液相色谱水—异丙醇体系测定脂溶性维生素A,D,E

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液相色谱法测定乳品中维生素A、 D、 E含量

液相色谱法测定乳品中维生素A、 D、 E含量吴少明【摘要】A new method was established for determination vitamin A, D, E from dairy products by ultra-high pressure liquid chromatography ( UPLC ) technology. Sample was saponificated under alkaline conditions, and then by liquid-liquid extraction, dehydrated and concentrated to nearly dry, the residue was dissolved in methanol, flitted and analysis. Limit of detection (S/N=3) and limit of quantization of vitamin A, D, E were 0. 2~10 μg/100 g. There was an excellent linear correlation (r2>0. 999) of vitamin A, D, E. When infant formula powder was spiked with vitamin A, D, E at three levels (n=6), the average recoveries were 94. 0% ~99. 1%, and relative standard deviation (RSD) was 2. 1% ~6. 1%, respectively. The established method is simple, fast high sensitivity, good reproducibility. The method can be adapted to detection vitamin A, D, E from dairy products.%采用超高压液相色谱技术，建立了乳品中维生素 A、 D、 E的测定方法。

保健食品中9种脂溶性维生素的测定BJS201717

附件5保健食品中9种脂溶性维生素的测定BJS 2017171范围本方法规定了营养素补充剂类保健食品中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素含量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本方法适用于营养素补充剂类保健食品中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素含量的测定。

2原理试样经混合溶液（异丙醇：二氯甲烷：甲醇=10:10:80，v:v:v）提取后，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。

3试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 试剂3.1.1甲醇：质谱级。

3.1.2乙腈：质谱级。

3.1.3异丙醇：色谱纯。

3.1.4丙酮。

3.1.5二氯甲烷。

3.1.6提取溶液（异丙醇：二氯甲烷：甲醇=10:10:80，v:v:v）：取异丙醇50mL、二氯甲烷50mL，用甲醇稀释至500 mL，混匀。

3.1.7 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1 mL用水稀释至1 000 mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。

3.1.8 0.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸1 mL用甲醇稀释至1000mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。

3.2标准品维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。

3.3标准溶液配制3.3.1标准储备液（100μg/mL）—41 —3.3.1.1维生素K1标准储备液：称取0.01 g（精确至0.000 1 g）的维生素K1标准品（3.2），加入5mL丙酮（3.1.4）溶解，用甲醇转移并定容于100 mL棕色容量瓶中。

3.3.1.2 β-胡萝卜素标准储备液：称取β-胡萝卜素标准品（3.2）0.01 g（精确至0.000 1 g），用二氯甲烷（3.1.5）溶解，转移并定容至100 mL棕色容量瓶中。

高效液相色谱法同时测维生素a和维生素d的原理

高效液相色谱法同时测维生素a和维生素d的原理高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种分离技术，常用于分析和测定复杂的样品中目标化合物的含量。

