鸡马立克氏病病毒抗体mdvabelisa试剂盒使用说明书.doc
鸡白血病病毒抗体(ALV-Ab)酶联免疫分析(ELISA)
鸡白血病病毒抗体(ALV-Ab)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清，血浆及相关液体样本中白血病病毒抗体(ALV-Ab)水平。
实验原理：本试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中鸡白血病病毒抗体(ALV-Ab)。
用纯化的鸡白血病病毒抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中白血病病毒抗体(ALV-Ab)相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的白血病病毒抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中鸡白血病病毒抗体(ALV-Ab)的存在与否。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
梅里亚家禽产品说明
家禽活疫苗产品名称作用与用途使用说明产品名称作用与用途使用说明产品名称作用与用途使用说明产品名称作用与用途使用说明产品名称作用与用途使用说明产品名称作用与用途使用说明产品名称作用与用途使用说明产品名称作用与用途使用说明家禽灭活疫苗产品名称作用与用途使用说明产品名称使用说明产品名称作用与用途使用说明产品名称作用与用途使用说明产品名称作用与用途使用说明产品名称作用与用途使用说明产品名称作用与用途使用说明产品名称作用与用途使用说明产品名称作用与用途使用说明产品名称作用与用途使用说明部分进口家禽疫苗产品产品名称成份及性状产品名称使用说明产品名称成份及性状使用说明冻克灵(RISPENS)鸡马立克氏病活疫苗（CVI988株）预防鸡马立克氏病1日龄雏鸡出壳后，尽快颈皮下注射接种立克灵(MAR-BLEN)鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗（FC126株）预防鸡马立克氏病1日龄雏鸡出壳后，尽快颈皮下注射接种新威灵（AVINEW）鸡新城疫活疫苗（VG/GA 株）预防鸡新城疫可用于1日龄首免和2周龄后健康鸡群的补强免疫，可用喷雾、滴眼、饮水法免疫接种新倍灵（NEW-BLEN）新城疫活疫苗（La Sota株）预防鸡新城疫用于4日龄以上的健康鸡群，通过滴眼、饮水法接种新支灵（NB-BLEN）新城疫、传支二联活疫苗（La Sota株+B48株）预防鸡新城疫和传染性支气管炎用于4日龄以上的健康鸡群，通过滴眼或饮水法接种威支灵(AVIENW+H120）鸡新城疫、传支二联活疫苗（VG/GA株+H120株）预防鸡新城疫和传染性支气管炎可用于1日龄首免和2周龄后健康鸡群的补强免疫，可用喷雾、滴眼、饮水法免疫接种威力克（VAXXITEK）鸡传染性法氏囊病病毒火鸡疱疹病毒载体活疫苗（vHVT-013-69株）预防鸡法氏囊病和马立克氏病用于18-19日龄鸡胚胚内注射或1日龄雏鸡颈皮下免疫接种鸡马立克氏病I、III型二价活疫苗（CVI988株+FC126株）预防鸡马立克氏病1日龄雏鸡出壳后，尽快颈皮下注射接种高力优ND 鸡新城疫灭活疫苗（Ulster 2C株）用于预防鸡新城疫雏鸡在1-7日龄接种一次、0.15ml/羽，颈背皮下注射；5周后接种，0.3ml/羽，皮下或肌肉注射。
鸡(LAMβ1)ELISA试剂盒kit说明书
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
鸡(LAMβ1)ELISA试剂盒kit说明书样本实验准备在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。
对收集后当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。
对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，最好-70℃冻存备用。
标本应避免反复冻融。
鸡(LAMβ1)ELISA试剂盒kit说明书液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
5. 培养细胞检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6. 组织标本切割标本后，称取重量。
鸡马立克氏病病毒(MDV)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书
鸡马立克氏病病毒（MDV）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于检测鸡血清，血浆及相关液体样本中马立克氏病病毒（MDV）水平。
实验原理：本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中鸡马立克氏病病毒（MDV）。
用纯化的鸡马立克氏病病毒（MDV）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中马立克氏病病毒（MDV）相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的马立克氏病病毒（MDV）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF 值相比较，从而判定标本中鸡马立克氏病病毒（MDV）的存在与否。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
鸡马立克氏病
病原
• 3．血清型：MDV共分三个血清型，I型为强毒、 超强毒及其人工致弱株（CVI988，荷兰），2型 为天然无毒株（SB-1、301B/1），3型为火鸡疱 疹病毒（HVT） 。 • 4．致病性及免疫特点：主要是靠细胞免疫。 • HVT对火鸡有轻微致病性，对鸡无毒。可用作疫 苗。MDV及HVT属终身感染，因此属于带毒免疫。 HVT只能防止肿瘤的形成，但不能阻止MDV强毒 感染。
鸡马立克氏病 Marek’s Disease, MD
概 述
• 马立克氏病是由马立克病毒引起的鸡的一种淋巴 组织增生性疾病，即肿瘤和神经麻痹性传染病， 临床表现为外周神经及多种组织器官的单核细胞 浸润和肿瘤形成，病鸡消瘦，肢体麻痹或急性死 亡。 • 广泛存在于世界各地，传染性极强，危害极大， 由马立克氏发现，故名之。曾经给养鸡业造成毁 灭性打击。我国从70年代开始广泛流行，80-90 年代泛滥成灾，近一、二年因液氮苗用于防制， 故少发生。
诊断
• 实际诊断中常根据血液学检查和病理学特 征结合病原和抗体的检查来确诊。淋巴细 胞性白血病应注意与马立克氏病鉴别。 • 病原的分离和抗体的检测是建立无白血病 鸡群的重要手段（补体结合反应、 ELISA）。
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病 名 马立克氏病（MD） 淋巴性白血病（LL） 发病日龄 4周龄以上 16周龄以上 临床症状 神经麻痹多见 无 虹膜混浊 多见 极少 病理变化 神经节肿大多见 无 皮肤、肌肉肿瘤 有 无 消化道肿瘤 常有 无 法氏囊病变 弥散性增生或萎缩结节状 肿瘤 病原核酸类型 DNA RNA
概 述
• 禽白血病是由禽C型反转录病毒群的病毒引 起的禽类多种肿瘤性疾病的统称，主要是 淋巴细胞性白血病，其次是成红细胞性白 血病、成髓细胞性白血病。此外还可引起 骨髓细胞瘤、结缔组织瘤、上皮肿瘤、内 皮肿瘤等。大多数肿瘤侵害造血系统，少 数侵害其他组织。 • 本病的危害主要为垂直传播，雏鸡免疫耐 受，对疫苗不产生免疫应答
试剂盒使用说明书
大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
1使用目的：本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉），药物、血清和尿样中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）残留的定量检测。
