱纤维绵羊红细胞（SRBC） 加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min 弃上清 加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min 弃上清
12
Ⅰ 单向琼脂扩散实验:
琼脂中含抗体
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
1:80
1:40 1:20
1:10
未知
沉淀环直径平方
抗原浓度
13
Ⅱ 双向琼脂扩散实验:
14
方法：
1. 微波炉中彻底融化1% 琼脂
1
实验二 抗体制备和凝集反应 (2) &沉淀反应
2
1. 原理:
抗原抗体反应
直接凝集反应
玻片凝集
试管凝集
定性
半定量
3
1) 玻片凝集反应:
? 已知抗原 + 未知抗体
凝集团块 混浊
百度文库
2) 试管凝集反应：
定量抗原
+
系列稀释抗体
不同程度的凝集反应 确定抗体的滴度
Ag1 Ag2
Ag2 Ag1
Ab
15
注意：
✓ 琼脂板一定平整、光滑 (无气泡). ✓ 琼脂不可过厚 ✓ 孔中液体不可过满
16
Test 3 再次免疫
17
2. 方法: 脱纤维绵羊红细胞（SRBC） 加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min 弃上清 加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min 弃上清
12
Ⅰ 单向琼脂扩散实验:
琼脂中含抗体
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
1:80
1:40 1:20
1:10
未知
沉淀环直径平方
抗原浓度
13
Ⅱ 双向琼脂扩散实验:
14
方法：
1. 微波炉中彻底融化1% 琼脂
凝集反应(肥达反应、血型鉴定)页PPT文档
弃去0.5ml
ml
1
2
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Fra Baidu bibliotek
4
5
6
7
阴性对照
生理盐水 0.9 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
0.5
受检血清 0.1 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
——
稀释度 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320
诊断菌液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
0.5
血清最终 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 稀释度
金黄色葡萄球菌抗原凝集抗体直接凝集反应?试管凝集试验肥达反应?玻片凝集试验abo血型鉴定?肥达反应widalreaction是用已知的伤寒沙门菌的h抗原鞭毛和o抗原菌体以及甲型副伤寒沙门菌肖氏沙门菌和希氏沙门菌的h抗原的诊断菌液与病人血清做凝集试验和希氏沙门菌的h抗原的诊断菌液与病人血清做凝集试验肥达反应测定受检血清中有无相应的抗体以及抗体的效价用于伤寒副伤寒的辅助诊断或流行病学调查
间接凝集反应
将可溶性抗原吸附于载体颗粒(如乳胶颗粒、红细胞等)的 表面，称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与相应抗体结合，即 可出现凝集现象。
协同凝集实验
金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白(SPA)能与人及多 种哺乳动物IgG类抗体的Fc段结合。IgG的Fc段与SPA结 合后，两个Fab段暴露在葡萄球菌表面，仍保持其抗体活 性和特异性，当其与特异性抗原相遇时，出现凝集现象。 称为协同凝集反应。
免疫学实验课件：实验二直接凝集试验
• 牛、马和骆驼于1：100稀释度，猪、山羊和 犬于1：50稀释度出现“++”以上凝集现象时， 被检血清应判定为阳性反应。牛、马和骆驼于 1：50，猪、养和犬于1：25稀释度出现“++” 以上凝集现象时，应判为可疑反应。
五、结果判定
1.玻板凝集试验的结果……. 2.试管凝集试验的结果…….
凝集反应的类型
两大类
玻片法：定性 直接凝集试验
试管法：定量
间接Baidu Nhomakorabea集试验
乳胶凝集试验 碳素凝集试验 间接血凝试验
三、实验材料
1. 玻板凝集试验
（1）玻片、移液枪、牙签等； （2）布氏杆菌平板凝集抗原、布氏杆菌标准阳性血清和阴性血清 （3）待被检血清
2. 试管凝集试验
（1）试管（1 ㎝×8 ㎝ ）、试管架、恒温箱、各规格移液枪等； （2）布氏杆菌试管凝集抗原及布氏杆菌阳性血清、阴性血清； （3）待被检血清； （4）灭菌0.5%石碳酸生理盐水。
• 未出现凝集者为阴性反应。
生理盐水
2. 试管凝集试验
（1）取试管八支，按下表加入生理盐水； （2）取布氏杆菌血清进行梯度稀释； （3）加入布氏杆菌检测抗原； （4）充分20.35混匀，置37℃ 温箱24小时。
单位(ml )
3. 结果判定：
4. 判定标准：
• 出现“++”以上的凝集现象的最高血清稀释 度为血清的凝集价
五、结果判定
1.玻板凝集试验的结果……. 2.试管凝集试验的结果…….
