提取组织DNA操作详解
提dna步骤及原理
提dna步骤及原理DNA提取是一种分离纯化DNA的过程，它可以用于分子生物学的各种实验和研究。
以下是DNA提取的步骤及原理：步骤1：细胞破碎首先，需要将目标细胞破碎以释放DNA。
这可以通过机械方式（如刮取细胞）或者化学方式（如孵育细胞在酶溶液中）来完成。
破碎细胞的目的是破坏细胞膜和核膜，释放DNA。
步骤2：细胞溶解接下来，要将破碎细胞中的蛋白质和其他细胞组分溶解。
这可以通过加入表面活性剂（如SDS）来破坏蛋白质的结构，使其变为可溶解状态。
细胞溶解的目的是除去蛋白质和其他细胞成分，保留DNA。
步骤3：蛋白质沉淀通过加入盐类，可以使DNA溶液中的蛋白质形成沉淀。
盐类中的离子与蛋白质形成复合物，使其聚集在一起并沉淀到溶液底部。
这一步的目的是除去大部分蛋白质，净化DNA溶液。
步骤4：DNA沉淀将溶液中的DNA沉淀到管壁上，可以通过加入酒精或其他有机溶剂来实现。
这些溶剂改变了DNA溶液的物理性质，使DNA变得不溶于水而沉淀。
这一步的目的是分离纯化DNA。
步骤5：洗涤和纯化DNA最后，通过洗涤沉淀的DNA，可以除去残留的盐类和其他杂质。
洗涤可以使用乙醇或其他缓冲液。
洗涤后，可以用缓冲液溶解DNA并进一步纯化。
DNA提取的原理是基于DNA和其他细胞成分的物理和化学特性的差异。
其中，细胞破碎和溶解步骤破坏了细胞膜和核膜，并释放了DNA。
蛋白质沉淀和DNA沉淀步骤利用了盐类和有机溶剂对不同分子的溶解性差异，将蛋白质和DNA分离。
洗涤步骤则进一步清洁和纯化DNA。
整个过程旨在从复杂的细胞混合物中分离纯化出DNA，以便在后续实验中进行分析和应用。
组织细胞DNA提取
组织/细胞DNA提取一．组织准备取10-20mg新鲜或解冻组织用PBS洗一下，用剪刀尽可能剪成碎块，对于一些坚硬组织也可以进行液氮研磨。
转移组织在 1.5ml微量离心管中再加入500ul预热的TNES （T:10mmol/LTris-HCl,N:NP40表面活性剂,E:1mmol/LEDTA;通过螯合金属离子配体抑制DNA酶的活性，S:1%SDS;离子型表明活性剂；①溶解细胞膜蛋白从而破坏细胞膜；②解聚细胞里的核蛋白；③与蛋白形成复合物）和10mg/mL3ul蛋白酶K(分解蛋白质，破坏细胞膜）。
颠倒混匀，放置55度孵育1-24h。
二．蛋白质沉淀1.先用离心机13000g离心8min，小心移取含DNA的上清液到新标记好的离心管中2.再加入500ul异丙醇，轻柔颠倒混合溶液直至形成白色线状DNA絮状物，再在离心机上13000g离心8min，弃掉上清（不要碰到白色沉淀）3.为了充分去除蛋白质，可用酚氯仿（苯酚：强蛋白变性剂&氯仿：蛋白变性剂，与水不溶，与苯酚互溶，可以带走残余的酚/能降低分子表明张力，减少抽提过程中泡沫的产生，同时有助于离心后保持三相稳定）进行第二次抽提：1）向弃上清后的离心管里加100ul DNA酶free H2O，再加100ul酚氯仿充分混匀2）在13000g离心8min小心移取上清液（最上层：水相；含DNA，中层：变性蛋白，下层有机溶剂相；含脂类杂质）到新标记的离心管4.再加入等体积500ul50%的异丙醇，上下翻转混合均匀，同样再13000g离心8min，小心弃去上清5.再加入1ml70%乙醇（洗涤可去除残余的盐离子）洗涤后13000g离心8min，弃掉上清。
然后瞬离一下，用针尖去尽多余液体，开盖挥干2min6.最后再加100-200ulDNA酶freeH2O ,55度溶解，测浓度。
ctab法提取dna流程
ctab法提取dna流程
CTAB法是一种有效的提取植物组织DNA的方法，它基于离子型表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)的使用。
此方法在提取高品质、高纯度DNA方面非常有效，并且适用于多种植物组织类型。
以下是CTAB法提取DNA的步骤：
1. 收集样品并切碎：将植物材料收集并切碎成小片或粉末。
最好在样品收集后立即进行，以确保样品的DNA质量。
2. 前处理：将样品加入含有CTAB溶液的离心管中，然后添加蛋白酶K、DTT和PEG。
该混合物将帮助去除植物样品中的蛋白质和碳水化合物。
3. 离心：将离心管放入离心机中，在高速离心下离心5-10分钟，以分离出DNA和其他细胞残留物。
4. 加入异丙醇：将异丙醇加入混合物中，沉淀DNA。
5. 洗涤：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀，去除杂质。
6. 溶解：将DNA沉淀用TE缓冲液溶解，保存在冰箱中。
以上是CTAB法提取DNA的基本步骤。
