鸡α-干扰素基因克隆及其在大肠杆菌中表达
北京油鸡α-干扰素的克隆和表达研究的开题报告
北京油鸡α-干扰素的克隆和表达研究的开题报告一、课题背景与研究意义油鸡是我国重要的畜禽资源之一。
近年来，油鸡产业的发展备受关注。
在油鸡的繁殖、生长过程中，易受到各种病原微生物的侵害。
因此，疾病防治成为油鸡养殖中的重要问题之一。
干扰素是对病原微生物感染具有抗性的重要因子。
因此，对油鸡干扰素的研究具有重要的意义。
本文拟以北京油鸡干扰素为研究对象，开展相关的克隆和表达研究，旨在深入了解北京油鸡免疫系统的机制，为油鸡养殖提供科学可靠的技术支持。
二、主要研究内容1.干扰素基因的克隆在实验室中，通过PCR技术，根据已有的北京油鸡干扰素序列信息设计引物，进行PCR扩增，获得北京油鸡干扰素基因序列。
利用克隆技术，将目的基因序列克隆至表达载体中。
2.可溶性干扰素的表达及纯化将克隆好的重组表达质粒经电转化至大肠杆菌MG1655中，在IPTG诱导条件下，表达目的基因，获得可溶性的重组干扰素。
通过IEX层析和分子筛层析等技术，对表达的干扰素进行纯化处理。
3.干扰素的功能分析通过体外实验，对获得的干扰素样品，进行功能分析，包括测定抗病毒活性、抑菌活性以及调节细胞增长等方面，并对北京油鸡免疫系统的机制进行研究。
三、预期成果本文预期达到的成果包括：1.克隆获得北京油鸡干扰素基因序列，并将其克隆至表达载体中；2.表达出可溶性重组干扰素，并进行纯化处理；3.获得具有抗病毒、抑菌和调节细胞增长等活性的干扰素样品，并对其进行功能分析；4.深入了解北京油鸡免疫系统机制。
四、研究方案1.实验材料北京油鸡组织样品、大肠杆菌MG1655菌株、重组表达质粒pET-28a2.克隆获得干扰素基因设计引物，进行PCR扩增，获取序列信息。
通过限制性内切酶消化后，将目的基因序列连接至表达载体上，获得重组表达质粒。
3.表达及纯化将构建好的表达质粒电转化进大肠杆菌MG1655中，进行诱导表达。
通过纯化技术，获得目的蛋白。
4.干扰素样品的制备对获得的干扰素样品进行活性测定，获得具有活性的样品。
鸡γ-干扰素基因在大肠杆菌中的表达
关键词 ： 鸡 一干扰 素；克隆 ； 原核表达
中 图 分 类 号 ：￥５ ． ８５ ９ 文献 标 识 码 ： Ａ
Ｃｈ ｃ ｅ ＦＮ — ｇ ｎｅ Ｅｘ ｅ ｓｏ ｎ Ｅｓ ｈｅ ｉｈｉ ｏ ｉ ｉｋ ｎ Ｉ ｅ ｐｒ ｓｉｎ ｉ ｃ ｒｃ ａ ｃ ｌ
ＷＵ Ｓ ｕ ｈ ａ ＧＯ ｅ ｇｔｏ Ｚ ｈ — ｕ 。 ＮＧ Ｐ ｎ — ， ＨＡＮＧ Ｘｉ ｈ ｎ， Ｕ Ｌｎ Ｌ ｉｎ ｈ ａ ａ — ｅ Ｗ ｉｇ， ＩＪａ — ｕ ｃ
ｉｔ ｅｏ ， ｅｇｎ ａ ｌ ｅ ｔ ｐ Ｔ一 ８ （ ｎｅ ｒ ｆ ｒ ｎ一 ｔ ｅｅｗ ｓ ｏ ｄｉ ｏ Ｅ ２ ａ ＋）ｖｃ ｒｔｅ ａ ｓ ｒ ｅ ｔ ｔｅ ．ｏｉ Ｌ １ Ｄ ３ ｆ — ｈ ｃｎ ｎ ｅｔ ， ｎｔ ｎｆ ｍ ｄｉ ｏ ｈ Ｅ ｃｌＢ ２ （ Ｅ ） ｏ ｅ ｏ ｈ ｒ ｏ ｎ ｒｘ
青 岛农业大学学报（ 自然科学版 ） ２ （ ） ８～１ ，０ ９ ６１ ： １２０ Ｊｕｎ ｌｆＱ￣ａ ｏ ｇｉ ｌ ｒｌ ｎｖｒｔ Ｎ ｔｒｌ ｃ ｎｅ ｏｒａ ｉ ａ ｒ ｕ ｕａ Ｕ ｉ ｓｙ（ ａｕａ Ｓｉ ｃ） ｏ Ａ ｃｔ ｅｉ ｅ 文章编号 ： ６４—１８ ２０ ） １— ０ ８— ４ １７ ４ Ｘ（￣ ９ ０ ００ ０ ０
ｐ ｅ ｓｏ ． Ｉ ｄ ｃ ｄ ｂ ｒ ｓ ｉｎ ｎ ｕ ｅ ｙ １ ｍｍｏ／Ｌ Ｉ ＴＧ ｔ３ Ｃ ｆ ｒ４ ｌ Ｐ ａ ７￣ ｈ，ｔ ｅ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｒ ｄ ｃ ｓ ｉ ｅ ｔｆ ｄ ｂ ＤＳ—ＰＡＧＥ． Ｔ ｅ ｏ ｈ ｘ ｒ ｓｉｎ ｐ ｏ ｕ ｔｗａ ｄ ｎ ｉ ｅ ｙ Ｓ ｉ ｈ ｒ ｓ ｌ ｈｏ ｄ ｔ ａ ０． ｃ ｃ ｅ ｎ ｅ ｅ ｏ ｐ ｏｅ ｎ ｗａ ｘ ｒ ｓｅ ｎ ｔ ｅ ｆｒ ｏ ｌ ｓｏ ｏ ｉｓ ｅ ｕ ｔ ｓ ｗｅ ｈ ｔ ｓ ２ ８ ＫＤ ｈｉｋ ｎ ｉｔ ｒ ｒ ｎ一 ｆ ｒ ｔｉ ｓｅ ｐ ｅ ｓ ｄ ｉ ｈ ｏｍ ｆｉ ｕ ｉｎ ｂ ｄｅ ．Ｔｈ ｔ ｄ ｎｃ ｅ ｓｕ ｙ
蛋鸡α-干扰素基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与复性研究
２ ｈ ｅｔ ｆｒ ｉ ａｅＣ ｎｒｌ ｎ ｒｖｎｉ ．ＴｅＣ ｎ ｒｏ ｓ ｓ ｏ ｔ ｄＰ ｅ ｔ ｎｏ ｌａｙＡｅ Ｐ Ａ， ｎ Ｓ ａ ｄｎ ， ５ ０４； ｅ Ｄｅ ｏａ ｅ ｏ ｆ五，ｎＭｉｔｒ ｒ ｏ Ｌ ｎ ， ｈ ｎ ｏｇ ２ ０ １ Ⅱ ｉ ａｆ ３ ｏｌ ｅ ．Ｃ ｌｇ ｅ ｏ ｆ Ｓｉ ｃ Ｓ ａ ｄｎ ｏｍ ｌＵ ｉ ｒｔ，五 ，Ｓａ ｄｎ ２０ １ ；Ｃ ｉａ ｃ ｎｅｏ ｈ ｎ ｏｇＮ ｒａ ｎｖ ｓｙ Ｍｎ ｈ ｎ ｏｇ， ５０ ４ ｈｎ ） ｅ ｆ ｅｉ
ｒａｔ ｎ（ Ｃ ， ｎ ａ ｌｎ ｄ ｉｔ ｐ 一 ｅ ｔ ｏ ｅ ｕ ｎ ｉｇ ｅ ｕｎ ｉｇｒｓｌ ｈ ｗ ｔａ ｔｅｏ ｅ ｅｃｉ Ｐ Ｒ） ａ ｄｗ ｓｃ ｅ ｎｏ ＭＤ Ｔ ｖｃ ｒｆ ｓｑ ｅ ｃ ．Ｓ ｑ ｅ ｃ ｅｕｔ ｓｏ ｈ ｔ ｈ ｐ ｎ ｏ ｏ １ ８ ｏ ｒ ｎ ｎ ｓ