凝集反应的类型
两大类
玻片法：定性 直接凝集试验
试管法：定量
间接Baidu Nhomakorabea集试验
乳胶凝集试验 碳素凝集试验 间接血凝试验
三、实验材料
1. 玻板凝集试验
（1）玻片、移液枪、牙签等； （2）布氏杆菌平板凝集抗原、布氏杆菌标准阳性血清和阴性血清 （3）待被检血清
2. 试管凝集试验
（1）试管（1 ㎝×8 ㎝ ）、试管架、恒温箱、各规格移液枪等； （2）布氏杆菌试管凝集抗原及布氏杆菌阳性血清、阴性血清； （3）待被检血清； （4）灭菌0.5%石碳酸生理盐水。
• 未出现凝集者为阴性反应。
生理盐水
2. 试管凝集试验
（1）取试管八支，按下表加入生理盐水； （2）取布氏杆菌血清进行梯度稀释； （3）加入布氏杆菌检测抗原； （4）充分20.35混匀，置37℃ 温箱24小时。
单位(ml )
3. 结果判定：
4. 判定标准：
• 出现“++”以上的凝集现象的最高血清稀释 度为血清的凝集价
凝集反应试验
ABO血型结果判断
来自百度文库抗B
+ + -
抗A
+ + -
血型
间接乳凝试验检测类风湿因子
间接凝集反应也称为被动凝集反应，是
将可溶性抗原或抗体吸附于载体颗粒表 面、再与相应的抗体或抗原结合，出现 凝集现象。间接乳凝试验检测类风湿因 子。 常用类风湿因子检测。
【操作方法】
1、轻轻混匀胶乳试剂 2、核对阴、阳性对照 3、在反应板孔中加1滴未稀释血清20ul 4、然后加1滴胶乳试剂在血清中（阴阳性对 照同此法） 5、轻轻摇动其充分混匀2分钟内观察结果。
玻片凝集法-ABO血型鉴定
试验目的
通过标准血清抗体鉴定红细胞上ABO 血型系统抗原，掌握盐水介质法进行 ABO血型系统正定型的基本操作方法和 结果判断。
实验原理
根据IgM类特异性血型抗体与红细胞上
特异性抗原结合能够出现凝集反应的原 理，用已知IgM类特异性标准抗血清与 被检红细胞在盐水介质中反应（室温）， 若出现凝集想象，表明被检红细胞膜上 有与血型抗体相对应的抗原，从而判断 和鉴定被检者的血型。
间接反应的常见类型
– – – – – 间接凝集试验 间接血凝试验 胶乳凝集试验 明胶凝集试验 间接凝集反应的应用
1、（正向）间接凝集试验
2 反向间接凝集试验
3、间接凝集抑制试验
医学免疫学：实验2 凝集反应(ABO血型测定)
ELISA(酶联免疫吸附试验) 凝集反应(ABO血型测定)
凝集反应
原理:
颗粒性抗原与相应抗体发生特异性结合，并 在一定条件下形成肉眼可见的凝集物。
应用：检测未知Ag或Ab
分类：
1.直接凝集反应： 玻片法---ABO血型鉴定、菌种鉴定
试管法---肥达反应
2.间接凝集反应
ABO血型测定
实验目的: 检测待测者ABO血型
加wenku.baidu.com标二抗
+
-
抗原抗体 复合物
游离
洗涤
+
-
加底物
每孔加底物 A and B 各一滴 混匀， 37 ℃ 10 min
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值 酶标板
思考
ELSA实验中，待测标本是否含有乙 肝表面抗体？为什么？
ABO血型鉴定实验中，待测者的血型 属哪一型？为什么？
血型鉴定在临床中有什么应用？
放射物标记技术 酶标技术
免疫荧光技术
酶联免疫吸附试验
酶免疫组化技术
双抗体夹心法
竞争法
双抗原夹心法
间接法
直接法
原理：间接ELISA法(酶联免疫吸附试验)
不显色
洗涤
洗涤
1.包被已知抗原 2.加入待测标本 （未知抗体？） 3.加入酶标二抗 （即抗抗体 ：抗人Ig的抗体） 4.加入底物
凝集反应
原理:
颗粒性抗原与相应抗体发生特异性结合，并 在一定条件下形成肉眼可见的凝集物。
应用：检测未知Ag或Ab
分类：
1.直接凝集反应： 玻片法---ABO血型鉴定、菌种鉴定
试管法---肥达反应
2.间接凝集反应
ABO血型测定
实验目的: 检测待测者ABO血型
加wenku.baidu.com标二抗
+
-
抗原抗体 复合物
游离
洗涤
+
-
加底物
每孔加底物 A and B 各一滴 混匀， 37 ℃ 10 min
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值 酶标板
