凝胶色谱柱
凝胶色谱柱
装柱由于凝胶的分离是靠筛分作用，所以凝胶的填充要求很高，必须要使整个填充柱非常均匀，否则必须重填。
凝胶在装柱前，可用水浮选法去除凝胶中的单体、粉末及杂质，并可用真空泵抽气排出凝胶中的气泡。
最好购买商品中的玻璃或有机玻璃的凝胶空柱，在柱的两端皆有平整的筛网或筛板。
将柱垂直固定，加入少量流动相以排除柱中底端的气泡，在加入一些流动相于柱中约1/4的高度。
柱顶部连接一个漏斗，颈直径约为柱颈的一半，然后在搅拌下、缓慢的、均匀地、连续地加入已经脱气的凝胶悬浮液，同时打开色谱柱的毛细管出口，维持适当的流速，凝胶颗粒将逐层水平式上升，在柱中均匀地沉积，直到所需高度位置。
最后拆除漏斗，用较小的滤纸片轻轻盖住凝胶床的表面，再用大量洗脱剂将凝胶床洗涤一段时间。
3、柱均匀性检查凝胶色谱的分离效果主要决定于色谱柱装填得是否均匀，在对样品进行分离之前，对色谱柱必须进行是否均匀的检查。
由于凝胶在色谱柱中是半透明的，检查方法可在柱旁放一至于柱平行的日光灯，用肉眼观察柱内是否有“纹路”或气泡。
也可向色谱柱内加入有色大分子等，加入物质的分子量应在凝胶柱的分离范围，如果观察到柱内谱带窄、均匀、平整，即说明色谱柱性能良好；如果色带出现不规则、杂乱、很宽时必须重新装填凝胶柱。
4、上样凝胶柱装好后，一定要对柱用流动相进行很好的平衡处理，才能上样。
凝胶柱的上样也是一个非常重要的因素，总的原则是要使样品柱塞尽量的窄和平整。
为了防止样品中的一些沉淀物污染色谱柱，一般在上柱前将样品过滤或离心。
样品溶液的浓度应该尽可能的大一些，但如果样品的溶解度与温度有关时，必须将样品适当稀释，并使样品温度与色谱柱的温度一致。
当一切都准备好后，这时可打开色谱柱的活塞，让流动相与凝胶床刚好平行，关闭出口。
用滴管吸取样品溶液沿柱壁轻轻地加入到色谱柱中，打开流出口，使样品液渗入凝胶床内。
当样品液面恰与凝胶床表面平时，再次加入少量的洗脱剂冲洗管壁。
重复上述操作及此，每一次的关键是既要使样品恰好全部渗入凝胶床，又不致使凝胶床面干燥而发生裂缝。
凝胶色谱柱的基本介绍
凝胶色谱柱的基本介绍凝胶色谱柱是一种广泛应用于生物化学和生物分析领域的柱层析技术。
它通过利用物质在固定在凝胶柱上的多孔材料中的分配和排除效应来实现对样品分离和纯化的目的。
凝胶柱的填料通常由交联聚合物或生物高分子构成，如琼脂糖、琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶等。
凝胶色谱通过控制样品溶液中的分子在柱体高度约束的情况下，根据分子大小、形状、电荷等性质的差异进行分离。
下面将对凝胶色谱柱的原理、种类和应用进行详细介绍。
凝胶色谱柱的原理基于分子在凝胶填料中的扩散速率的不同。
凝胶填料的多孔结构提供了大量的吸附位点，使得分子可以在填料内部进行扩散。
分子越大，扩散速率越慢，因此会在柱层析过程中停留更长的时间，从而迟滞分离。
与此同时，分子的外部特性也会影响到在凝胶填料中的分配。
例如，根据一个分子的电荷状态（阳离子或阴离子）以及其与填料表面之间的相互作用，分子可能会快速进入或迅速排除凝胶材料中。
根据凝胶色谱柱的填料材料的不同，凝胶色谱柱可以分为凝胶滤析柱和凝胶排阻柱两种主要类型。
凝胶滤析柱是利用分子的大小差异进行分离的。
其中，琼脂糖滤析柱是最常见的滤析柱之一、琼脂糖是一种天然生物高分子，具有多孔结构。
样品溶液在柱体中通过扩散和龋流，大分子会被限制在空隙较小的凝胶颗粒中间，分子量较小的则会通过凝胶颗粒的孔隙流出柱底。
由于分子重量的差异，样品中的分子将根据其大小被分离。
凝胶排阻柱是利用分子的大小和形状差异进行分离的。
其中最常见的是聚丙烯酰胺凝胶排阻柱。
这种柱材具有均匀的孔隙结构，使得分子可以自由扩散。
大分子由于体积大、形状复杂，会更慢地扩散，而小分子由于体积小、形状简单，会更快地穿过凝胶孔隙，从而实现了分离纯化目标。
凝胶色谱柱具有以下几个优点。
首先，它可以在温和的条件下进行分离，无需高压条件，从而保持样品的完整性。
其次，凝胶色谱柱可用于分离和纯化广泛的生物分子，如蛋白质、多肽、核酸等。
此外，凝胶色谱技术简单易行，操作方便，成本相对较低。
g-10葡聚糖凝胶色谱柱使用
g-10葡聚糖凝胶色谱柱使用
G-10葡聚糖凝胶色谱柱是一种常用的分离和纯化生物大分子
的柱子，特别适用于分离寡聚糖和多糖混合物。
该柱子采用葡聚糖作为固定相，具有一定的孔隙大小和分子筛效果。
G-10葡聚糖凝胶色谱柱通常用于分离多糖、寡糖和其他大分
子化合物。
在使用之前，需要将柱子进行激活和平衡，具体步骤如下：
1. 将G-10葡聚糖凝胶色谱柱放入柱子支撑架上，并连接到色
谱系统上。
2. 将适当的缓冲液（如适应于样品的缓冲液）通过柱子进行激活，以去除可能存在的杂质和污染物。
3. 进行柱子平衡：将适当的缓冲液通过柱子流经，直到柱子和系统达到平衡状态。
4. 加载样品：将待分离的样品按照柱子载样方法加载到柱子上。
5. 进行色谱分离：根据需要，控制缓冲液的流速和浓度梯度，使待分离的目标化合物在柱子上进行分离。
6. 收集分离物：根据其他方法（如按时间段收集、检测波长等）进行分离物收集和检测。
值得注意的是，G-10葡聚糖凝胶色谱柱通常用于相对较小的
生物大分子分离，如寡聚糖和多糖，对于更大分子的分离可能需要使用其他类型的色谱柱。
此外，在操作过程中需要根据具体样品的特性和需要进行柱子条件的调整。
凝胶渗透色谱柱安全操作及保养规程
凝胶渗透色谱柱安全操作及保养规程凝胶渗透色谱柱是生物分离和纯化中常用的工具。
为了确保设备的正常运转和用户的人身安全，本文将介绍凝胶渗透色谱柱的安全操作和保养规程。
一、准备工作在进行凝胶渗透色谱柱分离和纯化实验之前，需要做好以下工作：1.确认实验室内的安全防护措施是否齐全，并穿好防护衣物和手套等个人防护用品。