在测量维生素A和维生素D时，HPLC可以提供高效、准确和灵敏的分析结果。

HPLC的基本原理是将一种混合物分离成为其组成部分。

它涉及到一个流动相（溶剂）和一个固定相（填充物）。

样品在流动相中通过固定相，根据不同化学性质的相互作用以及在两者之间的亲和力选择性地分离出来。

在测量维生素A和维生素D时，下面是HPLC的基本步骤：1.样品制备：对于维生素A和维生素D的测量，样品通常是食品、血液、营养补充剂等。

样品需要进行前处理步骤，如提取、稀释和过滤，以获得可测量的分析样品。

2.色谱条件设置：选择适当的色谱柱和填料，以确保目标化合物的高效分离。

维生素A和维生素D的分子结构不同，因此可能需要使用不同的填料和溶剂体系。

3.流动相选择：选择合适的溶剂系统以实现维生素A和维生素D的分离。

流动相通常是有机溶剂和缓冲溶液的混合物。

溶剂的选择应考虑到色谱柱类型、填料性质和化合物的亲和力。

4.柱温和流速控制：控制色谱柱的温度和流速以优化分析条件。

柱温度可以影响化合物的分离性能，而流速可以影响分析时间和色谱峰形。

5.峰检测：使用适当的检测器检测样品中维生素A和维生素D的峰。

常见的检测器包括紫外-可见吸收光谱仪（UV-VIS）、荧光检测器和质谱仪。

检测器的选择应根据目标化合物的特性和所需的灵敏度进行。

6.标准曲线与定量：根据一系列已知浓度的标准物质制备标准曲线，并根据样品中的峰面积与标准曲线进行定量。

通过比较样品峰的面积和标准曲线上对应峰的面积，可以确定维生素A和维生素D的浓度。

7.数据分析与结果解释：根据定量结果进行数据分析和结果解释。

可以计算样品中维生素A和维生素D的浓度，并进行统计比较或评估。

总结起来，HPLC同时测维生素A和维生素D的原理是通过将样品分离并进行检测来确定目标化合物的含量。

液相色谱串联质谱法测定血清维生素A、E含量

摘要：目的建立液相色谱串联质谱法（ＬＣ—ＭＳ／ＭＳ法）测定血清维生素Ａ和维生素Ｅ含量的方法。方法采用硫酸锌沉淀蛋白，９６孔蛋白沉淀板过滤。采用ＬＣＭＳ／ＭＳ［正离子电喷雾离子化（ＥＳＩ＋）的多反应监测模式（ＭＲＭ）］氘代同位素内标法检测血清维生素Ａ、Ｅ含量并进行相关方法学验证。结果ＬＣ—ＭＳ／ＭＳ检测血清维生素Ａ的批内精密度变异系数为３．２％（２．４％～３．９％），批问变异为５．５％（５．０％～６．０％）；维生素Ｅ的批内精密度变异系数为４．１％（３．Ｏ％～５．１％），批间变异为８．０％（７．６％一８．３％）。维生素Ａ在０．０６—２１ｘｇ／ｍＬ、维生素Ｅ在１．２—４０ｐ￣ｇ／ｍＬ范围内线性良好，线性相关系数分别为０．９９８７、０．９９０９。维生素Ａ、维生素Ｅ的定量限分别为０．０３ｇ／ｍＬ、０．８ｇ／ｍＬ；检测限分别为０．０２ｌｘｇ／ｍＬａｎｄ０．０１ｇ／ｍＬ。维生素Ａ低浓度回收率为１０７．５％，高浓度为１０６．９％；维生素Ｅ的低浓度回收率为９１．９％，高浓度为８８．４％。与液相色谱方法进行比对，两种方法的结果差异无统计学意义（Ｐ值均大于０．３０）说明两种方法具有一致性。结论ＬＣ—ＭＳ／ＭＳ检测血清维生素Ａ及维生素Ｅ的灵敏度高，结果准确、稳定，可应用于临床分析。关键词：维生素Ａ；维生素Ｅ；液相色谱串联质谱；内标法；血清
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ＬａｂｅｌｅｄＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ＆ＣｌｉｒｔＭｅｄＡｏｒ．２０１８．Ｖｏ１．２５．Ｎｏ．４，