思考
ELSA实验中，待测标本是否含有乙 肝表面抗体？为什么？
ABO血型鉴定实验中，待测者的血型 属哪一型？为什么？
血型鉴定在临床中有什么应用？
放射物标记技术 酶标技术
免疫荧光技术
酶联免疫吸附试验
酶免疫组化技术
双抗体夹心法
竞争法
双抗原夹心法
间接法
直接法
原理：间接ELISA法(酶联免疫吸附试验)
不显色
洗涤
洗涤
1.包被已知抗原 2.加入待测标本 （未知抗体？） 3.加入酶标二抗 （即抗抗体 ：抗人Ig的抗体） 4.加入底物
血液凝集反应PPT课件
抗原抗体反应
免疫凝集试验
凝集反应 （agglutination）
• 是指颗粒性抗原，例如细菌、红细胞、 螺旋体、细胞性抗原，或可溶性抗原 （或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒 后，与相应的抗体（或抗原）在适量的 电解质存在的条件下，经一定时间后凝 聚成肉眼可见的凝集现象。
凝集反应的特点
• 颗粒性抗原 • 致敏颗粒
常用载体：
RBC
聚苯乙烯胶乳（polystyrene latex）
明胶颗粒
活性炭
皂土（bentonite）
火棉胶
间接凝集反应分类依据
• 根据致敏载体用的是抗原（正向）或抗 体（反向） • 根据载体（RBC，胶乳，明胶）
• 根据凝集反应的方式（间接凝集试验， 间接凝集抑制试验，协同凝集试验）
外斐试验肥达试验间接凝集试验正向间接凝集试验反向间接凝集试验间接凝集抑制试验协同凝集试验间接血凝试验胶乳凝集试验明胶凝集试验直接凝集反应directagglutinationagglutinogenagglutinin肥达试验widaltest伤寒外斐试验weilfelixtest立克次交叉配血试验间接凝集反应indirectagglutination将可溶性抗原或抗体先吸附或偶联与免疫无关大小适当的颗粒性载体的表面使之成为致敏载体颗粒然后与相应抗体或抗原作用在适宜的电解质存在的条件下出现特异性凝集现象称间接凝集反应indirectagglutination或被动凝集反应passiveagglutination
免疫凝集试验
凝集反应 （agglutination）
• 是指颗粒性抗原，例如细菌、红细胞、 螺旋体、细胞性抗原，或可溶性抗原 （或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒 后，与相应的抗体（或抗原）在适量的 电解质存在的条件下，经一定时间后凝 聚成肉眼可见的凝集现象。
凝集反应的特点
• 颗粒性抗原 • 致敏颗粒
常用载体：
RBC
聚苯乙烯胶乳（polystyrene latex）
明胶颗粒
活性炭
皂土（bentonite）
火棉胶
间接凝集反应分类依据
• 根据致敏载体用的是抗原（正向）或抗 体（反向） • 根据载体（RBC，胶乳，明胶）
• 根据凝集反应的方式（间接凝集试验， 间接凝集抑制试验，协同凝集试验）
外斐试验肥达试验间接凝集试验正向间接凝集试验反向间接凝集试验间接凝集抑制试验协同凝集试验间接血凝试验胶乳凝集试验明胶凝集试验直接凝集反应directagglutinationagglutinogenagglutinin肥达试验widaltest伤寒外斐试验weilfelixtest立克次交叉配血试验间接凝集反应indirectagglutination将可溶性抗原或抗体先吸附或偶联与免疫无关大小适当的颗粒性载体的表面使之成为致敏载体颗粒然后与相应抗体或抗原作用在适宜的电解质存在的条件下出现特异性凝集现象称间接凝集反应indirectagglutination或被动凝集反应passiveagglutination
凝集实验PPT课件
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4、注意事项
(1) RBC悬液浓度 2-5%； (2) 牙签搅拌混匀时，不能使抗A和抗B血
清混合； (3)在白色背景上观察效果好。
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(二)类风湿因子检测