2实验原理本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原，加入大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）标准品或样品，游离大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）与微孔条上预包被的大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原互相竞争抗大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）含量成反比，通过标准曲线计算样品中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）的含量。
3试剂盒组成3.1预包被的大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。
3.2大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0ug/ml, 0.1ug/ml,0.3ug/ml,0.9ug/ml,2.7ug/ml,8.1ug/ml3.3抗大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）抗体酶结合物：1瓶（6ml）。
3.4显色液A：1瓶（6ml）。
3.5显色液B：1瓶（6ml）。
3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。
3.7样本稀释液：1瓶（10×,6ml），用于样品稀释用。
3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。
3.9说明书一份。
4需要而未提供的材料4.1设备4.1.1波长450nm酶标仪。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测体内特定抗原或抗体的存在和浓度。
ELISA检测试剂盒是用于进行ELISA实验的组合套装，包括抗体或抗原、酶标记物、底物、缓冲液等。
本文将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，以帮助用户顺利进行ELISA实验。
1.准备实验材料：-ELISA检测试剂盒：根据实验需要选择适当的ELISA检测试剂盒，确保其在储存和运输过程中无损坏。
-样本：准备需要检测的样本，如血清、尿液、组织提取物等。
确保样本的质量和浓度满足实验要求。
-微孔板：根据试剂盒的要求选择合适的微孔板，同时注意其质量有无污染。
-基本实验设备：如计量器、洗板机、显微镜等。
2.实验步骤：-取出储存在4℃的试剂，确保其达到室温（一般为20-25℃），再根据实验步骤进行下一步操作。
-预处理样本：根据试剂盒的说明书，进行样本的预处理，包括稀释、纯化、稳定化等步骤。
-加样：将样本按照试剂盒要求的体积加入微孔板中，通常每个孔需要加入100-200μL的样品。
-洗板：使用洗板机或手工操作，将孔中的杂质洗净。
洗板时应注意洗涤缓冲液的使用浓度和洗涤次数。
-加入特异性抗体：根据试剂盒的说明书，将稀释好的特异性抗体加入各孔中，确保操作的准确性和每孔的稀释倍数。
-洗板：重复第4步的操作，将未结合的抗体洗净。
-加入酶标记物：根据试剂盒的说明书，将稀释好的酶标记物加入各孔中，确保加入的量准确无误。
-洗板：重复第4步的操作，将未结合的酶标记物洗净。
-加入底物：将稀释好的底物加入各孔中，使其与酶标记物反应，生成可视化的颜色。
-终止反应：根据试剂盒的要求，在一定的反应时间后，加入终止剂停止反应。
终止剂的选择需符合试剂盒的要求。
-检测结果：使用酶标仪或目视观察检测孔中的颜色变化，通过测量吸光度或颜色强度来确定样本中目标物的浓度。
3.数据分析：-计算样本的结果：根据试剂盒的说明书，根据吸光度或颜色强度测量结果，计算样本中目标物的浓度。
病毒检测试剂盒说明书
加上额外的损失量。可以用网状带，搅拌器，研钵或者其他的研磨装置研磨样品，如果使用 研钵和研杵在研磨不同的样品时要彻底的清洗干净。
试验步骤 1、加入样品：根据下载的表格，在每个样品孔内加入 100 微升样品液，在阳性对照样品孔 和提取液样品孔个加入 100 微升阳性对照和缓冲液。如果有阴性对照在阴性样品孔加入 100 微升阴性对照。 2、孵化酶标板：加完样品后，用小塑料袋将酶标板装好，放入室温孵化 2 小时或者 2-8 度 过夜。 3、准备酶标抗体溶液：注意：使用前 10 分钟准备酶标抗体溶液。 酶标抗体溶液时浓缩液，因此必须用酶标缓冲液稀释，建议的稀释比例在标签上，在专用的 容器内加入适量的酶标缓冲液。为了确保需要，1 毫升溶液用于 8 个样品孔，一个酶标板需 要 10 毫升缓冲液。然后根据标签比例加入酶标抗体。 举例:如果标签上写着 1:100，并且你准备 10ml 酶标抗体溶液，首先需要准备 10ml 酶标缓冲 液然后加入 100 微升抗体到缓冲液内。 加入抗体后，充分混匀，此步非常重要。 4、洗板：样品孵育完成后洗板，快速倾倒溶液到没有其他液体的水池或者废容器内。 每孔加入 200 微升的 1 倍 PBST，快速倒空酶联板，重复 7 次。 洗板结束后，在吸水纸上吸干残余液体。 检查酶联板，所有的样品孔没有样品残渣，如果还有样品残渣再重复洗板并吸干。 5、加酶标抗体溶液:向每个样品孔加 100 微升酶标抗体溶液。 6 孵育酶标板：室温条件下在湿润的箱子中孵育 2 小时。 7、准备底物溶液：每份底物基片能配置 5 毫升底物溶液，浓度为 1 毫克每毫升，大约够 5 排 8 个样品孔。 大约孵育完成前的 15 分钟，为每个基片量取 5 毫升室温下的 1 倍缓冲液，不能直接用手接 触基片，加基片到缓冲液里。 注意：不能接触基片或者底物溶液暴露在强光下，光及污染会使阴性对照的背景颜色加深。 8、洗板：如前面，用 1 倍洗液洗板 8 次。 检查样品孔存在的气泡，用吸水纸巾吸干残存的液体及气泡，如果还有气泡存在可以用干净 的吸头扎破。 9、加底物溶液：每个样品孔加 100 微升底物溶液。（此步要快，保证显色时间一致） 10、孵育酶联板：闭光孵育酶联板 60 分钟。 11、结果判读：肉眼判断或用酶标仪在 405 纳米读数。在光线下存在气泡会改变测试结果， 因此建议在读数前消除气泡。 样品孔的颜色可以判定测试结果。样品孔的颜色不明显判定为阴性，判定结果只有在阳性对 照颜色明显，缓冲液无色的条件下才有效。 结果可能在孵育 60 项 禁止皮肤或者眼睛直接接触，或吞咽其有效成分。为误食该试剂应了解注意事项，用过该试 剂之后要彻底的冲洗双手。
鸡禽流感病毒检测试剂盒说明书
使用说明书一、可做90次检测所需要的试剂：a)1块包被AIV抗原的微孔板b)10ul AIV阳性对照血清c)10ul AIV阴性对照血清d)100ul 针对鸡IgG(H+L)的山羊抗体过氧化物酶标记溶液e)40ml 稀释缓冲液f)10ml ABTS-Hydrogen Peroxide基质溶液g)2.5ml 5倍浓度反应终止液，5%SDS（用去离子水1：5稀释）h)20ml 20倍浓度洗涤液（用去离子水1：20稀释）注意：所有试剂盒内的试剂要2-7℃保存，不要冷冻。
二、检测需要但试剂盒没有提供的设备和材料：a)高精密度的移液器（1-20ul移液器）b)0.2ml、1.0ml和5.0ml移液器c)8道或12道移液器及吸头d)2个量筒（50ml）e)1ml或5ml硼硅酸盐玻璃试管f)未包被的低吸附的96孔微孔板（如Nunc catalog#269620）g)实验室级别用水（去离子蒸馏水）h)96孔板酶标仪（波长405-410nm）i)洗板设备j)盛有漂白剂或其他氧化剂的废液容器三、使用试剂和AIV抗原包被的微孔板的操作者请注意：a)所接触的试剂和样品是具有生物危险性的材料b)防止所有试剂接触皮肤和眼睛。
一旦接触，立即用冷水冲洗接触的地方。
c)洗涤液、对照液、检测板、样品和其它试剂盒内的试剂在处理前必须用漂白剂或其他强氧化剂来净化。
d)特别要注意任何检测试剂不能被血清或细菌污染。