2.检查凝胶渗透色谱柱是否完好，特别是注意检查接口处是否有裂纹或断裂，如果有需要及时更换。
3.检查色谱柱的滤芯是否清洁，如有需要就更换滤芯。
4.将凝胶渗透色谱柱安装在色谱柱支架上，并连接好色谱柱两端的管道，确保管道连接处紧密无漏。
二、样品制备在进行凝胶渗透色谱柱分离和纯化实验前，需要对样品进行处理，一般包括以下步骤：1.样品离线浓缩：使用超滤器等离子体固定离子将样品离线浓缩。
2.样品调整：将调整剂或洗涤剂加入到样品中，以调整样品的pH值，离子强度等参数。
3.样品过滤：通过微孔过滤器将样品进行过滤，以去除悬浮粒子和杂质。
4.样品冷藏：将处理好的样品放入低温冰箱中冷藏，以方便后续实验操作。
三、凝胶渗透色谱柱的操作步骤1.开始操作前需要进行预流洗操作，在预流洗中需要使用上述处理好的样品进行洗涤，并进行管道空气排除操作，这样可以确保色谱柱和管道内都没有气泡和空隙。
2.样品进样：将经处理好的样品注入色谱柱的进样口，并进行样品的压力调节操作，确保样品在色谱柱内的流动状态符合要求。
3.分离纯化：根据实验要求，进行分离纯化等操作。
4.实验结束后，要进行终流洗操作，将色谱柱内的样品和膜材洗净。
注意，在操作过程中要对色谱柱和管道进行清洗和消毒处理，以防止实验中残留物质的影响。
四、凝胶渗透色谱柱的保养规程1.对于已经使用过的凝胶渗透色谱柱，需要进行周全的清洁和消毒处理，以消除污垢和杂质，并防止细菌生长。
2.长期闲置的凝胶渗透色谱柱需要进行密封存放，以防止附着微生物和灰尘等影响。
3.对色谱柱的使用寿命要进行控制和管理，定期进行检查和更换，避免老化和磨损等问题带来的影响。
凝胶过滤色谱柱说明
rat liver microsome
Elution : (0.2mol/l sodium chloride +20%glycerol +
octaethyleneglycol dodecylether) in 50mmol/l
phosphate buffer,ph 7.0. Note : concentration
2008 -12 volume 15
Applications of TSK-GEL SW-type Gel Filtration columns
Higher resolution with 5um TSK-GEL SWXL compared with 10um TSK-GEL SW columns
Separation of membrane protein by SEC with different surfactant concentration in the eluent
Column : TSKgel G3000SW ,7.5mm ID*60cm
Sample : Membrane protein from a crude extract from
Separation of crude protein samples on TSKgel G3000SWxl.
Column : Sample:
Elution : Flow Rate ; Detection : Recovery :
TSK gel G3000SWXL,5um,7.8mm ID *30cm A. crude peroxidase from Japanese radish, 0.15mg in 0.1ml B. crude glutathione S-transferase from guinea pig liver extract ,0.7mg in 0.1ml 0.3mol/l NaCL in 0.05mol/l phosphate buffer ,ph 7 1.0ml/min
凝胶色谱柱和c18色谱柱
凝胶色谱柱和c18色谱柱
凝胶色谱柱和C18色谱柱是两种常用的色谱柱，它们在分离和纯化蛋白质、多肽和其他生物分子方面具有重要作用。
1. 凝胶色谱柱：
凝胶色谱柱的核心是凝胶颗粒，这些颗粒是多孔的，具有很高的表面积。
这些颗粒的孔径大小不一，大分子会进入小孔，而小分子则会进入大孔。
因此，不同大小的分子会以不同的速度通过凝胶色谱柱，从而实现分离。
凝胶色谱柱主要用于蛋白质、多肽、核酸等生物分子的分离和纯化。
由于其具有高分辨率和高效率，凝胶色谱柱已成为生物化学实验室的必备设备。
2. C18色谱柱：
C18色谱柱是一种常用的反相色谱柱，它以C18硅胶为基质，通过键合相技术将C18链固定在硅胶表面。
由于C18键合相具有亲脂性，因此C18色谱柱对脂溶性化合物具有很好的保留能力。
C18色谱柱主要用于分离和纯化脂溶性化合物，如脂溶性维生素、甾醇、类胡萝卜素、农药残留物等。
此外，C18色谱柱也可用于分离肽类、蛋白质等生物分子。
总之，凝胶色谱柱和C18色谱柱在分离和纯化生物分子方面具有重要作用。
选择哪种色谱柱取决于要分离的物质类型和实验条件。
lh20凝胶色谱柱和反相分离色谱柱作用原理
lh20凝胶色谱柱和反相分离色谱柱是色谱技术中常用的两种柱子，它们在不同的色谱分离应用中有着不同的作用原理。
本文将就这两种色谱柱的作用原理进行介绍，希望能帮助读者更好地理解和应用这两种色谱柱。
一、lh20凝胶色谱柱的作用原理1. 凝胶色谱柱的基本原理lh20凝胶色谱柱是一种基于凝胶质量法的色谱柱，其中凝胶是由多孔性的颗粒组成。
样品在凝胶柱中进行分离时，会根据分子大小和形状的不同，在柱子中以不同的速率迁移，从而实现分离。
2. 凝胶的选择和使用在使用lh20凝胶色谱柱时，需要选择合适的凝胶填料，并且注意填充柱子的密实度和均匀性，因为这些因素会直接影响到样品的分离效果。
3. 应用范围lh20凝胶色谱柱在生物分子分离、天然产物提取和纯化等方面有着广泛的应用，尤其适用于大分子的分离和富集。
二、反相分离色谱柱的作用原理1. 反相分离的基本原理反相分离色谱柱是一种利用非极性固相(如疏水性烷基链)来与样品中的非极性成分进行相互作用，从而实现分离的色谱柱。