间接乳胶凝集试验 Ag: 变性IgG Ab: 抗变性IgG(类风湿因子)
第25页/共27页
方法：
A、取一乳胶凝集实验反应板； B、加待测血清、阳性和NS对照各一滴； C、各加一滴致敏乳胶； D、5分钟后观察结果。
第3页/共27页
第4页/共27页
肉眼可见的 凝集物。
第5页/共27页
第6页/共27页
影响条件 1、电解质：0.85% NaCl等； 2、酸碱度：pH6～9； 3、温度：370C。
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Ag-Ab反应种类： 1、凝集反应； 2、沉淀反应； 3、补体结合反应； 4、中和反应； 5、免疫标记技术。
免疫学试验注意事项
1、必须穿白大衣进实验室； 2、实验中注意实验室秩序，禁止喧哗打闹； 3、爱惜实验器材，如发生损坏应及时报告； 4、节约实验药品； 5、实验结束后，要回收的玻璃器材如载玻片等，放于指定容器内；废品弃于 垃圾袋内，严禁丢弃在水槽中。
6、实验完毕，清理桌面，班长安排清洁，老师检查后，做清洁同学方可离开。
第21页/共27页
2、方法
(1)取血(无名指尖或耳垂)制备2-5%RBC悬液； (2)加血清各1滴； (3)加RBC各1滴； (4)牙签搅和混匀； (5)结果判断(10-15min后)。
4、注意事项
(1) RBC悬液浓度 2-5%； (2) 牙签搅拌混匀时，不能使抗A和抗B血
清混合； (3)在白色背景上观察效果好。
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(二)类风湿因子检测
间接乳胶凝集试验 Ag: 变性IgG Ab: 抗变性IgG(类风湿因子)
第25页/共27页
方法：
A、取一乳胶凝集实验反应板； B、加待测血清、阳性和NS对照各一滴； C、各加一滴致敏乳胶； D、5分钟后观察结果。
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肉眼可见的 凝集物。
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影响条件 1、电解质：0.85% NaCl等； 2、酸碱度：pH6～9； 3、温度：370C。
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Ag-Ab反应种类： 1、凝集反应； 2、沉淀反应； 3、补体结合反应； 4、中和反应； 5、免疫标记技术。
免疫学试验注意事项
1、必须穿白大衣进实验室； 2、实验中注意实验室秩序，禁止喧哗打闹； 3、爱惜实验器材，如发生损坏应及时报告； 4、节约实验药品； 5、实验结束后，要回收的玻璃器材如载玻片等，放于指定容器内；废品弃于 垃圾袋内，严禁丢弃在水槽中。
6、实验完毕，清理桌面，班长安排清洁，老师检查后，做清洁同学方可离开。
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2、方法
(1)取血(无名指尖或耳垂)制备2-5%RBC悬液； (2)加血清各1滴； (3)加RBC各1滴； (4)牙签搅和混匀； (5)结果判断(10-15min后)。
凝集反应（ABO血型的鉴定）
凝集反应（ABO血型的鉴定）
实验一凝集反应（ABO血型的鉴定）
[实验目的]
1．掌握凝集反应的原理，玻片法和试管法凝集实验的实验方法和结果分析。
2．了解凝集反应基本类型及血型鉴定的各种方法包括正、反定型，血型板鉴定法和血型卡鉴定法。
[实验原理]
在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。
[实验器材]
1．器材：光学学显微镜，消毒缸
2．材料：消毒干棉球，一次性采血针，载玻片，玻璃试管，一次性带刻度朔料吸管，医用黄色垃圾袋
3．试剂：75%医用酒精，0.9%NaCl注射液，抗血清试剂抗A、抗B
[内容与方法]
(一)玻片法凝集实验
