非感染引起全身炎症反应综合征及全身感染患者单核细胞内毒素耐受性的对比研究

IDD M .Diabetes ,1997,46:1643-1646.10Boutin P ,Chevre J C ,Hani EH ,et al .An automated fluorescent single -strand conformation polymorphism technique for s creeningmutations in the

hepatocyte nuclear factor -1αgene (maturity -onset diabetes of the

young ).Diabetes ,1997,46:2108-2112.

(收稿:1998-09-29 修回:1999-02-10)

(本文编辑:袁桂清)

作者单位:100730中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院加强医疗科

非感染引起全身炎症反应综合征及全身感染患者单核细胞内毒素耐受性的对比研究

孙东旭　潘家绮　杜斌　陈德昌

近年来,随着对全身感染及多器官功能障碍综合征(MODS )发病机理研究的不断深入,人们认越来越清楚地认识到对于感染或其它的打击,机体不仅产生过度的炎症反应,同时还伴有免疫功能低下。这可能是临床抗炎措施失败的原因之一[1]。但是,判断创伤或感染引起全身性炎症反应综合征(SIRS )患者是否伴有免疫功能低下及区分SIRS 和全身感染是临床经常遇到的难题。本实验通过比较非感染引起的SIRS 及全身感染患者单核细胞在体外对于内毒素(LPS )的反应性,探讨单核细胞内毒素耐受现象与免疫功能低下的关系,并通过体外测定单核细胞的反应性以了解机体炎症免疫反应的总体状态。

一、对象与方法

1.对象:1998年3月至1998年6月入加强医疗科患者,其中SIRS 患者15例,男7例,女8例,年龄48±11岁。全身感染患者17例,男7例,女10例,年龄58±16岁。采用1991年美国胸科医师学会(ACCP )和危重病学会(SCC M )联席会制定的标准[2]。SIRS :符合以下两项或两项以上指标,(1)体温>38℃或<36℃,(2)心率>90次 分,(3)呼吸>20次 分

或二氧化碳分压(PaCO 2)<4.27kPa ,(4)白细胞>12×109

L 。全身感染:除了符合SIRS 标准外,有明确感染证据。凡伴有免疫缺陷病毒血清学阳性,原发免疫缺陷,接受免疫抑制剂或抑制细胞生长制剂者均予以排除。按以下方法分4组进行观测:SIRS 组:急性胰腺炎并发急性肾功能衰竭1例,颅脑外伤术后3例,腹部术后4例,骨关节置换术后合并ARDS 1例,高血压及急性心肌梗死引起心源性休克各1例,双侧甲状腺大部分切除术后2例,脑出血并发应激性溃疡失血性休克1例,肾上腺囊肿切除术后并发失血性休克1例。全身感染组:腹部术后并发腹腔感染7例,胆道感染3例,肺炎4例,病毒性脑炎2例,贲门撕裂并发胸腔感染1例;其中有6例发生感染性休克。对照组和LPS 预刺激组,均取自10例健康志愿者外周血单核细胞。

2.方法:(1)外周血单核细胞的分离和培养:SIRS 和全身感染组均在患者进入病房24～48小时采集外周静脉血25ml ,采用Ficoll -Urografin 分离液密度离心分离单个核细胞。用RPMI1640培养基(含10%胎牛血清、1%青霉素、链霉素、

25mmol L Hepes )培养。调整细胞的浓度为2×106 ml ,接种24孔板,5%CO 2、37℃培养1小时,洗掉未贴壁细胞继续培养24小时(采用台盼蓝排出试验检测细胞活力>95%,非特异酯酶染色鉴定单核细胞>90%)。按以下处理:对照组、SIRS

组与全身感染组单核细胞均用含LPS 1000ng ml (0127∶B8,sigma )的培养基培养4小时;LPS 预刺激组,用100ng ml LPS 预刺激健康人单核细胞24小时,然后换含LPS 1000ng ml 的培养基培养4小时[3]。培养液保存用于-80℃以备测定TNF -α及前列腺素E 2(PGE 2)。(2)检测外周血单核细胞表达HLA -DR 抗原:PE 标记抗人HLA -DR 及异硫氰酸荧光素标记抗人CD14单抗双标单核细胞,用红细胞裂解法流式细胞仪(Coulter Epics Elite Esp ,USA )检测。(3)测定TNF -α及PGE 2:采用ELISA 法测定TNF -α、EIA 法测定PGE 2(美国Cyman ),所有的标本均采用双管法,结果取其平均值。(4)统计学处理:TNF -α、PGE 2及HLA -DR 结果用均数±标准差表示,多个样本间均数的比较采用方差分析;两组间的病死率

采用χ2检验。

二、结果

1.临床资料:两组性别、ICU 住院时间、白细胞计数及体温之间差异无统计学意义(表1)。

表1　全身炎症反应综合征与非炎症性全身

感染者临床资料

组别例数体温(℃)白细胞计数(×109 L )住ICU 时间

(天)死亡

例数SIR S 组1538.2±1.513±69.0±8.31全身感染组

17

37.6±2.1

13±6

16.3±3.9

7＊

注:与SIR S 组比较＊P <0.05

2.单核细胞在体外对LPS 耐受性:LPS 预刺激组,即健康人外周血单核细胞受到小剂量LPS 预刺激,当再次受到大剂量LPS 攻击TNF -α分泌明显受抑制,反之PGE 2分泌明显增加。全身感染组患者单核细胞受到大剂量LPS 攻击后分泌TNF -α明显低于SIRS 组,并且与LPS 预刺激组之间无差异;SIRS 组TNF -α明显高于LPS 预刺激组,但与对照组无差异。相反,全身感染组PGE 2平均为对照组的2.5倍及SIRS

组的1.5倍,SIRS 组PGE 2值也明显高于对照组(约1.5倍),均有明显的统计学意义(表2)。