绵羊上皮细胞三种纯化与培养方法的比较研究

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不同培养方法对山羊瘤胃上皮细胞生长及角蛋白18表达量的影响

不同培养方法对山羊瘤胃上皮细胞生长及角蛋白18表达量的影响刘思乐;康劲翮;谭支良;王征【摘要】本试验旨在研究不同培养方法对山羊瘤胃上皮细胞生长及角蛋白18( CK18)表达量的影响。

采集42日龄山羊的瘤胃上皮组织,分别采用酶消化法和组织块法对其进行体外培养。

通过光学显微镜观察原代培养和传代培养阶段的细胞形态,检测第5代山羊瘤胃上皮细胞的生长曲线,并采用细胞免疫荧光法对山羊瘤胃上皮细胞进行鉴定。

结果显示：1)经0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸消化获得的原代培养山羊瘤胃上皮细胞于2 d开始贴壁生长,5 d细胞开始明显增多,10 d 细胞数量达到最大。

2)经组织块法获得的原代培养山羊瘤胃上皮细胞于4 d开始“爬出”组织块,8 d细胞开始明显增多,14 d细胞数量达到最大。

3)经免疫荧光染色显示2种方法获得的细胞胞浆内CK18均呈阳性表达且细胞纯度后者明显高于前者。

4)组织块法获得的细胞CK18表达量显著高于酶消化法( P<0.05)。

综合得出,与酶消化法相比,应用组织块法可成功获得纯度更高的山羊瘤胃上皮细胞。

%This research aimed to study the effects of different culture methods on growth and keratin 18 ( CK18) expression of ruminal epithelium cells of goats. The test proceeded with ruminal epithelium cells of goats aged 42 days, and the cells were cultured using the methods of enzyme digestion and tissue mass culture. The morphology of cells at the stages of primary culture and subculture was observed under the optical micro-scope, and the growth curve of the fifth generation of ruminal epithelium cells of goat was tested, meanwhile, ruminal epithelium cells were identified using cell immune fluorescence method. The results showed as follows:1) theprimary cultured ruminal epithelium cells of goats obtained by digestion of 0. 25% trypsin and 0. 02%ethylenediamine tetra-acetate began adherent growth on the 2nd day. There was a significant increase in cell number on the 5th day, and the cell number reached a maximum at the 10th day. 2) The primary cultured ru-minal epithelium cells of goats obtained by tissue mass culture began ‘escape’ from the tissue ma ss on the 4th day. There was a significant increase in cell number on the 8th day, and the cell number reached a maximum at the 14th day. 3) The CK18 in cytoplasm of cells obtained by the 2 methods exhibited a positive reaction by im-mune fluorescence staining, and cell purity was higher in tissue mass culture method. 4) Tissue mass culture method expressed significantly higherCK18 compared with enzyme method ( P<0.05) . In conclusion, ruminal epithelium cells of goats were successfully obtained with high purity using the method of tissue mass culture.【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2016(028)004【总页数】8页(P1225-1232)【关键词】山羊;瘤胃;上皮细胞;原代培养;分离;CK18【作者】刘思乐;康劲翮;谭支良;王征【作者单位】中国科学院亚热带农业生态过程重点实验室，亚热带农业生态研究所，湖南省农业生态过程重点实验室，长沙410125; 湖南农业大学生物科学技术学院，长沙 410128;中国科学院亚热带农业生态过程重点实验室，亚热带农业生态研究所，湖南省农业生态过程重点实验室，长沙 410125;中国科学院亚热带农业生态过程重点实验室，亚热带农业生态研究所，湖南省农业生态过程重点实验室，长沙410125;湖南农业大学生物科学技术学院，长沙 410128【正文语种】中文【中图分类】S826瘤胃是反刍动物消化代谢和营养物质吸收最重要的场所。

绵羊羊膜上皮细胞分离培养及鉴定

中国组织工程研究第16卷第14期2012–04–01出版Chinese Journal of Tissue Engineering Research April 1, 2012 Vol.16, No.14绵羊羊膜上皮细胞分离培养及鉴定*☆朱雪敏，李海军，米焱，杨银凤，关洪敏，曹贵方Isolation, culture and identitication of Ovis aries amnion epithelial cells Zhu Xue-min, Li Hai-jun, Mi Yan, Yang Yin-feng, Guan Hong-min, Cao Gui-fangAbstractBACKGROUND: The amnion epithelial cells (AECs) with stem cells properties have been successfully obtained after isolating, digesting and culturing human and rat amnion and AECs have the potential to differentiate into cells of the endoderm (liver, lung, epithelium), mesoderm (bone, fat), and ectoderm (neural cells),OBJECTIVE: To obtain the Ovis aries AECs and detect the stem cell characteristics.METHODS: Ovis aries amnion tissue was peeled off by mechanical way and the low velocity-trypLE (pancreatic enzymereplacement) digestion method was used to isolate and culture the Ovis aries amnion, and the Ovis aries AECs were obtained. RESULTS AND CONCLUSION: The immunofluorescence observation showed that the labeled protein of AECs such as Oct-4, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60,TRA-1-81 could be expressed on Ovis aries AECs. RT-PCR experiments confirmed that the genes of Oct-4, Sox-2 and Rex-1 were expressed and Nanog was not expressed. The results indicate that the Ovis aries AECs with stem cells properties have been achieved successfully.Zhu XM, Li HJ, Mi Y, Yang YF, Guan HM, Cao GF. Isolation, culture and identitication of Ovis aries amnion epithelial cells.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2012;16(14): 2559-2562. [ ]Laboratory of Animal Embryo and Developmental Biology, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia Autonomous Region, ChinaZhu Xue-min☆, Studying fordoctorate, Lecturer, Laboratory of Animal Embryo and Developmental Biology, InnerMongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia Autonomous Region, Chinazhuxuemin7195@ Correspondingauthor: Cao Gui-fang, Doctor, Professor, Laboratory of Animal Embryo and Developmental Biology, InnerMongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia Autonomous Region, Chinaguifangcao@ Supported by: National HighTechnology Research and Development Planning (863 Program),No.2008AA101005*Received: 2011-10-30Accepted: 2011-12-01摘要背景：目前有研究发现人羊膜和大鼠羊膜分离消化培养后，可成功获得具有干细胞特性的人羊膜上皮细胞和鼠羊膜上皮细胞，在体外一些外源因子作用下具有向三胚层细胞分化的潜能。