高效液相色谱-串联质谱法测定奶粉中的维生素A、维生素D、维生素E

ｔｅｄｂｙｎ—ｈｅｘａｎｅａｆｔｅｒｓａｐｏｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｈｏｕｌｄｂｅｄｉｒｅｄｗｉｔｈｎｉｔｒｏｇｅｎｆｔａｅｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄｂｙｒｏｔａｒｙｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ
ＭＳ／ＭＳ）ｔｏｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙｄｅｔｅｃｔＶｉｔａｍｉｎＡ，Ｄ。Ｅｉｎｍｉｌｋｐｏｗｄｅｒｆｏｒａｎａｌｙｓｉｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＶｉｔａｍｉｎｓｉｎｔｈｅｓａｍｐｌｅｗｅｒｅｅｘｔｒａｃ —
测（ＳＲＭ）正离子模式测定。结果维生素Ａ、维生素Ｄ、维生素Ｅ在各自浓度范围内线性关系良好。方法的相对标准
偏差（ＲＳＤ）为４．８％～１６．７％（ｎ＝６），奶粉中维生素Ａ、维生素Ｄ、维生素Ｅ的回收率为７６．４％～９５．９％，７种维生素的检出限分别为：维生素Ａ：５．０ｇ／Ｌ；维生素Ｄ：１．０ｇ／Ｌ；维生素Ｄ，：１．０ｇ／Ｌ；一维生素Ｅ：０．１Ｌ；Ｂ一维生素Ｅ：０ห้องสมุดไป่ตู้．５ｇ／Ｌ；一维生素Ｅ：０．５ｇ／Ｌ；８一维生素Ｅ：０．１ｇ／Ｌ。结论本法可同时对奶粉中的维生素Ａ、维生素Ｄ、维生素Ｅ进行定性和定量分析，方法的精密度、回收率和检出限能满足实际检测要求，可用于奶粉等食品中维生素Ａ、维生素Ｄ、维生素Ｅ含量的日常监测。关键词：高效液相色谱一串联质谱；维生素Ａ；维生素Ｄ；维生素Ｅ；奶粉中图分类号：ＴＳ２５２．５２文献标识码：Ａ文章编号：１００４—８６８５（２０１５）１１ —１７３３— ０５

脂溶性维生素A和维生素D的测定-科标检测

脂溶性维生素的测定方法——科标检测脂溶性维生素(lipid soluble vitamin)由长的碳氢链或稠环组成的聚戊二烯化合物。

脂溶性维生素包括维生素A、D、E和K，它们都含有环结构和长的、脂肪族烃链，这四种维生素尽管每一种都至少有一个极性基团，但都高度疏水的。

某些脂溶性维生素是辅酶的前体，而且不用进行化学修饰就可被生物体利用。

青岛科标检测研究院在食品营养成分检测服务具有丰富的经验，可以助广大食品企业一臂之力，精确地测定食品中的营养成分含量，提供包括微量元素、维生素、脂肪酸、糖类在内的全面营养成分测试。

以下介绍的是维生素A和维生素D的测定方法：一、维生素A维生素A的测定常用的方法有：三氯化锑比色法、紫外分光光度法、荧光分析法、液相色谱法。

对于三氯化锑比色法适用于样品中含V A高的样品，方法简便、快速、结果准确，但是对维生素A含量低的样品，如每克样品中含5～10μg维生素A时，这时样品由于受其脂溶性物质的干扰，不应用比色法测定。

对于紫外分光光度法不必加显色剂显色，可直接测定维生素A的含量，对样品中含V A低的也可以测出可信结果，操作简便、快速。

1、维生素A的性质⑴因有许多不饱和链，故见光易分解；⑵在缺氧情况下，对热较稳定，对光特别敏感。

如测强化奶粉时，速度要快，一般要求测定时间长短，因为时间长，见光时间长，见光分解，故测出的比出厂的含量要少；⑶对碱稳定；2、测定步骤⑴样品用有机溶剂萃取脂类样品可以根据脂肪的测定处理脂肪，即索氏抽提法，采用乙醚作提取剂，也可用热苯回流方法提取脂类。

如果样品中含蛋白质和淀粉多的情况下可采用乙醚提取法。

⑵脂类的皂化脂类有维生素和脂肪这两部分通过皂化（50%KOH、无水C2H3OH、热回流）把它们分开，得到一部分皂化物和一部分不皂化物。

皂化条件：（1）C2H3OH︰脂类= 8︰1；（2）KOH量= 脂量×皂化价（mg）×2.5；（3）皂化温度与时间：70℃、30分钟在皂化时可以加入抗氧剂连苯二酚和对苯二酚，防止氧化。

液相色谱-串联质谱法检测饲料原料中维生素A、维生素D3、维生素E

分析与检测Oct 2018 CHINA FOOD SAFETY 29现行的饲料中维生素A 、维生素D 3、维生素E（以下简称“VA、VD 3、VE”）的检测方法均为液相色谱法，其中VA 的检测方法为GB/T 17817-2010，定量限为1000IU/kg；VD 3检测方法为GB/T 17818-2010，定量限为500IU/kg；VE 的检测方法为GB/T 17812-2008，定量限为1IU/kg。

