AKTA蛋白纯化层析系统操作规程
蛋白纯化AKTA操作说明(二)
蛋白纯化AKTA操作说明（二）引言概述：本文档旨在提供关于蛋白纯化AKTA操作的详细说明。
蛋白纯化是生物化学和生物技术中常用的实验技术之一，能够用于从复杂的生物样品中纯化目标蛋白质。
AKTA操作是常用的蛋白纯化系统，本文将介绍该系统的操作步骤和注意事项，帮助用户顺利进行蛋白纯化实验。
正文：一、AKTA操作之仪器准备1. 确保AKTA蛋白纯化系统已经连接好电源，并打开主机电源开关。
2. 检查液氮罐中的液氮是否充足，并确保液位高于所需运行温度。
3. 打开冰盒，准备好所需的离心管、移液器和其他实验器材。
二、AKTA操作之列柱装配1. 按照实验要求选择合适的色谱柱和填料，并正确装配到AKTA系统中。
2. 使用力学手套松开色谱柱底部的螺丝，将填料注入色谱柱中，确保填料均匀。
3. 同时，注意将填料与色谱柱的连接口处用黑色硅胶密封，以免液体泄漏。
三、AKTA操作之流程设置1. 打开AKTA系统的软件界面，并选择“新建方法”。
2. 在方法设置界面中，设定蛋白纯化的各个步骤，如进样、洗脱等流程参数。
3. 根据实验需求，选择合适的梯度洗脱方案，并输入相应的洗脱液体浓度。
四、AKTA操作之样品处理1. 将待纯化的生物样品进行预处理，如离心、过滤等，以去除杂质。
2. 根据纯化需求，可进行某些特定试剂的添加，如酶切剂、亲和标记剂等。
3. 根据方法设置，将样品装入进样器中，并调整进样量和进样流速。
五、AKTA操作之运行实验1. 保存并加载所设置的方法，确保参数设定正确。
2. 启动AKTA系统，开始实验运行，并监控过程中的各项参数指标。
3. 及时记录实验数据，并根据需要进行样品采样、保存等操作。
总结：通过本文所述的蛋白纯化AKTA操作说明，用户可以了解到系统准备、列柱装配、流程设置、样品处理和运行实验等关键步骤。
合理而正确的操作，将帮助用户获得高质量的蛋白纯化结果。
同时，用户还需根据实际操作中的具体情况，进一步优化实验参数，以满足各自的研究需求。
蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击 Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control 界面， Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......； Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
AKTA Prime plus SOP
ÄKTA Prime plus蛋白纯化系统操作规程1．打开电源，打开电脑：仪器经过自检，面板液晶窗口显示Templates2．缓冲液准备：所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
然后将A1的管道放入平衡缓冲液中，B管道放入洗脱液中。
3．系统清洗：在主菜单中，选择菜单Templates，并按OK选择一级子菜单Application Templates, 并按OK选择二级子菜单System Wash Method，并按OK选择要被清洗的缓冲液进口（A 1 为预选进口），并按OK，仪器自动进行系统清洗。
4．连接色谱柱：连接时防止气泡产生。
5．准备样品：连接上样环（位于InjectionValve阀 2，6位），从InjectionValve 阀的3号位缓缓注入样品（注意没有气泡），注入样品的体积大于样品环的体积。
进完样后将注射器留在3号口。
6．系统运行6.1 手动运行系统：在主菜单中选择Manual Run ,并按OK6.1.1 平衡色谱柱选择子菜单Set the method base,显示现有设置，按OK再选择时间（min）或体积（ml）并按OK选择菜单Set flow Rate,显示现有设置，按OK使用面板上控制键▲选择流速，按OK选择菜单Set pressure limit,显示现有设置，按OK设置压力极限（以填料的耐压为准）,按OK设置完成后，显示Press OK to start Run.按OK 开始运行.6.1.2 进样使用面板上控制键▲选择autozero, 按OK▲选择Set inject valve position, 按OK选择inject, 按OK6.1.3 洗脱使用面板上控制键▲选择Gradient，设定length，ok和target，ok。