永生化绵羊子宫内膜上皮细胞系的建立与鉴定

永生化绵羊子宫内膜上皮细胞系的建立与鉴定永生化绵羊子宫内膜上皮细胞系的建立与鉴定第一章：引言近年来，研究人员对于细胞系的建立和鉴定日益重视。

其中，动物细胞系的建立对于动物发育、疾病研究以及药物筛选具有重要意义。

本文的研究目的是建立和鉴定一种永生化的绵羊子宫内膜上皮细胞系，为未来相关领域的研究提供有效的实验模型。

第二章：材料与方法2.1 绵羊子宫内膜采集选取健康成年绵羊，通过外科手术方法采集子宫内膜组织。

2.2 细胞培养基配制配制含有必需营养物质（如氨基酸、维生素）、血清和抗生素的培养基。

2.3 细胞培养条件将取得的绵羊子宫内膜组织在无菌条件下切割成小块，通过消化酶（如胰蛋白酶）处理，获得单个细胞。

将细胞转移到培养基中，定期更换培养基，保持适宜的培养条件（37℃，5% CO2）等。

2.4 细胞增殖检测采用细胞计数、增殖曲线和克隆形成实验等方法监测细胞的增殖情况。

2.5 细胞生长状态观察通过显微镜观察细胞的生长状态，包括细胞外形、细胞表面特征等。

2.6 细胞种类鉴定通过荧光染料特异性染色、免疫细胞化学染色等方法检测细胞的类型，包括上皮细胞标志物等。

2.7 永生化细胞系的建立通过引入适当的操纵基因，如转染TERT基因等，使细胞系具备永生化的特征。

2.8 发育功能鉴定通过细胞培养体外诱导绵羊永生化细胞系向多功能干细胞方向发展，观察其分化潜能。

第三章：结果与讨论3.1 绵羊子宫内膜上皮细胞系的建立经过一段时间的细胞培养，绵羊子宫内膜上皮细胞系成功建立。

3.2 细胞生长状态和增殖特性绵羊子宫内膜上皮细胞系在培养基中呈现出良好的生长状态和增殖特性。

3.3 细胞类型鉴定通过荧光染料标记和免疫细胞化学染色等技术，我们鉴定出绵羊子宫内膜上皮细胞系的特异性。

3.4 永生化细胞系的建立通过转染TERT基因，绵羊子宫内膜上皮细胞系成功实现了永生化。

3.5 发育功能鉴定绵羊子宫内膜上皮细胞系在体外诱导实验中，展示了多功能干细胞的潜能。

永生化绵羊附睾上皮细胞系的建立及其生物学特性分析

畜牧兽医学报 2019!0(9)：1822-1831Acta Veterinaria et Zootechnica Sinicadoi : 10. 11843/j. issn. 0366-6964. 2019. 09. 009永生化绵羊附睾上皮细胞系的建立及其生物学特性分析宋慧子，栾兆进，王兆琛，杜炜，赵勇超！长家新"(内蒙古农业大学动物科学学院，内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室，呼和浩特010018)摘要：旨在建立绵羊附睾上皮永生化细胞系，为进一步研究绵羊附睾功能调节机制提供基础。

本研究采用酶消化法分离培养原代绵羊附睾上皮细胞，利用脂质体将pCI-neo-hTERT 质粒转入绵羊附睾上皮细胞(SEECs ),经 G418筛选得到了细胞系hTERT-SEECs ,免疫荧光法鉴定其角蛋白18(CK18)和人端粒酶逆转录亚基(hTERT)表达情况;RT-PCR 检测其hTERT mRNA 的表达；采用CCK-8法绘制细胞生长曲线检测其增殖能力；利用流式细胞仪检测其周期和细胞凋亡情况；核型分析检测其倍体情况；从mRNA 和蛋白水平检测其谷胱甘肽过氧化物酶5 (GPX5)和雄激素受体(AR)的表达情况。