饲料原料中VA、VD 3、VE 含量在方法的定量限之下时，上述方法无法准确检出它们的含量。

虽然饲料原料中VA、VD 3、VE 的含量很低，但由于饲料原料的添加比例很大，因此饲料中VA、VD 3、VE 的总量十分很可观，故研究适用于饲料中VA、VD 3、VE 低含量的检测方法是一件十分有价值的工作。

1 研究内容1.1 优化前处理方法1.1.1 皂化反应溶液需先离心：皂化反应后的样液转移至离心管中，离心取上清液转移至分液漏斗中，防止样品残渣堵塞分液漏斗。

1.1.2 用石油醚代替乙醚：石油醚的提取效率和乙醚的提取效率基本相同，且因为石油醚的毒性低于乙醚，因此用石油醚代替乙醚。

1.2 考查线性相关性用甲醇溶液配置VA、VD 3、VE 工作液，其系列浓度分别为0.1IU/L、0.5IU/L、1.0IU/L、5.0IU/L、20.0IU/L、100IU/L。

相同条件下，用串联质谱检测上述曲线各点的峰面积，VA 的浓度与峰面积的相关系数为0.9998，VD 3的浓度与峰面积的相关系数为0.9999，VE 的浓度与峰面积的相关系数为0.9995。

1.3 净化小柱的选择根据VA、VD 3、VE 的性质特点，应选取吸附特性为非极性的净化小柱。

经查阅资料，选择安捷伦公司提供的Bond Elut ENN、Bond Elut LMS、Bond Elut ENV、Bond Elut PLEXA4种净化小柱。

笔者分别考察并进行了VA、VD 3、VE 过净化小柱的回收率，其中，Bond Elut PLEXA 净化小柱VA、VD 3过柱回收率达到99%，VE 过柱回收率达到93%。

高效液相色谱法测定水果中脂溶性维生素含量的研究

1. 2 标准溶液的配制
储备液: 精确称取标准品 VA, VD2, VD3 和 VE 用甲醇溶解使浓度分别为 1. 0, 1. 0, 1. 0mg /mL 和 0. 10 g /mL 储于 - 20 冰箱中。工作液: 测定前用甲醇稀释 VA, VD2, VD3 和 V E储备液, 使浓度分别为 100, 100, 100 g /mL 和 1m g /mL 应用液, 用甲醇将工作液稀释成一定浓度的混合标准系列溶液。
ห้องสมุดไป่ตู้
1136
2112
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图 3 苹果样品脂溶性维生素色谱图
4结论
本实验对水果中脂溶性维生素的测定作了色谱条件和前处理过程的优化, 并建立了测定方法, 对样品进行充氮气处理, 皂化时间 4h, 用乙醚萃取, 洗去碱液, 并浓缩处理, 色谱条件为甲醇
高效液相色谱法测定水果中脂溶性维生素含量的研究
摘要: 建立了反相色谱法同时测定水果中脂溶性维生素的方法, 色谱条件为甲醇水 = 97 3, 检测波长: 300nm, 流速:
1. 0mL /m in, 样品在 20m in内达到基线分离。该方法适用于测定水果蔬菜等低含量脂溶性维生素的测定, 准确性高, 灵敏度好, 是一种快速简单的分离脂溶性维生素的有效方法, 适用于水果的质量控制, 填补了国内检测低脂溶性维生素含量检测方法的空白。
浓缩: 将分液漏斗中的乙醚用滤纸过滤入与旋转蒸发器配套的 250mL 球形蒸发瓶中, 并用于 25 水浴减压蒸干, 用 1. 5mL 甲醇溶解. 再用 0. 22um 有机滤膜过滤, 上机进样分析。
续表维生素 D2 维生素 D3 维生素 E

VA、VD、VE的测定

前言测定维生素A、D、E的方法很多，但广为采用的是高压液相色谱法，方法快速、准确，并避免了三种成分的相互干扰。

本标准由中国轻工总会提出。

本标准由全国乳品标准化中心归口。

本标准负责起草单位：国家乳制品质量监督检验中心。

本标准参加起草单位：卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢（中国）投资服务有限公司。

本标准主要起草人：杨金宝、王芸。

中华人民共和国国家标准婴幼儿配方食品和乳粉维生素A、D、E的测定Milk powder and formula foods for infant and young children-Determination of vitamin A,D,E contentGB/T 5413.9—19971 范围本标准规定了用液相色谱法测定维生素A、D、E的方法。

