级本科实验2w凝集反应课件

单向免疫扩散
2. 双向免疫扩散
【原理】
• 可溶性抗原与抗体分别加到琼脂板上相应的小孔中，两 者各自向四周扩散，若抗原与抗体相对应，两者相遇即 发生特异性结合，并在比例合适处形成白色沉淀线。
• 可以用已知抗体（或抗原）检测未知抗原（或抗体）， 鉴定抗原性物质或免疫血清的浓度、纯度以及比较抗原 之间的异同点。
定义：的条件下，如果两者比例适当， 在一定的温度下经过一定的时间，可以形成肉眼可见的凝 集块，这种现象叫做凝集反应。
凝集反应
直接凝集反应
【原理】 细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原在适当电解 质存在的条件下，可以直接与相应的抗体特异性 结合，形成肉眼可见的凝集块。
实验二
Part I 凝集反应 Part II 沉淀反应 Part III 免疫器官的组织结构观察
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实验内容
• 凝集反应 – 直接凝集反应：玻片凝集
• ABO血型鉴定
• 沉淀反应
– 环状沉淀 – 琼脂扩散技术：单向免疫扩散、双向免疫扩散 – 电泳技术：对流免疫电泳实验
• 免疫器官的组织结构观察
Part I 凝集反应
• 皮质区 浅皮质区（非胸腺依赖区）：B细胞区（淋巴滤泡） 深皮质区（胸腺依赖区）：T细胞、M 、内皮细胞
• 髓质区 髓索：B细胞，浆细胞，部分T细胞和M 髓窦：大量M
2. 淋巴结（lymph node） 淋巴结皮质
被膜 淋巴小结 被膜下淋巴窦
深（副）皮质区
2. 淋巴结（lymph node）
对准序号加样
3. 对流免疫电泳试验
【原理】
• 在双向免疫扩散基础上加电泳的方法。 • 带电胶体颗粒在电场中移动的方向与其所带电荷有关。
抗原在pH8.6的缓冲溶液中带负电荷，由阴极向阳极移 动。抗体为球蛋白，只带微弱的负电荷，分子量又大， 因为电渗作用反而向负极倒退。 • 抗原与抗体在琼脂两孔间相遇时，在两者比例适当处形 成白色沉淀线。
抗原、抗体在电场中定向移动，被限制了多方向自由扩 散的倾向，因而提高了实验敏感度，且沉淀线出现较快， 可在1小时之内观察结果，所以可用于快速诊断。
【实验器材】
1. 0.05mol/L，pH8.6巴比妥缓冲液。 2. 抗AFP血清，已知AFP阳性血清，待检血清。 3. 玻片、吸管、打孔器、微量移液器、电泳仪等。
【原理】
1. 单向免疫扩散
将某种特异性抗体混合于琼脂中，再于含抗体的琼脂板上 打孔，将一定量的抗原加入孔中。孔中抗原向四周呈辐射 状扩散。若抗原与已知抗体相对应，在两者比例适合处即 出现由IC所形成的沉淀环，其大小与抗原浓度成正比。
此实验属于定量实验。主要用于测定血清IgG、IgM、IgA 和补体成份的含量。
实验报告
1. ABO血型鉴定的原理、步骤、结果、分析； 2. 对流免疫电泳实验的原理、步骤、结果、分析； 3. 绘制免疫器官（胸腺、淋巴结、脾脏）的镜下观察结果。
（HE染色 观察倍数）
值日
请排好值日生，清理实验桌面，打扫实验室卫生。
下次实验内容
• 补体参与的实验----免疫血清的制备与应用（三）
2、每组同学归纳整理一份预习报告，可以是word电子文档打印，宋体、 小四号、1.5倍行距，2000字左右。
3、每位同学都要查资料，小组成员共同完成。
The End Thank You
免疫器官的种类 中枢免疫器官：胸腺，骨髓，法氏囊（鸟类） 外周免疫器官: 淋巴结，脾脏
法氏囊（Bursa of Fabricius）
免疫器官
1. 胸腺（Thymus）
胎儿胸腺
成人胸腺
1. 胸腺（Thymus）
小叶间隔 皮质
髓质 胸 腺 （HE染色， 10×10）
2. 淋巴结（lymph node）