维普资讯
・
・
中国兽药杂志
２ ０ ，１ ６ ： ／ ０７ ４ （ ）４—８ 马凤龙 ， 等
蛋鸡 Ｏ 干扰 素基 因的克 隆及其 ｔ 一 在 大 肠 杆 菌 中的高 效 表 达 与 复性 研 究
马凤 龙 ， 兴伦 乔彦 良 ， 傅 ， 李春荣 李朝 阳 ， ， 刘焕珍
为检 测 系统 ） 定 复性液 的抗 病毒 比 活性高达 １ ／ ｇ以上。 测 ０Ｕ ｒ ａ
［ 关键 词 ］ 鸡 ； Ｎ． 基 因 ； 达 ； 涵体 ； 性 Ｉ Ｏ Ｆ ｔ 表 包 复
Ｃｌｎ ｎ ｎ ｐ ｅ ｓ ｎ ｏ ｙ ｒ Ｉ ｔ ｒｅ ｏ － 【 ｎ ｎ Ｅ． ｏ ｉ ｏ ｉ ｇ ａ ｄ Ｅｘ ｒ ｓ ｉ ｆＬａ ｅ ｎ ｅ ｆｒ ｎ ０ Ｇｅ ｅ ｉ ｃ ｌ ｏ
［ 摘 要］ 根 据 Ｇ ｎ ａｋ中鸡 ＩＮ仅序列设 计 引物对， 用 Ｐ Ｒ技术克 隆并测定 了莱航 鸡 ｅＢ ｎ Ｆ一 利 Ｃ
鸡γ-干扰素基因克隆、表达及对禽流感灭活苗的免疫增强作用的开题报告
鸡γ-干扰素基因克隆、表达及对禽流感灭活苗的免
疫增强作用的开题报告
一、选题背景
禽流感是由禽流感病毒引起的一种急性高传染性呼吸道疾病，对家禽养殖业造成了严重的经济损失。
治疗方法有限，预防措施主要是疫苗接种。
但是，常规灭活疫苗接种后的免疫效果不稳定，需要频繁接种。
因此，开发一种高效的禽流感疫苗具有重要意义。
干扰素是一类免疫调节蛋白，具有广泛的抗病毒、抗肿瘤等生物学活性。
鸡γ-干扰素是鸡体内较为重要的干扰素，能够增强鸡体免疫力。
因此，本研究旨在克隆和表达鸡γ-干扰素基因，探究其对禽流感灭活苗的免疫增强作用，为禽流感疫苗的研发提供理论依据和实践参考。
二、研究内容和方法
1.鸡γ-干扰素基因的克隆与构建
采用PCR扩增鸡γ-干扰素基因，将其克隆至表达载体中，构建表达载体。
2.鸡γ-干扰素基因的表达与纯化
将构建的表达载体转化至大肠杆菌中进行表达，并进行融合蛋白的纯化。
3.免疫增强实验
选取鸡群，分为实验组和对照组。
实验组接种加入鸡γ-干扰素的灭活疫苗，对照组接种普通灭活疫苗。
测定两组鸡的免疫效果及抗体水平的变化，比较免疫增强效果。
三、研究意义
通过克隆和表达鸡γ-干扰素基因，探究其对禽流感灭活苗的免疫增强作用，为禽流感疫苗的研发提供理论依据和实践参考，可以促进禽流感防控工作的发展和进步。
鸡γ-干扰素的克隆·表达和序列分析
ｔ ｅ ｏ ｉａ ｔｐｏｅｎ ｗａ ｂ ｕ ８ ｋ ａ ｄ ｔｅ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｅ ｅ ｓｈｇ ｅ ｔａｔｒＩ Ｇ ｎ ｕ ｔｏ ｘ ｒ ｓｉｎｆ ｒ４ｈ． ｔ ｈ ｘ ｒ ｓｉｎ ｙｅｄ ｈｅｒｃ ｍｂｎ ｎ ｒｔｉ ｓａ ｏ ｔ１ Ｄ ｎ ｈ ｘ ｒ ｓｉｎ１ ｖ ｌｗａ ｉｈ ｓ ｆ ＰＴ ｉｄ ｃｉｎ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｗｉ ｔｅｅ ｐ ｅ ｓｏ ｉｌ ｅ ｏ ｈ
谢昆 王 ， 传铭ｔ ， 林丽飞１ ， 王栋ｔ ， 李河１
（ ． 学 院生 命 科 学 与 技 术 学 院 ， 南 蒙 自 ６ １０ ； ． 省 天 然 药 物 与 化 学 生 物 学 重 点 实 验 室 ， 南 蒙 自 ６ １０ ） １ 红河 云 ６ １０ ２云南 云 ６ １０
摘要 ［ 目的］ 为鸡 一 干扰素的进一步研 究奠定基础。 方法 ］ ［ 根据 Ｇ ｎ ａｋ ｅ Ｂｎ 发表的鸡 一 干扰素核苷酸序列， 设计 ｌ 对特异性引物。 利 用 Ｒ － Ｒ技 术从 ｇ ｎ ＴＰ Ｃ ｏＡ诱 导培 养的 鸡脾脏 淋 巴细胞 中克隆鸡 ． 素 基 因 ， 干扰 并在 ＩＴ Ｐ Ｇ诱 导 下在 大肠 杆 菌 中表达 重组 茵 。结 果 ］ ［ 克 隆的 鸡 ． 素 基 因全长 ４５ ｐ 编 码 １５ 氨基 酸 ， 国外克 隆 的鸡 一 扰素 基 因序 列 的 同源性 为 １０ 鸡 一 素蛋 白合 有 干扰 ９ ， ｂ ６个 与 干 ０％。 干扰
鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒活性测定
鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒活性测定陈红英;宋凌云;崔保安;胡功政;贾艳艳;郭显坡【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2009(024)001【摘要】通过PCR技术从罗曼鸡肝脏基因组中扩增鸡α干扰素(ChIFN-α)全基因,并克隆和测序.序列分析表明,ChIFN-α基因全长为582 bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因489 bp,利用基因重组技术构建了重组质粒,使ChIFN-α置于原核表达载体pQE30的T5启动子下并同6×His(多聚组氨酸标签)-Tag 融合.