e)每一块板中均有湿度指示剂，如果湿度指示剂变粉红色，这说明板有可能被损害，这时可以用一些办法进行处理，如净化（即用漂白液洗板）。
f)好的实验结果是在依照其后的操作程序，并用正确的、安全的实验室操作技术达到的。
g)不要使用过了有效期的试剂盒。
h)决不能用嘴接触移液器在使用开始前让所有试剂放置到室温（大约22-24度）四、样品采集为了建立群体血清学检测程序，建议每一个群体至少要在一个固定间隔时间（如每四周）随机抽取30份或更多的样品。
ELISA 检测试剂盒 说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断小鼠小鼠（（MouseMouse））肿瘤坏死因子可溶性受体肿瘤坏死因子可溶性受体ⅠⅠ（TNFsR-TNFsR-ⅠⅠ）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ（TNFsR-Ⅰ）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ（TNFsR-Ⅰ）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测病原体、抗体或其他分子的存在和浓度。
它具有高灵敏度、高特异性、易操作和较低成本的优势，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和免疫学领域。
本篇文章将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，包括实验准备、试剂的使用步骤和结果解读。
一、实验准备1.阅读检测项目的说明书：在使用试剂盒前，仔细阅读说明书，了解试剂的使用方法、灵敏度和特异性等关键信息。
2.样本准备：根据实验要求，准备样本。
如果需要检测血清中的抗体水平，可以采集血液样本，离心分离血清；如果需要检测细胞培养上清中的分子，将上清收集，并使其清晰，避免细胞或杂质的污染。
3.样本预处理：根据实验需求，对样本进行必要的预处理。
例如，可以通过加热、稀释、酶解等方式来处理样本，以改变样本组分和浓度。
4.准备品质控制样品：制备阳性和阴性控制样品，用于评估试剂盒和实验操作的稳定性和准确性。
5.实验器材准备：准备所需实验器材，如酶标板、移液器、微孔板洗涤仪等。
确保器材的干净和完整，并按照说明书要求对其进行预处理。
二、试剂使用步骤1.试剂准备：根据说明书要求，将试剂从冰箱中取出，并在室温下放置一段时间使其恢复到室温。
确保试剂瓶盖紧闭，并避免暴露在直接阳光下。
2.实验操作：按照说明书的要求，将试剂加入到酶标板中，并根据实验设计进行标准曲线的设置。
标准曲线用于测量未知样品的数量，并计算出浓度。
3.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行孵育。
孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。
4.洗涤：使用洗涤缓冲液对酶标板上的不特异性结合物进行洗涤。
洗涤过程应准确控制洗涤孔板次数和洗涤液的体积。
5.补液：在洗涤完成后，加入辣根过氧化物酶标况稀释液，促进酶标物与特异性结合物的反应。
6.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行二次孵育。
7.反应停止：根据试剂盒的要求，加入相应的停止液，停止酶反应。
鸡马立克氏病的诊断
鸡马立克氏病的诊断鸡马立克氏病（简称马立克氏病）是一种由马立克氏病毒引起的可怕传染病，该病毒主要感染家禽，尤其是鸡。
马立克氏病对家禽养殖业造成了严重的影响，因此准确、早期的诊断对预防和控制马立克氏病至关重要。
本文将介绍马立克氏病的诊断方法及其相关技术，以便于饲养员和兽医能够及时有效地诊断和防治该疾病。
我们来了解一下马立克氏病的临床表现。
患有马立克氏病的鸡主要表现为以下症状：厌食、蛋产量下降、呆滞、精神萎靡、发蓝、呼吸困难、腹泻、贫血、肿腹、饮水增加、黄疸等。
这些临床症状并不都同时出现，但一旦发现鸡出现上述症状的任何一种或几种，就有可能患有马立克氏病。
所以，在诊断马立克氏病时，兽医应该结合临床症状进行综合判断。
我们需要了解一下马立克氏病的实验室诊断方法。
马立克氏病的实验室诊断方法主要有几项：1. 病原学检测采用病毒分离培养技术，通过禽类细胞株诊断病毒，是马立克氏病诊断的一项重要方法。
应用PCR技术检测病毒的核酸也是一种常用的方法。
PCR检测方法的敏感性和特异性非常高，可以用来快速鉴定病毒。
2. 抗体检测在马立克氏病的诊断中，抗体检测是非常关键的一环。
可以通过ELISA（酶联免疫吸附测定法）和中和试验等方法检测血清中的特异性抗体水平，并可用于对马立克氏病的暴发情况进行监测。
3. 组织学检测组织学检测是通过组织病理学的方法，对鸡的相关组织进行病理学检查。
在病毒感染后，鸡的组织会产生不同程度的病变，如血管扩张、出血、淋巴细胞增加等，这些病变都可以通过组织学检测来进行诊断。
在实际操作中，一般结合以上几项检测手段，以提高诊断的准确性和可靠性。
无论是采用病原学检测、抗体检测还是组织学检测，都需要通过专业的实验室设备和技术人员进行操作，以保障诊断的准确性。
在饲养管理方面，饲养员还可以通过观察鸡舍环境、关注鸡的饮食情况和行为习惯等对鸡的健康状况进行监测。
一旦发现有鸡出现上述临床症状，应及时向兽医进行报告，并进行详细检查和诊断。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA检测试剂盒使用指南1.简介：1.1 本文档旨在提供ELISA检测试剂盒的详细使用指南，以帮助用户正确、高效地进行ELISA检测。
1.2 ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫测定方法，用于检测体液中特定抗原或抗体的存在与浓度。
1.3 本文档将涵盖ELISA检测试剂盒的准备、样本处理、试剂操作、结果读取等详细步骤。
2.准备：2.1 确保实验室环境整洁，无污染。
2.2 检查所需试剂、仪器和设备是否完整，并检查有效期和储存条件。
2.3 根据实验需要，准备所需样本和质控品，并储存于适当的条件下。
3.样本处理：3.1 根据实验目的选择合适的样本类型，如血清、血浆、尿液等。
3.2 根据试剂盒说明书的要求，对样本进行适当的稀释和预处理。
3.3 严格控制操作条件，避免样本污染和交叉污染。
4.试剂操作：4.1 根据试剂盒说明书，将所需试剂从冰箱中取出，并在室温下适当恢复。
4.2 严格按照说明书的要求，对试剂进行稀释和混合。
4.3 操作过程中注意洁净实验台面，避免试剂交叉污染。
5.检测步骤：5.1 将适量的稀释后的样本、质控品和标准品分别装入试管中。
5.2 添加适量的酶标记抗体或底物，并充分混匀。
5.3 按照试剂盒说明书的要求，进行孵育和洗涤步骤。
5.4 添加底物并进行反应，控制反应时间。
5.5 停止反应，并使用酶标仪测量吸光度。
6.结果读取：6.1 根据试剂盒说明书，根据吸光度值和标准曲线，计算样本中目标物质的浓度。
6.2 将测量结果记录，并进行统计和分析。
6.3 评估实验结果的可靠性，并进行结果的解释和报告。
7.注意事项：7.1 严格按照试剂盒说明书的要求进行操作，避免任何操作步骤的误差和误操作。
7.2 注意实验室安全，避免接触有害化学物质，正确使用防护设备。
7.3 在实验过程中遵循生物安全操作规范，避免潜在的感染风险。
此外，本文档涉及附件，请在附件部分查看相关详细信息。
1、ELISA 试剂盒使用说明书（5 孔板格式）