当样品进入反相分离色谱柱时，非极性成分会优先和固相发生相互作用，从而被延迟迁移，而极性成分则会被更快地输运，实现了分离效果。
2. 固相的选择和使用在使用反相分离色谱柱时，选择合适的反相填料对样品的分离效果至关重要。
也需要注意溶剂的选择和梯度的设置，在实践中不断优化反相色谱条件，以实现更好的分离效果。
3. 应用范围反相分离色谱柱广泛应用于化学、生物、制药等领域，尤其对有机小分子的分离和纯化有着重要的作用。
三、lh20凝胶色谱柱和反相分离色谱柱的比较与应用1. 分离效果的比较lh20凝胶色谱柱适用于大分子生物分子的富集和纯化，而反相分离色谱柱则更适用于有机小分子的分离和纯化。
在选择色谱柱时，需要根据样品的特性和需求来进行选择，以获得最佳的分离效果。
2. 应用案例在生物医药领域，lh20凝胶色谱柱常用于蛋白质和核酸的富集和纯化，而在药物分析和制造领域，反相分离色谱柱则常用于药物成分的分离和纯化。
凝胶色谱柱的基本介绍
目录1凝胶色谱2分类3分子筛效益4凝胶种类及性质5填料合成技术6实验技术凝胶色谱高温凝胶色谱仪凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。
凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。
凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。
目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。
分类根据分离的对象是水溶性的化合物还是有机溶剂可溶物，凝胶色谱又可分为凝胶过滤色谱（GFC）和凝胶渗透色谱（GPC）。
凝胶过滤色谱一般用于分离水溶性的大分子，凝胶过滤色谱柱如多糖类化合物。
凝胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂主要是水。
凝胶渗透色谱法主要用于有机溶剂中可溶的高聚物 (聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等) 相对分子质量分布分析及分离，常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶，洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。
凝胶色谱不但可以用于分离测定高聚物的相对分子质量和相对分子质量分布，同时根据所用凝胶填料不同，可分离油溶性和水溶性物质，分离相对分子质量的范围从几百万到100以下。
近年来，凝胶色谱也广泛用于分离小分子化合物。
化学结构不同但相对分子质量相近的物质，不可能通过凝胶色谱法达到完全的分离纯化的目的。
分子筛效益一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。
大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。
小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。
凝胶色谱柱
凝胶色谱柱1. 引言凝胶色谱是一种常用的分离和纯化生物大分子的方法之一。
凝胶色谱柱是凝胶色谱的核心部分，被广泛应用于生物分析和制药工业。
2. 凝胶色谱柱的原理凝胶色谱柱是一种由多孔材料制成的柱子，多孔材料通常是由高分子聚合物构成的凝胶（如琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶）。
凝胶色谱柱通过孔隙大小的选择性分离溶液中的生物分子。
凝胶色谱柱的分离原理是根据生物分子在凝胶中的分子大小差异进行分离。
当溶液经过凝胶色谱柱时，大分子无法进入较小的孔隙，因此较大的分子会比较快地通过柱子，而较小的分子会被凝胶柱内的孔隙所捕获，使其在柱中停留更长的时间。
3. 凝胶色谱柱的类型凝胶色谱柱可以根据不同的凝胶材料和孔隙大小进行分类。
目前常用的凝胶色谱柱主要包括以下几种类型：•分子筛色谱柱：适用于分离分子量较小的生物大分子，如小型蛋白质和核酸。
•聚丙烯酰胺凝胶柱：适用于分离中等分子量的生物大分子，如中型蛋白质和寡核苷酸。
•琼脂糖凝胶柱：适用于分离大分子量的生物大分子，如大型蛋白质和多聚核苷酸。
•离子交换色谱柱：根据样品的电荷性质进行分离，适用于带电的生物大分子。
4. 凝胶色谱柱的应用凝胶色谱柱广泛应用于生物科学研究和制药工业。
以下是凝胶色谱柱常见的应用领域：•蛋白质纯化：凝胶色谱柱可用于分离和纯化复杂的蛋白质混合物。
•核酸分析：凝胶色谱柱可用于分离和纯化DNA、RNA和寡核苷酸。
•生物药物制造：凝胶色谱柱可用于生物药物的分离、纯化和检测。
•病原体检测：凝胶色谱柱可用于分离和检测病原体，如病毒和细菌。
5. 凝胶色谱柱的操作注意事项使用凝胶色谱柱时需要注意以下几点：•预处理：在使用凝胶色谱柱之前，需要进行柱子的预处理，如洗涤和平衡，以保证柱子的稳定性和分离效果。
•样品加载量：要根据样品的性质和要求确定加载量，过高的加载量可能会影响柱子的分离效果。
•柱温控制：柱子的温度会影响分离的速度和效果，需要根据实验要求进行温度控制。
•溶液选择：柱子的分离效果受溶液 pH 值和离子强度的影响，选择适当的溶液条件可以优化分离效果。
凝胶色谱柱操作
凝胶色谱柱操作1、溶胀商品凝胶是干燥的颗粒，通常以40~63um的使用最多。
凝胶使用前需要在洗脱液中充分溶涨一至数天，如在沸水浴中将湿凝胶逐渐升温到近沸，则溶涨时间可以缩短到1~2小时。
凝胶的溶涨一定要完全，否则会导致色谱柱的不均匀。