经酶切和PCR鉴定,DNA测序证实重组质粒pQEChIFN-α构建正确;将pQEChIFN-α转化大肠杆菌M15感受态细胞,用IPTG诱导表达.SDS-PAGE和Western blot证实表达出分子质量为19.80 kDa的融合蛋白.表达的蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性处理后,在Vero细胞上抗水泡性口炎病毒的活性为1.16×103 U/mg.本研究成功表达了ChIFN-α,表达的重组蛋白具有一定的生物活性.【总页数】4页(P40-43)【作者】陈红英;宋凌云;崔保安;胡功政;贾艳艳;郭显坡【作者单位】河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南省动物性食品安全重点实验室,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南省动物性食品安全重点实验室,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南省动物性食品安全重点实验室,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南省动物性食品安全重点实验室,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002【正文语种】中文【中图分类】Q785【相关文献】1.鸡γ干扰素成熟蛋白基因的表达及其产物抗病毒活性测定 [J], 蔡梅红;曹瑞兵;周斌;谈国蕾;杨松;陈溥言2.鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒效果研究 [J], 韦琴;彭贵青;金梅林;朱裕东;周红波;郭红燕;陈焕春3.猪γ-干扰素基因的克隆原核表达及抗病毒活性检测 [J], 张瑞华;刘珍;刘春凌;李春红4.猪α干扰素与白介素-18融合基因的克隆、原核表达及其抗病毒活性的初步研究[J], 张盼盼;何静;康银峰;向斌;任涛5.鸡α干扰素基因的原核表达及其活性测定 [J], 戴华;郑佳玉;陈俊华;潘志明;焦新安因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鸡γ-干扰素的可溶性表达及纯化产物的抗NDV活性
鸡γ-干扰素的可溶性表达及纯化产物的抗NDV活性代丽;单安山;孙进华;尹佳佳;李远见【期刊名称】《东北农业大学学报》【年(卷),期】2011(042)009【摘要】将鸡γ-干扰素(chIFN-γ)基因先克隆,接着通过大肠杆菌表达后进行产物纯化与活性检测.通过PCR方法以带有信号肽的重组质粒PMD-18T-preIFN-γ为模板,扩增无信号肤chIFN-γ基因片段,克隆至原核表达载体pProEXTM HTa,构建重组表达质粒pProEXTM HTa-chIFN-γ,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,然后利用Novagen蛋白纯化试剂盒进行天然纯化可溶性蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blot鉴定,同时利用CEF-NDV系统测定抗病毒活性.结果表明,459bp的chIFN-γ成熟蛋白编码基因被成功克隆,同时chIFN-γ蛋白在大肠杆菌中也获得了成功表达,分子质量约为20 ku,能与抗His的单克隆抗体发生特异性反应.表达蛋白一部分形成包涵体,另一部分以可溶形式存在,可溶性蛋白经镍柱在天然条件下的纯化得率约为1.9 m g· mL-1.生物学活性试验表明,1∶54稀释纯化的重组chIFN-γ( rchIFN-γ)孵育CEF细胞后能抵抗100TCID50的NDV(新城疫Ⅳ系弱毒苗)攻击.研究纯化获得的rchIFN-γ具有较好的抗病毒活性,为研制新型抗病毒干扰素制剂奠定基础.【总页数】6页(P37-42)【作者】代丽;单安山;孙进华;尹佳佳;李远见【作者单位】东北农业大学动物营养研究所,哈尔滨150030;东北农业大学动物营养研究所,哈尔滨150030;东北农业大学动物营养研究所,哈尔滨150030;东北农业大学动物营养研究所,哈尔滨150030;东北农业大学动物营养研究所,哈尔滨150030【正文语种】中文【中图分类】S826【相关文献】1.鸡γ干扰素成熟蛋白基因的表达及其产物抗病毒活性测定 [J], 蔡梅红;曹瑞兵;周斌;谈国蕾;杨松;陈溥言2.鸡γ-干扰素的可溶性表达及纯化产物的抗病毒活性 [J], 齐静;杜以军;朱小玲;胡北侠;孙守礼;张秀美;刘玉庆3.鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子-猪干扰素α1融合基因在大肠埃希菌中的可溶性表达及其生物学活性研究 [J], 胡涛;何志远;张文昌;赵俊;王明丽4.鸡IFN-γ基因的原核表达及其表达产物的抗NDV活性 [J], 董建宝;黄溢泓;谢芝勋;孙建华;刘加波;庞耀珊;邓显文;谢丽基5.惠阳胡须鸡Ⅱ型干扰素基因在毕赤酵母中的表达及其产物活性分析 [J], 韩春来;吴志光;史喜菊;张灿;柏亚铎;汪明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