AKTA层析系统
其它要求
TSK-gel XX 5pw 7.5*75
0.5 kPsi /0.6M Pa
1mL/min
TSK-gel XX 5pw 21.5*150
0.5 kPsi /0.6M Pa
6mL/min
TSK-gel G5000PW XL 7.8*300
0.1 kPsi /0.3M Pa
0.5mL/min
TSK-gel G3000SW 0.1 kPsi /0.3M
AKTA层析系统标准操作规程
在使用AKTA前，请先阅读本规程，并了解 所需层析方法的原理。初次使用请在有经验
的人指导下进行。
1. 缓冲液和层析的样品的准备：
1. 溶液需用去离子水、超纯水或注射用水配制，除NaOH和乙 醇外，所有用于层析的缓冲液需经0.45μm孔径的滤膜过滤， 并盛装于用0.45μm孔径滤膜过滤的水至少荡洗4次的容器中。
⑶使用完仪器应在文件管理界面关闭UNICORN程序，系统将提 示是否锁定界面，选否，待UNICORN完全退出后方可关闭仪器电 源。使用完毕后需清理台面，并登记使用事项。
2．AKTA仪器的运行
⑴在打开流速之前，将AB管道插入缓冲液中，遵循A低盐，B高 盐或者A高pH, B低pH的原则，若只用一种缓冲液，请将AB管道都 插入缓冲液中，然后AB泵各走50%。在装上柱子之前应先用高流速 将管道中替换成自己相应缓冲液。
20mL/min
35*40 0.5M Pa 25mL/min
20mL/min
35*60 0.5M Pa 25mL/min
20mL/min
国产柱子，A*B表示内径为A（mm），高为B（cm）
4.
4. 常压介质：
介质
压力上 限
(完整word版)蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
akta 操作规程
akta 操作规程操作规程是指为了规范化、标准化工作流程，确保工作的安全和高效进行而制定的一系列规范和步骤。
以下是关于akta操作规程的一份示例，总字数为1200字。
一、引言akta操作规程旨在确保在akta工作流程中的每个步骤都按照标准程序和最佳实践进行操作，以保证最佳的实验结果和避免任何潜在的风险和错误。
二、适用范围本操作规程适用于所有参与akta工作流程的工作人员，包括实验室技术人员、研究人员等。
三、定义1. akta：一种用于蛋白质纯化的仪器。
2. 标本：指待处理的蛋白质溶液。
四、工作准备1. 检查akta设备是否正常运作，并进行必要的维护和保养。
2. 准备所需的试剂和耗材。
3. 检查仪器和试剂的质量和有效期。
五、样品处理1. 按照相关的实验方案和标准操作程序将标本添加到akta设备中。
2. 设置合适的参数，如流速、压力等，以确保蛋白质纯化的效果最佳。
3. 监测纯化过程中的各项参数，如pH值、溶液浓度等，及时进行调整。
4. 在工作过程中严格遵守个人防护要求，如戴手套、穿实验服，并避免直接暴露于有害化学物质中。
5. 严格按照规定的时间和步骤进行样品处理，避免任何错误。
六、数据记录与分析1. 在整个纯化过程中，准确记录关键步骤和操作参数。
2. 在操作过程中及时记录实验结果，包括纯化效果、产率等。
3. 对结果进行合理的分析和解释，并进行必要的调整和改进。
七、安全措施1. 在操作过程中，严格遵守实验室的安全规定，使用个人防护设备。
2. 防止刺激性、致敏性和有毒性物质的接触，并妥善处理废弃物。
3. 在有害气体、溶液或物质存在的情况下，确保有良好的通风条件。
八、仪器维护与清洁1. 在每次使用后及时进行仪器的维护和保养，检查仪器的功能是否正常。
2. 仪器清洁要求按照实验室的相关规定进行，保持工作区域的干净整洁。
九、问题解决1. 在操作过程中遇到任何问题，应立即与相关人员进行沟通和协调，确保问题及时解决。
蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
AKTA操作流程
蛋白层析纯化系统FPLC：全称为快速蛋白液相色谱（Fast protein liquid chromatography）操作流程：1.打开全自动交流稳压器的电源2.打开FPLC或purifier 100的电源，系统立即进行自检3.打开电脑电源4.双击unicon4.12图标，输入用户名和密码，进入系统窗口。