– 补体溶血反应 – 补体结合实验
• T细胞数量及其功能检测
– 淋巴细胞的分离与纯化 – E花环形成实验 – 淋巴细胞转化实验
预习报告
临床案例 患者陈×，男性，30岁，未婚。自述有静脉注射毒品史2年余，1年前体重明显减轻、 近3月发热、干咳，因近日自感觉呼吸不畅，并伴进行性视力下降，到医院就诊。 体格检查：腿部及手臂皮肤多个紫褐色结节，直径约lmm至lcm大小不等、触痛； 口咽部白膜合并溃疡；全身浅表淋巴结肿大；肺部可闻及干啰音。眼底检查显示视 网膜动脉充血、视乳头水肿出血。胸片显示肺门周围间质性肺浸润。支气管肺泡灌 洗液中可见成团微生物，银染阳性。HIV抗体阳性。CT扫描轻度脑萎缩。口腔涂片 发现念珠菌。HIV mRNA水平为20 000拷贝／m1。 临床诊断：艾滋病。 问题：该病人需要检测T淋巴细胞的数量和功能，可以用哪些方法进行测定？并简 述其原理。 要求：1、可以查阅资料获得检测T细胞数量、功能的方法。（至少2种方法）
【实验器材】
1. 抗A 、抗B标准血清、生理盐水； 2. 塑料板、采血针、试管、滴管、消毒棉棒、牙签、
记号笔等。
【实验步骤】
注意事项 1. 消毒处干燥后再取血 2. 滴管不可与抗体液面接触 3. 不可用牙签的同一头混合液体
红细胞血悬1液滴 NS 5滴
抗A 1滴
抗B 1滴
A
B
红细胞悬液 1滴
【实验结果判断】
髓窦 髓索
淋巴结髓质
3. 脾（spleen）
3. 脾（spleen） 脾脏的基本结构:白髓
3. 脾（spleen） 脾脏的基本结构:红髓
小结
抗原抗体检测：特异性、可见性
1. 凝集反应：颗粒性抗原 直接凝集反应 玻片凝集----定性
2. 沉淀反应：可溶性抗原 定性：双扩、对流免疫电泳（双扩＋电泳） 环状沉淀 定量：单扩
抗体
抗原
可用已知抗体（或抗原）检测未知抗原（或抗体），鉴定抗原 性物质或免疫血清的浓度、纯度以及比较抗原之间的异同点。
【实验步骤】
1
6
2
1 62
53 4
24h
53 4
⑴ 中央 孔：抗体（AFP诊断血清）。 ⑵ 1、4孔：阳性对照（AFP阳性血清）；
2、3、5、6孔：相应待检抗原。 ⑶ 放入湿盒内，24h后检查结果。
血型 抗A血清
抗B血清
A型
B型
AB型
O型
【原理】
Part II 沉淀反应
可溶性抗原（多糖、蛋白质、类脂等）与相应抗体特异性结 合，在电解质存在的条件下，如果两者比例适当，在一定的 温度下经过一定的时间，可以形成肉眼可见的沉淀物，这种 现象称为沉淀反应。
【分类】
• 环状沉淀 • 免疫扩散技术：双向免疫扩散、单向免疫扩散 • 电泳技术：对流免疫电泳、免疫电泳、火箭免疫电泳
【实验步骤】 电极＋
－电极
1
2
34
1
2
34
抗AFP血清 抗AFP血清
Ab
Ab
已知阳性血清
Ag
待检血清
电极＋
－电极
1
2
？ 3 4
1
2
？ 3 4
抗AFP血清 抗AFP血清
Ab
Ab
已知阳性血清
Ag
待检血清
Part III 免疫器官的组织结构观察
免疫系统：机体执行免疫应答和免疫功能的重要系统。
免疫器官----骨髓、胸腺、淋巴结、脾脏等； 免疫组织----淋巴小结、弥散的淋巴组织等； 免疫细胞----T细胞、B细胞、NK细胞等； 免疫分子----抗原、抗体、细胞因子等。
【分类】
玻片凝集 ABO血型鉴定
ABO血型鉴定
人类ABO血型系统
【原理】
人类ABO血型抗原分A、B两种。A型血者红细胞膜上有 A抗原，B型血者红细胞膜上有B抗原，AB型有A、B两种抗 原，O型则不含A、B抗原。
用已知的抗A或抗B试剂与受检者红细胞混合时，抗A和 /或抗B血清与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝 集，根据其凝集状况便可判定受试者的血型。