三黄鸡α干扰素的克隆、表达及抗病毒活性初步研究
通 ＤＮＡ 聚合 酶 、 白质 Ｍａｋ ｒ Ｂ ａ ｆｒ 白定 蛋 ｒ ｅ 和 ｒｄｏ ｄ蛋
量 测定试 剂 盒 为上海 生工 生物 工程 技术 服 务 有 限公 司产 品 ；Ｐ Ｉ ＴＧ、 素 、 烯 酰 胺 、 尿 丙 甲叉 双 丙 烯 酰 胺 为
Ｇｅ ｖｅ ｎ ｉｗ公 司 （ 京 ） 品 ； ｉ 碱 为 Ｓｇ 北 产 Ｔｒ ｓ ｉｍａ公 司产
（． １ 河南 省康 星 药 业 有 限 公 司 ， 南 中 牟 ４ １ ６ ；． 州 牧业 工 程 高 等 专 科 学 校 ， 南 郑 州 ４ ０ １ ； 河 ５４ ４ ２ 郑 河 ５０ １
３ 辽 宁省 辽 阳市 种 畜 场 ， 宁辽 阳 ｌ Ｉ Ｏ ） ． 辽 ｉＯ Ｏ
摘
要 ： 用 Ｐ Ｒ方 法从 三黄鸡 血 液基 因组 中扩增 鸡 Ｃ干扰 素 全基 因， 采 Ｃ ｔ 并克 隆和测序 。序 列 分析表 明 ，
鸡 （干 扰 素 （ ｈｃ ｅ ｔｒ ｒｎ ａ ｈ ， ｈ Ｆ Ｉ ｔ ｃ ｉ ｎ ｉ ｅｆ ｏ －ｌ ａ Ｃ ｌ．
１ １ １ 质 粒 和 茵株 ． ．
原 核表 达 载体 ｐ Ｔ ８ 、 Ｅ ２ ａ 大肠
埃希 菌 （ ｓｈ ｒｃ ｉ ｏｉ） Ｅ ｃ ｅｉ ａｃ ｌ ＤＨ５ ｈ ａ和 Ｂ ２ Ｌ １由河 南 省 康星 药业 有 限公 司研发 部 实验室 保存 。 １ １ ２ 鸡 胚和 病毒 ９日龄 鸡 胚 为 郑 州 瑞 祥 孵 化 ．． 厂孵 化 ； 城疫 病 毒 由河 南 农 业 大 学禽 病 研 究 所 惠 新
素 分 为 Ｉ型 和 Ⅱ型两类 。 Ｉ型 干扰 素包 括 Ｉ Ｎ— Ｆ ａ和
Ｉ Ｎ Ｂ等 ， Ｆ — Ⅱ型干 扰 素 又 称 免 疫 干 扰 素 即 Ｉ Ｎ ７２。 Ｆ 一［ ］ ａ干扰 素 主要 来 源于 Ｂ淋 巴细胞 和 巨噬细胞 ， 扰 Ｂ干 素 主要来 源 于成 纤 维 细 胞 和 上 皮 细胞 ， 者 主 要 活 两
一种优化的鸡α干扰素肽链及其重组表达工程菌株[发明专利]
![一种优化的鸡α干扰素肽链及其重组表达工程菌株[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/a94e1a2d2cc58bd63086bd0a.png)
专利名称：一种优化的鸡α干扰素肽链及其重组表达工程菌株专利类型：发明专利
发明人：曹丁,丁年平,李学优,黄魁英,兰玲峰,甘祥武,陈琼
申请号：CN201811642869.0
申请日：20181229
公开号：CN109608535A
公开日：
20190412
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种优化的鸡α干扰素肽链及其重组表达工程菌株，所述重组表达工程菌株的制备方法为：将优化的鸡α干扰素基因连入毕赤酵母表达载体pPIC9k中，然后运用电转化方式整合入毕赤酵母基因组中即得重组鸡α干扰素的毕赤酵母工程菌株。
与天然干扰素基因序列重组菌株相比，该重组毕赤酵母的鸡α干扰素的表达量提高了2倍，抗病毒活性提高了42倍；重组鸡α干扰素的毕赤酵母工程菌株表达的上清中，鸡α干扰素蛋白纯度高达80%，分离纯化工艺简单，透析超滤除菌后即可使用，能够实现鸡α干扰素的工业化生产。
申请人：广州市微生物研究所,广东广微检测股份有限公司,广州科盛生物科技有限公司
地址：510000 广东省广州市萝岗区尖塔山路1号
国籍：CN
代理机构：广州粤高专利商标代理有限公司
代理人：单香杰
更多信息请下载全文后查看。
大肠杆菌重组鸡α干扰素、重组表达载体、重组表达工程菌及其制备方法和应用[发明专利]
![大肠杆菌重组鸡α干扰素、重组表达载体、重组表达工程菌及其制备方法和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d5f6128c9b6648d7c0c7460b.png)
专利名称：大肠杆菌重组鸡α干扰素、重组表达载体、重组表达工程菌及其制备方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：孙永珍,徐进,李厚伟,刘福涛
申请号：CN201611220000.8
申请日：20161226
公开号：CN107141347A
公开日：
20170908
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌重组鸡α干扰素、重组表达载体、重组表达工程菌及其制备方法和应用，属于基因工程领域。
本发明通过优化鸡α干扰素基因序列并合成全基因，然后构建重组表达载体转化大肠杆菌，最后通过诱导表达和蛋白纯化获得纯度和含量较高的rChIFN‑α蛋白。
重组干扰素rChIFN‑α在CEK细胞、鸡胚上和鸡体内对FAV‑4均具有抗病毒作用。
其中，在CEK细胞上的抗病毒活性为4.17×10IU/mL；在鸡胚上能明显抑制FAV‑4增殖，延迟鸡胚的死亡时间；在鸡体内也能显著抑制FAV‑4复制，延迟感染鸡的死亡时间。
说明重组干扰素rChIFN‑α对FAV‑4具有较好的抗病毒作用。