1.用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。滴1至2滴血液于含有1ml生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。用干棉球止血。2．取洁净载玻片1块，在中间用蜡笔画一条竖线，将抗A、B分型试剂分别加1滴于载玻片两端。
3. 用毛细吸管吸取血球悬液，在白瓷板的两个圆孔内各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。
4.肉眼观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。若肉眼观察不明显，可在显微镜下观察是否存在微小凝集
5.记录凝集情况，判定受检者的血型。
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抗体
抗原
可用已知抗体（或抗原）检测未知抗原（或抗体），鉴定抗原 性物质或免疫血清的浓度、纯度以及比较抗原之间的异同点。
【实验步骤】
1
6
2
1 62
53 4
24h
53 4
⑴ 中央 孔：抗体（AFP诊断血清）。 ⑵ 1、4孔：阳性对照（AFP阳性血清）；
2、3、5、6孔：相应待检抗原。 ⑶ 放入湿盒内，24h后检查结果。
单向免疫扩散
2. 双向免疫扩散
【原理】
• 可溶性抗原与抗体分别加到琼脂板上相应的小孔中，两 者各自向四周扩散，若抗原与抗体相对应，两者相遇即 发生特异性结合，并在比例合适处形成白色沉淀线。
• 可以用已知抗体（或抗原）检测未知抗原（或抗体）， 鉴定抗原性物质或免疫血清的浓度、纯度以及比较抗原 之间的异同点。
髓窦 髓索
淋巴结髓质
3. 脾（spleen）
3. 脾（spleen） 脾脏的基本结构:白髓
3. 脾（spleen） 脾脏的基本结构:红髓
小结
抗原抗体检测：特异性、可见性
1. 凝集反应：颗粒性抗原 直接凝集反应 玻片凝集----定性
2. 沉淀反应：可溶性抗原 定性：双扩、对流免疫电泳（双扩＋电泳） 环状沉淀 定量：单扩
【分类】
玻片凝集 ABO血型鉴定
ABO血型鉴定
人类ABO血型系统
【原理】
人类ABO血型抗原分A、B两种。A型血者红细胞膜上有 A抗原，B型血者红细胞膜上有B抗原，AB型有A、B两种抗 原，O型则不含A、B抗原。
用已知的抗A或抗B试剂与受检者红细胞混合时，抗A和 /或抗B血清与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝 集，根据其凝集状况便可判定受试者的血型。
实验二
Part I 凝集反应 Part II 沉淀反应 Part III 免疫器官的组织结构观察
123
实验内容
• 凝集反应 – 直接凝集反应：玻片凝集
• ABO血型鉴定
• 沉淀反应
– 环状沉淀 – 琼脂扩散技术：单向免疫扩散、双向免疫扩散 – 电泳技术：对流免疫电泳实验
• 免疫器官的组织结构观察
Part I 凝集反应
免疫器官的种类 中枢免疫器官：胸腺，骨髓，法氏囊（鸟类） 外周免疫器官: 淋巴结，脾脏
法氏囊（Bursa of Fabricius）
免疫器官
1. 胸腺（Thymus）
胎儿胸腺
成人胸腺
1. 胸腺（Thymus）
小叶间隔 皮质
髓质 胸 腺 （HE染色， 10×10）
2. 淋巴结（lymph node）
• 皮质区 浅皮质区（非胸腺依赖区）：B细胞区（淋巴滤泡） 深皮质区（胸腺依赖区）：T细胞、M 、内皮细胞
• 髓质区 髓索：B细胞，浆细胞，部分T细胞和M 髓窦：大量M
2. 淋巴结（lymph node） 淋巴结皮质
被膜 淋巴小结 被膜下淋巴窦
深（副）皮质区
2. 淋巴结（lymph node）
血型 抗A血清
抗B血清
A型
B型
AB型
O型
【原理】
Part II 沉淀反应
可溶性抗原（多糖、蛋白质、类脂等）与相应抗体特异性结 合，在电解质存在的条件下，如果两者比例适当，在一定的 温度下经过一定的时间，可以形成肉眼可见的沉淀物，这种 现象称为沉淀反应。
【分类】
• 环状沉淀 • 免疫扩散技术：双向免疫扩散、单向免疫扩散 • 电泳技术：对流免疫电泳、免疫电泳、火箭免疫电泳
实验报告
1. ABO血型鉴定的原理、步骤、结果、分析； 2. 对流免疫电泳实验的原理、步骤、结果、分析； 3. 绘制免疫器官（胸腺、淋巴结、脾脏）的镜下观察结果。