本标准适用于各种婴幼儿配方食品和乳粉中维生素A、D、E的测定。

2 方法提要样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离，经（用）石油醚萃取后，用高压液相色谱，紫外检测器定量测定。

3 仪器所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。

3．1 高峰氏淀粉酶（Taka-Diastase）。

3．2 异丙醇：色谱纯。

3．3 焦性没食子酸的乙醇溶液：15g/L。

3．4 氢氧化钾溶液：质量比为100：50。

3．5 石油醚：沸程30～60℃。

3．6 甲醇：色谱纯。

3．7 正己烷：色谱纯。

3．8 环己烷：色谱纯。

3．9 维生素A、E标准溶液3．9．1 维生素A标准贮备液，含维生素A100µg/mL的甲醇溶液。

称取10mg的维生素A，用甲醇定容于100mL容量瓶中。

3．9．2 维生素E标准贮备液，含维生素E400µg/mL的甲醇溶液。

称取40mg的维生素E，用甲醇定容于100mL容量瓶中。

3．9．3 维生素A、E标准工作液，其中维生素A的浓度为2μg/mL，维生素E 的浓度为20µg/mL。

HPLC法测定饲料中维生素A、维生素D3和维生素E

HPLC 法测定饲料中维生素A 、维生素D 3和维生素E王安群，邓益群，彭凤仙（长沙环境保护技术学院，湖南长沙 410004）摘要：建立了以w （C 2H 5OH ）=95%乙醇直接提取，高效液相色谱仪在波长280nm 和254nm 处连续测定饲料中维生素A 、维生素D 3和维生素E 的方法。

色谱柱为大连依利特Hypersil ODS C 18（25cm >4.6mm >5!m ），流动相为甲醇水，流速为1.2mL /min 。

维生素A 、维生素D 3、维生素E 的质量浓度分别在1.0mg /L ~20.0mg /L 、0.5mg /L ~15.0mg /L 、2.5mg /L ~50.0mg /L 范围内与峰面积呈良好的线性关系，检测限分别为0.3>10-6!g 、0.04>10-6!g 、5.0>10-6!g ，相对标准偏差分别为1.6%、2.7%、2.4%，平均回收率分别为99%、102%、98%。

关键词：高效液相色谱法；维生素A ；维生素D 3；维生素E ；饲料中图分类号：O657.7+2 文献标识码：B 文章编号：10062009（2005）02003302To Detect Vitamin A ，Vitamin D 3and Vitamin E in Feed with HPLCWANG An-gun ，DENG Yi-gun ，PENG Feng-xian（Changsha Enwironmental Protection Technology Institute ，Changsha ，Hunan 410004，China ）Abstract ：To detect Vitamin A ，Vitamin D 3and Vitamin E in feed ，which to directly extract with w （C 2H 5OH ）=95%glycollic ，with HPLC in 280nm and 254nm.Chromatographic column was Hypersil ODS C 18（25cm >4.6mm >5!m ），mobile phase was methanol -water ，velocity of flow was 1.2mL /min.When the mass concentration of Vitamin A ，Vitamin D 3and Vitamin E was 1.0mg /L ~20.0mg /L 、0.5mg /L ~15.0mg /L 、2.5mg /L ~50.0mg /L ，there had a well lineal relationship.Detection limit was 0.3>10-6!g 、0.04>10-6!g 、5.0>10-6!g.Relative standard deviation was 1.6%、2.7%、2.4%，recovery rate was 99%、102%、98%.Key words ：HPLC ；Vitamin A ；Vitamin D 3；Vitamin E ；Feed 收稿日期：20040323；修订日期：20050130作者简介：王安群（1962—），女，江西吉安人，高级工程师，学士，从事环境监测教学工作。