申请人：河南后羿生物工程股份有限公司
地址：451100 河南省郑州市新郑港区新港大道东侧
国籍：CN
代理机构：郑州睿信知识产权代理有限公司
代理人：张鹏辉
更多信息请下载全文后查看。
一种大肠杆菌重组鸡α-γ二价干扰素及其制备方法[发明专利]
![一种大肠杆菌重组鸡α-γ二价干扰素及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/92b1bc9aa26925c52cc5bff3.png)
专利名称：一种大肠杆菌重组鸡α-γ二价干扰素及其制备方法专利类型：发明专利
发明人：郝智慧,宋丽,贾德强,张瑞丽,邱梅,王春元
申请号：CN200910256418.8
申请日：20091225
公开号：CN102108096A
公开日：
20110629
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种大肠杆菌重组鸡α-γ二价干扰素及其制备方法。
本发明的目的在于提供一种抗肿瘤效果好、提高畜禽免疫力的，能够在短时间内实现控制病情的干扰素。
其组分为：大肠杆菌重组鸡α-扰素、大肠杆菌鸡γ-干扰素；其制备方法为：基因设计，表达载体构建，诱导表达，目的蛋白质纯化及活性检测即得。
该药品为畜禽病毒病治疗替代药物，利用大肠杆菌表达鸡α-扰素、鸡γ-干扰素，具有广谱的抗病毒作用。
通过纯化蛋白后具有免疫调节活性和一定的抗病毒活性，二者联合应用于临床具有明显的协同作用。
本发明制成的二价干扰素可优于单独应用任何一种干扰素对新城疫和法氏囊病的治疗和预防效果。
申请人：青岛康地恩药业有限公司,青岛六和药业有限公司
地址：266061 山东省青岛市崂山区高科园苗岭路29号山东高速大厦605
国籍：CN
更多信息请下载全文后查看。
鸡γ-干扰素基因在大肠杆菌中的表达
鸡γ-干扰素基因在大肠杆菌中的表达吴树华;宫鹏涛;张西臣;吴玲;李建华【期刊名称】《青岛农业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2009(026)001【摘要】构建鸡γ-干扰素基因(lFN-γ)的融合表达质粒,并在原核系统表达.根据GenBank发表的鸡γ-干扰素核苷酸序列,使用primer5设计一对特异性引物,通过RT-PCR技术从ConA诱导培养的鸡脾脏淋巴细胞中克隆出鸡γ-干扰素基因并对其进行测序.测序结果表明,鸡γ-干扰素基因全长495bp,具有一个完整的开放阅读框,编码164个氨基酸,与国外发表的序列同源性为100%.将序列连接到原核表达载体pET28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳分析.结果表明鸡γ-干扰素表达蛋白大小为20.8KD,并以包涵体形式表达.为鸡γ-干扰素生物制剂或疫苗佐剂的开发奠定基础.【总页数】4页(P8-11)【作者】吴树华;宫鹏涛;张西臣;吴玲;李建华【作者单位】吉林大学畜牧兽医学院,吉林,长春130062;吉林大学畜牧兽医学院,吉林,长春130062;吉林大学畜牧兽医学院,吉林,长春130062;吉林大学畜牧兽医学院,吉林,长春130062;吉林大学畜牧兽医学院,吉林,长春130062【正文语种】中文【中图分类】S855.9【相关文献】1.猪干扰素-γ基因在大肠杆菌中的克隆表达及其活性测定 [J], 王丽;刘金波;何涛;郑小莉;梅志强;李洪2.鸡传染性支气管炎病毒S1基因和鸡Ⅱ型干扰素基因在重组鸡痘病毒中的共表达[J], 孙永科;田占成;王云峰;童光志;智海东;刘胜旺;王玫;杨增岐3.乳糖诱导重组鸡γ干扰素基因在大肠杆菌中的表达 [J], 王宏华;凌红丽;马向东;王雷;孙海新;赵玉惠4.鸡γ-干扰素基因在大肠杆菌中的高效表达及多克隆抗体的制备 [J], 丁忠庆;刘胜旺;孔宪刚;宋铭忻5.鸡IFN-γ基因在大肠杆菌中的表达及表达产物对鸡的免疫保护 [J], 王立红;高春萍;邢克智;王红英;郭永军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鸡γ-干扰素cDNA的克隆和在大肠杆菌中的温度诱导型表达
鸡γ-干扰素cDNA的克隆和在大肠杆菌中的温度诱导型表达高山;杨国庆;郭英;陈永福;张沅;张勤【期刊名称】《农业生物技术学报》【年(卷),期】2003(011)004【摘要】克隆了鸡(Gallus gallus)的γ-干扰素cDNA,并用大肠杆菌(Escherichia coli)进行了温度诱导型表达.用PCR方法扩增了鸡γ-干扰素基因组基因,将其克隆到载体pGEM-T上.对重组载体的插入片段进行酶切分析和部分序列测定:证明了基因的正确性;克隆的鸡γ-干扰素基因的编码序列中存在一个点突变(G→A),这一突变导致一个三联体密码子GAA变为AAA,编码的氨基酸由谷氨酸(Glu)变为赖氨酸(Lys).用鸡γ-干扰素基因组基因构建了真核表达载体pCI-ChIFN.将这一真核表达载体转染兔成纤维细胞的细胞系中进行表达实验:提取转染后细胞裂解物中的RNA,再以此为模板进行RT-PCR,获得了完整的鸡γ-干扰素cDNA基因,同时证明鸡γ-干扰素基因组基因能在兔成纤维细胞系中表达.