ÄKTA层析软件有四个窗口：UNICORN Main Menu、Method Editor、System Control、Evaluation。
如使用程序运行，在Method Editor窗口里编方法设置各种参数(详见注意事项)；如使用手工运行，在System Control窗口里设置各种参数。
5.接入层析柱。
如需低温操作，可通冷凝水6.注入样品，运行程序或手工运行7.试验结束，先用水冲洗柱子，再用20%乙醇保存柱子，然后拆除柱子，不得带入气泡。
取下后放回原位。
保存系统及层析柱8.关机：仔细检查完毕，确信用过的所有管道都已经充满20%乙醇后，退出ÄKTA层析软件各窗口，脱出UNICORN软件，关闭电脑9.关闭系统电源注意事项：技术指标注意事项：1. 报警压力参数设置：所有程序运行和手动运行中，必须首先设定报警压力（使用预装柱，编程时由软件自动设定）。
压力值参阅层析柱及填料说明书，取较小的一个最大耐受压力。
我们实验室的层析柱如XK16/70Superdex75、200、DEAE-FF等柱子的警报压力均为0.3MPa。
Sephacryl-200、Sephacryl-300的警报压力为0.2MPa。
2.紫外灯：如果只是平衡层析柱，关闭紫外灯。
FPLC通过FPLC系统主机关闭；Purifier 通过软件lamp off关闭。
一般在上样前或前15min打开紫外灯。
3.层析柱的连接：层析柱是玻璃的，一定要轻拿轻放。
层析柱特别是凝胶过滤柱不能有气泡进入，将柱子接入系统时，可在柱子一端接带有液体的注射器，用手推，将气泡排出，同时，给系统一定流速，保证没有气泡的情况下将柱子连入系统。
AKATA 蛋白纯化系统
AKATA蛋白纯化系统
●操作步骤：
1.启动电脑，然后启动仪器。
2.启动Unicorn程序，进入控制程序
3.设置系统压力为10Mpa，流速5mL/min，点RUN
4.使用水进行清晰，然后用缓冲液平衡整个系统
5.清洗上样环2-3次，直至A280吸光值稳定
6.调整为柱子要求的流速和压力，装柱子，平衡
7.上样，洗脱，收集
8.使用洗脱液充分清洗柱子，然后用水冲洗整个系统，
及上样环，最后用20%乙醇充满整个系统
●注意事项：
1.使用前确认你已阅读使用说明（可从唐远平处获取光盘）
2.20%乙醇至少半个月换一次
3.使用前检查泵后腔循环管路，确认其充满了20%乙醇，
如有空气请吸出
4.若压力报警，首先确认样品经过高速离心或过滤，其次
检查柱子是否完好，若压力依然报警，更换在线滤片。
5.不使用pH电极时，绝不将其置于流动池中，也不宜用水
保存。
正确的保存方法为：从流动池中卸下pH电极，先用蒸馏水清洗，轻拭水份后，保存在饱和氯化钾中
6.每月定期保养，发现假峰时，拆下柱子，将所有缓冲液
入口置于1M NaOH中，执行systerm wash method，并以1mL/min流速清洗20min。
AKTA层析仪使用操作规程
ÄKTA全自动层析仪操作规程1. 开机打开主机和电脑电源，待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮不闪烁），双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2. 准备流动相和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
3. 清洗管道及装柱3.1 首先将A1管道放入平衡液或banding buffering中，将B1管道放入高盐溶液中或elutionbuffering中，在system control窗口点击manual→pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。
泵清洗程序会自动运行结束。
3.2 选择manual→pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择manual→Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。
将进样阀的1号位管道接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉，直接拧入紫外流动池或连接管道。
4. 手动运行4.1 平衡柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值正确曲线走稳了）。