结果显示，原代绵羊附睾上皮细胞呈典型的铺路石状形态)hTERT 成功转入绵羊附睾上皮细胞，传45代后,hTERT-SEECs 仍呈铺路石状;hTERT-SEECs 仍可稳定表达CK18和 hTERT ,并且拥有正常的二倍体核型；hTERT-SEECs 增殖能力高于原代细胞,hTERT-SEECs 处于G1期的细胞比例显著低于SEECs(P <0. 05)，处于S 期细胞比例显著高于SEECs(P <0. 05),且其活细胞率显著高于SEECs(P <0. 05)凋亡率显著低于SEECs(P <0. 05)； hTERT-SEECs 和SEECs 的GPX5和AR 蛋白表达量差异不显著 (P 〉0.05)本研究所建立的hTERT-SEECs 经长期培养后仍具有正常的附睾上皮细胞形态，增殖能力强并保留了附睾上皮细胞的生物学特性)关键词：绵羊附睾上皮细胞；永生化;hTERT ；基因表达中图分类号:S826. 3文献标志码：A文章编号：03666964(2019)09182210Establishment of Sheep Immortalized Epididymal EpithelialCell Line and Analysis of Its Biological CharacteristicsSONG Huizi , LUAN Zhaojin , WANG Zhaochen , DU Wei , ZHAO Yongchao , ZHANG Jiaxin ** (Inner Mongolia Autonomous Region Key Laboratory of Animal Genetics , Breeding and Reproduction ,College of Animal Science , InnerMongolia Agricultural University , Hohhot 010018, China )收稿日期：2019-03-21基金项目：内蒙古自治区自然科学基金(2018MS03012)作者简介：宋慧子(1993-),女，山东济南人，硕士，主要从事动物繁殖研究,E-mail :871625329@qq. com*通信作者：张家新，主要从事动物生殖生物学与繁殖技术研究,E-mail :zjxcau@ 163. comAbstract :Thisstudyaimedtoestablishsheepimmortalizedepididymalce l lineandprovideaba-sisforfurtherstudyingtheregulation mechanism ofepididymisfunctioninsheep Theprimary sheepepididymalepithelialce l swereisolatedandculturedbyenzymaticdigestion ThepCI-neo-hTERT plasmid was transferred into the sheep epididymal epithelial ce l s (SEECs ) byusinglipo-someandthehTERT-SEECswasscreenedby G418 Thece l expressionofkeratin18 (CK18) andhumantelomerasereversetranscriptase (hTERT ) wereidentified byimmunofluorescenceTheexpressionof hTERT mRNA was detected by RT-PCR Thece l growthcurvewasdetectedby CCK-8 Thegrowthcycleandapoptosisstatusweredetectedbyflowcytometry Theploidywas detectedbykaryotypeanalysis The mRNA andproteinexpressionofglutathioneperoxidase5(GPX5) andandrogenreceptor (AR ) weredetected Theresultsshowedthattheprimarysheep9期宋慧子等：永生化绵羊附睾上皮细胞系的建立及其生物学特性分析1823epididymalepithelialce l exhibitednativecobblestonemorphology hTERT wastransferredsuc- cessfully into the SEECs. After 45 passage , the hTERT-SEECs still showed cobblestone mor phology , the CK18 and hTERT could be steadily expressed in hTERT -SEECs , and the cells were in normal diploid , the proliferation ability of hTERT-SEECs was higher than that of primarySEECs , the percentage of hTERT-SEECs in G1 phase were significantly less than that of SEECs(P <0. 05) , while the percentage of hTERT-SEECs in S phase was significantly higher than thatof SEECs (P <0. 05) , the percentage of living hTERT-SEECs was significantly higher than that of SEECs (P <0.05), the apoptosis rate of hTERT-SEECs was significantly less than that of SEECs (P <0.05).TherewerenosignificanUdi f erencein GPX5and ARproUeinconcenUraions beUweenhTERT-SEECsandSEECs (P %0.05).AfUerlongUermculUure UhehTERT-SEECses-UablishedinUhissUudycan mainUain normal epididymal epiUhelial ce l morphology havesUrong proliferaivecapaciUyandreUainUhebiologicalcharacUerisUicsofepididymalepiUhelialce l s.Key words ： sheep epididymal epithelial cell ； immortalization ； hTERT ； gene expression哺乳动物附睾是精子成熟、运输和储存的重要器官，由起始部、附睾头、附睾体和附睾尾组成，每部分都具有不同的形态特征和生理学功能*12+。