使用这种方法提取的DNA 可以用于PCR扩增、测序和其他分子生物学实验。
需要注意的是，使用CTAB法提取DNA时，最好在实验室的无尘环境中操作，并使用无菌器材和试剂。
此外，为了确保DNA的质量和完整性，最好避免反复冻融DNA样品。
- 1 -。
组织dna提取实验步骤
组织dna提取实验步骤-概述说明以及解释1.引言1.1 概述DNA提取实验是分子生物学中一项重要的实验操作，通过该实验可以从细胞或组织中提取出DNA分子，为后续的分子生物学研究提供基础材料。
DNA的提取可以应用于许多领域，如基因检测、遗传学研究以及犯罪调查等。
DNA提取实验通常包括几个关键步骤，包括实验准备、样品收集、细胞破碎和DNA提取步骤。
在实验准备阶段，我们需要准备所需的试剂、器材和实验条件等。
样品收集要求从既定的细胞或组织样品中采集到足够的细胞数量以及完整的DNA。
细胞破碎是为了破坏细胞膜，使DNA释放出来。
最后，通过一系列的化学处理和离心等步骤，可以得到纯净的DNA 样品。
DNA提取实验的成功与否对后续实验的结果具有重要影响，因此实验步骤的正确和严谨非常重要。
本文将详细介绍DNA提取实验的步骤及其操作要点，并对实验结果进行分析和讨论。
通过本实验的学习和掌握，读者将能够熟练进行DNA提取实验，并为科研工作和应用研究提供有力的支持。
总之，本文旨在介绍DNA提取实验的步骤和操作要点，帮助读者了解和掌握该实验的基本原理和操作流程，同时也展望了进一步的研究方向。
通过本文的学习，相信读者将能够更好地应用这一技术，为科研工作和生物学领域的发展做出贡献。
文章结构部分的内容如下:1.2 文章结构本文将按照以下结构进行撰写：1. 引言：首先对DNA提取实验的背景和意义进行概述，介绍该实验在生物学研究中的重要性和应用领域。
2. 正文：详细介绍组织DNA提取实验的步骤及各个步骤的操作方法和注意事项。
正文将包括以下几个部分：2.1 实验准备：介绍进行实验所需的器材和试剂准备工作，确保实验的顺利进行。
2.2 样品收集：说明如何选择合适的生物组织样品，并介绍收集样品的方法和注意事项。
2.3 细胞破碎：详细介绍如何破碎细胞以释放DNA，并介绍各种细胞破碎方法的选择和操作步骤。
2.4 DNA提取步骤：逐步介绍DNA提取的各个步骤，包括细胞裂解、蛋白质酶处理、DNA沉淀、洗涤和溶解等过程，重点强调每个步骤的关键操作和注意事项。
组织DNA的提取
组织DNA的提取
1.采集新鲜的组织样，用灭菌的镊子、剪刀将其剪碎，转移至1.5ml的离
心管中。
2.加入750µl组织裂解液及Rnase至终浓度为20µg/ml，置于37℃温育1 ～
2h。
3.再加入7.5µl的10mg/ml蛋白酶K（PEK）至终浓度为100µg/ml，充分
混匀，用封口膜封住，置于55℃水浴消化过夜，这期间将其取出轻摇几次，使沉淀块散开，以利酶解。
4.取出试样离心管，待溶液冷却至室温后，加入750µl的苯酚，缓慢地颠
倒离心管10min，直至两相混合形成乳浊液，12000g离心，10min。
5.取上清，再加入等体积苯酚，缓慢地颠倒离心管10min，12000g离心
10min。
6.取上清，加入等体积酚：氯仿，缓慢地颠倒离心管10min，12000g离心
10min。
7.取上清，加入等体积氯仿，缓慢地颠倒离心管10min，12000g离心10min。
8.取上清，加入2倍体积的无水冰乙醇沉淀DNA，缓慢地转动离心管，可
见白色DNA沉淀。
9.将DNA挑出放到1.5ml离心管中，或12000g10min，离心去上清，然后
加4℃预冷的70%乙醇洗两次，12000g离心10min，去上清。
10.将DNA干燥(注意不能太干燥)。
11.加适量TE溶解（100ul），电泳检测。
DNA提取方法和步骤
DNA提取方法和步骤DNA提取是生物学实验中常见的操作步骤，用于从细胞或组织中提取纯化DNA。
DNA提取的主要目的是获得纯净的DNA样品，以便进行后续的实验，如PCR、限制酶切、测序等。
下面我们将详细介绍DNA提取的方法和步骤。
1.细胞破碎：将待提取DNA的细胞或组织进行破碎，以释放细胞内的DNA。
细胞破碎的方法有很多种，包括机械破碎、酶解、热破碎等。
其中，常用的方法是机械破碎，如用搅拌器或超声波振荡器将样品强力搅拌或振荡，以破坏细胞膜和细胞壁。
2.蛋白质除去：细胞破碎后，通过蛋白酶的作用，将细胞内的蛋白质降解，并与蛋白质结合的DNA一同除去。
常用的蛋白酶有蛋白酶K、丝氨酸蛋白酶等。
需要注意的是，蛋白酶的适宜浓度和作用时间需要根据实验的要求进行优化。
3.DNA纯化：在蛋白质除去后，将细胞产生的碱基、RNA等杂质与DNA分离。
常用的纯化方法有酚/氯仿方法、盐方法和硅胶柱法等。