用鸡γ-干扰素cDNA构建了温度诱导型原核表达载体pBVcDNA,并将其转导到大肠杆菌DH5 α中,经细菌发酵和温度诱导,表达了一个18 kD的特异蛋白,其表达量占细菌总蛋白的8.75%.【总页数】5页(P394-398)【作者】高山;杨国庆;郭英;陈永福;张沅;张勤【作者单位】中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,北京,100094;中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,北京,100094;中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,北京,100094;中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,北京,100094;中国农业大学动物科技学院,北京,100094;中国农业大学动物科技学院,北京,100094【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.鸡γ干扰素基因的分子克隆及其在大肠杆菌中的表达 [J], 张敬峰;魏雪涛;李银;刘宇卓2.猪干扰素γcDNA的分子克隆与在大肠杆菌中的表达 [J], 吴文学;夏春;汪明;蒋金书3.鸡IL-18 cDNA的克隆及在大肠杆菌中的高效表达 [J], 胡敬东;崔治中;赵宏坤4.SH2域S、HP2 cDNA的克隆鉴定和在大肠杆菌中的表达及其与CagA的相互作用 [J], 李征;盛妮晶;高晓莲5.人血管内皮细胞生长因子cDNA克隆和在大肠杆菌的高效表达 [J], 何延政;刘建平;谢毅;张培华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鸡α-干扰素基因的克隆与原核表达
鸡α-干扰素基因的克隆与原核表达刘水清;刘新文;李茜;张七斤;李明义【期刊名称】《上海畜牧兽医通讯》【年(卷),期】2007(000)002【摘要】根据Genbank中发表鸡α-干扰素基因序列设计一对引物,采用PCR法从SPF鸡的全血白细胞中克隆了α-干扰素基因(ChIFN-α).序列分析结果显示,与已发表的ChIFN-α的同源性在98.1%以上,与其他禽类的IFN-α同源性在67.4%以上,其中与火鸡IFN-α同源性在89.8%,而与鸭α干扰素同源性仅为67.4%.将该基因连接到原核表达载体pET-28 a上,构建重组表达质粒,转入BL21,IPTG诱导后SDS-PAGE分析,可见一条约19ku的清晰蛋白带,结果表明克隆的ChIFN-α基因在原核中获得表达.【总页数】2页(P24-25)【作者】刘水清;刘新文;李茜;张七斤;李明义【作者单位】内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古,呼和浩特,010018;青岛易邦生物工程有限公司山东青岛 260032;河北农业大学动物科技学院,河北,保定,071000;内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古,呼和浩特,010018;青岛易邦生物工程有限公司山东青岛 260032【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒活性测定 [J], 陈红英;宋凌云;崔保安;胡功政;贾艳艳;郭显坡2.鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒效果研究 [J], 韦琴;彭贵青;金梅林;朱裕东;周红波;郭红燕;陈焕春3.鸡γ-干扰素基因的克隆及原核表达 [J], 芦芝川;史耀旭;杨孝朴4.鸡γ-干扰素基因的克隆及原核表达 [J], 史耀旭;殷宏;曾巧英;关贵全;高金亮;党志胜;刘志杰;刘爱红;马米玲;任巧云;罗建勋5.鸡γ-干扰素基因的克隆与原核表达 [J], 鲍鸣;仲大莲;许发芝;余为一;李槿年因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鸡a干扰素成熟蛋白基因的表达的开题报告
鸡a干扰素成熟蛋白基因的表达的开题报告一、背景与意义干扰素（interferons）是一类重要的细胞因子，主要具有细胞免疫调节、抗病毒和抗肿瘤等生物效应。
根据其作用机制及受体类型的不同，干扰素可以分为三类，即干扰素α、干扰素β和干扰素γ。
其中，干扰素α和干扰素β主要由巨噬细胞和上皮细胞产生，而干扰素γ则主要由天然杀伤细胞和T细胞产生。
鸡是重要的家禽动物，在养殖生产中发挥着重要的作用。
与此同时，鸡也是许多病原微生物的宿主，例如新城疫病毒、家禽流感病毒等。
因此，研究鸡的免疫调节机制对于鸡的健康养殖和疾病防控具有重要意义。
目前，已经发现了鸡的干扰素α和干扰素β基因，但是关于鸡的干扰素γ基因目前还没有被报道。
因此，本研究旨在克隆和表达鸡的干扰素γ成熟蛋白基因，并探究其在免疫调节中的作用及调控机制。
二、研究内容和方法1. 克隆和序列分析鸡干扰素γ基因采用PCR技术从鸡的脾脏组织中扩增出干扰素γ基因，并进行DNA测序和序列分析。