《绵羊精原干细胞的分离富集与体外培养研究》范文

《绵羊精原干细胞的分离富集与体外培养研究》篇一摘要：本文旨在探讨绵羊精原干细胞的分离富集及体外培养技术。

通过实验研究，我们成功分离并富集了绵羊精原干细胞，并进行了体外培养。

本文详细介绍了实验材料、方法、结果及分析，为绵羊生殖生物学及干细胞研究提供了新的思路和方向。

一、引言随着干细胞研究的深入发展，精原干细胞作为生殖细胞的重要组成部分，在畜牧业和医学领域均具有重要价值。

绵羊作为重要的家畜之一，其精原干细胞的研究对于提高繁殖效率和畜牧产业发展具有重要意义。

本文通过研究绵羊精原干细胞的分离富集与体外培养技术，为进一步应用提供理论基础。

二、材料与方法1. 材料（1）实验动物：成年绵羊。

（2）试剂与仪器：胰蛋白酶、DMEM培养基、离心机、显微镜等。

2. 方法（1）精原干细胞的分离与富集：采用睾丸组织消化法，结合密度梯度离心技术进行分离和富集。

（2）体外培养：将分离富集的精原干细胞接种于培养皿中，使用DMEM培养基进行培养。

三、实验结果1. 精原干细胞的分离与富集通过睾丸组织消化法结合密度梯度离心技术，成功从绵羊睾丸组织中分离出精原干细胞，并实现了其富集。

2. 体外培养将分离富集的精原干细胞接种于培养皿中，使用DMEM培养基进行培养。

在适宜的温度和湿度条件下，精原干细胞得以成功增殖并保持良好的形态。

通过显微镜观察，可见细胞生长良好，无污染现象。

四、结果分析1. 分离富集结果分析通过密度梯度离心技术，成功从绵羊睾丸组织中分离出精原干细胞，且富集效果显著。

该方法具有较高的纯度和效率，为后续实验提供了可靠的细胞来源。

2. 体外培养结果分析在适宜的条件下，精原干细胞得以成功增殖并保持良好的形态。

通过显微镜观察，可见细胞生长旺盛，无污染现象。

这为进一步研究精原干细胞的生物学特性和应用提供了基础。

五、结论本文通过研究绵羊精原干细胞的分离富集与体外培养技术，成功实现了从绵羊睾丸组织中分离出精原干细胞，并进行了体外培养。

该方法具有较高的纯度和效率，为进一步研究精原干细胞的生物学特性和应用提供了基础。

《绵羊精原干细胞的分离富集与体外培养研究》范文

《绵羊精原干细胞的分离富集与体外培养研究》篇一一、引言近年来，随着干细胞研究的深入发展，精原干细胞作为一类具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞，其研究备受关注。

精原干细胞在畜牧生产、医学治疗以及再生医学等领域具有广阔的应用前景。

绵羊作为重要的家畜之一，其精原干细胞的分离富集与体外培养研究具有重要意义。

本文旨在通过对绵羊精原干细胞的分离富集和体外培养进行研究，为相关领域的进一步应用提供理论基础和实验依据。

二、材料与方法1. 材料实验所用的绵羊睾丸组织来自当地养殖场，实验室设备包括显微镜、离心机、细胞培养箱等；试剂包括酶消化液、培养基、胎牛血清等。

2. 方法（1）精原干细胞的分离富集首先对绵羊睾丸组织进行预处理，采用酶消化法将组织中的精原干细胞分离出来。

然后通过密度梯度离心法将精原干细胞富集，获得高纯度的精原干细胞。

（2）体外培养将富集得到的精原干细胞接种于培养皿中，加入适量的培养基和胎牛血清，置于细胞培养箱中培养。

在培养过程中，定期观察细胞的生长情况，记录细胞形态、数量等数据。

三、实验结果1. 精原干细胞的分离富集结果通过酶消化法和密度梯度离心法，成功地从绵羊睾丸组织中分离出精原干细胞，并富集得到高纯度的精原干细胞。

2. 体外培养结果将富集得到的精原干细胞接种于培养皿中，细胞在培养基中生长良好，呈现出典型的干细胞形态。

在培养过程中，细胞的增殖速度较快，数量逐渐增多。

通过显微镜观察，可以发现细胞具有自我更新能力和多向分化潜能。

四、讨论本研究通过对绵羊精原干细胞的分离富集和体外培养进行研究，发现该方法可以有效地从绵羊睾丸组织中分离出高纯度的精原干细胞，并在体外培养中表现出良好的生长特性和自我更新能力。