液相色谱水_异丙醇体系测定脂溶性维生素A_D_E_海沙尔

第22卷,第4期光谱学与光谱分析Vol .22,No .4,pp693-6942002年8月 Spectroscopy and Spectral Analysis August ,2002　液相色谱水-异丙醇体系测定脂溶性维生素A ,D ,E海沙尔1,塔依尔21.新疆分析测试中心,新疆乌鲁木齐　8300112.新疆大学化学系,新疆乌鲁木齐　830046摘　要　利用反相高效液相色谱研究了混合药片中的脂溶性维生素A ,D ,E 的同时测定。

用不同比例的水∶异丙醇体系分析这三种维生素,确定25∶75(φ)的水∶异丙醇体系为最佳流动相。

测定了不同萃取条件下的脂溶性维生素的回收率,回收率均94%以上。

使用9维他片作为样品。

本方法简单,可靠,结果令人满意。

主题词　高效液相色谱;脂溶性维生素A ,D ,E ;9维他片中图分类号:O 657.7 文献标识码:B 文章编号:1000-0593(2002)04-0693-02　收稿日期:2001-04-15,修订日期:2001-06-06　作者简介:海沙尔,1973年生,新疆分析测试中心助理研究员前　言维生素是维持人类机体正常生育的具有生物活性的一类化合物.许多维生素是酶的辅基和酶的组成部分,因此,测定食品中或药物中维生素的含量是食品营养分析和药物分析的主要内容之一。

脂溶性维生素的分析方法一般有生物法、分光光度法、薄层色谱法、荧光光度法等,但这些方法都只能单独的测定一种维生素,随着高效液相色谱技术的发展,国内外研究工作着利用高效液相色谱技术分析脂溶性维生素做了很多工作,发展了更具有选择性的分析方法,如电化学法、质谱法等,并且对同时测定脂溶性维生素的方法作了一些探索。