ELISA kitInstruction Manual5-plate formatJuly, 2006For research use only.Not for use in diagnostic or therapeutic procedures.ContentsAbbreviations 2 Introduction 3 Contents of the kit 4 Hazard information 4 Materials and reagents required but not provided 4 Working solutions 4 General procedure 5 Coating antibodies 5 Blocking 5 Test samples and standards 5 Biotinylated detector antibodies 5 SPP conjugate 5 Substrate 5 Cytokine standards 6 Storage kit reagents 6 Directions for washing 7 Trouble shooting 7 References 8AbbreviationsAPC Antigen presenting cellsBSA Bovine serum albuminCD Cluster of differentiationCSB Cytokine stabilization bufferDMSO Dimethyl sulfoxideELISA Enzyme linked immunosorbent assayGM-CSF Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor IFN InterferonIL InterleukinMHC Major histocompatibility complexOD Optical densityPB Phosphate bufferPBS Phosphate buffered salinePBST PBS containing 0.05% Tween-20PBST-B PBST containing 0.5% bovine serum albuminSPP Streptavidin-HRP polymerT h T helper subsetTMB TetramethylbenzidineTNF Tumor necrosis factorIntroductionCytokines are a group of regulatory proteins critically involved in many physiological processes such as immune recognition, cell differentiation and cell proliferation. They have been identified in many vertebrate species and are produced by a variety of different cell types. Cytokines are usually produced transiently and locally, acting in a paracrine or autocrine manner. They interact with high affinity cell surface receptors specific for each cytokine or cytokine group and are active at very low concentrations mostly in the picogram range.It is well known now that the type of an antigen-specific immune response largely depends on the selection or preferential activation of defined CD4+T cell subsets (i.e. T h1 and T h2). Activation of these subsets is characterized by the secretion of distinct patterns of cytokines. T h1, but not T h2 cells, primarily secrete IL-2 and IFN-γ while T h2, but not T h1 cells, produceIL-4, IL-5, IL-6, IL-10 and IL-13. Other cytokines, such as TNF-α and GM-CSF are produced by both T h subsets. In addition, the production of IL-12 and IL-10, produced by antigen presenting cells (APC) such as macrophages and dendritic cells, critically contributes to the preferential expansion of T h1- or T h2-type of cells. For instance, early production of IL-12 is considered essential for the development of T h1 cells. On the other hand, the absence or low concentrations of IL-12 and IFN-γ in the early phase of an immune response and concomitant production of IL-4 by cells of the mastcell/basophil lineage or T cells themselves is known to favor the development of T h2 cells. In addition to their regulatory effects on T h subset differentiation, the cytokines released by the two types of T h cells also produce distinct effector functions. For instance, IL-4 and IFN-γhave differential or antagonistic activities on immunoglobulin isotype selection or MHC class II expression. Therefore, the properties of an immune response can be best studied by determining the amounts of cytokines produced by the responding T cells and APC.Contents of the kitItemsQuantity(5-plate format)StorageconditionsCoating antibodies 1 vial 4ºC (39ºF)Cytokine standard 5 vials 4ºC (39ºF)Biotinylated detector antibodies 1 vial 4ºC (39ºF)SPP conjugate (Streptavidin-HRP polymer) 1 vial ≤ -20ºC (-4°F)TMB substrate tablets 5 4ºC (39ºF)Substrate buffer capsules 5 Rt*BSA stock solution (10%) 2 vials (24 ml) 4ºC (39ºF)Cytokine stabilization buffer (CSB)** 1 vial (5 ml) 4ºC (39ºF)Tween-20 1 vial (5 ml) Rt*ELISA plates8 Rt*Adhesive cover slips 10 Rt** Room temperature** For serum and plasma samples only; see under “Test samples and standards”Materials and reagents required but not provided•PB stock: dissolve 96.0 g