其中，酚/氯仿方法是最早被使用的DNA纯化方法，其基本原理是将DNA与蛋白质、RNA等杂质分离，从而得到纯净的DNA。
酚/氯仿方法的步骤如下：a.向破碎细胞溶液中加入等体积的酚/氯仿混合液，轻轻摇晃离心管混匀，使DNA分配在有机相和水相之间。
b.离心管在高速离心机中离心15分钟，使混合液分为有机相、界面层和水相三个层次。
c.使用移液器将上清液（水相）转移到新的离心管中，注意避免吸入有机相。
d. 向上清液中加入1倍体积的冰冷异丙醇（Isopropanol），使DNA沉淀。
使用移液器轻轻颠倒离心管使DNA沉淀。
e.在-20℃冷冻保存30分钟或在室温下沉淀15分钟，以便DNA更好地沉淀。
f.在高速离心机中离心DNA沉淀，沉淀时间约为10分钟，沉淀结束后将上清液倒掉。
g.用70%乙醇洗涤DNA沉淀，然后在室温下晾干。
h.使用适量的缓冲液（如TE缓冲液）重新溶解DNA。
4.DNA沉淀：将纯化后的DNA样品进行沉淀，以去除残留的盐、酚、异丙醇等。
植物dna提取方法
植物dna提取方法
提取植物的DNA可以通过以下几个步骤：
1. 植物材料准备：选择新鲜的植物组织，如叶片、茎、根或花朵。
使用刀片将组织切碎，将其放入离心管或试管中。
2. 细胞破碎：可以使用物理或化学方法将细胞破碎，以释放DNA。
常用的方法有研钵法、冻融法或特定的细胞破碎缓冲液。
3. DNA溶出：将细胞破碎液加入含有溶出缓冲液的试管中，使DNA从细胞中溶出。
溶出缓冲液通常含有EDTA、盐和洗涤剂等成分。
4. 蛋白质消化：加入蛋白酶K等蛋白质消化酶，去除DNA溶液中的蛋白质。
蛋白酶K可以在高温下活性化，并能降解多种蛋白质。
5. DNA沉淀：加入等体积的冷乙醇或异丙醇，使DNA分子沉淀。
可以通过离心沉淀DNA，并将上清液倒掉。
6. DNA纯化：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除杂质。
然后用适量的缓冲液重新溶解DNA。
7. DNA检测：可以使用紫外光谱仪或凝胶电泳等方法检测DNA的浓度和质量。
注意事项：
- 实验操作时应注意无菌条件，以避免污染。
- 建议在化学通风橱等无菌环境下进行DNA提取。
- 每个步骤中所用试剂和设备应事先消毒或经过无菌处理。
- DNA提取过程中应尽量避免DNA的降解，可以采取低温、迅速和轻柔的操作方式。
DNA提取方法
DNA提取方法材料和试剂：-需要提取DNA的样品（例如细胞、组织、血液等）- 细胞裂解缓冲液：含25 mM Tris-HCl（pH 8.0）、50 mM EDTA（pH 8.0）、1% SDS（溶液A）-NaCl溶液：5M-酚-氯仿-异戊醇混合物（溶液B）-无水乙醇-75%乙醇步骤：1.准备样品：根据需要提取的样品类型和数量，准备适量的细胞或组织样品。
注意保持样品的冷链和洁净。
2.细胞破碎：将样品加入一个离心管中，使用适当的方法破碎细胞膜，并释放DNA分子。
可以使用机械方法（如搅拌器、超声波器等）或化学方法（如酶解）来破碎细胞。
3.核酸溶解：向破碎的样品中加入适量的细胞裂解缓冲液（溶液A），彻底混合。
细胞裂解缓冲液中的SDS可以降解蛋白质并保护DNA不被降解。
4.清除蛋白质：向上述混合物中加入相同体积的酚-氯仿-异戊醇混合物（溶液B），轻轻颠倒混合，促使DNA和蛋白质分离。
这个混合物可以通过离心来分离为两个相。
5.分离DNA：将混合物离心约10分钟，离心后可以看到分离为上部红色相（含蛋白质）、中间白色相（含DNA）和下部无色相（含细胞碎片和胆固醇）。
6.收集DNA：使用移液器或管道将中间白色相（含DNA）转移至一个新的离心管中。
同时尽量避免带入上下两部分的液体。
7.沉淀DNA：加入等体积的无水乙醇，轻轻颠倒混合，使DNA沉淀出来。
也可以在室温下静置一段时间，帮助DNA沉淀。
8.洗涤DNA：使用75%乙醇洗涤沉淀的DNA，将其离心5-10分钟，去除乙醇。
9.干燥DNA：使用离心机将离心管倾斜，将剩余的乙醇去除，然后将离心管倒置，待DNA干燥。
10.溶解DNA：使用适量的纯净水或缓冲液溶解DNA，并储存于-20°C 的冰箱中，以避免DNA的降解。
DNA提取方法的关键是将DNA从其他细胞组分中分离出来，同时保护其完整性和纯度。
酚-氯仿法是一种常见的DNA提取方法，该方法简单、快速，适用于各种样品类型。
浅析DNA提取步骤及注意事项
浅析DNA提取步骤及注意事项DNA提取是分子生物学中的一个核心步骤，它涉及从生物样本中分离出DNA。
这个过程通常包括细胞裂解和核酸纯化两个主要阶段。
细胞裂解旨在破坏细胞膜和核膜，释放出DNA，而核酸纯化则是通过物理化学方法将DNA与其他细胞组分分离。