为了完全分离一组脂溶性维生素,在高效液相色谱中需要梯度洗脱或者需要连柱色谱技术。

用单独的流动相来同时测定脂溶性维生素A ,D ,E 比较难,很达到最佳完全分离效果。

本文在综合国内外研究成果的基础上用水-异丙醇体系同时测定了9维他片中脂溶性维生素。

食品中维生素ade的测定 -回复

食品中维生素ade的测定-回复如何测定食品中维生素A、D和E的含量。

维生素A、D和E是人体必需的脂溶性维生素，它们在食物中的含量对人体健康至关重要。

测定食品中维生素A、D和E的含量是确保食品营养丰富、符合健康标准的重要手段。

本文将一步一步回答如何进行食品中维生素A、D和E的测定。

第一步：样品制备为了准确测定食品中的维生素A、D和E含量，首先需要将食品样品制备成可测定的形式。

对于富含维生素A、D和E的食品，如肉类、鱼类和植物油，样品可以直接获得。

而对于其他种类的食品，如谷物、蔬菜和水果，就需要先进行提取。

通常情况下，可以用有机溶剂（如乙酸乙酯）来提取食品样品中的维生素A、D和E。

第二步：前处理在进行测定之前，我们需要对样品进行前处理，以消除可能的干扰物质。

这包括去除食品样品中的脂肪、蛋白质和其他杂质。

常用的前处理方法包括离心沉淀、净化柱和溶剂萃取。

第三步：色谱分析色谱分析是目前最常用的测定维生素A、D和E含量的方法之一。

维生素A、D和E具有特定的吸收波长，可以通过紫外-可见光谱仪进行测定。

在进行色谱分析之前，需要将前处理过的样品溶解于合适的溶剂中，并通过滤膜过滤以去除残留的杂质。

第四步：校正与定量在进行色谱分析后，我们需要对结果进行校正和定量。

首先，通过测定含有已知浓度的标准溶液的吸光度，绘制标准曲线。

然后，将我们得到的样品的吸光度与标准曲线进行比较，从而确定样品中维生素A、D和E 的含量。

第五步：结果分析最后，我们需要分析测定结果并从中得出结论。

根据样品中维生素A、D 和E的含量，我们可以评估其是否符合健康标准。

同时，我们还可以通过与其他食品样品的比较来评估其营养价值。

总结：测定食品中维生素A、D和E的含量是确保食品营养丰富、符合健康标准的重要手段。

通过样品制备、前处理、色谱分析、校正与定量和结果分析的步骤，我们能够准确测定食品中维生素A、D和E的含量，并评估其对人体健康的影响。

这有助于保证我们获得均衡的饮食，维持身体健康。

HPLC法测定脂溶性维生素注射液中维生素D2及维生素E的含量

HPLC法测定脂溶性维生素注射液中维生素D2及维生素E的含量陈光【摘要】目的建立测定脂溶性维生素注射液中维生素D2、维生素E的高效液相色谱(HPIC)分析方法.方法应用高效液相色谱法.维生素D2采用Kromasil 100-5sil(250mm×4.6mm)色谱柱:以正已烷:异丙醇(97.5:2.5)为流动相:流速为1ml/min):检测波长为265nm:柱温室温:紫外测器.维生素E采用Kromasil 100-5sil(250mm×4.6mm)色谱柱:以正已烷-异丙醇(99.5:0.5)为流动相:流速为1mL/min:检测波长为298nm:柱温室温:紫外检测器.结果维生素D2和维生素E分别在0.26~2.08μg/mL和0.64~3.20mg/mL范围内与峰面积线性关系良好.维生素D2和维生素E的平均回收率分别为98.90%、100.2%、RSD分别为1.2%、1.1%.结论本方法准确、快速、重现性好.【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2017(007)015【总页数】5页(P46-50)【关键词】维生素D2;维生素E;高效液相色谱法;含量测定【作者】陈光【作者单位】济南市血液供保中心药剂科,山东济南 250001【正文语种】中文【中图分类】R927.2脂溶性维生素注射液为含有维生素A、维生素D2、维生素E、维生素K1和注射用大豆油，卵磷脂等的灭菌乳剂，属维生素类药。

用于脂溶性维生素缺乏的预防和治疗。

其中维生素D又称钙化醇，维生素D种类很多。

以维生素D2（麦角钙化醇）和维生素D3（胆钙化醇）较为重要。

维生素D的主要生理功能是：调节钙、磷代谢、促进钙、磷吸收。

缺乏时，儿童和哺乳期妇女更为明显。

维生素E[1-3]又名生育粉，维生素E有很强的抗氧化作用。

同时具有提高维生素A功能的作用；维生素E缺乏将导致红血球被破坏。

肌肉的变性。

贫血症，生殖机能障碍等病变[4-6]，由于维生素E结构复杂，异构体多，准确分析测定较困难，近年来许多科学家致力于其分析的研究，开发了很多实用高效的检测方法，既有物理和化学方法，也有仪器分析方法，既有维生素E的总含量检测，也有异构体含量检测等。

血液中水、脂溶性的检测

血液中脂溶性维生素的检测1、仪器与试剂HP1220高效液相色谱仪、氮吹仪、漩涡振荡器、离心机维生素A、维生素D、维生素E标品；无水乙醇；正己烷；甲醇（色谱级别）2、标准溶液配制1mg/ml维生素标准储备液：3种维生素标品各0.01g于10ml 容量瓶中，甲醇定容。

工作液浓度（ug/ml) 量取的母液体积（ml）定容体积（ml）维生素A 40 2 50维生素D 10 1 100 维生素E 400 4 103、实验方法3.1 色谱条件设置色谱柱C18柱进样体积(ml）20ul泵流动相甲醇97%纯化水3%流速1ml/min 柱温25℃检测波长0-8min 315nm8-12min 265nm12-16min 290nm3.2 测定方法取血清0.2ml置5ml具塞离心管中，加入0.2ml无水乙醇沉淀蛋白质，后加入正己烷 1.0ml，旋涡振荡器振荡2min，8000r/min离心5min，吸取上层正己烷液0.5ml，氮气吹干，0.2ml流动相溶解残渣，旋涡振荡器振荡30s，15000r/min离心2min，取上清液到进样瓶。