此时将紫外调零，选择manual →Alarm&mon→autozero，exectue，就准备上样了。
4.2 上样4.2.1 用样品环上，将样品吸进注射器，推掉气泡，从进样阀的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍），不要取下注射器。
选择manual→flowpath→injectionValve→inject，execute。
4.2.2 用样品泵上样（AKTAexplorer系统），将样品置于Sample Valve 1号位（可以选8个不同的位置），点击manual→pump→Direct Load_960输入进样流速和体积，execute。
AKTA-go 蛋白纯化仪操作规程
AKTA-go 蛋白纯化仪操作规程1、开机长按仪器主电源至环形绿灯常亮，打开电脑电源，待仪器自检完毕，双击桌面上UNICORN 7.4图标，进入操作界面，待仪器显示屏显示Ready ，系统连接完毕。
2、准备工作液和样品所有工作溶液的样品必须经过0.45μm的滤膜过滤，少量样品也可高速离心后取上清使用。
缓冲液使用前用过超声脱气10min;3、清洗及管道准备（1）将需要用到的泵头（一般为A、B、sample）从蓝盖瓶中取出，插入到超纯水中，在system control窗口点击工具栏内的manual,选择execute manual instructions --- pump --- pump wash --- A、B、sample 选on --- insert --- Execute ,用纯水洗泵，洗完自动停止。
（2）将A泵管插入到平衡缓冲液中，B泵插入到洗脱缓冲液中，sample 泵插入到平衡缓冲液中，按照上一步骤洗泵，洗完自动停止。
（3）检查管路中是否还有气泡，如果有气泡需要手动排气，在system control窗口点击工具栏内的manual,选择execute manual instructions ---Flow path--- inlet，依次选择泵，进行手动注射器抽液，两个泵都抽出连续的液体。
（4）将sample 管道插入待上样的样品中；4、安装层析柱（1）在system control窗口点击工具栏内的manual,选择execute manual instructions --- pump--- Flow 输入一个慢流速1或者0.5m L/min，insert;（2）选择Alarm---Alarm pressure (输入柱子的耐受压力，可在说明书中查看)；点击execute;（3）待Injecttion Valve 5号管位流出液体后，将管路接入柱子的上端，稍微拧紧后将柱子下端的堵头卸掉接入管道。
蛋白质纯化系统AKTAPurifer10操作规程
仪器操作规程-蛋白质纯化系统 AKTA Purifer 10
一、标准操作规程
1.检查各部件连接是否正常（电源开关，仪器部件，流动相，色谱柱等）。
2.打开AKTA purifierTM10蛋白层析仪和计算机电源。
3.双击UNICON 5.11图标，进入实时方法编辑、实时运行、结果分析界面。
4.编辑新方法:
1)编辑方法：点击文件，点击新建方法，编辑方法（运行时间，流动相选择，流速，
检测波长等）。
2)保存方法：点击文件，点击另存方法为（输入文件名）。
3)运行方法：选择文件，点击右键，点击RUN，进行方法运行。
4)平衡色谱柱，一般约1—2个柱体积。
5)手动单针进样：在Load状态，将样品注入进样环，完毕后，点击Inject状态。
6)批处理进样：编辑方法，选择A—905自动进样器，进入scouting界面，利用向
导进行批处理编辑，保存批处理文件，点击批处理运行图标。
7)数据处理：点击第四个谱图分析图标，进入数据处理界面，打开要处理的文件，
点击积分向导图标进行数据处理（还可点击界面顶部的手动积分进行手动处理）。
保存数据处理方法。
5.运行已有方法：在实时分析界面点击文件，打开方法文件，点击RUN即可。
6.清洗色谱柱，在方法文件中调出自动清洗方法，点击RUN即可。
二、注意事项
1.流动相的溶剂须使用色谱纯，水为超纯水，缓冲盐需用0.45um的滤膜过滤。
2.清洗泵后的保护液为20%乙醇，一周更换一次。
3.如经常使用仪器，在线过滤器中的滤芯需每周超声清洗一次。
三、送样要求
初级纯化过滤后的样品。
ATKA 蛋白质纯化系统操作规程