热溶涨法还可以杀死凝胶中产生的细菌、脱掉凝胶中的气泡。
2、装柱由于凝胶的分离是靠筛分作用，所以凝胶的填充要求很高，必须要使整个填充柱非常均匀，否则必须重填。
凝胶在装柱前，可用水浮选法去除凝胶中的单体、粉末及杂质，并可用真空泵抽气排出凝胶中的气泡。
最好购买商品中的玻璃或有机玻璃的凝胶空柱，在柱的两端皆有平整的筛网或筛板。
将柱垂直固定，加入少量流动相以排除柱中底端的气泡，在加入一些流动相于柱中约1/4的高度。
柱顶部连接一个漏斗，颈直径约为柱颈的一半，然后在搅拌下、缓慢的、均匀地、连续地加入已经脱气的凝胶悬浮液，同时打开色谱柱的毛细管出口，维持适当的流速，凝胶颗粒将逐层水平式上升，在柱中均匀地沉积，直到所需高度位置。
最后拆除漏斗，用较小的滤纸片轻轻盖住凝胶床的表面，再用大量洗脱剂将凝胶床洗涤一段时间。
3、柱均匀性检查凝胶色谱的分离效果主要决定于色谱柱装填得是否均匀，在对样品进行分离之前，对色谱柱必须进行是否均匀的检查。
由于凝胶在色谱柱中是半透明的，检查方法可在柱旁放一至于柱平行的日光灯，用肉眼观察柱内是否有纹路”或气泡。
也可向色谱柱内加入有色大分子等，加入物质的分子量应在凝胶柱的分离范围，如果观察到柱内谱带窄、均匀、平整，即说明色谱柱性能良好；如果色带出现不规则、杂乱、很宽时必须重新装填凝胶柱。
4、上样凝胶柱装好后，一定要对柱用流动相进行很好的平衡处理，才能上样。
凝胶柱的上样也是一个非常重要的因素，总的原则是要使样品柱塞尽量的窄和平整。
为了防止样品中的一些沉淀物污染色谱柱，一般在上柱前将样品过滤或离心。
样品溶液的浓度应该尽可能的大一些，但如果样品的溶解度与温度有关时，必须将样品适当稀释，并使样品温度与色谱柱的温度一致。
凝胶色谱柱交联度
凝胶色谱柱交联度是指凝胶色谱柱中聚合物分子之间的连接程度。
交联度越高，聚合物分子之间的连接越紧密，形成的网状结构越稳定，孔隙越小，对样品的分离效果越好。
在凝胶色谱中，交联度是一个重要的参数，它直接影响到色谱柱的性能。
交联度的选择需要根据待分离样品的性质和目标来进行。
一般来说，对于大分子量的样品，需要选择交联度较高的色谱柱；而对于小分子量的样品，则需要选择交联度较低的色谱柱。
交联度的测定方法主要有以下几种：
1. 溶胀法：将一定量的凝胶放入已知体积的溶剂中，使其充分溶胀后，测量其体积和重量，然后计算其溶胀比，从而得到交联度。
2. 渗透法：通过测量凝胶在不同浓度溶液中的渗透压，可以计算出其孔隙大小和交联度。
3. 膨胀计法：通过测量凝胶在不同温度下的体积变化，可以计算出其孔隙大小和交联度。
4. 红外光谱法：通过测量凝胶的红外光谱，可以得到其化学结构和交联度。
5. X射线衍射法：通过测量凝胶的X射线衍射图谱，可以得到其晶体结构和交联度。
凝胶过滤色谱柱 色谱柱操作规程
凝胶过滤色谱柱色谱柱操作规程凝胶过滤色谱柱用于体积排阻层析体积排阻，也叫凝胶过滤,依据物质尺寸大小的不同分别。
假如分子的尺寸大于树脂的最大孔径，这种分子就不能进入树脂颗粒内部，它所经过的有效体积最小，最早从洗脱液中流出。
凝胶过滤色谱柱用于体积排阻层析体积排阻，也叫凝胶过滤,依据物质尺寸大小的不同分别。
假如分子的尺寸大于树脂的最大孔径，这种分子就不能进入树脂颗粒内部，它所经过的有效体积最小，最早从洗脱液中流出。
而小分子能够进入树脂的孔道中，经过的有效体积比较大，从洗脱液中流出较晚，分子量越小，流出越晚。
体积排阻层析可以用于纯化的第一步，按分子量大小将产品粗分；也可以用作纯化的中心步骤来改换缓冲液或脱盐，或用于纯化的最后一步来去除杂质，精制产品。
体积排阻层析树脂有预先设定的排阻极限，排阻极限由树脂本身的最大孔径和孔径分布范围决议。
MKF有机凝胶型大孔填料规格有：7—10μm超细颗粒，具有很高的辨别率；20μm，40μm中等颗粒，用于制备型的纯化步骤；60—80μm较粗颗粒，用于经济型制备的纯化步骤；100—150μm粗颗粒，用于产物的大规模捕获。
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当色谱柱使用一段时间以后，柱内由于各种原因，滞留了一些高沸点组分或氧化物等，除柱效有所下降外，还可能显现基线波动或“鬼峰”。
为了去除污染物，使柱效和基线恢复到原来的状态，称为色谱柱的再生。
色谱柱的再生和柱老化有确定区分和不同，它是柱在使用一段时间柱性能下降，经处理后尽量恢复到原来性能的过程。
A、色谱柱在以下几种情况必需再生处理a.使一段时间，柱效明显下降；b.柱被污染，特别是在程序升温时，基线漂移和噪声超过容忍程度或显现“鬼峰”；c.柱头塌陷，柱床短路或断位（在玻璃柱中简单发觉），而显现尖峰或双重峰；d.峰形展宽，保留时间明显变化；e.待分别组分和固定相表面非特异性相互作用，引起保留时间较短的峰拖尾或显现双峰；B、毛细管柱再生的几种方法a.用载气将色谱柱污染物冲洗出来；b.将柱头截去100mm 或更长一些；c.若使用交联的色谱柱，可在仪器上反复注射溶剂进行冲洗。
常用的凝胶色谱柱
常用的凝胶色谱柱常用的凝胶色谱柱有以下几种：1. Sephadex系列：Sephadex是一种基于芦荟胶的凝胶，常用于分离蛋白质、核酸、多糖等生物大分子。
根据颗粒大小的不同，常见的Sepharose型号包括Sephadex G-25、Sephadex G-50、Sephadex G-75等。
2. Sepharose系列：Sepharose是一种基于琼脂糖的凝胶，常用于亲和色谱和凝胶过滤等分离纯化方法中。
常见的Sepharose型号包括Sepharose 4 Fast Flow、Sepharose CL-4B、Sepharose FF等。
3. Superdex系列：Superdex是一种基于聚丙烯的凝胶，常用于蛋白质和核酸的分子量测定和分离纯化。