4、上机进样测量物质波长设置V A标品315nmVD标品265nmVE标品290nm血清样品可变波长其他色谱条件与上述一致血液中水溶性维生素的检测1、仪器与试剂HP1220高效液相色谱仪、氮吹仪、涡旋振荡器、离心机、ODS C18固相萃取柱（100mg/1ml）维生素标准品：VB1、VB3、VC、叶酸；0.01mol/l HCL溶液；1mol/l KOH溶液; 甲醇；50mmol/l NH4H2PO4溶液（PH6.0）；VC提取溶剂：乙二酸四乙酸二钠0.005g，二硫苏糖醇0.05g，加适量水溶解，加入高氯酸1.42ml，加水定容至50ml。

2、标准溶液配制VB1、VB3、标准储备液（1mg/ml），用0.01mol/l HCL配制；叶酸标准储备液（1mg/ml）,以1滴1mol/lKOH溶解后，在用0.01mol/l HCL定容。

婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E 的测定

食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E的测定1 范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E的测定方法。

本标准适用于婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E的测定。

2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

3 原理试样皂化后，经石油醚萃取，维生素A、E用反相色谱法分离，外标法定量；维生素D用正相色谱法净化后，反相色谱法分离，外标法定量。

4 试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 α-淀粉酶：酶活力≥1.5 U/mg。

4.2 无水硫酸钠。

4.3 异丙醇：色谱纯。

4.4 乙醇：色谱纯。

4.5 氢氧化钾水溶液：称取固体氢氧化钾250 g，加入200 mL水溶解。

4.6 石油醚：沸程30 ℃～60 ℃。

4.7 甲醇：色谱纯。

4.8 正己烷：色谱纯。

4.9 环己烷：色谱纯。

4.10 维生素C的乙醇溶液（15 g/L）。

4.11 维生素A、D、E标准溶液4.11.1 维生素A标准储备液（视黄醇）（100 μg/mL）：精确称取10 mg的维生素A标准品，用乙醇（4.4）溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中。

4.11.2 维生素E标准储备液（α-生育酚）（500 μg/mL）：精确称取50 mg的维生素E标准品，用乙醇（4.4）溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中。

4.11.3 维生素D2标准储备液（100 μg/mL）：精确称取10 mg的维生素D2标准品，用乙醇（4.4）溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中。

4.11.4 维生素D3标准储备液（100 μg/mL）：精确称取10 mg的维生素D3标准品，用乙醇（4.4）溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中。

注：维生素A、D、E标准储备液均须-10℃以下避光储存。

食品和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定

2) 将皂化液转入一500mL分液漏斗中，用100mL水分几次冲平底烧瓶。

洗涤液并入分液漏斗中。

3) 于上述分液漏斗中，加入100mL石油醚，盖好瓶塞，倒置分液漏斗并剧烈振摇1 min.在振摇过程中，注意释放瓶内压力。

静置分层，将水相放入另一500mL分液漏斗中，重复上棕萃取过程2次，合并醚液到第一个分液漏斗中。

用蒸馏水洗该醚液至中性，通过无水硫酸钠过滤干燥，在40℃和氮气流下，于旋转蒸发器上蒸至近于（绝不允许蒸干）后，用石油醚转移至10mL容量瓶中，定容。

4) 从上述容量瓶中取7mL放入一试管中，用氮气将石油醚吹干，于试管中加1mL正己烷。

5.3测定：1) 测定液的制备：A) 仪器条件：色谱柱：30cm×40cm，硅胶柱。

流动相：正己烷与环己烷按体积比1：1混合，并按体积分数0.8％加入异丙醇。

流速：1mL/min。

波长：265nm。

柱温：20℃。

灵敏度：0.005AU/MV。

注射体积：200mL。

B) 注射50mL维生素D标样和200mL样品溶液，根据维生素D标样保留时间收集维生素D于试管中，将试管用氮气吹干，准确加入0.2mL甲醇溶解。

2) 测定步骤：A) 仪器条件：色谱柱：4.6mm×25cm，C18或具同等性能的色谱柱。

流动相：甲醇。

流速：1mL/min。

波长：265nm。

柱温：20℃。

灵敏度：0.005AU/MV。

注射体积：50mL。

B) 注射50mL维生素D标准溶液，注射50mL样品溶液，得到标样和样品溶液中维生素D峰面积或峰高。

6. 计算ρs×10∕7×40×100X =mAsρs= ---×ρsd。