常用的DNA提取方法包括有机溶剂提取法、硅胶柱提取法和磁珠法。
在实际工作中，需要根据不同的样本类型和实验需求，选择不同的提取方法。
一、常见的DNA提取步骤（详细实验操作根据方法不同有所差异）1.细胞破碎：使用物理或化学方法破坏细胞膜和细胞壁，释放细胞内的DNA。
物理方法包括研磨、冻融循环等，化学方法包括使用去污剂（如SDS-十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K。
2.去除蛋白质和其他杂质：常用的方法包括酚氯仿抽提法、盐析法和使用硅胶柱层析法。
这些方法可以去除蛋白质、RNA和其他细胞组分，从而净化DNA。
3.DNA纯化：通过乙醇沉淀或使用硅胶柱等方法进一步纯化DNA，去除残留的杂质。
4.DNA浓缩：使用乙醇沉淀法或离心浓缩等方法将提取的DNA 浓缩到适宜的体积和浓度。
5.质量检测：通过紫外光谱吸收值（OD260/OD280比值）、凝胶电泳和qPCR等方法评估DNA的纯度和浓度。
二、特殊样本的提取方法对于特定类型的样本，如植物组织和血液，可能需要特别设计的提取方法。
例如，植物DNA提取中常用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵，Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide)法，该方法利用CTAB与核酸形成复合物，在低盐溶液中沉淀，而在高盐溶液中解离，从而分离DNA和多糖。
血液样本中的DNA提取则可能采用非离子变性剂NP40和蛋白酶K的组合来裂解细胞和去除蛋白质。
注意事项：在进行DNA提取时，应注意避免核酸酶污染，确保样品新鲜并妥善保存，避免反复冻融，以保证DNA完整性，以及严格按照协议操作以保证结果的一致性和可重复性。
优化提取条件、样本预处理、温度控制和充分混匀或使用专用试剂盒等策略可以提高提取的效率和质量。
dna提取实验步骤
dna提取实验步骤DNA提取是分子生物学中的一项重要实验技术，它可以从细胞中提取出DNA，并用于后续的分子生物学研究。
本文将介绍DNA提取的实验步骤。
一、实验前准备1.1 材料准备为了进行DNA提取实验，我们需要准备以下材料：- 细胞样本：可以是动物组织、细菌、植物组织等。
- 细胞裂解缓冲液：含有离子洗涤剂、蛋白酶K等。
- 高盐溶液：用于沉淀DNA。
- 各种浓度的酒精：用于沉淀DNA。
- 离心管、试管等实验器材。
1.2 实验环境准备- 实验室应保持清洁整洁，避免污染DNA样本。
- 使用无菌技术进行操作，避免外源DNA的污染。
二、细胞裂解2.1 细胞破碎将细胞样本放入离心管中，加入适量的细胞裂解缓冲液，用振荡器或超声波进行细胞破碎，使细胞膜破裂，释放出细胞内的DNA。
2.2 蛋白酶处理加入适量的蛋白酶K，使其降解细胞中的蛋白质，释放出DNA。
同时，离子洗涤剂可以使DNA保持在溶液中，避免沉淀。
三、DNA纯化3.1 加入高盐溶液为了沉淀DNA，需要加入高盐溶液。
高盐溶液中的离子浓度较高，可以与DNA中的离子结合，使DNA形成沉淀。
3.2 离心沉淀将样品离心，沉淀下的DNA会在离心管底部形成一个白色沉淀。
去除上层液体后，可以看到这个沉淀。
四、DNA沉淀4.1 加入酒精为了进一步沉淀DNA，可以加入适量的酒精。
酒精会使DNA分子凝聚在一起，形成可见的白色沉淀。
4.2 离心沉淀再次进行离心操作，将上层的液体去除后，可以看到沉淀。
注意，沉淀的DNA非常脆弱，操作时要轻柔避免破坏。
五、洗涤和溶解5.1 洗涤为了去除沉淀中的杂质，可以使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀。
将乙醇加入离心管中，轻轻摇晃，使DNA充分溶解。
5.2 溶解将洗涤后的DNA沉淀用适量的缓冲液溶解，使其完全溶解。
六、质量检测为了确保提取到的DNA质量良好，可以使用紫外可见光谱仪或凝胶电泳进行质量检测。
通过测量DNA的吸光度或检测DNA在凝胶上的迁移情况，可以评估提取到的DNA的纯度和完整性。
组织dna提取方法
组织dna提取方法
组织DNA提取的方法具体有以下几种常用的方法：
1. 高盐法（CTAB法）：该方法利用CTAB（羧甲基四甲基溴化铵）与DNA结合的能力，将DNA从细胞和细胞碎片中提取出来。
该方法适用于多细胞植物和真菌的组织。
2. 硅胶柱提取法：该方法通过将DNA溶解在Buffer AE（加醋酸和EDTA）中，然后使用硅胶柱将DNA与其他杂质分离。
硅胶柱提取法适用于多种样品类型，如细胞、组织和血液等。