Na2HPO4.2H2O plus 17.5 g KH2PO4in 1.0 L distilled water and adjust pH to 7.4•Sterile distilled water•H2SO4•Dimethyl sulfoxide (DMSO)•Pipetting devices for the accurate delivery of volume required for the assay performance •Plate washer: automated or manual (squirt bottle, manifold dispenser, etc)•Reading device for microtiter-plate set to 370, 450 and/or 655 nmWorking solutions•PBS: add 10 ml PB stock and 8.8 g NaCl to 1 L distilled water. Adjust pH to 7.4.Alternatively, use commercially available liquid PBS from Invitrogen or other suppliers.Do not use commercially available PBS tablets for the preparation of the coating solution (the filler in the tablets interferes with the coating process).•PBST: 0.5 ml Tween-20 dissolved in 1 L PBS.•PBST-B: 2 ml BSA stock solution (10%) added to 38 ml PBST.•Blocking buffer: 2 ml BSA stock solution (10%) added to 18 ml PBS (for 1 ELISA plate). •Substrate buffer: the contents of one capsule is dissolved in 100 ml distilled water (takes approximately 5 minutes). For optimal performance, the buffer solution should be used within60 minutes.•Stopping solution: 2 M H2SO4TMB (tetramethylbenzidine) and sodium perborate (in substrate buffer)General procedureCoating antibodies•Reconstitute the lyophilized antibodies by injecting 250 µl of sterile distilled water into the vial. Mix the solution gently for approximately 15 seconds and allow it to stand for 2 minutes at room temperature. Avoid vigorous shaking. To coat 96 wells of an ELISA plate 50 µl is pipetted out of the vial (or use a frozen aliquot of 50 µl; see "Storage kit reagents") and added to 5 ml PBS. Mix gently.•Add 50 µl of diluted antibody solution to each well of the ELISA plate and fill up to 100 µl with PBS.•Seal the plate to prevent evaporation.Incubate overnight at 4ºC or alternatively 1 to 2 hours at 37ºC.Blocking•Remove the coating antibody solution and wash the wells at least six times with PBST. •Add 200 µl of blocking buffer.•Seal the plate and incubate at 37ºC for 1 hour.Test samples and standards•Remove the blocking buffer but do not wash.•Add 1/20 volume of CSB to serum or plasma samples but not to other samples such as cell culture supernatants; CSB inhibits the degradation of cytokines in pure serum or plasma. •Dilute standards and test samples in an appropriate diluent (see “Cytokine standards”). •Add 100 µl to each well.•Seal the plate and incubate at 37ºC for 2 hours or overnight at 4ºC.Biotinylated detector antibodies•Remove test samples/standards and wash the wells at least six times with PBST. •Reconstitute the lyophilized antibodies by injecting 0.5 ml of sterile distilled water into the vial. Mix the solution gently for approximately 15 seconds and allow it to stand for 2 minutes at room temperature. Avoid vigorous shaking. Hundred microliter is pipetted out of the vial (or use a frozen aliquot of 100 µl; see "Storage kit reagents") and added to 10 ml PBST-B.Mix gently.•Add 100 µl of diluted antibody solution to each well.•Seal the plate and incubate at 37ºC for 1 hour.SPP conjugate•Remove detector antibody solution and wash the wells at least six times with PBST. •Reconstitute the contents of the vial by injecting 0.5 ml of sterile distilled water into the vial.Mix the solution gently for approximately 15 seconds and allow it to stand for 1 minute at room temperature. Avoid vigorous shaking. Hundred microliter is pipetted out of the vial (or use a frozen aliquot of 100 µl; see "Storage kit reagents") and added to 10 ml PBST-B. Mix gently.•Add 100 µl to each well.