99mTc-放射性药物的正辛醇-水分配系数的测定

实验九 99m Tc-放射性药物的正辛醇-水分配系数的测定
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一、实验目的
1．掌握药盒法制备99m Tc-MIBI 。

2．掌握99m Tc-放射性药物的正辛醇-水分配系数的测定方法。

二、实验原理
脂-水分配系数是分子亲脂特性的量度，在药剂学研究中主要用于预见药物对在体组织的渗透或吸收难易程度。

根据相似相容原理，脂水分配系数是指化合物在脂(油)相和水相的分配比例，化合物的水溶性与脂溶性间达到平衡时，其平衡常数称为脂水分配系数。

药物脂水分配系数大小影响药物的吸收、分布、转运、代谢和排泄。

脂水分配系数决定了药物能否进入人体的特定器官，对于脂溶性的器官，要求药物的脂水分配系数大，这样药物容易进入，进而产生药效；对于非脂溶性器官，要求药物的脂溶性低，进而产生药效。

因此，药物要有适当的脂溶性。

鉴于正辛醇的结构和理化性质特点更接近生物相，目前认为正辛醇－水是一种良好的模拟系统，从而被广泛采用。

正辛醇-水分配系数是平衡状态下99m
Tc-
放射性药物在正辛醇相的浓度C o 和水相中的中性（未解离的）形态的浓度C w
的比值。

即：
o
w
c P c =
其中P 为分配系数；c o 为平衡时99m Tc-放射性药物在正辛醇相中的浓度；c w 为平衡时99m Tc-放射性药物在水相中的浓度。

log P 为P 的常用对数。

log P 值越大，表明物质对有机相的亲和性（亲脂性）越高，亲水性越低。

测定分配系数最经典的方法是振荡法，将无载体放射性示踪剂加到一定量的正辛醇和水中，充分混合并静置直至达到平衡，然后利用计数器测定两相中的放射性活度，算出分配系数。

o
w
A P A =
其中，A o 为放射性药物在正辛醇相的放射性活度，A w 为放射性药物在水相的放射性活度。

本实验用正辛醇—PBS 缓冲溶液（pH 值为7.4）测定
99m
Tc-MIBI 配合物的
正辛醇-水分配系数。

为了降低实验操作不当给实验结果带来的误差，目前常用的方法是先用移液抢从正辛醇和PBS 缓冲溶液中取出相应的体积，然后加入到
已知质量的试管中，利用分析天平分别称量上述体积的质量，根据密度计算出相应准确体积，再根据体积和对应放射性活度计算99m Tc-MIBI配合物的正辛醇-水分配系数。

三、仪器与试剂
仪器：NaI（Tl）γ-井型闪烁探测器，毛细管，聚酰胺薄片，烧杯，试管，离心试管，离心机，振荡器，加热装置等。

试剂：高锝酸钠淋洗液(99Tc m O4-)，乙腈，MIBI药盒，正辛醇—PBS缓冲溶液。

四、实验步骤
1. 制备99m Tc-MIBI配合物
将高锝酸钠淋洗液注入MIBI药盒中，沸水浴下加热15 min，平行点样三次，在乙腈-聚酰胺薄膜体系中展开，用γ-井型闪烁探测器测量，计算标记率。

2. 99m Tc-MIBI配合物的脂水分配系数的测定
体积法：
(1) 取3.0 ml正辛醇，2.9 ml PBS（pH=7.4）注入1号离心试管中，再向其中加入0.1 ml 99m Tc-MIBI溶液，涡旋振荡5 min，离心5 min，使两相明显分层后分离正辛醇相和PBS相。

(2) 用移液枪取出PBS相、正辛醇相各0.2 ml，平行三次，测定其放射性计数，计算P1值。

(3) 取出1号离心管中的油相2 ml加入2号离心管中，再加入1 ml正辛醇、3 ml PBS溶液，涡旋振荡5 min，离心5 min，使两相明显分层。

重复(2)实验步骤，并计算P2值。

(4) 重复(2)和(3)实验步骤，直到前后两次计算的P x值非常接近，取最后一次计算的P值作为99m Tc-MIBI配合物的正辛醇—PBS缓冲溶液（pH值为7.4）的一次测量结果。

(5) 重复(1)-(4)实验步骤2次。

五、实验数据处理
1. 99m Tc-MIBI配合物的标记率。

表一99m Tc-MIBI在乙腈-聚酰胺薄膜体系的计数率
Rf 0-0.1 0.1-0.2 0.2-0.3 0.3-0.4 0.4-0.5 0.5-0.6 0.6-0.7 0.7-0.8 0.8-0.9 0.9-1.0 标记率平行1 107 7 6 3 12 24 41 62 161 2152 89.83% 平行2 114 19 18 16 34 32 24 33 105 3189 91.91% 平行3 262 10 8 7 25 28 27 42 103 3381 89.49%
2. 99m Tc-MIBI配合物的脂水分配系数计算值及标准偏差。

表二99m Tc-MIBI在正辛醇和水中的计数及相关数据的处理结果
油相水相油相平均水相平均lg D
1-1 1160014 586424
1152483 557340 0.32
1-2 1141965 501502
1-3 1155470 584094
2-1 457693 368550
2-2 454110 377251
456949.7 370296.7 0.09
2-3 459046 365089
3-1 230117 69802
3-2 229344 69974
229716 70071.67 0.52
3-3 229687 70439
4-1 95127 39318
94962.33 39689.67 0.38
4-2 95343 39405
4-3 94417 40346
5-1 38833 17929
38645.33 18241.67 0.33
5-2 38778 18821
5-3 38325 17975
lg D的平均值0.33
lg D的标准偏差57.05%
注：本底已扣除
由以上三组数据可以看出，随着脂水分配次数的增加，lgD波动不稳定，最终测定值为lgD=0.33，D值为2.14。

五、实验结果分析及思考
1. 实验中lg D值波动不稳定，最终没有达到稳定结果分析
首先测定次数不够，如果再多测量几次，则能得到较稳定的lg D值。

此外，五次的测量结果没有是成增加趋势而后趋于平稳，而是波动状，可能是涡旋和震荡不够充分，使得物质在两相的分配不够充分。

还有水相中枪头没有留在试管中一起测定，也带来了误差，是造成实验结果不稳定的原因之一。

2. 测定99m Tc-MIBI配合物的脂水分配系数的用途是什么？
答：测定99mTc-MIBI配合物的脂水分配系数是为了看该药物的脂溶性是否适当。

看该药物是否可以进入人体的特定器官。

对于脂溶性器官，要求药物的脂水分配系数大，这样药物容易进入，进而产生药效。

对于非脂溶性器官，要求药物的脂水分配系数小，进而产生药效。

3. 影响99m Tc-MIBI配合物的脂水分配系数测定的因素是什么？
答：影响99m Tc-MIBI配合物的脂水分配系数测定的因素有：
①所用的正辛醇-PBS溶液是否互相饱和；
②正辛醇-PBS溶液的温度和pH值；
③漩涡震荡和离心的时间要够，使两相明显分层；
④测定取样时油相水相是否达到分配平衡;
⑤取水相样本时要避免油相的污染等；
⑥选用的体系。

本实验选用的正辛醇-PBS溶液是比较接近真实体内环境的。