这为进一步研究精原干细胞的生物学特性和应用提供了重要的实验依据。

在绵羊精原干细胞的分离富集过程中，酶消化法和密度梯度离心法是常用的方法。

其中，酶消化法可以有效地将组织中的细胞消化出来，而密度梯度离心法可以进一步富集目标细胞。

《绵羊精原干细胞的分离富集与体外培养研究》范文

《绵羊精原干细胞的分离富集与体外培养研究》篇一一、引言随着生物医学技术的飞速发展，干细胞研究已成为当前科研的热点领域。

其中，精原干细胞作为一类具有自我更新和分化潜能的细胞，在动物繁殖和人类疾病治疗等领域具有广阔的应用前景。

绵羊作为重要的家畜之一，其精原干细胞的研究对于畜牧业的改良以及医学研究都具有重要意义。

本文旨在研究绵羊精原干细胞的分离富集及体外培养技术，为进一步应用提供理论依据。

二、材料与方法1. 材料实验所需材料包括：绵羊睾丸组织、培养基、试剂、耗材等。

2. 方法（1）精原干细胞的分离与富集a. 采集绵羊睾丸组织，进行组织处理。

b. 采用酶消化法分离精原干细胞。

c. 通过细胞筛选和纯化技术，富集精原干细胞。

（2）体外培养a. 制备培养基，将富集的精原干细胞接种于培养基中。

b. 调整培养条件，包括温度、湿度、气体比例等。

c. 观察细胞生长情况，定期更换培养基。

三、实验结果1. 精原干细胞的分离与富集结果通过酶消化法和细胞筛选技术，成功分离并富集了绵羊精原干细胞。

在显微镜下观察，富集的细胞具有典型的精原干细胞形态特征。

2. 体外培养结果将富集的精原干细胞接种于培养基中，调整培养条件后开始培养。

在显微镜下观察，细胞生长良好，呈现出典型的干细胞分裂增殖特征。

定期更换培养基后，细胞生长更加旺盛，形态更加稳定。

四、讨论1. 精原干细胞的分离与富集技术精原干细胞的分离与富集是本研究的关键步骤。

采用酶消化法和细胞筛选技术，可以有效地分离并富集绵羊精原干细胞。

然而，该过程中仍存在一定难度，需要严格控制实验条件，以保证实验结果的可靠性。

2. 体外培养技术体外培养技术的成功与否直接影响到精原干细胞的应用价值。

通过调整培养条件，如温度、湿度、气体比例等，可以有效地促进精原干细胞的生长和分裂。

此外，定期更换培养基也有助于维持细胞的稳定性和活力。

然而，在体外培养过程中，仍需注意避免细胞老化、污染等问题。

五、结论本研究成功实现了绵羊精原干细胞的分离富集与体外培养。

《绵羊乳腺类器官分离与体外培养研究》范文

《绵羊乳腺类器官分离与体外培养研究》篇一一、引言随着生物医学技术的不断进步，类器官的研究逐渐成为生物学和医学领域的研究热点。

其中，绵羊乳腺类器官的分离与体外培养技术，对于乳腺疾病研究、乳腺细胞生理机制探索以及药物筛选等领域具有重要意义。

本文旨在研究绵羊乳腺类器官的分离方法、体外培养条件及其潜在应用价值。

二、研究背景及意义绵羊乳腺作为重要的产乳器官，其乳腺细胞的生长、发育和泌乳过程具有独特的生物学特性。

通过研究绵羊乳腺类器官的分离与体外培养技术，可以深入了解乳腺细胞的生理机制，为乳腺疾病的预防和治疗提供理论依据。

此外，该研究还有助于建立高效的细胞模型，用于药物筛选和评价，为新药研发提供有力支持。

三、材料与方法1. 材料来源本研究所用绵羊乳腺组织取自健康成年绵羊。

2. 实验方法（1）类器官分离技术：采用酶解法、机械剥离法等方法分离绵羊乳腺组织中的类器官。

（2）体外培养：将分离得到的类器官进行细胞培养，优化培养基成分和培养条件，观察细胞生长、分化及功能表达情况。

（3）数据分析：运用细胞生物学、分子生物学等实验技术和统计分析方法，对实验数据进行处理和分析。

四、实验结果1. 绵羊乳腺类器官的分离与鉴定通过酶解法和机械剥离法相结合的方式，成功从绵羊乳腺组织中分离出类器官。

经鉴定，分离得到的类器官具有典型的乳腺组织结构特征。

2. 体外培养及观察将分离得到的类器官进行体外培养，优化了培养基成分和培养条件。

在适宜的培养环境下，类器官细胞生长良好，形态特征明显，且具有泌乳能力。

3. 数据分析与讨论通过对实验数据的统计分析，发现类器官的分离与体外培养过程中，不同因素对细胞生长、分化和功能表达的影响。

这些因素包括培养基成分、培养温度、pH值等。

通过调整这些因素，可以进一步优化类器官的体外培养条件，提高细胞活力和功能表达水平。

五、讨论本研究成功分离并培养了绵羊乳腺类器官，为进一步研究乳腺细胞的生理机制、乳腺疾病的发生与发展以及新药研发等领域提供了重要的实验工具。

《绵羊乳腺类器官分离与体外培养研究》范文

《绵羊乳腺类器官分离与体外培养研究》篇一一、引言随着生物技术的飞速发展，动物乳腺类器官的研究在生物医药、生物材料及人类健康领域有着越来越重要的应用。

绵羊作为乳品的主要提供者之一，其乳腺类器官的体外分离与培养不仅对深入理解其生理结构具有重要意义，还能为提高动物繁殖效率和乳品质量提供理论依据。

本文旨在探讨绵羊乳腺类器官的体外分离与培养技术，为相关研究提供参考。

二、研究背景及意义近年来，随着组织工程和再生医学的迅速发展，对于类器官体外培养技术的需求逐渐增长。

乳腺类器官是机体分泌乳汁的主要部位，其结构的复杂性和功能的独特性使研究其在体外培养中的形态学变化、生长调节以及生物学功能具有重要的科学价值。

绵羊乳腺类器官的研究不仅有助于了解其生理结构与功能，还能为提高乳产品质量、推动新型乳制品的研发等提供有力的理论支撑和技术支持。

三、材料与方法3.1 实验材料本研究以健康成年绵羊为研究对象，收集其乳腺组织进行后续实验。

同时，需准备实验所需的培养基、酶解液等试剂和设备。

3.2 实验方法（1）组织准备：无菌环境下从绵羊身上取得乳腺组织。

（2）组织酶解与分离：将组织用酶解液进行酶解处理，再通过梯度离心的方法将类器官分离出来。

（3）体外培养：将分离出的类器官置于特定的培养基中，在适宜的温度和湿度条件下进行体外培养。

（4）观察与记录：定期观察类器官的生长情况，并记录相关数据。

四、实验结果4.1 绵羊乳腺类器官的形态学观察通过显微镜观察，我们发现绵羊乳腺类器官在体外培养过程中，其形态和结构均有所变化。

具体表现为细胞的增殖和组织的分化，以及一些特殊细胞群的形成。

4.2 体外培养过程中生长曲线分析经过多日的连续观察与记录，我们发现绵羊乳腺类器官在适宜的培养条件下生长迅速，呈现明显的指数增长趋势。

这一结果表明培养环境有利于类器官的生长与繁殖。

4.3 类器官结构的变化与功能分析随着培养时间的延长，我们发现类器官的结构逐渐趋于复杂化，细胞间的连接更加紧密，这表明类器官在体外环境中发生了复杂的生理变化和功能适应。

