微生物12革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌

(三)临床意义
• 食物中毒
– 含菌量达105/g（ml)以上 –呕吐型——耐热肠毒素 – 腹泻型——不耐热肠毒素
• 心内膜炎、败血症和脑膜炎 • 夏、秋季多见
练习题
• 1、对炭疽病动物采集标本要特别禁止( A、取舌尖 B、取耳尖 • 2、下列哪种细菌的菌落为卷发状( ) A．蜡样芽胞杆菌 B．炭疽芽胞杆菌 C．白喉棒状杆菌 D．阴道加特纳菌 E．产单核李斯特菌 )
– 直接涂片 – 分离培养 – 毒力试验
1. 标本的采集
用无菌长棉拭子从疑为假膜的边缘采取分 泌物，也可采取鼻咽部或扁桃腺分泌物。作 培养时应在抗生素前采取，如不能立即送检， 应将标本浸于无菌生理盐水或15%甘油中，标 本应取双份。
2. 鉴定
• 直接涂片染色镜检
–革兰染色：观察形态、染色 –异染颗粒染色：观察异染颗粒 –初步报告：检出具有异染颗粒的革兰阳性杆菌
第十二 章
革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌
本章内容
• 革兰阳性无芽胞杆菌
– 白喉棒状杆菌 – 产单核细胞李斯特菌 – 红斑丹毒丝菌
• 革兰阳性需氧芽胞杆菌属
– 炭疽芽胞杆菌 – 蜡样芽胞杆菌
教学要求
• 掌握白喉棒状杆菌、炭疽芽孢杆菌生物学性状与 微生物学检验。
• 熟悉产单核细胞李斯特菌的生物学性状与微生物 学检查法。
（3）鉴定依据
• • • • 涂片染色和菌落特征 生化试验 青霉素抑菌试验 噬菌体裂解试验
将可疑菌落挑出，划线接种于普通营 养琼脂平板之上，在划线区内分别贴上浸 有诊断用炭疽芽孢杆菌噬菌体和青霉素的 纸片。37℃孵育过夜或24h后，在两种纸片 的周围均出现明显的抑菌环，便可判定为 炭疽芽孢杆菌。
1、形态与染色
• 致病菌中最大的G+杆菌，两端平切、竹节状、无 鞭毛，有毒株有明显荚膜， • 有芽胞——椭圆形，小于菌体，位于菌体中央
炭疽杆菌荚膜
2、培养特性
• 需氧或兼性厌氧，生长条件不严格； • 普通培养基：扁平、粗糙、不透明、灰白色、无 光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边缘呈 卷发状； • 血平板：12～15h不溶血，18～24h轻微溶血；
• 分离培养：同时接种血平板及吕氏斜面或亚碲酸 钾血平板
–吕氏斜面：生长迅速，涂片镜检异染颗粒明显
–亚碲酸钾血平板：黑色菌落
鉴定要点
• 革兰阳性，着色不均匀，菌体细长弯曲，排列不 规则，有X、V形态，具有异染颗粒
• 触酶阳性，无动力，无芽胞
• 吕氏血清斜面的菌落：灰白色、隆起、湿润
• 亚碲酸钾血平板的菌落：黑色或灰黑色
（二）微生物学检验
• 标本采集及处理 • 鉴定
– 标本直接检查 – 分离培养 – 鉴定依据 – 鉴别试验
1、标本采集及处理
• • • • • • 皮肤炭疽：病灶深部标本 肺炭疽：痰和血液 肠炭疽：粪、呕吐物 脑膜炭疽：CSF、血液 尽可能在抗生素治疗前采取标本 严禁用解剖方式获取标本。
2、 鉴定
电镜下的白喉杆菌
形态与染色
革兰染色白喉棒状杆菌
2. 培养特性：
本菌为需氧或兼性厌氧菌。对营养要求较严格， 在一般培养基上不生长。
在吕氏血清斜面上生长快，菌落为细小有光泽、 圆形、灰白色、凸起、光滑的菌落；涂片染色菌体 形态典型、异染颗粒明显。
在亚碲酸钾血平板上，可形成黑色或灰黑色菌 落。此培养基可作为选择和鉴定之用。
炎，败血症、心内膜炎
• 首选青霉素
第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属
• 炭疽芽胞杆菌 • 蜡样芽胞杆菌
ห้องสมุดไป่ตู้疽病疫情
• 据新华社电2011年8月 12日，从辽宁省卫 生厅获悉，辽宁鞍山海城市和岫岩县近日 发生的皮肤炭疽传染病疫情，截至11日20 时病例报告数已增至30例，其中临床确诊 病例3例，疑似病例27例，无死亡病例。 • 据调查，辽宁这次疫情是由于当地居民私 自屠宰或接触病牛而感染发生的
蜡样杆菌在血平板β溶血
蜡样杆菌普通平板菌落
3、生化反应
• 发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素等，产 酸不产气 • 不产生吲哚和硫化氢 • V-P（+）
（二）微生物学检验
• 标本：患者食物、呕吐物、剩余食物、腹泻粪便 • 鉴定
–直接涂片镜检 –分离培养 –活菌计数 ＞ 105个/g 或 ＞105个/ml –鉴定依据：菌落、形态染色、生化反应等