常见的Superdex型号包括Superdex 75、Superdex 200、Superdex 30等。
4. Bio-Gel P系列：Bio-Gel是一种基于聚加醇的凝胶，它具有微细的孔隙结构，可用于蛋白质、核酸和多糖等生物大分子的分离和纯化。
常见的Bio-Gel P型号包括Bio-Gel P-100、Bio-Gel P-30等。
5. Polyacrylamide凝胶：Polyacrylamide是一种常用的凝胶材料，可用于分离许多不同大小和电荷的生物大分子。
常见的凝胶类型包括聚丙烯酰胺凝胶（Polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）、非变性聚丙烯酰胺凝胶（Non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis，Non-denaturing PAGE）和变性聚丙烯酰胺凝胶（Denaturing polyacrylamide gel electrophoresis，Denaturing PAGE）等。
这些常用的凝胶色谱柱在生物科学研究和生物制药工业中广泛应用，在分离和纯化生物大分子方面具有重要作用。
凝胶色谱柱的基本介绍
凝胶色谱柱的基本介绍凝胶色谱柱是一种常用的分离和纯化生物大分子的工具。
它是一种由高分子材料制成的柱状介质，其中含有孔隙结构，可以根据溶质的分子大小和形状进行分离。
凝胶色谱柱广泛应用于生物分离学、生物化学、生物物理学、分子生物学等领域，被用于分离和纯化蛋白质、核酸、多糖等大分子化合物。
凝胶色谱柱通常由两部分组成：柱身和填料。
柱身是指支持凝胶填料的柱体，可以是玻璃、塑料或不锈钢等材质制成。
填料是一种高分子材料，具有孔隙结构，用于分离和纯化所需的分子。
常见的填料材料包括琼脂糖、聚丙烯酰胺、琼脂、聚乙烯等。
凝胶色谱柱按照填充剂的孔径尺寸可以分为三种类型：分子筛柱、表观分子筛柱和凝胶渗透柱。
分子筛柱是孔径最小的柱型凝胶，可以分离分子量相似但大小稍有差异的溶质，常用于蛋白质和多肽的分离。
表观分子筛柱是孔径较大的柱型凝胶，常用于中低分子量的溶质分离，如核酸和低分子肽。
凝胶渗透柱的孔径最大，一般用于高分子量的生物大分子的分离，如多糖类、DNA、基因组DNA等。
凝胶色谱柱可以根据填充剂的交联程度分为两种类型：线性凝胶柱和交联凝胶柱。
线性凝胶柱的填充物是线性的高分子链，分子间没有交联结构，具有更大的孔径，适合于大分子的分离。
交联凝胶柱的填充物以交联剂和高分子链相互交联，形成三维网络结构，孔径较小，适合于小分子的分离。
凝胶色谱柱的使用过程通常需要配合流动相，即载体溶液。
根据需要分离的化合物的特性，可以选择不同的载体溶液，如盐溶液、酸碱溶液、有机溶剂等。
溶液会在柱内与填充物发生相互作用，将溶质分离开来。
根据分离的要求和填充物的特性，可以调整溶剂的流速、浓度和pH值等参数，以达到最佳分离效果。
凝胶色谱柱具有分离效率高、分辨率好、重复性好等优点，但也存在一些限制。
首先，填充物可能对溶质产生吸附作用，特别是对一些极性化合物，可能导致部分溶质无法完全分离。
其次，柱子的尺寸和填充物的性质可能导致分析时间较长，不适合高通量分析。
此外，填充物的孔径和稳定性可能会受到样品中存在的盐、溶剂等条件的影响。
凝胶色谱柱的基本介绍
目录1凝胶色谱2分类3分子筛效益4凝胶种类及性质5填料合成技术6实验技术凝胶色谱高温凝胶色谱仪凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。
凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。
凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。
目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。
分类根据分离的对象是水溶性的化合物还是有机溶剂可溶物，凝胶色谱又可分为凝胶过滤色谱（GFC）和凝胶渗透色谱（GPC）。
凝胶过滤色谱一般用于分离水溶性的大分子，凝胶过滤色谱柱如多糖类化合物。
凝胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂主要是水。
凝胶渗透色谱法主要用于有机溶剂中可溶的高聚物 (聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等) 相对分子质量分布分析及分离，常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶，洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。
凝胶色谱不但可以用于分离测定高聚物的相对分子质量和相对分子质量分布，同时根据所用凝胶填料不同，可分离油溶性和水溶性物质，分离相对分子质量的范围从几百万到100以下。
近年来，凝胶色谱也广泛用于分离小分子化合物。
化学结构不同但相对分子质量相近的物质，不可能通过凝胶色谱法达到完全的分离纯化的目的。
分子筛效益一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。
大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。
小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。
凝胶色谱柱知识点总结
凝胶色谱柱知识点总结凝胶色谱柱的分类凝胶色谱柱主要有两种类型，即大小分离色谱和亲和色谱。
1. 大小分离色谱大小分离色谱是根据生物大分子在凝胶中的大小差异进行分离的，通常用来分离蛋白质、核酸和多肽等大分子生物大分子。