3. 磁珠提取法：该方法利用具有亲和性的磁性珠子，结合特定的核酸结合剂，使DNA与磁珠结合。
然后利用磁力将磁珠与DNA分离，实现DNA的提取。
该方法适用于多种样本类型，如血液、唾液和组织等。
4. 酚/氯仿提取法：该方法通过加入酚/氯仿提取液，使DNA从细胞和细胞碎片中溶解，并通过酚和氯仿的加入和离心分离纯化DNA。
这种方法适用于多种样品类型，如细菌、真菌、植物和动物组织等。
需要根据实际样品类型的不同选择合适的提取方法，不同方法的选择也可能会根据研究目的和所需DNA的质量和纯度要求而有所不同。
提取dna的方法及步骤
提取dna的方法及步骤提取DNA的方法及步骤DNA（脱氧核糖核酸）是构成生物遗传信息的基本单位，因此，准确提取DNA样本是进行遗传研究、基因工程和犯罪侦查等领域的重要步骤。
以下将介绍几种常见的DNA提取方法及其步骤。
方法一：酚氯仿法酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，其步骤如下：1. 收集样本：可以是人体组织、血液、细胞培养物等。
确保样本新鲜，并避免受到污染。
2. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
3. 酚氯仿提取：将沉淀加入酚氯仿混合液中，轻轻混匀，并离心以分离DNA。
4. 沉淀DNA：将上清液转移到新的离心管中，加入冷乙醇沉淀DNA。
5. 洗涤：用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法二：盐析法盐析法是一种简单易行的DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
2. 盐析提取：加入高盐缓冲液使DNA与其他核酸和蛋白质分离。
3. 沉淀DNA：将上清液转移到新的离心管中，加入冷乙醇沉淀DNA。
4. 洗涤：用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除杂质。
5. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法三：硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
2. 硅胶柱处理：将细胞沉淀加入硅胶柱中，经过洗涤和离心，将DNA吸附在硅胶柱上。
3. 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤硅胶柱，以去除杂质。
4. DNA洗脱：加入低盐缓冲液，使DNA从硅胶柱上洗脱出来。
5. 洗涤：用70%乙醇洗涤洗脱后的DNA，以去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法四：酶解法酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
DNA提取(细胞组织)
细胞、组织基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）一、原理独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗—离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
二、注意事项1.所有离心步骤均在室温完成。
2.开始实验前将需要的水浴先预热55℃和70℃备用。
3.第一次使用前先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇。
三、操作步骤1.组织培养细胞①收集约105-106悬浮细胞到一个1.5ml离心管，对于贴壁细胞，应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。
②13000rpm离心10s，使细胞沉淀下来。
弃上清，留下细胞团和大约10-20μl残留的液体。
③加200μl缓冲液TB重悬洗涤细胞，重复②步骤，弃上清后将细胞重悬于200μl缓冲液TB中。
④加入200μl结合液CB，立刻剧烈颠倒轻摇充分混匀，加入20μl 蛋白酶K（20mg/ml）溶液，充分混匀，70℃放置10min。
⑤冷却后加入100μl异丙醇，颠倒轻摇充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
⑥将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）10000rpm离心30s，倒掉收集管中的废液。
⑦接步骤4继续。