Elek平板试验结果
白喉杆菌菌苔
沉淀线(阳性)
含白喉抗毒素滤纸片
(2)动物试验
采用家兔皮内试验法。取待检菌的48h肉汤 培养液O．2ml，注射在去毛的一侧体壁皮内， 5h后注射500U白喉抗毒素血清，30min后再次注 射同样的培养液于动物去毛的另一侧体壁皮内 作为对照。经24—72h后，若注射抗毒素前接种 培养液的部位发生红肿与坏死，而对照部位不 发生任何变化，则说明待检菌株具有毒力。
噬 菌 体 斑
（4）鉴别试验
• 串珠试验 炭疽芽孢杆菌接种于含有0.05～ 0.5U/ml青霉素的培养基中，可发生形态变 异，形成大而均匀的圆球状并相连如串球 状，而类炭疽杆菌无此现象。
串珠试验
（三）临床意义
• 所致疾病：炭疽病 • 炭疽芽胞杆菌主要是牛、羊等食草类动物炭疽病 的病原体 • 炭疽病是人畜共患的急性传染病 • 传染源：患病食草动物及其制品或被污染物 • 传播途径：接触——皮肤炭疽 食用——肠炭疽 吸入——肺炭疽
• 肉汤：絮状沉淀生长
• 其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速
炭疽在普通平板的菌落
炭疽在血平板的菌落
炭疽杆菌卷发状菌落
3、生化反应
• 发酵葡萄糖、麦芽糖海藻糖等，产酸不产 气 • 硝酸盐还原试验阳性 • 不产生吲哚和硫化氢 • 枸橼酸盐、尿酶阴性
4、抵抗力
• 抵抗力不强，加热60℃ 30分钟死亡，易被一般消 毒剂杀灭； • 芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140℃ 3h才能 杀灭； • 芽胞在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致 病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数十年 • 生物武器
（1）直接镜检
• G+染色：G+大杆菌、两端平截、竹节状排列。 • 荚膜染色：有明显荚膜，有时呈S、T、O形排列。 • 芽胞染色：芽胞卵圆形，位于菌体中央，菌体不 膨大。
（2）分离培养
• 血平板上的菌落：较大、灰白色、边缘不整齐和 有轻微溶血。
• 普通营养琼脂平板的菌落：灰白色、扁平、干燥、 无光泽。 • 浸染严重标本，最好用选择性培养基（喷他脒多 粘菌素B培养基）。
毒力试验
• 人类临床标本中检出白喉棒状杆菌，并非 都能产生毒素，产生外毒素的菌株是由于 携带β -棒状杆菌噬菌体。可用 Elek 琼脂 扩散法体外试验或用动物体内毒力测定。
(1)琼脂平板毒力试验：
将含有20％牛血清肉汤琼脂注于平皿 中，将浸有lOOu／ml抗毒素血清的滤纸条 沉于琼脂内，在与滤纸条垂直方向将待检 菌划线接种，同时接种标准产毒株作为阳 性对照。37℃培养 24—48h，若菌苔两侧 出现斜向外侧延伸的乳白色沉淀线，并与 其邻近的标准产毒株的沉淀线相吻合，则 为产毒株。
• 了解红斑丹毒丝菌、蜡样芽胞杆菌的生物学性状 与微生物学检查
第一节 革兰阳性无芽胞杆菌
一、白喉棒状杆菌
（一 ）生物学特性
1. 形态结构：革兰氏染色阳性，菌体细长弯曲， 一端或两端膨大呈棒状，常排列呈V、L等文字 形。无鞭毛、无荚膜、无芽胞。用亚甲蓝或奈 瑟染色，菌体一端、两端或中央可见明显的浓 染颗粒，称为异染颗粒，主要成分是核糖核酸 和多磷酸盐。
（二）微生物学检验
–鉴定特点：G+杆菌，细菌在湿片中呈翻筋斗运 动
–倒伞形生长，在血平板上形成狭窄β -溶血环
–CAMP阳性，与金葡协同溶血阳性，木糖、甘露
醇、H2S（-）
（三）临床意义
• 李斯特菌属有7个种，只有该菌对人和动物致病 • 分布广泛，土壤、水、植物、人和动物粪便中均 存在，亦可自甲壳动物、蝇、蜱中分离出 • 能引起多种野生动物和家畜感染（羊、马、狗、 猫、鸟、鱼等）
（三）临床意义
• 传染源：患者或带菌者 • 致病物质：白喉外毒素（由携带β -棒状杆菌噬菌 体的白喉杆菌产生） • 经呼吸道飞沫感染，引起白喉。 • 假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因 • 中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因 • 抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用
二、产单核细胞李斯特菌
C、局部病灶的病变组织 D、宰杀后解剖