根据凝胶的孔径大小，可以将大分子生物大分子从小分子生物大分子中分离出来。
2. 亲和色谱亲和色谱是利用生物大分子与特定配体之间的亲和作用来进行分离和纯化的方法。
通常在凝胶上固定一定的亲和剂，通过生物分子与亲和剂之间的特定相互作用来实现生物分子的选择性吸附和洗脱。
凝胶色谱柱的原理凝胶色谱柱的分离原理是利用凝胶材料固定在色谱柱中，通过色谱柱中的孔隙结构来实现生物大分子的分离。
凝胶色谱柱根据其孔隙大小可分为两种类型，包括凝胶过滤柱和凝胶渗透柱。
1. 凝胶过滤柱凝胶过滤柱利用凝胶中的孔隙大小来分离生物大分子。
当生物大分子通过色谱柱时，较大的生物大分子会被凝胶阻挡，而较小的生物大分子可以通过凝胶的孔隙，从而实现生物大分子的分离。
2. 凝胶渗透柱凝胶渗透柱通过凝胶中的孔隙大小来实现生物分子的分离。
通常，生物大分子会根据其大小在凝胶柱中进行渗透，从而实现生物大分子的分离和纯化。
凝胶色谱柱的应用凝胶色谱柱在生物分离和纯化中有广泛的应用，主要包括以下几个方面：1. 蛋白质分离与纯化凝胶色谱柱可用于蛋白质的分离与纯化，对于分离蛋白质复合物、纯化功能蛋白等方面具有重要作用。
2. 核酸分离与纯化凝胶色谱柱可以用于核酸的分离与纯化，对于分离DNA、RNA等核酸样品具有重要作用。
3. 多肽分离与纯化凝胶色谱柱也可用于多肽的分离与纯化，对于分离多肽混合物、纯化特定多肽等方面具有重要作用。
4. 膜蛋白分离与纯化对于膜蛋白的分离与纯化，凝胶色谱柱也有着重要的应用价值。
凝胶色谱柱的优缺点凝胶色谱柱具有一些优点和缺点，以下分别进行介绍：1. 优点（1）分离效果好：凝胶色谱柱能够实现对生物大分子的高效分离与纯化，分离效果好；（2）操作简便：凝胶色谱柱的操作相对简单，不需要复杂的设备和技术，易于掌握；（3）适用范围广：凝胶色谱柱适用于多种生物大分子的分离与纯化，具有较广的应用范围。
分子排阻色谱柱类型
分子排阻色谱柱类型
分子排阻色谱（SEC）是一种用于分离生物大分子（如蛋白质、
多肽、核酸等）的色谱技术。
在SEC中，分子的分离是基于它们在
固定填料（色谱柱）中的排阻效应。
色谱柱的类型对于SEC的分离
效果至关重要。
1. 多孔硅凝胶色谱柱。
多孔硅凝胶色谱柱是最常用的SEC柱类型之一。
它由细小的凝
胶颗粒组成，这些颗粒之间存在许多微小的孔隙，分子可以在这些
孔隙中排列，根据其大小进行分离。
多孔硅凝胶色谱柱适用于分离
大分子，如蛋白质和多肽。
2. 纤维素色谱柱。
纤维素色谱柱是另一种常见的SEC柱类型。
它由纤维素颗粒组成，这些颗粒具有不同的孔隙大小，可以用于分离不同大小的分子。
纤维素色谱柱适用于分离较大的生物大分子，如蛋白质和核酸。
3. 凝胶过滤色谱柱。
凝胶过滤色谱柱是一种特殊类型的SEC柱，它使用具有特定孔隙大小的凝胶来分离生物大分子。
这种柱适用于分离较大的生物大分子，如蛋白质和病毒。
选择合适的SEC柱类型对于有效的分子分离至关重要。
不同的柱类型适用于不同大小和类型的生物大分子，研究人员需要根据其样品的特性选择合适的SEC柱类型，以获得最佳的分离效果。
交联聚苯乙烯凝胶 色谱柱
交联聚苯乙烯凝胶色谱柱
交联聚苯乙烯凝胶色谱柱是一种常用于分离和纯化生物大分子的色谱柱。
它通常由交联的聚合物制成，具有高度的孔隙度和表面积，能够提供良好的分离效果。
这种色谱柱在生物化学、生物医药等领域得到广泛应用。
首先，让我们从结构和特点方面来看。
交联聚苯乙烯凝胶色谱柱具有均匀的孔隙结构，这使得大分子能够在色谱柱中得到良好的分离。
此外，由于其高度的孔隙度和表面积，交联聚苯乙烯凝胶色谱柱具有较高的样品吸附能力和分离效率，能够有效地分离生物大分子。
其次，我们可以从应用领域来看。
交联聚苯乙烯凝胶色谱柱在生物制药领域被广泛应用于蛋白质、多肽、核酸等生物大分子的分离和纯化。
在生物化学研究中，它也常被用于分离和纯化生物大分子样品，如蛋白质复合物、细胞器等。
此外，我们还可以从操作和维护方面来看。
在使用交联聚苯乙烯凝胶色谱柱时，需要注意选择合适的流动相和操作条件，以确保分离效果和样品纯度。
另外，定期进行色谱柱的清洗和保养也是非
常重要的，可以延长色谱柱的使用寿命并保证分离效果。
总的来说，交联聚苯乙烯凝胶色谱柱是一种在生物大分子分离和纯化中应用广泛的色谱柱，具有良好的分离效果和操作性能，适用于生物化学、生物医药等领域的研究和生产实践中。
凝胶色谱柱柱效下降的原因
凝胶色谱柱柱效下降的原因
凝胶色谱柱柱效下降可能由多种因素引起，这些因素可能影响柱子的性能和分离效果。
以下是一些可能导致凝胶色谱柱柱效下降的原因：
1.柱子老化：长时间使用会导致凝胶柱的老化，凝胶颗粒可能变形或破碎，从而影响柱效。
2.溶剂选择：使用的溶剂可能与柱子不兼容，导致柱子的膨胀或收缩，进而影响柱效。
确保使用的溶剂符合柱子的规格和建议。
3.样品残留：在连续分析样品时，可能在柱子中留下残留物，导致柱子的性能下降。
定期冲洗和保养柱子以防止样品残留。
4.柱子污染：柱子可能受到来自样品或其他源头的污染，例如沉淀物、微生物等，这可能影响柱效。
保持实验室的清洁和使用合适的样品制备方法可以减少柱子的污染。
5.流速和压力：超过柱子规格的流速和压力可能会损害柱子。
确保在柱子规格范围内操作，并避免突然的流速或压力变化。
6.温度变化：温度的波动可能引起柱子的膨胀或收缩，从而影响柱效。
稳定的温度控制是维持柱子性能的重要因素。
7.缓冲溶液：使用不合适的缓冲液或缓冲液的质量不佳可能对柱效产生负面影响。
确保缓冲液的准备和贮存符合标准。
8.操作错误：操作错误，如过大的样品体积、不适当的样品加载方法等，可能损害柱子。
确保操作符合柱子的使用规范。
在柱效下降的情况下，定期检查和保养凝胶色谱柱是非常重要的。
如果柱效持续下降，可能需要更换柱子或进行其他维护措施。
