香菇液体菌种固化技术研究

３讨论
由于食用菌液体菌种不耐贮藏、不便运输。因此，当 前液体菌种绝大部分仅用来作为原种，将液体菌种固化以 延长保藏期尚未见报道。研究表明，将香菇８５６液体培养 的菌丝球与选择的主要成分为棉籽壳的同化载体基质，按 ｌ：６的比例制备成同化菌种，室温下可保藏３０ ｄ，呼吸强 度低，纤维素酶活力明显升高，萌发力强，菌丝生长快。 这一技术可能成为延长液体菌种保藏时间．同时增加液体 菌种在运输和使用等方面的商业竞争力的有效途径。目前 固化菌种的出菇试验正在进行中。 液体菌种之所以不耐保藏．其原因可能基于以下两 点．一是保藏期间液体菌种中溶氧量很低．菌丝体不能正 常的呼吸而窒息衰竭甚至死亡：二是菌液内所含营养在发 酵过程中已被消耗殆尽．菌丝体得不到新的养分而饥饿死 亡。用液体菌种同化技术生产的菌种则避开了这些因素的 限制．在菌种同化过程中加入的有机载体．不但对菌丝球 （菌丝）起到提高适应新环境能力、延长菌种寿命的作用， 同时也对菌种进行了无需培养的放大，降低了菌种成本。 因此从理论上该方法是科学可行的．而且过滤去除的培养 液还可用于生产保健食品。
表３不同保藏时间香菇固化菌种的呼吸强度
Ｔａｂ．３ ７ｒｈｅ ｂｒｅａｔｈｅ
ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ
保藏０
ｄ～３０
ｄ的固化菌种的滤纸糖酶（ＦＰＡ酶）和羧
甲基纤维素钠（ＣＭＣ—Ｎａ）纤维素酶活力测定结果见表４。 南表４可见，与呼吸强度相反．随着保藏时间的延 长，固化菌种的这２种纤维素酶活力明显升高，可能是由 于菌丝球从不含纤维素的液体培养基转入富含纤维素成分 的载体基质中．纤维素酶被诱导形成．将十分有利于接种 后在栽培料中定殖萌发。
（４）蛋白胨Ｏ．０４５ ｇ、麦芽膏７．５ ｇ、ＫＨ２Ｐ０４ ０．０４５
Ｋ２ＨＰ０４
０．０４５
藏。 １．６固化菌种的生理性状测定 呼吸强度 采用小篮子法【４ｌ测定同化菌种的呼吸强度。 １．６．２纤维素酶活力测定 参照杨新美等的方法嘲分别测定固化菌种的滤纸糖酶 （ＦＰＡ酶）活力和羧甲基纤维素酶（ＣＭＣ酶）活力。 ２结果与分析 ２．１液体培养基优选结果 液体振荡培养香菇８５６，从菌丝开始萌发时间、澄清 度、菌幺幺球的数量和大小等方面观察液体菌种的生长情 况，对５种液体培养基进行比较，结果见表１。
ｄ～２５
化菌种。以延长其贮藏期。
１材料与方法
１．１供试菌株 香菇８５６（ｋ眦ｉ删Ｊ ｅ如如５ ８５６），河南农业大学食用 菌研究所提供。 １．２培养基 １．２．１斜面培养基 采用ＰＤＡ培养基。 １．２．２液体培养基 选取以下５种培养基配方进行香菇液体培养基的优 选。 （１）蔗糖４．５ ｇ、豆饼粉３ ｇ、玉米粉１．５ ｇ、酵母粉
ｇ、ＭｇＳ０４０．０４５
ｇ、蔗糖６
ｇ。 ｇ、
（５）麦芽膏０．７５ ｇ、豆饼粉１．５ ｇ、蛋白胨０．１５
ＫＨ２Ｐ０４ ０．０７５ ｇ。
１．６．１
ｇ、ＭｇＳ０４
０．０ｒ７５
ｇ、ｌ％ＮａＣｌ ０．１５ ｍＬ、酵母
膏０．０１５
１．３固化载体材料 选取２种载体基质进行同化载体的优选．一号载体基 质主要成分是木屑，二号载体基质的主要成分是棉籽壳。 １．４液体菌种的制备 用打孔器将平板上的菌丝块分割。取ｌ块接种到三角 瓶中。待三角瓶静置２４ ｈ以后，将其置于１５０ ２５℃摇床振荡培养１４ ｄ。
ｗａｓ
ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｏｆ ｓｏｌｉｄｉ６ｃａｔｉｏｎ ｓｐａｗｎ ｓｔｏｒｅｄ Ｉ．ｏｒ ３０ ｄ
ｗａｓ
ｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｏｔｈｅｌｗｉｓｅ ｈｉｇｈｅｒ ａｎｄ ｇｍｗｔｈ ｆａｓｔｅｒ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：￡ｅ凡￡讥ｗ ｅｄＤ如ｓ；Ｌｉｑｕｉｄ ｓｐａｗｎ；Ｓｏｌｉｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ
ｃａ而ｅｒ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ ｃｏｔｔｏｎｓｅｅｄ ｈｕＵ ｍａｉｎｌｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｐｅｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ
１：６．ｃｏｍｐａｒｅｄ
ｔｏ
ｈｙｐｈａｅ
ｐｅｌｌｅｔ ａｎｄ
ｃａ而ｅｒ ｍｅｄｉｕｍ
ｗａｓ
ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｏｌｉｄｍｃａｔｉｏｎ ｓｐａｗｎ ｓｔｏｒｅｄ ｆｏｒ Ｏ ｄ，ｔｈｅ ｂｒｅ砒ｈｅ
０．７５
ｄ．培养基内菌丝菌龄上下差
异较大，前端菌丝处于萌动状态时，基质表面菌丝已接近 老化，导致栽培种出菇不整齐，不能满足香菇规模化生产 的需求。而液体菌种具有生产成本低、效率高、菌龄一 致、萌发点多，萌发快等优点『２｜，有人预言“液体菌种是食 用菌走向规模化生产的必由之路”【３】。然而，液体菌种也存 在着不易保藏、贮藏期短的缺点，制约了液体菌种的推广 应用。本文探讨了将液体菌种和同体基质一起混合制成固
万方数据
第２８卷第ｌ期
刘映淼等：香菇液体菌种同化技术研究
１７
０．３１５
ｇ、琼脂０．０７５
ｇ。 ｇ、
１．５固化菌种的制备 液体菌种培养结束，收集菌丝球，在严格无菌条件下 接入灭过菌的固化载体材料中。混合均匀．置于室温下保
ｇ、
（３）土豆３０ ｇ、蔗糖３ ｇ、硫酸铵０．３ ｇ、ＫＨ２Ｐ０４ ０．１５
ＭｇＳ０４０．０７５ ｇ、ＶＢｌ １．５ ｇ、琼脂Ｏ．０７５ ｇ，ｐＨ自然。
表１
Ｔａｂ．１ ｒ・ｍｉｎ一、
５种液体培养基中香菇８５６的生长情况
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
ｏｆ
ＧＨ州ｈ
Ｌ．ｅｄｏｄ每ｓ ８５６
ｉｎ
５ ｌｉｑｕｉｄ ｍｅｄｉａ
从表ｌ可以看出．在５种液体培养基中．香菇都可在 其中生长良好．综合比较各项指标．１号配方和５号配方 较好，３号配方次之，２号配方、４号配方较差。从培养基 成分上比较，ｌ号配方和３号配方较为简便、经济、原料 易得，且菌种在其中生长时菌丝萌发快、生长旺盛，尤其 是ｌ号培养基菌丝球数量多．菌丝球大小在ｌ
ｄｅｖｅｌ叩ｒＩｌｅｎｔ ｏｆ
Ｌ．ｅｄ诎５
８５６ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉｆｆ毛ｒｅｎｔ ｐｍｐｏｒｔｉｏｎ
ｏｆ
２
ｃａｒｄｅｒ
ｍｅｄｉａ
（下转第２２页）
万方数据
中周食用菌
ＥＤＩＢＬＥ ＦＵＮＣｌ ０Ｆ ＣＨＩＮＡ
Ｖ０１．２８
Ｎｏ．１
合菌丝的长势和生长速度，以配方Ａ。、配方Ａ，较为理 想．即木薯酒精废渣６０％一８０％和棉籽壳４０％～２０％的配比 较为合适：在木薯酒精废渣与杂木屑配比的各培养基中菌 丝长势和长速差异较大，以培养基配方Ｂ。为好，即木薯 酒精废渣８０％、杂木屑２０％比较理想。 综ｊ：所述。在实际生产上，完全可以利用酒精生产的 废弃物木薯酒精废渣代替原料不充足、生产菌种质餐差的 杂术屑以及生产成本偏高的棉籽壳来制作木耳的原种和栽 培种。从而达到变废为宝、降低生产成本、提高菌种质量