《阿尔巴斯白绒山羊与绵羊胚胎干细胞培养技术的研究》范文

《阿尔巴斯白绒山羊与绵羊胚胎干细胞培养技术的研究》篇一摘要：本文以阿尔巴斯白绒山羊与绵羊为研究对象，深入探讨了胚胎干细胞培养技术的应用及其对动物育种与繁殖的影响。

通过对比传统育种方法，本研究采用先进的胚胎干细胞培养技术，为畜牧业的可持续发展提供了新的可能。

一、引言随着生物科技的不断进步，胚胎干细胞培养技术在畜牧业中得到了广泛应用。

阿尔巴斯白绒山羊和绵羊作为重要的经济动物，其育种与繁殖技术的提升对于畜牧业发展具有重要意义。

本研究旨在探讨胚胎干细胞培养技术在阿尔巴斯白绒山羊与绵羊育种中的应用，以期为畜牧业的可持续发展提供新的思路和方法。

二、研究背景胚胎干细胞培养技术是一种通过体外培养胚胎干细胞，实现动物育种与繁殖的技术。

该技术具有操作简便、成本低廉、效率高等优点，为动物育种提供了新的可能。

阿尔巴斯白绒山羊和绵羊作为重要的经济动物，其产肉、产毛等经济价值较高，因此，研究其胚胎干细胞培养技术具有重要的现实意义。

三、研究方法本研究采用先进的胚胎干细胞培养技术，对阿尔巴斯白绒山羊与绵羊的胚胎进行体外培养。

首先，从供体动物中获取优质的卵子和精子；其次，通过体外受精和胚胎培养，获得早期胚胎；最后，将早期胚胎移植到代孕母体内，实现胚胎的发育和繁殖。

四、实验结果通过实验，我们发现胚胎干细胞培养技术在阿尔巴斯白绒山羊与绵羊的育种中具有显著的优势。

首先，该技术可以大大提高繁殖效率，缩短育种周期；其次，通过体外培养，可以实现对胚胎的遗传改良，提高后代的经济价值；最后，该技术操作简便、成本低廉，具有较高的经济效益和社会效益。

五、讨论胚胎干细胞培养技术的应用，为阿尔巴斯白绒山羊与绵羊的育种提供了新的思路和方法。

通过该技术，我们可以实现对胚胎的遗传改良，提高后代的经济价值；同时，该技术还可以大大提高繁殖效率，缩短育种周期，降低生产成本。

然而，该技术仍存在一些挑战和问题，如如何保证体外培养的胚胎在代孕母体内成功着床和发育等。

因此，我们需要进一步研究和探索，以完善该技术并提高其应用效果。

《阿尔巴斯白绒山羊与绵羊胚胎干细胞培养技术的研究》范文

《阿尔巴斯白绒山羊与绵羊胚胎干细胞培养技术的研究》篇一一、引言近年来，随着生物科技的快速发展，干细胞培养技术已经成为畜牧产业的重要研究领域。

特别是在羊类养殖方面，阿尔巴斯白绒山羊与绵羊作为我国特有的品种，其经济价值及研究价值尤为突出。

本篇论文将就阿尔巴斯白绒山羊与绵羊胚胎干细胞培养技术进行深入研究，旨在探索其在动物繁殖、遗传疾病防控及提高畜产品品质等方面的应用。

二、阿尔巴斯白绒山羊与绵羊概述阿尔巴斯白绒山羊和绵羊均是我国传统的家畜品种，其生长快、适应性强、繁殖性能好等特点，使得它们在畜牧产业中占据重要地位。

阿尔巴斯白绒山羊以其优良的产绒性能和较高的经济价值，被广泛用于畜牧业生产。

而绵羊作为主要的肉用家畜之一，其产品也深受市场欢迎。

然而，传统的家畜繁殖方式往往存在繁殖周期长、疾病防控难度大等问题，而胚胎干细胞培养技术的应用则可有效解决这些问题。

三、胚胎干细胞培养技术胚胎干细胞培养技术是一种通过体外培养胚胎干细胞，进而实现家畜克隆和遗传改良的技术。

该技术具有繁殖周期短、遗传疾病防控效果好等优点，为畜牧产业带来了革命性的变革。

在阿尔巴斯白绒山羊与绵羊的胚胎干细胞培养方面，该技术已取得了一定的研究成果。

四、阿尔巴斯白绒山羊与绵羊胚胎干细胞培养技术的研究进展1. 胚胎干细胞的分离与培养：通过实验室技术手段，成功从阿尔巴斯白绒山羊与绵羊的早期胚胎中分离出胚胎干细胞，并在特定的培养条件下进行体外培养。

