SephadexG10凝胶色谱柱

Sephadex G10 凝胶色谱柱

在药物质量控制中的应用

（大连依利特公司应用实验室）

1.前言

目前国内外分离分析β-内酰胺类抗生素中高分子杂质的主要方法是色谱法，应用的色谱分离模式包括反相、离子交换和凝集色谱等。由于结构不同的高分子杂质通常具有相似的生物学特性（如均为过敏性杂质），因此在药品质量控制中一般只需控制药品中高分子杂质的总量而不必控制不同结构的杂质。因此根据样品分子量差异进行分离的凝胶色谱法具有明显的优势。

在深入研究药物与葡聚糖凝胶相互作用及流动相对该作用影响的基础上，人们开发了葡聚糖凝胶Sephadex G-10为固定相的凝胶色谱模式，可以方便地用于各类β-内酰胺类抗生素中高分子杂质的分离分析。

中华人民共和国药典2000版规定了采用Sephadex G-10色谱柱测定头孢他啶、头孢哌酮、头孢噻肟和头孢曲松四种药物中高分子杂质的含量。但是采用传统的玻璃低压凝胶色谱柱柱效非常低，很难达到药典规定的色谱柱的指标，同时该类色谱柱还由操作不方便、分离时间长、分离度差等不足。针对上述问题，大连依利特公司在药典规定的基础上于2000年开发成功高效Sephadex G-10凝胶色谱柱，能够满足药典规定的四种药物中高分子杂质质量控制的需要。2年来用户使用得到很好的效果。

2．药典规定用Sephades G-10色谱柱的分析方法描述

中国药典2000版采用Sephadex G-10色谱柱分离表1所示的四种头孢化合物中的聚合物，定量方法均为自身对照外标法，药物对照品的分析采用相同的流动相条件（0.01％十二烷基硫酸钠溶液），但是样品的分析用流动相组成和盐的浓度不完全相同。评价色谱柱柱效和拖尾因子均采用蓝色葡聚糖2000。

以下分别在上述条件下评价了依利特Sephadex G-10色谱柱的性能指标及其在药物分析中的应用谱图。

3．Sephadex G-10色谱柱的性能评价

表2 在药典规定条件下蓝色葡聚糖2000评价色谱柱性能

Sephadex G-10凝胶色谱柱能够分离分子量小于700的肽、蛋白及葡聚糖等高分子化合物。药典规定评价色谱柱用分子量为2000的蓝色葡聚糖，此时，蓝色葡聚糖的洗脱体积即为色谱柱的排阻体积。以下分别为在药典规定条件下蓝色葡聚糖的色谱图及相应的色谱柱参数。

表2的数据表明，在药典规定条件下，用蓝色葡聚糖2000测定的色谱柱的理论塔板数在1092到1342之间，拖尾因子在0.92到1.18之间，洗脱时间的重复性非常好。完全满足药典对色谱柱性能指标的要求。

4．β-内酰胺类抗生素对照品分析

药典规定β-内酰胺类抗生素对照品分析的流动相条件为0.01％的十二烷基硫酸钠溶液，流动相流速为1ml/min，在上述条件下分别分析了头孢他啶、头孢噻肟和头孢哌酮，相应的谱图和色谱峰指标列于表3中。

表3 药品对照品的分析

5．头孢噻肟中高分子杂质的分析

6．头孢哌酮钠的分析

7．头孢他啶的分析