ｏｆ
ｓｏｌｉｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ印ａｗｎ
ｓｔｏｒｅ
ｏｆ Ｌ
ｅ幽如５ ８５６
ｏｆ ｄｉｆｆ毫Ｉ它ｎＩ
ｔｉｍｅ
从表３可以看出，随着保藏时间的延长，固化菌种的 呼吸强度明显减弱。保藏１５ ｄ和３０ ｄ。呼吸强度分别比 保藏开始时降低了４９．６７％和５１．９５％。其原因可能是同化 载体基质中营养比较贫乏，菌种生长缓慢，对菌种保藏、 保持菌种的生活力十分有利。 ２．３．２纤维素酶活力
中国食用菌２００９，２８（１）：１６～１７，２２
ＥＤＩＢＬＥ ＦＵＮＧｌ ０Ｆ ＣＨｌＮＡ
ＣＮ５３—１０５４／Ｑ
ＩＳＳＮ
１００３—８３ｌＯ
香菇液体菌种固化技术研究术
刘映淼，王兰青，高玉千，戚元成，申进文，邱立友”
（河南农业大学生命科学学院，河南
郑州４５０００２）
摘要：食用茵液体菌种由于具有不耐贮藏和不便于运输等缺点，极大地限制了液体茵种的推广应用。研究报道了一种 食用茵液体菌种固化技术，可有效解决液体菌种的上述缺点。在优选的蔗糖、豆饼粉液体培养基中摇瓶培养香菇８５６， 将得到的菌丝球与优选的主要成分是棉籽壳的固化载体基质按ｌ：６的比例混合，制成固化菌种，室温保藏３０ ｄ，与保 藏０ ｄ的固化菌种相比，呼吸强度低，纤维素酶活力明显升高，萌发力强，茵丝生长快。 关键词：香菇；液体菌种；固化技术
（４）：３ｌ一３２．
（上接第１７页） 从表２可以看出．对于一号固化载体基质．当菌丝球 与基质的比例为ｌ：８时固化菌种生长最好；对于二号固化 载体基质。菌丝球与基质的比例为ｌ：４和ｌ：６时固化菌种 生长最快．菌丝生长速度平均达０．４６６ ｃｍ・ｄ－ｌ。明显高于 一号固化载体基质。综合菌种萌发力和菌丝生长速度等因 素。二号固化基质的菌丝球与基质的比例ｌ：６为最适固化 载体基质和同化比例，以下试验均采用该基质和比例。 ２．３不同保藏时间固化菌种的呼吸强度和纤维素酶活力 ２．３．１呼吸强度 在窜温下保藏固化菌种０ ｄ一３０ ｄ．分别测定其呼吸强 度．结果见表３。
ｔｏ
ｔｏ
ｉｔｓ ｓｈｏｒｔ ｓｔｏｍｇｅ
ａ
ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐＩ℃ｓｅｎｔ ８５６
Ｉ＿ｅｐｏｒｔ ｗＤｕｌｄ ｂｅ
ｆａｃｉｌｉｔｙ
ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ
ｏｖｅｒｃｏｍｅ ｔｈｅ ｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓ ｏｆ ｌｉｑｕｉｄ
ｓｐａｗｎ．Ｌｅｍ讯ｗ ｅ如如ｓ
ｐｏｗｄｅｒ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ０ｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｅｎａｎ Ａ酣ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｈｅｎａｎ ４５（Ｘ）０２）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｏｐｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｄｉｂｌｅ ｍｕｓｈｍｏｍ ｌｉｑｕｉｄ ｓｐａｗｎ ｈａｄ ｂｅｅｎ ｌｉｍｉｔｅｄ ｇｒｅａｔｌｙ ｄｕｅ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｓｈｉｐｉｎｇ ｉｎｃｏｎｖｅｎｉｅｎｃｅ．Ｔｈｅ ｌｉｑｕｉｄ ｓｐａｗｎ ｓｏｌｉｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ
香菇犯ｅｍｉ凡凇ｅ如如５）是一种重要的食（药）用真菌， 近年来我国香菇栽培发展迅猛，总产量已跃居世界首位， 成为香菇的主产地川。 我国香菇生产的主要方式有浙江庆元的高棚层架栽培 模式、福建古田的菌棒栽培模式以及我省泌阳、两峡的小 棚大袋栽培模式。所用菌种主要是木屑菌种、枝条菌种等 常规同体菌种。这种菌种的生产过程需要较大的空间，培 养周期长。一般在２０
中图分类号：Ｓ６４６．１＋２文献标识码：Ａ
文章编号：ｌ咖Ｂ一８３１０（２咖１９）０１—∞１６—０３
Ｓｔｕｄｉｅｓ
ｏｎ
ｔｈｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｓｐａｗｎ ＳｏＫｄｉ行ｃａｔｉＯｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ ｋ以砌比ｓ口ｄＤｄ幻
Ｌｉ－ｙｏｕ
ＬＩＵ
Ｙｉｎｇ—ｍｉ神，ＷＡＮＧ Ｌａｎ—ｑｉｎｇ，ＧＡｏ Ｙｕ—ｑｉ柚，ＱＩ Ｙ岫ｎ．ｃｈｅｎｇ，Ｓ瑚王Ｎ Ｊｉｎ—ｗｅｎ．ＱＩＵ
ｇ、ＫＨ２Ｐ０４０．１５ ｇ、ＣａＣ０３ ０．３ ｇ，ｐＨ自然。
（２）麦麸７．５ ｇ、蔗糖３ ｇ、硫酸铵０．１５ ｇ、ＭｇＳ０４
０．０６ ｇ、ＺｎＳ０４ ０．０３
ｇ、硼酸０．０１５ ｇ、石膏粉１．５
ｇ、ＶＢＩ
・项目来源：河南省科技攻关项目（编号：０５２４０４０００３）。 ・宰通讯作者：Ｅ—ｍａｊｌ：ｑｌｉｙｏｕ＠ｈｅｎａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 收稿日期：２００８一ｌＯ—１４
表４不同保藏时间香菇固化菌种的纤维素酶活力
Ｔｈｂ．４‘１１ｈｅ ｃｅｌｌｕｌａｓｅ
ａｃｌｉｖｉｔｙ
ｏｆ ｓｏｌｉｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｓｔｏｒｅ
的目的。但由于木薯酒精废渣颗粒较细，在使用时最好与 棉籽壳或较粗的杂木屑按一定比例混合，所生产的菌种宜 在满袋后１０ ｄ内使用。
【参考文献】 【１】曹隆枢．术屑培养基隐性污染ｆＪｌ．中国食用菌，２００１， 【２】张松．食用菌学【Ｍ】．华南理工大学出版社，２００６． 【３】李明．鸡腿菇菌种培养基配方比较试验【ＪＪ．食用菌，２００３，（１）：２０．
ｍｍ一２ ｍｍ
之间，培养结束后培养基澄清。因此，在以下试验中均选 用ｌ号配方培养基。 ２．２固化载体基质的优选结果 将香菇８５６的菌丝球分别与２种同化载体基质按不同 比例进行混合制备固化菌种．测定固化菌种的萌发力和生 长速度。结果见表２。
裹２两种固化载体基质不同比例下香菇菌种的生长情况
’ｒａｂ．２ Ｇｎ，ｗｔｈ
ｗｅｒｅ
ｗ鹊ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｂｙ ｓｈａｋｉｎｇ ｎａｓｋ ｉｎ ａ卵ｌｅｃｔｅｄ
ｓｐａｗｎ
叩ｔｉｍｕｍ
ｌｉｑｕｉｄ ｍｅｄｉｕｍ，
ｉｎ ｗｈｉｃｈ ｓｕｇａｒ ａｎｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｃａｋｅ
ｍａｉｎ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ．Ｓｏｌｉｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｗ酗ｍａｄｅ ｏｆ
ｔｈｅ ｍｉｘｔｕｒｅ ｏｆ ｈｙｐｈａｅ ｐｅｌＪｅｔ ａｎｄ ｏｐｔｉｍｕｍ ｓｏｌｉｄ ｂｅｔｗｅｅｎ