1.严格按照操作方法使用。
2.每次用前检查仪器是否正常，在使用时清洗系统。
3.必须总有上样环连接在上样阀的接口2和6。这是为了在转换此阀时防止液体从这些接口喷出。尤其是使用危险化学品时，这是特别危险的。
4.如果有大量溢出的液体渗入系统外壳并有同带电部件接触的危险，应立即关闭系统并同指定的技术服务人员联系。
Check用于检测系统内部参数，例如序列号、泵运行时间、和灯亮度。
Manual Run用于手工运行系统。
关机步骤
结束运行(Finishing the run)
在Method Complete即时按OK结束运行。
Method Complete
Press OK to continue
在结束前中断运行，按End，用选择yes来确认后面的信息，并按OK。
ATKA prime蛋白质纯化系统
型号：AKTAprime
厂家：GE
价格：13万元
主要功能：用于蛋白质的分离纯化
操作规程
开机步骤
启动系统并进行系统自检如下：(Selftest自检)
1．打开系统后面板的主电源开件版本号。然后在自检期间显示AKTA prime信息。如果检测到错误，则在显示器上显示出错误信息。
OK按OK进入子菜单
Esc按Esc一次返回一级菜单，或重复地回到主菜单。
5.主菜单概要(Main menu overview)
反复按Esc键可从任何子菜单进入主菜单平面。
Templates.该菜单出现在自检后启动时，用于运行应用模板和方法模板。Program Method用于编辑用户专用方法。
SetParameters用于对检测紫外(UV)、电导、PH、温度、和运转泵及混合器设置参数。
AKTA蛋白纯化系统操作
AKTA蛋白纯化系统操作1.设定纯化方法：首先，根据目标蛋白质的特性和要求，选择合适的纯化方法。
一般而言，常用的纯化方法包括亲和层析、凝胶层析和离子交换层析等。
在AKTA蛋白纯化系统上，可以预设不同的纯化方法并保存为方案。
2.准备蛋白样品：准备待纯化的蛋白样品。
在纯化前，需要将样品进行预处理，例如，去除杂质、去盐、浓缩等。
此外，一些特殊的样品也需要添加辅助试剂，如DTT、EDTA等。
3.配置层析柱：根据之前设定的纯化方法，选择合适的柱子。
AKTA系统支持多种柱径和材质的柱子，可以根据需要更换。
4.连接管路：将柱子与系统的蛋白吸附和洗脱缓冲液的管路相连接，确保连接处无泄漏。
5.调整流速：设置蛋白吸附和洗脱缓冲液的流速。
一般而言，根据柱子的大小和纯化方法的要求，设置合适的流速可以提高纯化效果。
6.均衡柱子：在进行纯化前，需要将柱子进行均衡操作。
均衡柱子可以提高吸附剂（如亲和树脂）和蛋白样品之间的接触效果，提高纯化效率。
7.加样和洗脱：将经过均衡的柱子连接到AKTA系统，将样品通过自动加样器加入。
在加样后，可以通过设定的方法进行洗脱和冲洗，以去除非目标蛋白质和杂质。
8.收集纯化的目标蛋白：通过设置最终洗脱步骤，将目标蛋白质从纯化方法中洗脱出来。
同时，系统可以将纯化的目标蛋白自动收集到相应的管子或容器中。
9.检测纯化后的蛋白质：对纯化后的蛋白质进行检测，如SDS-、Western blot等方法，以验证纯化效果。
10.清洗设备：在纯化完成后，要对设备进行清洗。
根据实验室的规范和设备说明书，进行相应的操作，以确保设备的使用寿命和实验结果的准确性。
总之，AKTA蛋白纯化系统是一种功能强大、操作灵活的蛋白质纯化设备。
通过合理的设定纯化方法、处理样品和操作设备，可以高效地纯化目标蛋白质，并得到高质量的纯化产物。
AKTA操作流程
蛋白层析纯化系统FPLC：全称为快速蛋白液相色谱（Fast protein liquid chromatography）操作流程：1.打开全自动交流稳压器的电源2.打开FPLC或purifier 100的电源，系统立即进行自检3.打开电脑电源4.双击unicon4.12图标，输入用户名和密码，进入系统窗口。
ÄKTA层析软件有四个窗口：UNICORN Main Menu、Method Editor、System Control、Evaluation。
如使用程序运行，在Method Editor窗口里编方法设置各种参数(详见注意事项)；如使用手工运行，在System Control窗口里设置各种参数。
5.接入层析柱。
如需低温操作，可通冷凝水6.注入样品，运行程序或手工运行7.试验结束，先用水冲洗柱子，再用20%乙醇保存柱子，然后拆除柱子，不得带入气泡。