2.动植物组织①将新鲜或者解冻的组织用解剖刀切成小块，或者在液氮中研磨成细粉后，取20-50mg组织细粉转入装有200μl组织裂解液TL的1.5ml离心管中，用大口径枪头吹打混匀。
②加入20μl的蛋白酶K（20mg/ml），剧烈颠倒轻摇充分混匀。
③将裂解物放置在55℃水浴一小时直到组织消化完全，轻柔振荡几次帮助裂解。
④加入200μl结合液CB，剧烈颠倒轻摇充分混匀，70℃放置10min。
⑤冷却后加入100μl异丙醇，剧烈颠倒轻摇充分混匀。
⑥用1ml枪头吸取部分上述混合物，可能有不溶组织物进入并堵住枪头，可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物，如果吸上来的混合物少可将枪头一起弃去。
组织DNA提取步骤说明书
组织DNA提取步骤1. 组织培养细胞1）收集细胞并转移到1.5ml 离心管中。
如果是贴壁细胞，收集前用胰蛋白酶消化。
2）13,000-16,000 x g 离心10 分钟沉淀细胞。
3）移弃上清，剩下沉淀和10-50ul 残留液体。
4）加入200ul PBS 清洗细胞。
按步骤1.2）, 离心并弃去PBS。
使用涡旋振荡器剧烈振荡使细胞重悬。
注释：有些细胞（比如PC12）在核细胞裂解液中裂解不够充分，对这样的细胞，在进行步骤1.5)之前，可按下面操作先进行冻融：按照步骤1.4)清洗细胞；随即在液氮中冷冻。
然后95oC 水浴融解细胞。
如此循环4 次。
5）加入600ul 核裂解液，反复吸放以裂解细胞，直到可见的细胞块消失。
6）非必须：向核裂解物中加入3ul RNA 酶溶液，颠倒离心管2-5 次混匀。
37oC 孵育15-30 分钟。
室温冷却5 分钟后再进行下一步操作。
7）向室温的样品中加入200ul 蛋白沉淀液并使用涡旋振荡器高速剧烈振荡20 秒钟。
然后置冰上冷却5 分钟。
8）13,000-16,000 x g 离心4 分钟，形成白色致密的蛋白沉淀。
9）在一个干净的1.5ml 小离心管中，加入600ul 室温异丙醇。
小心移取上步中的上清（含DNA）至此小离心管，不要吸到蛋白沉淀。
注释：为避免DNA 被蛋白污染，保留剩余上清，上清勿吸取得过于彻底。
10）轻轻颠倒混匀溶液，直至白色线状DNA 形成块状沉淀。
11）13,000-16,000 x g 室温离心1 分钟。
可见白色小块状DNA 沉淀。
小心弃去上清。
12）加入600ul 室温70%乙醇，轻轻颠倒离心管数次清洗DNA 沉淀，13,000-16,000 x g 室温离心1 分钟。
13）使用巴斯德吸管或测序加样枪头小心吸走乙醇溶液，此时DNA 沉淀十分松弛，需格外小心，避免将沉淀吸入管中。
14）将离心管倒置在干净的吸水纸上，自然干燥10-15 分钟。
15）向离心管中加入100ul DNA Rehydration Solution，65oC 孵育1 小时溶解DNA。
提取dna的实验操作方法
提取dna的实验操作方法
提取DNA的实验操作方法主要包括以下步骤：
1. 样本收集：收集所要提取DNA的生物样本。
常见的样本来源包括血液、唾液、细胞培养物、植物组织等。
2. 细胞破碎：将收集到的样本进行细胞破碎，使DNA释放出来。
常用的方法有物理破碎（如超声波破碎、酶解）和化学破碎（如细胞裂解液、洗涤液）等。
3. DNA溶解：将破碎后的细胞样本转移至含有盐和缓冲液的试管中，使DNA 溶解。
4. 蛋白质沉淀：加入蛋白酶K等蛋白质沉淀剂，将样品中的蛋白质去除。
5. DNA沉淀：加入过冷酒精或异丙醇等沉淀剂，使DNA凝结成白色絮状物，然后通过离心将DNA沉淀下来。
6. 洗涤：将沉淀下来的DNA进行洗涤，以去除杂质和残留的沉淀剂。
常用的洗涤缓冲液包括70%乙醇等。
7. 干燥和溶解：将清洗后的DNA样本用空气或真空干燥，然后用缓冲液或去离子水使其溶解。
8. 测定DNA浓度和纯度：使用分光光度计或其他的测定方法，测定提取到的DNA的浓度和纯度。
以上是提取DNA的基本实验操作方法，实际操作中可能会根据具体的实验目的和样本类型进行适当的调整和改进。
TRIZOl提取组织DNA详细步骤
Trizol提组织DNA按照RNA 分离操作方案在完全移去水样层后，匀浆中的DNA 存在于中间层和苯酚层中也可以被分离出来。
在沉淀和多次洗脱后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。
用TRIZOL试剂从组织和培养细胞中完全回收的DNA 可以用来做样品中DNA 含量的测定。
同时抽提的基因组DNA 可以用于对Northern analysis的结果进行标准化，因为DNA 变异程度比总RNA 或组织重量要小。