此外，建议根据柱子的使用情况，定期进行性能测试和质量控制，以确保准确的分析结果。
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装柱由于凝胶的分离是靠筛分作用，所以凝胶的填充要求很高，必须要使整个填充柱非常均匀，否则必须重填。
凝胶在装柱前，可用水浮选法去除凝胶中的单体、粉末及杂质，并可用真空泵抽气排出凝胶中的气泡。
最好购买商品中的玻璃或有机玻璃的凝胶空柱，在柱的两端皆有平整的筛网或筛板。
将柱垂直固定，加入少量流动相以排除柱中底端的气泡，在加入一些流动相于柱中约1/4的高度。
柱顶部连接一个漏斗，颈直径约为柱颈的一半，然后在搅拌下、缓慢的、均匀地、连续地加入已经脱气的凝胶悬浮液，同时打开色谱柱的毛细管出口，维持适当的流速，凝胶颗粒将逐层水平式上升，在柱中均匀地沉积，直到所需高度位置。
最后拆除漏斗，用较小的滤纸片轻轻盖住凝胶床的表面，再用大量洗脱剂将凝胶床洗涤一段时间。
3、柱均匀性检查凝胶色谱的分离效果主要决定于色谱柱装填得是否均匀，在对样品进行分离之前，对色谱柱必须进行是否均匀的检查。
由于凝胶在色谱柱中是半透明的，检查方法可在柱旁放一至于柱平行的日光灯，用肉眼观察柱内是否有“纹路”或气泡。
也可向色谱柱内加入有色大分子等，加入物质的分子量应在凝胶柱的分离范围，如果观察到柱内谱带窄、均匀、平整，即说明色谱柱性能良好；如果色带出现不规则、杂乱、很宽时必须重新装填凝胶柱。
4、上样凝胶柱装好后，一定要对柱用流动相进行很好的平衡处理，才能上样。
凝胶柱的上样也是一个非常重要的因素，总的原则是要使样品柱塞尽量的窄和平整。
为了防止样品中的一些沉淀物污染色谱柱，一般在上柱前将样品过滤或离心。
样品溶液的浓度应该尽可能的大一些，但如果样品的溶解度与温度有关时，必须将样品适当稀释，并使样品温度与色谱柱的温度一致。
当一切都准备好后，这时可打开色谱柱的活塞，让流动相与凝胶床刚好平行，关闭出口。
用滴管吸取样品溶液沿柱壁轻轻地加入到色谱柱中，打开流出口，使样品液渗入凝胶床内。
当样品液面恰与凝胶床表面平时，再次加入少量的洗脱剂冲洗管壁。
重复上述操作及此，每一次的关键是既要使样品恰好全部渗入凝胶床，又不致使凝胶床面干燥而发生裂缝。
随后可慢慢地逐步加大洗脱剂的量进行洗脱。
整个过程一定要仔细，避免破坏凝胶柱的床层。
.交联葡聚糖：葡聚糖凝胶颗粒的商品名，用于凝胶过滤，其大小不同颗粒可用于对各种不同原子量的物质进行分离，作分子筛色谱法介质这是葡聚糖凝胶，G后面的数字代表凝胶颗粒的大小。
具体操作详见，说明书啊！但是G-200的分离范围好像也不大啊，只有20万Sephadex G-100 对多糖的分离范围最大直到10万，而多糖大于十万的多得是呢只适用于水中应用，不同规格分离不同分子量范围的化合物。
sephadex g25 g25是什么意思？参考见解：Cross-linked dextran gel G-25,葡聚糖凝胶G-25,白色珠状颗粒。
一种由葡聚糖经醚键相互交联合成具有多孔性三度空间网状结构的高分子分离材料，为稳定的亲水性凝胶，G-10是表示G类凝胶吸水量的型号。
可将G后的数字除以10即为该凝胶每克干重所吸水分的毫升数。
能使一定分子量范围的大分子进入凝胶的网状结构内，不溶于水、盐分离和提纯蛋白质、多糖、酶、核酸、激素、氨基酸、多酞和抗菌素等。
比较基础，适合新虫学习！一、装柱装柱子（添硅胶）时，常用的有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。
不论干法还是湿法，硅胶（称为固定相更为广义）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右（长度没有绝对之说，根据自身情况而定，制备的大柱可以长达一米），太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。
湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压（土方法可以用养鱼的氧气泵加压或是用氮气，当然不加压也可以）用淋洗剂"走柱子"，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。
（我一般都用湿法装柱）干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧（湿法也要敲的，效果好点），至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实（一般柱子不敢用油泵抽，怕把柱子抽裂了）。
接着是用淋洗剂"走柱子"，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。
干法装柱较方便，但最大的缺陷在于"走柱子"时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到）（梯度洗脱时，湿法装柱也会出现该情况，比较不好处理，可以缓慢改变溶剂，且置于通风处），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚（用乙醚最最明显），二氯甲烷更为明显。
虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。
解决的办法是：第一、硅胶一定要压结实；第二、一定要用较多的溶剂"走柱子"，一定要到柱子的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。
也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂(我一般垫张滤纸，撒上石英砂，再放些棉花)，防止添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。