取下后放回原位。
保存系统及层析柱8.关机：仔细检查完毕，确信用过的所有管道都已经充满20%乙醇后，退出ÄKTA层析软件各窗口，脱出UNICORN软件，关闭电脑9.关闭系统电源注意事项：技术指标注意事项：1. 报警压力参数设置：所有程序运行和手动运行中，必须首先设定报警压力（使用预装柱，编程时由软件自动设定）。
压力值参阅层析柱及填料说明书，取较小的一个最大耐受压力。
我们实验室的层析柱如XK16/70Superdex75、200、DEAE-FF等柱子的警报压力均为0.3MPa。
Sephacryl-200、Sephacryl-300的警报压力为0.2MPa。
2.紫外灯：如果只是平衡层析柱，关闭紫外灯。
FPLC通过FPLC系统主机关闭；Purifier 通过软件lamp off关闭。
一般在上样前或前15min打开紫外灯。
3.层析柱的连接：层析柱是玻璃的，一定要轻拿轻放。
层析柱特别是凝胶过滤柱不能有气泡进入，将柱子接入系统时，可在柱子一端接带有液体的注射器，用手推，将气泡排出，同时，给系统一定流速，保证没有气泡的情况下将柱子连入系统。
蛋白纯化AKTA操作说明(一)
蛋白纯化AKTA操作说明（一）引言概述：蛋白纯化是生物技术研究中常用的一种重要技术手段，通过纯化目标蛋白，可以实现对其结构、功能和相互作用的进一步研究。
AKTA是一种常用的蛋白纯化设备，本文将介绍如何进行AKTA操作以获得高纯度的蛋白样品。
本文分为五个大点：设备准备、准备实验材料、样品制备、纯化操作步骤、数据处理和总结。
正文：一、设备准备：1. 查看设备状况：检查AKTA设备的各个组件是否齐全，并确保设备正常工作。
2. 设备消毒：使用适当的消毒剂对AKTA设备进行消毒，确保实验过程的无菌。
二、准备实验材料：1. 缓冲液：根据实验需要选择不同的缓冲液，并准备足够的量。
2. 标记抗体：根据实验需要选择适当的标记抗体，并准备足够的量。
3. 标记亲和树脂：根据实验需要选择适当的标记亲和树脂，并准备足够的量。
4. 标准品：准备适当浓度的标准品作为纯化过程中的参考。
三、样品制备：1. 细胞裂解：采用适当的方法对细胞进行裂解，获得含有目标蛋白的裂解液。
2. 预处理：根据裂解液的性质，进行适当的预处理，如去除杂质、调整pH值等。
3. 样品加载：将预处理后的样品加载到纯化系统中，确保样品的均匀分布。
四、纯化操作步骤：1. 初始化设备：打开AKTA软件，选择纯化方法，并设置相关参数。
2. 样品加载：将样品加载到设备中，并根据实验要求选择适当的柱子和纯化方案。
3. 洗脱：使用缓冲液进行洗脱，去除非目标蛋白和杂质。
4. 目标蛋白回收：使用适当的缓冲液洗脱目标蛋白，并将其收集到已经标记好的收集管中。
5. 清洗设备：使用适当的缓冲液对设备进行清洗，防止交叉污染。
五、数据处理和总结：1. 数据记录：记录纯化过程中的各项数据，如流速、吸光度和洗脱峰。
2. 数据分析：对纯化结果进行分析和比较，评估纯化效果。
3. 总结经验：根据纯化结果总结操作经验，以优化蛋白纯化的流程和效率。
总结：本文介绍了蛋白纯化AKTA操作的基本步骤。
通过设备准备、准备实验材料、样品制备、纯化操作步骤和数据处理，可以获得高纯度的蛋白样品，为后续的蛋白研究提供了可靠的基础。
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程一、目的：为了确保蛋白纯化层析系统操作的准确性、稳定性和安全性，保证实验结果的可靠性，制定本操作规程。
二、适用范围：本操作规程适用于实验室内的AKTA蛋白纯化层析系统操作。
三、操作流程：1.准备工作：(1)预热：打开系统电源，预热至设定温度（一般为室温）。
(2)洗涤缓冲液：根据实验要求，制备所需的洗涤缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(3)净化缓冲液：根据实验要求，制备所需的净化缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(4)样品：根据实验要求，制备所需的样品。
2.系统配置：(1)连接仪器：将系统中的各个模块连接好，包括色谱柱、注射器、检测器等。
(2)配置方法参数：根据实验要求，在系统内设置合适的流速、梯度洗脱条件等相关参数。
3.样品处理：(1)样品加载：将样品注入到加载注射器中，通过样品加载阀注入到色谱柱中。