2. 干细胞定向分化：在培养过程中，通过调节培养条件，使干细胞定向分化为特定类型的细胞，如产绒细胞、肌肉细胞等，为研究家畜生长发育和遗传改良提供了新的途径。

3. 胚胎克隆：利用胚胎干细胞进行克隆，可以快速获得大量遗传性状一致的个体，为遗传疾病的防控和优良品种的选育提供了有力支持。

五、应用前景阿尔巴斯白绒山羊与绵羊胚胎干细胞培养技术的应用前景广阔。

首先，该技术可有效缩短家畜的繁殖周期，提高繁殖效率；其次，通过定向分化培养，可研究家畜生长发育的机制，为遗传改良提供依据；再次，利用胚胎克隆技术，可实现优良品种的快速选育和遗传疾病的防控；最后，该技术还可用于生物医药领域，如生产生物药物、组织工程等。

《绵羊乳腺类器官分离与体外培养研究》范文

《绵羊乳腺类器官分离与体外培养研究》篇一一、引言随着生物医学技术的飞速发展，器官分离与体外培养技术为人类在疾病诊断、药物筛选及组织再生等方面提供了全新的视角。

近年来，动物乳腺类器官的研究更是为研究人类乳腺相关疾病和生理机制提供了可能。

绵羊作为乳腺生理学研究的重要模型动物，其乳腺类器官的分离与体外培养技术日益受到科研工作者的关注。

本文旨在研究绵羊乳腺类器官的分离方法及体外培养条件，为进一步探索其应用提供理论依据。

二、材料与方法2.1 材料准备本实验所需材料包括：新鲜绵羊乳腺组织、培养基、胰蛋白酶、胎牛血清等。

所有材料均需经过严格的无菌处理，确保实验的准确性。

2.2 实验方法1. 乳腺类器官的分离：通过外科手术获取新鲜绵羊乳腺组织，在无菌条件下进行类器官的分离。

采用胰蛋白酶消化法进行组织消化，并逐步进行机械分离。

2. 体外培养：将分离得到的类器官置于含有适宜培养基的培养皿中，加入适量胎牛血清和生长因子，在适宜的温度和湿度条件下进行体外培养。

3. 观察与记录：通过显微镜观察类器官的生长情况，并定期记录相关数据。

三、实验结果3.1 乳腺类器官的分离结果通过上述实验方法，成功地从绵羊乳腺组织中分离出类器官。

分离得到的类器官形态完整，具有典型的乳腺组织结构特征。

3.2 体外培养结果在适宜的培养条件下，绵羊乳腺类器官生长良好，细胞增殖迅速，组织结构保持完整。

通过显微镜观察，可观察到类器官内腺泡样结构的形成，说明其具备了一定的分泌功能。

四、讨论本研究成功分离了绵羊乳腺类器官并进行了体外培养，这一研究成果对于研究乳腺生理学、乳腺疾病诊断及治疗等方面具有重要意义。

首先，通过研究绵羊乳腺类器官的生理特性，可以进一步了解人类乳腺的生理机制，为相关疾病的诊断和治疗提供理论依据。

其次，绵羊乳腺类器官的培养可以模拟自然条件下的乳腺分泌过程，为研究乳蛋白的合成和分泌等过程提供可靠的模型。

此外，对于优化哺乳动物胚胎干细胞定向分化为乳腺组织的条件也有一定的指导意义。

3种定量检测绵羊肺炎支原体方法的比较

3种定量检测绵羊肺炎支原体方法的比较何曼莉;费磊;岳华;汤承【摘要】The Mycoplasma ovipneumoniae (MO) SC01 isolates were cultured in the modified Thiaucourt's medium and collected in different times. The growth curve of MO was determined by the color change unit (CCU), nephelornetry and Real-time PCR. The results of CCU showed 0 to 4 h was the lag phase, 4 to 16 h was logarithmic phase and the most of 1g CCU/mL was 10. 7000 ± 0. 4700, 16 to 20 h was the stationary phase, and 20 h later was decline phase of SC01 isolates. The results of nephelornetry method showed that D420nm of five folds concentration of SC01 cultures gradually increased with the culture time, following the 0. 0028±0. 0002 in 2 h, slowly increased in 4 to 12 h, fast increased in 12 to 24 h, the 0. 8609 ± 0. 0045 of highest level in 24 h and then stabilizaed. The results of Real-time PCR showed that the copy of SC01 isolates steadily increased in 2 to 30 h that the lg copy/mL was 4. 5889 + 0. 0048 in 2 h and the most of lg copy/mL was 7. 6165±0.1089 in 30 h. Furthermore, the correlation analysis exhibited that, in lag phase and logarithmic phase, the CCU had a high correlation with the Real-time PCR and nephelornetry, and Real-time PCR also existed a high correlation with nephelornetry, following that the correlation coefficients were 0. 967,0. 720 and 0. 849, respectively. During 2 to 30 h,there was a high correlation between the Real-time PCR method and nephelornetry and the correlation coefficients was 0. 912. Based on the above results of the time and accuracy of three detection methods, thestudy indicated that the Real-time PCR method was fast, accurate and easy to standardization and could replace for the CCU and nephelornetry methods.%本研究采用改良Thiaucourt's培养基培养绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovi pleuneniae,MO)临床分离株SC01,收集不同时间的培养物,分别用颜色变化单位(CCU)法、浊度法及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法进行定量,并绘制MO生长动态曲线.CCU检测结果显示,接种后0～4 h为SC01的迟缓期,4～16 h为对数生长期,lg CCU/mL最高达到10.7000±0.4700,16～20 h为稳定期,20 h以后进入衰亡期；浊度法定量检测结果显示,SC01培养物经过5倍浓缩后的D420nm随着培养时间延长逐渐上升,2h时为0.0028±0.0002,4～12hD420nm增加较缓慢,而12～24 h增加最快,24 h最高达到0.8609±0.0045,以后则趋于稳定；Real-time PCR法检测结果显示,SC01的拷贝数随着培养时间延长平稳上升,2h时lg拷贝/mL为4.5889±0.0048,在30 h时 lg拷贝/mL达到7.6165±0.1089.相关性分析结果表明,在迟缓期和对数生长期,CCU法与Real-time PCR法、CCU法与浊度法、Real-time PCR法与浊度法对MO的定量检测结果高度相关,相关系数分别为0.967、0.720和0.849,而Real-time PCR法和浊度法对MO的定量检测结果则在2～30 h内均高度相关,相关系数为0.912.经对检测所需时间及精确度等方面综合比较,本研究认为Re-time PCR法具有快速、准确及易标准化等特点,可以取代CCU法和浊度法用于MO的定量.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2013(040)003【总页数】4页(P177-180)【关键词】绵羊肺炎支原体;颜色变化单位;浊度;实时荧光定量PCR【作者】何曼莉;费磊;岳华;汤承【作者单位】西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】S852.62支原体（Mycoplasma）是目前己知能够独立生活没有细胞壁的原核微生物，属于软皮体（Mollicutes）纲支原体目（Mycoplasmatales）中一类原核微生物（Nicolet，1996）。