但我的感觉是如果小心上样，添加溶剂，则没有这个必要。
二、上样上样也有干法和湿法之分：干法（也称硅胶制沙）就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，在加入少量硅胶，拌匀后再旋去溶剂。
如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。
干法上样较麻烦，但可以保证样品层很平整。
（我一般喜欢用这种方法，除非不能用）湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀加入。
然后用少量溶剂洗涤后，再加入。
湿法较方便，但不溶剂让其完全被硅胶均匀吸附，不容易跑的很平整柱层析关键在于柱子是否装好（这是最大影响因素）和淋洗剂是否选择恰当。
而淋洗剂的选择则是通过TLC确定。
这里要指出的一点是：TLC （作用还是很大的）的作用除了跟踪反应进程，检测试剂和原料纯度外，一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。
上样完毕后，接着即用淋洗剂淋洗。
淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
由于层析柱和薄板的不同，即使两者使用的硅胶都相同，但是在把TLC分析得到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大，所以要稀释一倍，但又不能稀释太多，否则成了靠扩散作用来分离，效果也不会好。
（这一点很实用，不过有些特殊情况也不一定，如果要保险可以先做根小柱子跑一下，这样最安全，就是花点时间）三、收集主要依靠TLC（据说国外有石英柱，直接用荧光灯照能看出来，不过太贵了，在国内不一定适用），需要切记的是：第一、某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。
因此在寻找展开剂时，多尝试几种比例不同，成分不同的展开剂。
展开剂的极性太小，点分不开，极性太大，也分不开.一般以目标产物的Rf值在0.3左右为最佳。
第二、点不能点得太浓（在最后时应该点的浓点，这样看看有无收尽产品）,否则容易重叠,不易判断,因为如果两个点相近的话,一浓就变成一个点了。
第三、板上点的展开的清晰程度和溶剂的极性和物质在该溶剂中的溶解性有关，只有两者比较合适才能有一个交好的分离效果。
选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献（这是首选）中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
不行可以尝试两两混合，三者混合，一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例,达到最佳效果，如果没有分开的迹象，最好是换溶剂。
在利用TLC跟踪反应时，在点板的时候往往是反应体系的混和溶液点一个点A，每种难挥发的原料各点一个点B,C, D等等，然后所有的原料和反应体系的混合溶剂再共同点一个混合点X，这些点在板上的位置如图所示：A X B C D这样的好处是展开后可以清楚地看见每个点的位置，把A这个点展开后的各个层份的点与B,C,等原料比较，从而判断原料消失没有，点混合点X的目的在于，方便观察，因为有时候，板展开后，各点的位置有些变形，或者由于边缘效应等等，使得判断不易。
（我喜欢用小板，跑的快，很快见到结果，为了避免小板的边缘，用机器板较好）利用TLC判断物质的纯度时，如果不能完全确定，可以再结合其他检测手段，如NMR，因为某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。
但有趣的是，由于H-NMR可鉴别的纯度也就在95%左右，有时候H NMR现示较纯的东西，一点板就会发现有几个点。
所以，两者要结合使用。
如果有标准品或是以前做过的，对个对照最方便。
资料上说，将已经溶胀好的凝胶倒入柱内，当沉积的胶床至2～3cm高时，打开柱下端的出口，直到胶装完为止。
然后再平衡,请问，当下端出口打开时，上端需不需要接上蒸馏水或洗脱剂？我之前没有将下端口打开，自然沉降的。
后来看到很多资料上说要将下端口打开，但是没有说明上端口是否要打开接通蒸馏水获洗脱剂。
需要接的，如果不接的话水分只出不进，胶会干的你下端打开的时候上面继续倒凝胶呀，不要间断，最重要是的不要让气泡进入一定要接水，这样形成的凝胶柱才会均匀，同时保证胶床不会暴漏在空气中我用的是C-25凝胶的，我们先用甲醇泡，酸泡，再用碱泡。
然后就装柱了凝胶在甲醇中溶胀不够，我们一般都是放置过夜的。
之前需用玻璃棒缓慢搅拌至均匀，后静置。
装住前先装装一些溶剂到柱子里，然后再将溶胀好的葡聚糖凝胶用滴管加进去，注意葡聚糖混悬液浓度不应太大，让它自然沉降，装完后再用洗耳球压实，不会出现气泡的。
有气泡必须倒出来重装！有没有人装过GE的凝胶过滤色谱柱（sephadex-G10）在固定好的层析柱中加入约1/3体积的缓冲液，关闭柱出口，在柱顶部连续加入已经充分平衡好的琼脂糖凝胶（事先把凝胶调成流动性较好的糊状物），待凝胶沉降约3cm时打开出口，并连续加入糊状的凝胶，使其在形成的胶粒床面上连续均匀的沉降，直至凝胶完全沉降至适当的柱床体积为止。
然后关闭出口，使上层有3cm高的缓冲液并在整个层析过程中一直维持，不能使柱子走空。
为了防止柱床表面不会由于溶剂或样品的加入而引起搅动，要在柱床表面加一个保护装置，如圆形滤纸片或纱网等。
调糊也应注意。
我是静置，倒出上清，加水摇起，静置倒出上清，几次后认为替换成水了。