弓形虫单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析试纸条研制

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有机磷农药胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

论文题目：有机磷农药胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制学科专业：生物化学与分子生物学学位申请人：刘莹指导教师：魏新林（副教授）摘要有机磷农药目前仍在世界范围内广泛使用，其检出率高、超标严重、毒性大，对消费者的身体健康造成了极大的危害。

加大有机磷农药的监控力度，开发快速检测技术成为有机磷农药残留检测的研究趋势，是事关国计民生的重大食品安全问题。

本研究基于免疫分析原理，利用胶体金标记技术，研制了一种胶体金免疫层析试纸条，为有机磷农药的现场监控提供了可能，并为农药小分子的胶体金免疫层析试纸条的制作提供了理论依据。

本实验的主要研究内容和结果如下：1 通过重氮化法合成了一种有机磷人工抗原。

先将合成的有机磷半抗原产物通过质谱分析和核磁共振鉴定，确定半抗原合成成功。

偶联后的全抗原经紫外扫描和红外光谱鉴定，确定半抗原与载体蛋白偶联成功。

经浓度测定，有机磷人工抗原产物的蛋白含量为 4.32mg/ml。

通过紫外吸收法测得半抗原和载体蛋白的偶联比为7.61：1。

2 制备了有机磷单克隆抗体胶体金标记探针，确定胶体金标记的最佳pH为8.0，最适蛋白量为24 µg/ml。

通过斑点金免疫渗滤实验和免疫层析实验，鉴定制备的金标抗体探针具有免疫活性。

3 以有机磷人工合成抗原为包被抗原固定于硝酸纤维素膜的检测线位置，以羊抗鼠IgG包被于硝酸纤维素膜的控制线位置，组装了胶体金免疫层析试纸条。

对试纸条的各个组分进行了研究，确定了硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫等膜材料的使用型号，对各种膜的浸泡处理液的配方进行了优化选择，对免疫层析反应的溶液系统进行了筛选，并对包被抗原、羊抗鼠二抗及金标抗体的浓度和喷量进行了调试和确定。

最后对制备的胶体金试纸条进行了灵敏度、特异性、稳定性和重复性等各项质量性能指标测试。

结果表明，该胶体金试纸条可检出杀螟硫磷、甲基对硫磷、对硫磷等9种有机磷农药，最低检出浓度可达0.25 mg/kg，可用于多种有机磷农药的初筛。

实验动物弓形虫免疫胶体金快速检测方法的建立及试纸制备

摘要将样品垫、包被了弓形虫排泄分泌抗原和胶体金结合物的结合垫，包被了弓形虫排泄分泌抗原和抗弓形虫抗体的硝酸
纤维素膜、水垫依次首尾互相衔接粘贴在白色塑料板上，装成免疫胶体金快速检测试纸爷，以此建立检测实验动物弓形吸组并
弓形虫，论有无临床症状．可使约５％携带者无均０因垂直传播出现流产、死胎及胎儿先天性缺陷１，２在１
养殖上，弓形虫病也会造成重大损失。在实验动物中，鼠、鼠、鼠等是弓形虫重小大豚
化。温保存备用。低
２４胶体金一弓形虫排泄分泌抗原结合物的制备．
ＩＡ及ＥＩＡ等方法操作烦琐．ＨＬＳ只停留在实验室阶段。可用于现场快速检测的试剂盒寥寥无几。对基层实验动物中心开展弓形虫病检测带来诸多障碍。
１材
料
Ｓ３０凝胶，ｕ１，血清白蛋白，酸纤维一０ＨＡＣ牛硝素膜，滤膜，器，滤吸水垫，干胶，Ｖ不ＰＣ板等购自上海生化试剂公司；弓形虫阳性、阴性血清，由上海兽医研究所提供。
２方法
本研究拟建立一种方便、敏感的弓形虫快速检测方
先将０１ｇＬＨｕ１０Ｌ煮沸状态下与１Ｌ．／ＡＣ２０ｍ０的柠檬酸三钠１Ｌ结合，续煮沸５ｒｉ酒红．ｍ５继ｎ至ａ色，却。冷而后用０ｌ２Ｏ调整金溶胶ｐ至．ｍｏＬＫＣ３２／Ｈ８９制成金溶胶。加入４ｍｇ弓形虫排泄分泌抗原。．，

一种胶体金免疫层析试纸、制备方法及应用[发明专利]