[由于来源的不同，所得到的DNA 沉淀在进一步应用前可能需要额外的纯化步骤（例如苯酚抽提等等）。
实验所需但试剂未提供的物品：* 酒精、* 0.1 M柠檬酸钠（用10%酒精配制）、* 75%酒精、8 mM NaOH 如无例外，以下操作均应在15―30℃下完成。
组织：研磨组织，每50-100mg组织加0.75ml trizol1.DNA 的沉淀移除中间层上残余的水样层，用酒精从中间层和苯酚层中沉淀DNA 。
按最初匀浆化时每1 ml TRIZOL加0.3 ml的无水乙醇，反复颠倒来混合样品。
然后将样品置于15―30℃下2―3分钟，再在2―8℃下以不超过2,000×g的离心力离心5分钟沉淀DNA 。
小心移除水样层对抽提的DNA 的质量至关重要。
2.DNA 的洗脱移除离心后苯酚层中的上清液，如有必要，可以将其保留用于抽提蛋白。
用0.1 M柠檬酸钠（用10%酒精配制）洗涤DNA 沉淀两次。
按最初匀浆化时每1 ml TRIZOL加1 ml柠檬酸钠溶液。
每次洗涤时洗涤液要和DNA 沉淀在15―30℃下作用30分钟（期间周期性混匀）再在2―8℃下以2,000×g的离心力离心5分钟。
在两次洗涤完成后，用75%的酒精重悬DNA 沉淀（每1 ml TRIZOL加1.5―2 ml75%酒精），在15―30℃下放置10―20分钟（期间周期性混匀）然后再在2―8℃下以2,000×g的离心力离心5分钟。
组织DNA提取
①首先将胚胎组织取出切碎，用ddH2O洗一下，吸干装入Eppendorf管中，加入2倍体积的组织裂解液（0．1M EDTA+0.25M Tris-Hcl）约500ul，再加入SDS（10%）至终浓度为0.5%，再加入蛋白酶K（20ug/ul）15ul，55℃消化过夜或消化彻底即可。
②在消化液中加入等体积的Tris饱和酚，缓缓颠倒Eppendorf管30min，4℃下，12000rpm离心10min。
然后将上层粘稠水相用尖端剪平的1ml tip头小心轻缓地移出，转入另一批Eppendorf管中，补加灭菌水至500ul。
（注意：吸出上清要小心动作应轻慢，尽量不要吸出中间蛋白层，另外，在离心后如果没有及时吸出上清，静置一定时间后，上清会变浑浊，只要再离心一会即可）。
③向水相中加入等体积酚/氯仿，抽提两次，每次均轻缓颠倒Eppendorf管25min，4℃下，12000rpm，离心10min。
直到向水相中加入酚/氯仿看不到白色云雾状物为止。
④向水相中加入等体积氯仿/异戊醇，轻轻颠倒Eppendorf管10min，4℃下，12000rpm离心10min，转移水相。
⑤向水相中加入2倍体积的-20℃无水乙醇，快速用力水平旋转离心管，直到白色丝状DNA，出现并充分析出，4℃下，12000rpm 离心10min，沉淀DNA，小心去上清。
然后再用1ml 4℃预冷的70%乙醇洗涤DNA沉淀一次，4℃，12000rpm离心5min，小心去上清（注意：此时DNA和管壁粘附不牢，易滑出，倾倒乙醇时要尽量小心，使DNA沉淀于管底）。
室温下使乙醇挥发干净，也可以55℃下干燥30min。
⑥视沉淀块加入50ul左右的灭菌双蒸水，于培养箱中55℃溶解2小时。
溶解后，4℃保存，长期保存-20℃。
组织DNA提取步骤
组织DNA提取步骤简单步骤一、组织准备将10-20mg新鲜或者解冻组织加入到600μl冷冻胞核裂解液中，匀浆10秒。
﹙也可使用10-20mg基本组织。
﹚65℃孵育15-30分钟。
二、溶解和蛋白沉淀1、细胞或者动物组织胞核裂解产物中加入3μl核糖核酸酶溶液，混合。
37℃孵育15-30分钟。
冷却至室温。
2、加入200μl蛋白沉淀液。
涡旋振荡并在冰上冷却5分钟。
3、13000-16000xg﹙微量离心机最大转速﹚离心4分钟。
三、DNA沉淀和再水化4、将上清转移至含有600μl室温异丙醇的新管中。
5、轻柔颠倒混合。
6、13000-16000xg离心1分钟。
7、去上清并加入600μl室温70%的乙醇。
混合。
8、13000-16000xg离心1分钟。
9、抽吸乙醇，风干颗粒15分钟。
10、在100μl DNA再水化液中65℃再水化DNA 1小时，或者4℃过夜。
具体步骤1、15ml的离心管加入600μl胞核裂解液，冰上冷却。
2、冷冻胞核裂解液中加入10-20mg新鲜或者解冻组织，小型匀浆机匀浆ml微量离心管中。
﹙也可选择，使用研钵或研杵研磨预先冷冻在液氮中的组织。
研磨后，液氮挥发，转移大约10-20mg基本组织到含有600μlml微量离心管中。
﹚3、65℃孵育裂解产物15-30分钟。
4、胞核裂解产物中加入3μl核糖核酸酶溶液颠倒离心管2-5次混合。
混合物37℃孵育15-30分钟。