• 3、以下哪个不是炭疽芽胞杆菌的生物学特征( ) A、革兰阳性 B、菌体呈竹节状 C、专性需氧 D、感染后病死率不高 • 4、既有荚膜又有芽胞的细菌是( ) A、肺炎克雷伯菌 B、炭疽芽胞杆菌 C、枯草芽胞杆菌 D、蜡样芽胞杆菌 • 5、产单核李斯特菌在半固体培养基中培养可出现（ ） A、沉淀生长 B、浑浊生长 C、产生色素 D、倒伞形生长
• 生化反应：触酶（+），甲基红（+），VP（+）， CAMP（+），发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖等，产酸 不产气
（二）微生物学检验
• 标本采集：血液、脑脊液、分泌物及病变组织等 • 鉴定：
–直接涂片：脑脊液离心后取沉淀涂片，其它直接涂片
–分离培养：
• 脑脊液：血琼脂平板 • 血标本：增菌后，再接种血琼脂平板 • 咽拭子、组织和粪便等：接种于肉汤培养基中，置于 4℃冰箱中冷增菌，然后转种于血琼脂平板
（一）生物学特性 （二）微生物检验 （三）临床意义
（一）微生物特性
• 形态与染色：G+短小杆菌或球杆菌，常成双排列， 无芽胞
• 培养特性：最适30～37℃， 4℃能生长，在血琼 脂平板上，形成较小、圆形、光滑而有狭窄β -溶 血环的菌落，耐8.5%NaCl，半固体培养中动力阳 性（倒伞形，是本菌特征之一）。
皮肤炭疽
一、炭疽芽胞杆菌
• 炭疽芽胞杆菌是人类历史上最早被发现的 病原菌，俗称炭疽杆菌。是一种致病能力 最强的革兰阳性大杆菌。 • 芽孢：有些细菌(多为杆菌)在一定条件下, 细胞质高度浓缩脱水所形成的一种抗逆性 很强的球形或椭圆形的休眠体。
（一）微生物特性
• • • • 形态与染色 培养特性 生化反应 抵抗力
（三）临床意义
• 致病物质 – 荚膜：抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散 – 毒素：是致病和死亡的主要原因 • 对青霉素、红霉素、庆大霉素、氯霉素、链霉素、 环丙沙星均敏感，但对头孢菌素耐药。
二、蜡样芽孢杆菌
• 微生物学特性 • 微生物学检验 • 临床意义
（一）微生物学特性
• 形态与染色 • 培养特性 • 生化反应
1、形态与染色
• G+大杆菌，菌体两端稍钝圆，多数呈链状 排列。 • 无荚膜、有鞭毛（炭疽杆菌无鞭毛） • 芽胞位于菌体中心或次末端、不突出菌体
蜡样杆菌
2、培养特性
• 营养琼脂平板：菌落呈乳白色、不透明、边缘不 整齐，菌落常沿划线蔓延扩展成片如同白蜡 • 血平板：菌落呈浅灰色、毛玻璃样，伴草绿色溶 血或透明溶血环 • 卵黄培养基：培养3小时能看到白色混浊环，称之 为乳光反应 • 液体培养基：生长均匀，有菌膜
在麦康凯平板上不生长。
亚碲酸钾血平板菌落：
3. 生化反应
–发酵葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气。
–触酶和硝酸盐还原试验阳性，氧化酶阴性。
–不分解尿素，不产生吲哚。
4. 抵抗力
对热抵抗力不强，煮沸1分钟死亡。对干燥、 寒冷和日光的抵抗力较其他无芽胞细菌强，对 一般消毒剂敏感。
（二）微生物学检验
• 标本的采集 • 鉴定
（二）微生物学检查
• 标本：血液、分泌物、渗出液 • 鉴定： （1）直接涂片镜检：G+短小杆菌 （2）分离培养： 35℃培养24h形成S和R两种菌落，明胶穿 刺接种可见“试管刷”样生长。
（3）生化反应：触酶（-），乳糖（+），三糖铁产H2S
（三）临床意义
• 红斑丹毒丝菌病病原体
• 鱼类、家畜、家禽、兔类 • 经皮肤感染 • 局部感染多见，很少引起全身感染 • 症状：红肿、疼痛、痒，高热，淋巴管炎，关节
三、红斑丹毒丝菌
• 生物学性状 • 微生物学检查 • 临床意义
（一）生物学性状
• 形态与染色：G+短小杆菌 • 培养特性：需氧或兼性厌氧，最适温度30 ~35℃，pH 7.2~7.4,耐8.5%NaCl， 35℃培养24h形成S和R两种菌落，
S型细菌呈杆状或球杆装，R型细菌呈长丝状，明胶穿刺
呈“试管刷”样生长。 • 生化反应：触酶、氧化酶（-），乳糖、甲基红、V-P、靛 基质、尿酶（-），三糖铁产H2S。
• 正常人粪便带菌率达10%左右，70%的人可短期带 菌。新生儿、免疫功能降低者，易受该菌感染
（三）临床意义
• • • • • 健康带菌者是主要的传染源 污染食物，粪-口途径传播，通过肠道扩散全身 胎盘和产道——感染新生儿（脑炎、脑膜炎、败血症） 接触病畜及产品——眼和皮肤的局部感染、脓肿、尿道炎 氨基糖苷类抗生素可增强青霉素的抗菌活性，但头孢类不 能用于此菌的临床治疗