专利名称：一种胶体金免疫层析试纸、制备方法及应用专利类型：发明专利
发明人：陈海兰,文海燕,江明生,潘艳,严昊,何家康,韦英明申请号：CN202111394440.6
申请日：20211123
公开号：CN114137212A
公开日：
20220304
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于免疫层析检测技术领域，公开了一种胶体金免疫层析试纸、制备方法及应用，所述胶体金免疫层析试纸的制备方法包括：胶体金的制备；胶体金最适标记pH浓度的确定；胶体金最适标记蛋白浓度的确定；胶体金标记抗体制备；胶体金层析免疫试纸条的组装；胶体金免疫层析试纸条的性能考察。

本发明通过改良标记胶体金的制备方法，采用Tris辅助法制备优质的胶体金，制备猪轮状病毒胶体金免疫层析试纸条，适合于临床粪便样品中轮状病毒的快速检测。

本发明基于胶体金的猪轮状病毒胶体金免疫层析快速检测方法，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、简单快捷等特点，可以实现对临床样品的快速检测，适用于轮状病毒性腹泻疾病的快速诊断和流行病学。

申请人：广西大学
地址：530004 广西壮族自治区南宁市大学东路100号
国籍：CN
代理机构：重庆信必达知识产权代理有限公司
代理人：刘会锋
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胶体金试纸条的制备

结合垫(Conjugate pad)：
玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。
结合垫的作用主要为：
- 吸附一定量的金标结合物颗粒； - 吸附并持续不断的将样品转移到NC膜上； - 保持金标结合物颗粒的稳定性； - 保证金标结合物颗粒定量完全释放等。
玻璃纤维膜/聚酯纤维膜
胶体金免疫层析试纸模式双抗体夹心模式疫病抗原检测竞争模式小分子物质检测spa蛋白g模式疫病抗体检测双抗体夹心模式判定检测线质控线阳性显色显色阴性不显色显色竞争模式判定检测线质控线阳性不显色显色阴性显色显色spag蛋白模式判定检测线质控线阳性显色显色阴性不显色显色在兽药残留检测中的应用zhang等用克伦特罗制备的单克隆抗体标记胶体金作为检测探针然后将偶联bsa的克伦特罗作为t线以竞争模式组装成试纸用于样品的克伦特罗残留检测为我国食品安全检测提供了有效的工具
4、5 号管颜色无变化与对照颜色一致，最低蛋白量即为4 号管的蛋白量。
最终结合（McAb）
• 取100ml金溶液，调整pH值至8.2 • 调整滤过和离心的抗体溶液（0.1μg/μl）至
pH8.2 • 当金溶液在快速搅拌时要逐滴加入定量的
抗体（蛋白最小浓度量加10%即蛋白稳定量），大约5分钟加完 • 在金标溶液中加入10ml滤过的10％BSA至终浓度为1%，并轻轻搅拌10分钟。
» 向沸腾的溶液中加入1.5ml的0.1％二合水柠檬酸三钠，Na3C6H5O7.2H2O
» 当获得深红颜色的溶液时停止加热
胶体金的合成
胶体金 1％柠檬酸粒径三钠加入量（nm）（ml）*
16
2.00
24.5 1.50
41
1.00
71.5 0.70

一种检测猫弓形虫感染的胶体金免疫层析试纸及制备方法[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710475252.3(22)申请日 2017.06.21(71)申请人吉林大学地址 130011 吉林省长春市前进大街2699号(72)发明人宫鹏涛　刘维建　杨正涛　张西臣　李建华　杨举　李赫　李棕松　(74)专利代理机构吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100代理人陈宏伟(51)Int.Cl.G01N 33/558(2006.01)(54)发明名称一种检测猫弓形虫感染的胶体金免疫层析试纸及制备方法(57)摘要本发明公开一种检测猫弓形虫感染的胶体金免疫层析试纸，同时提供了其及制备方法，用于猫弓形虫感染的血清检测，制备的猫弓形虫感染胶体金试纸条具有简单、快速、无需特殊仪器设备等特点。

检测结果便于判读，适于临床中快速诊断和大规模流行病学调查中应用。

利用间接胶体金检测方法，其中纯化的重组蛋白SAG3保证了本发明的特异性。

使用金黄色葡萄球菌（SPA）进行标记，SPA容易获得，成本较低。

与传统的间接血凝试验和间接免疫荧光试验相比，检测速度较快，避免接触活虫，保证了检测人员的安全。

权利要求书1页说明书5页序列表1页附图4页CN 107462712 A 2017.12.12C N 107462712A1.一种检测猫弓形虫感染的胶体金免疫层析试纸，包括玻璃纤维、硝酸纤维素膜（NC ）、PVC底板、吸水板；其特征在于：金标垫上的金标抗体为金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA ），硝酸纤维素膜上的检测线（T ）包被弓形虫表面抗原SAG3、质控线（C ）包被兔抗SPA抗体。