(2)洗脱：根据实验要求，设置梯度洗脱条件，将混合物中的目标蛋白纯化。
4.系统清洗：(1)注射器清洗：每次实验结束后，将注射器从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
(2)色谱柱清洗：每次实验结束后，将色谱柱从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
5.系统关闭：(1)关闭电源：关闭系统电源，断开电源线连接。
(2)清洗系统：将系统中的各个模块用水冲洗干净，保持干燥。
(3)整理工作台：将使用过的耗材整理归位，清理工作台。
四、操作注意事项：1.操作前应仔细阅读操作手册，了解仪器的基本原理和操作要点。
2.操作时要穿戴实验室个人防护用品，避免吸入或接触有害物质。
3.在操作过程中，要严格按照实验要求进行，避免操作失误。
4.定期检查系统的运行状态，保证系统正常工作。
5.操作完成后，要及时清洗和整理仪器，保持仪器的干净和完好。
五、风险控制与安全措施：1.使用过程中，注意避免溶液飞溅引起的伤害，避免溶剂和化学品的吸入或接触。
2.避免电源短路或其他电气故障引起的意外事故。
AKTA层析仪使用操作规程(AKTA蛋白纯化系统经典培训资料)
ÄKTApurifier层析仪使用操作规程1、开机打开仪器的主电源，打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2、准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
3、清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。
泵清洗将自动结束。
4、安装层析柱在manual里选择pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。
待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
5、开始纯化：1）等待柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值和变化趋势）就准备上样了。
此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。
2）用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍）推好后不要取下注射器。
在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。
3）用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
2),3)选择一种方式4）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。
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AKTA蛋白纯化层析系统操作规程
1、使用前,根据自己所要分离蛋白的性质确定所需的分离柱及缓冲液,打开计
算机及仪器,但不要急于打开软件,等计算机与仪器连接再打开软件,此过程大约需要3-5分钟。
2、将纯水先抽滤脱气,使用?0.45μm的滤膜,,然后选择流路连到机器上,先洗泵,然后给机器一个流速和压力。
选择的最高压力须小于柱子所能承受的压力极限。
3、将柱子连接到仪器上,接柱子时,须等进液管中的液体出来,将柱子的一头与进液管通过接头连接,先不要拧的太紧,等液体从柱子的另一头流出,再用接头将其与出液管相连拧紧,再将进液管端拧紧,这样防止柱子中进入气泡,影响分离效果。
4、柱子接上后,换上配好的缓冲液,须抽滤脱气,用缓冲液平衡至仪器的各条基线都平后,再上样。
5、上样时,必须通过滤膜过滤,0.22μm,,具体上样体积视样品浓度而定,采用
不同的上样环上样。
6、仪器使用完毕,切记要用纯水清洗泵和柱子,洗柱直至各条基线都平为止,防止盐和粒子结晶于泵和柱子使机器报废。
若长期不用,再用20%的乙醇清洗系统和
柱子,防止泵和柱子生长微生物,这一步非常重要,。
7、仪器的PH计每隔一段时间,一个月,须校准一次。
紫外流动池也需定期清洗,三个月,。
生物技术中心仪器管理人,李红兵
2006年10月15日。