•Seal the plate and incubate at 37ºC for 1 hour.Substrate•Remove SPP conjugate and wash the wells at least six times with PBST.•Dissolve one TMB tablet in 1.0 ml DMSO (vortex at high speed for 5 minutes for complete dissolution)and than add 10 ml substrate buffer.•Mix thoroughly and immediately dispense 100 µl into each well. Leave the plate on the laboratory bench at room temperature (color development between 10 and 30 minutes).The substrate produces a soluble end-product that is blue in color and can be read spectrophotometrically at 370 or 655 nm. The reaction can be stopped by adding 50 µl of2 M H2SO4 (resulting in a yellow solution which can be read at 450 nm).Cytokine standardsFor maximum recovery, the vial with lyophilized cytokine standard should be reconstituted in 0.5 ml distilled water and allowed to stand for 1 minute at room temperature. Thereafter, the reconstituted cytokine standard (stock solution) is placed on melting ice and is immediately diluted as indicated below (preferentially within one hour). Use vials with cytokine standards only once.Please note that temperature of buffers and standard solution(s) should now be kept at 0-4ºC until use in the ELISA.The total amount of cytokine standard is indicated on the label of the vial (ng/vial). After reconstitution in 0.5 ml water, the concentration (ng/ml) will become twice the amount on the label [e.g. amount on label is 4.8 ng/vial; after reconstitution, the concentration becomes9.6 ng/ml = 9600 pg/ml].The standard stock solution is diluted to 320 pg/ml in PBST-B (highest concentration cytokine to be used in the standard range).The linear region of the cytokine standard curve is now obtainable in a series of two-fold dilutions in PBST-B ranging from 320 to 5 pg/ml. Always include a blank control (PBST-B only) in the standard range.Before establishing the standard curve, the OD value of the blank control (OD.bl) is subtracted from the measured OD values of the different standard solutions. The standard curve is now plotted as the standard cytokine concentration versus the corresponding (measured) OD value minus OD.bl. In addition, the actual OD values of the test samples are determined by subtracting OD.bl from the measured OD values.The concentration of the cytokine in the test sample can then be interpolated from the standard curve. It is useful to prepare a series of dilutions of the unknown test sample to assure that the OD will fall in the linear portion of the standard curve.Note 1: The OD value measured for the blank control (OD.bl) must be below 0.2.Note 2: for measuring cytokines in cell culture supernatant, samples should be diluted inPBST-B. However, when measuring cytokines in pure serum or plasma, the diluent for the standard and blank control should preferentially be control serum or plasma originating from the same species.Storage kit reagentsThe vials with lyophilized coating antibodies and biotinylated detector antibodies can be safely stored in a refrigerator for a defined length of time (expiry date indicated on the vial). After reconstitution, the antibodies remain fully active for minimal 6 months at 4ºC (39ºF) when kept sterile. However, it is strongly recommended to divide the reconstituted antibody solutions into small aliquots for single use. These aliquots should be stored at ≤-20ºC. Under these conditions the antibodies are stable for at least one year.Upon arrival, the vial with lyophilized SPP conjugate should be stored at ≤ -20°C. Storage of the vial at room temperature or at 4ºC for several months may lead to lower OD readings in the ELISA. After reconstitution, the SPP solution is stable for 2 months at 4°C but rapidly looses activity when stored at room temperature. It is strongly recommended that after reconstitution, the solution is immediately divided into small aliquots for single use and stored at ≤-20°C. Under these conditions SPP is stable for minimal 12 months.Directions for washing•Incomplete washing will adversely affect the assay. All washing must be performed with wash buffer (PBST).