新生山羊肾小管上皮细胞的原代培养与鉴定

新生山羊肾小管上皮细胞的原代培养与鉴定向华;张彦明;程媛媛;康恺;杨幼聪【摘要】[目的]建立新生山羊肾小管上皮细胞(Renal tubular epithelialcell,RTECs)的分离培养方法.[方法]采集刚出生未哺乳健康山羊的肾脏,分别采用胶原酶Ⅰ和胶原酶Ⅳ消化法分离培养RTECs,选择孔径0.15 mm的筛网对RTECs进行纯化,观察各组RTECs的生长情况;对分离的RTECs进行免疫组化和碱性磷酸酶染色鉴定,并进行透射电镜观察;用流式细胞仪检测RTECs的增殖周期和凋亡情况.[结果]胶原酶Ⅳ对RTECs的消化效果优于胶原酶Ⅰ,所得的细胞团块多,纯度高,细胞生长快,经孔径0.15 mm的筛网过滤后,RTECs的纯度达95%以上,并可连续传至第12代.分离获得的细胞经免疫组化法和碱性磷酸酶染色法鉴定呈阳性;透射电镜观察显示,细胞表面有微绒毛和桥粒连接.用流式细胞仪检测的结果显示,第4代新生山羊RTECs中G1期和S期细胞分别占细胞总数的25.01%和74.99%,G2/G1为1.97%,第10代细胞中G1期细胞和S期细胞均占50.00%,G2/G1为1.88%;第4代细胞的早期凋亡率在0.32%左右,而第10代可达3.7%,远高于第4代细胞.[结论]建立了增殖快、细胞活力高的山羊RTECs分离培养方法.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(039)004【总页数】6页(P1-6)【关键词】新生山羊肾小管上皮细胞;原代培养;酶消化;纯化【作者】向华;张彦明;程媛媛;康恺;杨幼聪【作者单位】西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100【正文语种】中文【中图分类】Q813.1+1人和多种动物的肾小管上皮细胞系已经建立，细胞在体外能够无限增殖，这为研究肾小管的生理和病理提供了材料[1-2]。

山羊输卵管上皮细胞的分离与培养

山羊输卵管上皮细胞的分离与培养李港;杨艳;王爱华;靳亚平;李倩【摘要】[目的]分离并培养山羊输卵管上皮细胞,研究其生长特性.[方法]采用胰酶、胶原酶及机械刮取方法分离输卵管上皮细胞并分析培养效果;选择免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定;向培养液中添加下丘脑粗提物、胰岛素、EGF和血清,探讨其对输卵管上皮细胞体外培养的影响.[结果]胰酶对山羊输卵管上皮细胞的分离效果较差.胶原酶次之,机械刮取方法较好.机械刮取法分离的细胞以细胞团居多,接种后8～12 h开始贴壁生长,生长2～3d细胞呈现明显的铺路石形态.免疫细胞化学染色显示,细胞角蛋白阳性率在95%以上.上皮细胞培养体系中含少量血清及人EGF、胰岛素,能有效促进原代和传代输卵管上皮细胞的生长,以体积分数5%血清+EGF的培养效果较好.[结论]采用机械刮取法分离培养的输卵管上皮细胞,在体外可连续传到第8代,传代细胞活性强、纯度高,可为输卵管上皮细胞相关功能的研究提供材料.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(038)006【总页数】7页(P71-76,82)【关键词】山羊;输卵管上皮细胞;胶原酶【作者】李港;杨艳;王爱华;靳亚平;李倩【作者单位】西北农林科技大学,动物医学院,农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物医学院,农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物医学院,农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物医学院,农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物医学院,农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室,陕西,杨凌,712100【正文语种】中文【中图分类】Q813.1+1卵母细胞体外成熟、体外受精(IVF)、体外生产胚胎，是动物胚胎工程研究的重要内容和关键环节；提高卵母细胞的体外成熟率和品质[1-2]、研究IVF胚胎的发育机理，是目前胚胎工程研究的一个重要领域。