（HE染色 观察倍数）
值日
请排好值日生，清理实验桌面，打扫实验室卫生。
下次实验内容
• 补体参与的实验----免疫血清的制备与应用（三）
对准序号加样
3. 对流免疫电泳试验
【原理】
• 在双向免疫扩散基础上加电泳的方法。 • 带电胶体颗粒在电场中移动的方向与其所带电荷有关。
抗原在pH8.6的缓冲溶液中带负电荷，由阴极向阳极移 动。抗体为球蛋白，只带微弱的负电荷，分子量又大， 因为电渗作用反而向负极倒退。 • 抗原与抗体在琼脂两孔间相遇时，在两者比例适当处形 成白色沉淀线。
抗原、抗体在电场中定向移动，被限制了多方向自由扩 散的倾向，因而提高了实验敏感度，且沉淀线出现较快， 可在1小时之内观察结果，所以可用于快速诊断。
【实验器材】
1. 0.05mol/L，pH8.6巴比妥缓冲液。 2. 抗AFP血清，已知AFP阳性血清，待检血清。 3. 玻片、吸管、打孔器、微量移液器、电泳仪等。
定义：
颗粒性抗原（病原微生物或红细胞）与相应的抗体特 异性结合，在电解质存在的条件下，如果两者比例适当， 在一定的温度下经过一定的时间，可以形成肉眼可见的凝 集块，这种现象叫做凝集反应。
凝集反应
直接凝集反应
【原理】 细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原在适当电解 质存在的条件下，可以直接与相应的抗体特异性 结合，形成肉眼可见的凝集块。
【实验器材】
1. 抗A 、抗B标准血清、生理盐水； 2. 塑料板、采血针、试管、滴管、消毒棉棒、牙签、
记号笔等。
【实验步骤】
注意事项 1. 消毒处干燥后再取血 2. 滴管不可与抗体液面接触 3. 不可用牙签的同一头混合液体
红细胞血悬1液滴 NS 5滴
抗A 1滴
抗B 1滴
A
B
红细胞悬液 1滴
【实验结果判断】
【实验步骤】 电极＋
－电极
1
2
34
1
2
34
抗AFP血清 抗AFP血清
Ab
Ab
已知阳性血清
Ag
待检血清
电极＋
－电极
1
2
？ 3 4
1Hale Waihona Puke Baidu
2
？ 3 4
抗AFP血清 抗AFP血清
Ab
Ab
已知阳性血清
Ag
待检血清
Part III 免疫器官的组织结构观察
免疫系统：机体执行免疫应答和免疫功能的重要系统。
免疫器官----骨髓、胸腺、淋巴结、脾脏等； 免疫组织----淋巴小结、弥散的淋巴组织等； 免疫细胞----T细胞、B细胞、NK细胞等； 免疫分子----抗原、抗体、细胞因子等。
【原理】
1. 单向免疫扩散
将某种特异性抗体混合于琼脂中，再于含抗体的琼脂板上 打孔，将一定量的抗原加入孔中。孔中抗原向四周呈辐射 状扩散。若抗原与已知抗体相对应，在两者比例适合处即 出现由IC所形成的沉淀环，其大小与抗原浓度成正比。
此实验属于定量实验。主要用于测定血清IgG、IgM、IgA 和补体成份的含量。
2、每组同学归纳整理一份预习报告，可以是word电子文档打印，宋体、 小四号、1.5倍行距，2000字左右。
3、每位同学都要查资料，小组成员共同完成。
The End Thank You
– 补体溶血反应 – 补体结合实验
• T细胞数量及其功能检测
– 淋巴细胞的分离与纯化 – E花环形成实验 – 淋巴细胞转化实验
预习报告
临床案例 患者陈×，男性，30岁，未婚。自述有静脉注射毒品史2年余，1年前体重明显减轻、 近3月发热、干咳，因近日自感觉呼吸不畅，并伴进行性视力下降，到医院就诊。 体格检查：腿部及手臂皮肤多个紫褐色结节，直径约lmm至lcm大小不等、触痛； 口咽部白膜合并溃疡；全身浅表淋巴结肿大；肺部可闻及干啰音。眼底检查显示视 网膜动脉充血、视乳头水肿出血。胸片显示肺门周围间质性肺浸润。支气管肺泡灌 洗液中可见成团微生物，银染阳性。HIV抗体阳性。CT扫描轻度脑萎缩。口腔涂片 发现念珠菌。HIV mRNA水平为20 000拷贝／m1。 临床诊断：艾滋病。 问题：该病人需要检测T淋巴细胞的数量和功能，可以用哪些方法进行测定？并简 述其原理。 要求：1、可以查阅资料获得检测T细胞数量、功能的方法。（至少2种方法）