•Washing can be performed manually as follows: completely aspirate the liquid from all wells by gently lowering an aspiration tip (aspiration device) into each well. After aspiration, fill the wells with at least 300 µl wash buffer. Let soak for 10 to 20 seconds, then aspirate the liquid. Repeat as directed under "General procedure". After washing, the plate is inverted and tapped dry on absorbent paper.•Alternatively, the wash buffer may be put into a squirt bottle. If a squirt bottle is used, flood the plate with wash buffer, completely filling all wells. After washing, the plate is inverted and tapped dry on absorbent paper.•If using an automated washing device, the operating instructions should carefully be followed.Trouble shooting•Poor consistency of replicates can be overcome by increasing the stringency of washes particularly after the incubation step with detector antibody.•High values of the blank control (optical density > 0.2) can be overcome by shortening the incubation time with the substrate solution or is caused by improper washing procedures. •Inconsistent replicates may be due to cross-contamination of wells by improper pipetting procedures.•If no signal is observed in the wells with the standards•try a new vial with cytokine standard•check the pH of the substrate solution (between 5.0 and 5.5)•verify whether the antibody, SPP conjugate and standardpreparations were properly diluted•Avoid sodium azide in wash buffers and diluents, as this is an inhibitor of peroxidase activity.•Storage of reconstituted SPP at room temperature for several days can lead to a significant loss of SPP activity and consequently low OD readings.ReferencesBooks:•Practice and theory of enzyme immunoassays 1985In: Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology, Vol.15 (eds R.H.Burdon and P.H. van Knippenberg)Science Publishers bv, Amsterdam, The Netherlands•ELISA and other Solid Phase Immunoassays.Theoretical and Practical Aspects 1988(eds D.M.Kemeny and S.J.Challacombe)John Wiley & Sons Ltd, Chichester, UK• A practical guide to ELISA 1991(ed D.M.Kemeny) Pergamon Press, Oxford, UKReview of U-CyTech ELISA references:Human cytokines:•Arend, S.M. et al. 2000 J. Infect. Diseases 181: 1850-1854 •Demirkiran, A. et al. 2006 Liver Transpl. 12: 277-284 •Hoogendoorn, M. et al. 2005 Clin. Cancer Res. 11: 5310-5318 •Tang, Y-M. et al. 2006 World J. Gastroenterol. 11: 4575-4578•de Waal, L. et al. 2004 J. Virol. 78: 1775-1781Monkey cytokines:•Fallon, P.G. et al. 2003 J. Infect. Dis. 187: 939-945•Hartman, G. et al. 2005 Vaccine 23: 3310-3317•Kornfeld, C. et al. 2005 J. Clin. Invest. 115: 1082-1091 •Mascarell, L. et al. 2006 Vaccine 24: 3490-3499•Polakos, N.K. et al. 2001 J. Immunol. 166: 3589-3598•de Swart, R.L. et al. 2002 J. Virol. 76: 11561-11569Mouse cytokines:•Eijkelkamp, N. et al. 2004 J. Neuroimmun. 150: 3-9•Kavelaars, A. et al. 2005 J. Neuroimmun. 161: 162-168•Vroon, A. et al. 2005 J. Immunol. 174: 4400-4406Rat cytokines:•Dieleman, J.M. et al. 2006 Life Sci. 79: 551-558•Pacheco-López, G. et al. 2005 J. Neurosci. 25: 2330-2337•Sajti, E. et al. 2004 Brain Behav. Immun. 18: 505-514•Teunis, M.A.T. et al. 2002 J. Neuroimmun. 13: 30-38。