下步之前样本冷却至室温5分钟。
5、冷却至室温的样本，加入200μl蛋白沉淀液，高速强力涡旋振荡20秒。
冰上冷却样本5分钟。
6、13000-16000xg离心4分钟。
沉淀的蛋白可形成一种致密的白色颗粒。
7、小心将含有DNA的上清转移至含有600μl室温异丙醇的1.5ml干净微量离心管。
﹙留下蛋白颗粒﹚注意：一些含有蛋白颗粒的上清可能仍留在原管中。
将这些残留液体留在原管中以免沉淀的蛋白污染DNA溶液。
8、轻柔颠倒混合溶液直到白色线状的DNA条带形成一种可见物。
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提取组织DNA
1.用液氮研磨一定量的组织（约绿豆大小），在研磨的过程中尽量不要让组织直接暴露于空气中，以免组织坏死，造成DNA降解。
2.将研磨好的组织粉末集中于一处，加入500ul STE将粉末覆盖（50ug/500ulSTE)。
3.待研钵中物质化为液体时，将其吸入到1.5ml EP管，再加入75ul 10% SDS和6ul 10mg/ul 的蛋白酶K(proteinase K），混匀后放入56℃水浴箱中。
4.待组织样本完全消化后，加入500 ul平衡饱和酚（Tris-HCl饱和重蒸酚，PH:8.0），颠倒混匀 5 min,在4℃台式高速离心机中以5000g/min离心5min,离心完全后吸取上清液放入新EP管。
5.重复步骤4。
6.在新的上清液中加入等体积的氯仿-异戊醇（体积比：24:1），颠倒混匀5min,在4℃台式高速离心机中以5000g/min 离心5min,离心完全后吸取上清液放入新EP管。
7.在EP管中加入1/10 体积的3mol/l 的NaAc 和2倍体积的冷无水乙醇，轻轻摇晃后放入-20℃冰箱，这时可看到絮状沉淀。
8.将静置后的液体在11000g/min 4℃10min 的条件下离心。
9.弃上清，加入1000ul 75％乙醇，将沉淀悬浮于乙醇中，然后在7500g/min 4℃5min 离心。
10.弃上清，将DNA沉淀晾干，以一定体积的TE溶解，一般以25-50ul TE溶解。
所需配制溶液
STE（1L):需要高压灭菌，PH:8.0,其实就是0.1mol/L的TE
●Tris base :1.21g(10mmol/L)
●EDTA:0.37g(1mmol/L)
●Nacl:5.84g(0.1mol/L)
TE(250ul)：需要高压灭菌，PH:8.0
●Tris base :0.30g(10mmol/L)
●EDTA:0.09g(1mmol/L)
10%SDS
●固体SDS 10g,加入灭菌水70ml溶解，最后用灭菌水定容至
100ml。
SDS是一种阴离子去污剂，可溶解细胞膜，裂解细胞，使蛋白质
变性、染色体解体。
实验原理:DNA以核蛋白的形式存在于细胞中，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类分离，又要保持DNA分子的完整。
SDS可以破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离；EDTA 可以抑制DNase活性，减少DNA降解。
分离出来的DNA用饱和酚抽提除去蛋白质，接着用氯仿-异戊醇除去DNA溶液中微量酚的污染，最后用无水乙醇沉淀DNA。
根据DNA在260nm处有一吸收峰，而蛋白质在280nm处有一吸收峰的原理，可测定A260nm/A280nm比值检测DNA的纯度，该比值接近1.8~2.0表示蛋白质的污染极少。
DNase需二价金属阳离子如Mg2+等的激活，可用EDTA等金属离
子螯合剂螯合Mg2+以抑制DNase的活性。
减少物理因素对DNA的降解，物理降解因素主要包括机械剪切力（如剧烈振荡、搅拌等），细胞突然置于低渗液中导致的细胞爆炸式破裂，DNase大量释放，样品反复冻融和高温等。
DNA的储存
储存溶液：DNA为两性解离分子，在碱性条件下较稳定，因此一
般用TE（pH8.0）保存。
TE的成分为：10 mM Tris-HCl（Tris与盐酸形成强的缓冲对）；1 mM EDTA（乙二胺四乙酸，能螯合二价金属
阳离子，抑制DNase的活性）；pH8.0（碱性条件可减少DNA的脱氨作用，防止降解）。
ddH2O的正常pH值为7.0，可作为DNA的储存液，但有些实验室制备的ddH2O呈酸性（pH值小于7.0），这不仅影响DNA的洗脱效率，而且导致长时间保存的DNA容易发生降解。
因此建议用TE作为DNA的长期储存液。
储存条件：为避免DNA降解，提取的DNA应先进行分装，然后置
于-20℃或-70℃保存，同时注意避免反复冻融造成DNA降解。