2. 构建鸡干扰素γ成熟蛋白表达载体将鸡干扰素γ基因克隆至表达载体中，并利用大肠杆菌DH5α菌株进行大规模扩增，最终提取纯化表达载体。
3. 表达鸡干扰素γ成熟蛋白将表达载体转化至大肠杆菌BL21菌株，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达鸡干扰素γ成熟蛋白，最终通过SDS-PAGE和Western blot检测表达效果。
4. 探究鸡干扰素γ在免疫调节中的作用及调控机制通过细胞实验等方法，进一步探究鸡干扰素γ在免疫调节中的作用及调控机制。
三、研究预期结果1. 成功克隆和分析了鸡的干扰素γ基因序列。
2. 成功构建了鸡干扰素γ成熟蛋白表达载体，并实现了表达。
3. 探究了鸡干扰素γ在免疫调节中的作用及调控机制，为鸡的健康养殖和疾病防控提供了理论和实验基础。
四、研究意义1. 为深入探究鸡的免疫调节机制提供了新思路和实验基础。
2. 对于鸡的健康养殖和疾病防控具有重要意义，可以为更好地防控鸡的传染病提供依据。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄｓ ： Ｃｈ ｉ ｃ ｋ ｅ ｎ ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｅ ｒ ｏ ｎ Ｏ ； Ｇｅ ｎ ｅ ｃ ｌ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ； Ｅ． ｃ ｏ ｌ ｉ ；Ｉ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｂ ｏ ｄ ｙ ； Ａｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ
Ｃｌ ｏ ｎｉ ｎｇ ｏ ｆ Ｃｈｉ ｃ ｋ ｅ ｎ Ｉ ＦＮ－ ｕ Ｇｅ ｎｅ ａ ｎｄ Ｉ ｔ ｓ Ｅｘ ｐｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ Ｅｓ ｅ ｈ ｅ ｒ ｉ ｃ ｈ ｉ ａ ｃ ｏ ｌ ｉ
Ｗａ ｎ ｇ Ｌ ｅ ｉ ，Ｌ ｉ ｎ ｇ Ｈｏ ｎ ｇ ｌ ｉ ， Ｗａ ｎ ｇ Ｈｏ ｎ ｇ ｈ ｕ ａ ，Ｓ ｕ ｎ Ｈａ ｉ ｘ ｉ ｎ
ａ ｎ ｄ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｅ ｄ ｂ ｙ Ｓ ＤＳ － Ｐ ＡＧＥ ａ ｔｅ ｆ ｒ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗｉ ｔ ｈ Ｉ Ｐ ＴＧ． Ｔｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｉ ｎ ｄ ｉ ｃ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｗａ ｓ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ ａ ｓ ｉ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｂ ｏ ｄ ｙ ． Ｔ ｈ ｅ
中国动物检疫 ２ ０ １ ３年第 ３ ０卷第 ２期
主持 人： 胡藕祥
鸡 Ｑ一 干扰 素基 因克隆及其在大肠杆菌 中表达
王 雷 ，凌红 丽 ，王宏华 ，孙 海新
（ 青岛宝依特生物制药有限公司，山东青 岛 ２ ６ ６ １ １ ４ ）
摘 要 ：根据 Ｇｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ中鸡 Ｉ Ｆ Ｎ． ０基 因设 计 引物对，利用 Ｐ Ｃ Ｒ技术克 隆并 测定 了 Ｓ Ｐ Ｆ鸡的 Ｉ Ｆ Ｎ． Ｑ基 因，再在成 熟肽基 因 两侧 设计 一对 引物 ，分别加入合 适的酶切位 点 ，将其 亚克隆在表 达载体 ｐ Ｅ Ｔ上 ，转化 ＢＬ ２ １（ Ｄ Ｅ ３ ）后用 Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ诱 导表达 ，用 Ｓ ＤＳ — Ｐ ＡＧＥ电泳分析表 达形 式，结果 为蛋 白以包涵体形式表 达。提取 的 包涵体用 ７ｍｏ ｌ ／ Ｌ盐酸胍变性 ，利用胱氨 酸一半胱氨 酸
（ Ｑｉ ｎ ｇ ｄ ａ ｏ Ｂ ｏ ｉ ｔ ｅ ｃ ｈ Ｂ ｉ ｏ ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ｓ Ｌ ｔ ｄ ，Ｑ ｉ ｎ ｇ ｄ ａ ｏ Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇ ２ ６ ６ １ １ ４ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ａｃ ｃ ｏ ｒ ｄ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｃ ｈ ｉ ｃ ｋ ｅ ｎ Ｉ Ｆ Ｎ－