鸡马立克氏病的诊断方法
2019年第08期鸡马立克氏病（MD ）是鸡的一种高度接触传染性的、由疱疹病毒引起的淋巴组织增生性疾病。
此病的特征是病鸡的外周神经、性腺、虹膜、各种脏器和皮肤单核细胞浸润，是淋巴瘤性质的肿瘤疾病。
本病最早在美国曾有过暴发，以后在荷兰、英国和许多国家发现此病，现在本病广泛流行于世界各个养禽国家，对养鸡业造成巨大经济损失。
在我国直至20世纪90年代，有不少地方发现本病的流行和危害。
后期开始对本病进行了研究，先后分离出了有良好致病力的京-1株强毒，研制出火鸡胞疹病毒（HVT ）冻干苗和同源弱毒预防疫苗，填补了我国有关马立克氏生物药品的空白，又研究出简便易行的血清学诊断方法。
这些成果已在全国各地推广应用，对控制本病减少危害起到了很好的作用。
1病毒分离人工接种病毒后1~2d 或接触感染后5d ，就可以从鸡体内分离出病毒。
分离病毒的时间与使用的病料有关。
如果从脾脏分离病毒，可在感染后5~7d 进行；如果从血液分离，可在1~2周进行；如果从羽毛囊分离，最好在3周进行，分离方法是从上述病料获得的淋巴细胞、白细胞或含细胞的羽髓浸提液，直接接种到CES 培养细胞或DEF 单层上，每天观察细胞病变，一般在5~14d 出现。
也可以用感染鸡的肾脏直接制备细胞培养物，还可将病毒细胞培养物接种于4~5d 的鸡胚卵黄囊，30%以上的胚在绒毛尿膜上可产生典型的痘斑。
如果接种于1周龄以内的易感鸡雏，至少应观察2~10周，然后进行有无病毒感染的检查。
2血清学试验鸡马立克氏病的血清学试验包括检查病毒抗原和沉淀抗体两方面。
可以用荧光抗体法或酶抗体法检查鸡组织中的病毒抗原或肿瘤特异性抗原，或用免疫扩散试验检查羽毛囊抗原。
同样，这些方法也可用于检测血清抗体。
此外，还可以用病毒中和试验检查中和抗体。
显然以免疫扩散法最为简单易行。
用已知的阳性血清做免疫扩散试验来检查羽毛囊抗原，操作简便。
只要从受检鸡身上拔下几根含羽髓的羽毛，用玻璃棒做适当的挤压浸提后，就可作免疫扩散试验。
鸡马立克氏病诊断技术规程_百替生物
鸡马立克氏病诊断技术规程_百替生物鸡马立克氏病诊断技术规程1范围本标准规定了鸡马立克氏病(MD)的临床症状与病理变化、实验室诊断和综合判定。
本标准适用于辽宁省境内的一切从事鸡类饲养、经营和鸡类产品生产、经营以及从事动物防疫活动的单位和个人对鸡马立克氏病的诊断、疫病监测及流行病学调查。
2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB／T18643-2002鸡马立克氏病诊断技术标准SN／T1454-2004鸡马立克氏病病毒分离与鉴定方法NT/T905-2004鸡马立克氏病强毒感染诊断技术3临床症状与病理变化3.1临床症状3.1.1神经型病鸡步态不稳，发生不全或完全麻痹，不能站立，蹲伏地上，并且两腿前后伸展呈“劈叉”姿势。
3.1.2皮肤型病鸡多在颈部、翅膀和大腿外侧体表毛囊腔形成结节及小的肿瘤状物。
3.1.3眼型病鸡一侧或两侧眼睛失明，瞳孔边缘不整齐呈锯齿状，虹彩消失，眼球如鱼眼，呈灰白色。
3.1.4内脏型病鸡精神萎靡，呆顿，食欲下降，明显消瘦，常缩颈蹲在墙角下。
羽毛松乱无光泽，皮肤苍白，排绿色稀便。
3.2病理变化3.2.1神经型外周神经肿胀，呈半透明水肿样，色泽变淡，横纹消失，其肿胀程度一般为正常神经的2倍～3倍。
这些变化多发生在腰荐神经丛、坐骨神经丛、臂神经丛、颈部迷走神经丛等部位。
3.2.2皮肤型以皮肤的羽毛囊为中心，形成半球形隆起的肿瘤，其表面有时可见鳞片状棕色痂皮。
3.2.3眼型虹膜呈环状或斑点状褪色，出现淡灰色；瞳孔不规则，有时偏向虹膜一侧。
3.2.4内脏型以内脏出现肿瘤为特征，其中肝脏、腺胃的发生率最高。
3.3病理组织学变化3.3.1采集病鸡肿胀的外周神经和内脏的肿瘤组织样品，按常规方法制备石蜡切片、苏木素伊红(HE)染色。
通过普通光学显微镜进行病理组织学观察判定。
鸡马立克氏病的诊断方法与防控建议
中国动物保健2024.01摘要：马立克氏病是鸡最常见的淋巴组织增生性疾病，其特征是形成外周神经及其他器官中的单核细胞浸润和肿瘤。
鸡马立克氏病是由疱疹病毒引起的，具有高度传染性，其致病性与其他鸡淋巴肿瘤疾病不同。
鸡马立克病的发病率和死亡率高，危害大，常继发鸡病原体，是一种急性传染病，马立克氏病破坏法氏囊、胸腺、脾脏等免疫器官，引起强烈的免疫抑制，并影响各种疫苗的预防效果。
病鸡是鸡马立克氏病主要传染源，一旦感染可迅速在鸡群中散播，造成严重的经济损失，因此可以通过实施合理的马立克病诊断和监测方法，积极推广有效的综合防治措施，进一步降低马立克病对鸡造成的经济损失。
本文就鸡马立克病给养禽业造成的损失，对鸡马立克病的病因、流行特点、诊断方法以及防控措施等进行了详细论述，以期为防治鸡马立克氏病提供积极有效的方案。
关键词：鸡；马立克氏病；诊断；防控鸡马立克氏病的诊断方法与防控建议梁海英（山东省临沂市莒南县农业农村局山东临沂276600）收稿日期：2023-03-14作者简介：梁海英（1972.2—），女，山东临沂人，大专，中级兽医师，主要从事畜牧兽医工作。
1907年由Josef Marek 首次报道马立克氏病；1967年，英国和美国的两个实验室从接种病鸡细胞的细胞培养物中分离出疱疹病毒，随后用从羽毛囊中提取的病毒进行感染试验，证实马立克氏病的病原体是病毒；1985年，有相关研究建立了马立克氏病肿瘤诱导的淋巴母细胞系，测定了肿瘤细胞的T 细胞特性、细胞溶解期和疾病的免疫抑制期，阐明了暂时性麻痹与马立克氏病病毒感染的关系，并分离出马立克病毒。
在未开发出有效疫苗之前，马立克氏病造成的经济损失非常惨重，随后几年，对马立克氏病的研究不断有新发现，制作出马立克氏病弱毒疫苗和火鸡疱疹病毒（HVT ）疫苗，使得免疫接种疫苗成为防控鸡马立克氏病的有效手段。
鸡马立克氏病破坏法氏囊、胸腺、脾脏等免疫器官，可以引起鸡只严重的免疫抑制，病鸡更易继发相关疾病，严重影响各种预防疫苗的有效性。
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鸡马立克氏病病毒抗体（MDV Ab）ELISA试剂盒使用说明书南京森贝伽现货供应，质量保证，价格优惠，试剂盒首选森贝伽。
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清，血浆及相关液体样本中鸡马立克氏病病毒抗体（MDV Ab）的表达。
实验原理：
本试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中鸡马立克氏病病毒抗体（MDV Ab）。
用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中马立克氏病病毒抗体（MDV Ab）相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中鸡马立克氏病病毒抗体（MDV Ab）的存在与否。
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞
浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备
用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1
孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。
然后在待测样品孔先
加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为鸡马立克氏病病毒抗体（MDV Ab）阴性
阳性判定：样品OD值≥临界值（CUT OFF）者为鸡马立克氏病病毒抗体（MDV Ab）阳性
注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。