ｇ ｅ ｎ ｅ ｐ ｕ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ Ｇｅ ｎ Ｂａ ｎ ｋ．ｔ ｈ ｅ ｃ ｈ ｉ ｃ ｋ ｅ ｎ Ｉ Ｆ Ｎ一 。 ｇ ｅ ｎ ｅ ｗａ ｓ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ
ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ｄ ，ａ ｐ ａ ｉ ｒ ｏ ｆ ｐ ｒ ｉ ｍｅ ｒ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｄ ｅ ｓ ｉ ｇ ｎ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ｓ ｙ ｎ ｔ ｈ ｅ ｔ ｉ ｚ ｅ ｄ ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｃ ａ ｎ ａ ｍｐ ｌ ｉ ｆ ｙ ｔ ｈ ｅ ｍａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｐ ｅ ｐ ｔ ｉ ｄ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ，ａ ｎ ｄ ａ ｄ ｄ ｅ ｄ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ａ ｐ ｐ ｒ ｏ ｐ ｒ ｉ ａ ｔ ｅ
再氧化法对 包涵体 变性液进行分段稀释法复性 。细胞病变抑 制法 （ Ｃ Ｅ Ｆ ． Ｖ ｓ Ｖ 为基本检测 系统 ）测定复性液的抗病毒 活性 不低 于
１ ０ 。Ｕ／ ｍＬ。
关键词 ：鸡 ｎ． 干扰 素；基 因克隆；大肠杆 菌；包涵体 ；活性 中图分类号 ：￥ ８ ５ ２ ． ５ ２ 文献标识码：Ｂ 文章编 号：１ ０ ０ ５ ． ９ ４ ４ Ｘ（ ２ ０ １ ３ ）０ ２ ． ０ ０ ４ ２ ． ０ ４
ｉ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｂ ｏ ｄ ｙ ｗａ ｓ ｄ ｉ ｓ ｓ ｏ ｌ ｖ ｅ ｄ ｉ ｎ ７ ｍｏ ｌ ／ Ｌ ｇ ｕ ａ ｎ ｄ ｉ ｎ ｅ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｉ ｄ ｅ ａ ｎ ｄ ｓ ｕ ｂ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｔ ｌ ｙ ｒ ｅ － ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｄ ｂ ｙ ｄ ｉ ｌ ｕ ｔ ｉ ｎ ｇ ｗｉ ｔ ｈ ｒ ｅ ｆ ｏ ｌ ｄ ｉ ｎ ｇ ｂ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ ｃ ｏ ｎ ｔ ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ｃ ｙ ｓ ｔ ｉ ｎ ｅ — ｃ ｙ ｓ ｔ ｅ ｉ ｎ ｅ ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ． ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｄ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｗａ ｓ ｖ ｅ ｒ ｉ ｉｅ ｆ ｄ ｔ ｏ ｂ ｅ ａ ｎ ｔ ｉ ． ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｏ ｖ ｅ ｒ １ ０ 。 Ｕ／ ｍＬ ｂ ｙ ＣＰ Ｅ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｅ ｓ ｔ
ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｉ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｉ ｔ ｅ ， ｔ ｈ ｅ ｎ ｔ ｈ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｒａ ｆ ｇ ｍｅ ｎ ｔ ｗａ ｓ ｓ ｕ ｂ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｖ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ｐ Ｅ Ｔ， ｈｅ ｔ ｒ ｅ ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ａ ｎ ｔ ｖ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ｗａ ｓ ｉ ｎ ｔ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｏ ＢＬ２１ （ ＤＥ３ ） ，