2. 权利要求1所述的一种检测猫弓形虫感染的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：通过表达纯化SAG3重组蛋白，利用柠檬酸三钠还原法烧制胶体金溶液，之后利用胶体金溶液对SPA进行标记，制备金标垫，组装试纸条；其中，1）重组蛋白SAG3诱导表达（a ）取3μL原核表达的SAG3菌液，5μL卡那霉素置于5mL的 LB培养基中，转入37℃恒温振荡培养箱中，150r/min，振荡过夜；（b ）取振荡过夜的菌液转移至300mL的LB培养基中，同时加入300μL的卡那霉素，封口后转入37℃恒温震荡培养箱中进行恒温振荡培养，1.5h ~2h；（c ）加入300μL的IPTG进行诱导，4~5h后4℃离心机7000r ×7min，收集菌液；（d ）取PBS对步骤c ）收集的菌液进行重悬，超声破碎，离心弃上清；（e ）用2mol/L尿素对沉淀进行充分吹打溶解后离心，弃上清；反复进行5次；（f ）用8mol/L尿素对洗后的沉淀进行溶解；（g ）离心后，取上清即得；2）SAG3重组蛋白的纯化（a ）将透析袋放入去离子水浸泡5min激活；（b ）取重组蛋白放入激活的透析袋中密封；（c ）将透析袋加入6mol/L尿素溶液中，4℃条件下进行搅拌透析5h；（d）按第（3）步分别通过4mol/L、2mol/L、1mol/L、0.5mol/L尿素进行梯度透析，用PBS 将尿素置换；（e ）将步骤4）产物4℃、12000 r/min条件下离心5min，取上清-20℃保存；（f ）SDS-PAGE电泳；3）胶体金试纸条的制备取21mm的NC膜贴于PVC底板上；金标垫压在NC膜上，样品垫压在金标垫上，吸水纸压在NC膜上粘在底板上；取试纸条进行抗体的包被划线，检测线（T ）划纯化的SAG3蛋白、质控线（C ）划兔抗SPA抗体。

弓形虫抗体检测方法及金标检测卡和制备方法[发明专利]

(10)申请公布号 CN 101699289 A(43)申请公布日 2010.04.28C N 101699289 A*CN101699289A*(21)申请号 200910022140.8(22)申请日 2009.04.03G01N 33/558(2006.01)G01N 33/552(2006.01)(71)申请人李克生地址730050 甘肃省兰州市小西湖东街14号174室(72)发明人李克生杜惠芬(54)发明名称弓形虫抗体检测方法及金标检测卡和制备方法(57)摘要本发明涉及一种弓形虫抗体检测方法及快速检卡和制备方法，其检测方法包括(1)将胶体金标记的弓形虫抗原载于载体上，并在与胶体金载体相连的检测载体上包被弓形虫分泌抗原形成的检测线和由抗弓形虫抗体形成的控制线；(2)取人血清滴于胶体金标记的载体上，如血清中有弓形虫抗体则在检测载体上形成检测线，检测载体上检测线、控制线双线为阳性，否则为阴性。

该检测卡包括加样端吸水层、检测层和吸水端吸水层，在检测层和加样端吸水层之间设有金标弓形虫抗原层；在检测层上包被有由弓形虫分泌抗原形成的检测线和由抗弓形虫抗体形成的控制线。

本发明的方法为“一步法”快速检测方法灵敏度高、特异性强；且快速、简便，无需专门设施。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页说明书 3 页附图 1 页权利要求书CN 101699289 A1/1页1.一种弓形虫抗体检测方法，包括下述步骤：(1)将胶体金标记的弓形虫抗原载于玻璃纤维或无纺布载体上，并在与胶体金载体相连的硝酸纤维膜(NC)载体上包被弓形虫分泌抗原形成的检测线和由抗弓形虫抗体形成的控制线；(2)取人血清滴于胶体金标记的载体上，如血清中有弓形虫抗体则在检测载体上形成检测线，检测载体上检测线、控制线双线为阳性，否则为阴性。

2.一种弓形虫抗体金标快速检测卡(1)，其特征在于该检测卡由检测条和塑料卡盒组成，检测条安装在塑料卡内。

基于重组致密颗粒蛋白11的弓形虫胶体金免疫层析检测方法的建立

动物医学进展,2021 ,42(3)=12-16Progress in Veterinary Medicine基于重组致密颗粒蛋白11的弓形虫胶体金免疫层析检测方法的建立张艳玲1，孟庆玲1*，乔军1，任宏琪1，赵春光1,宁程程1,季春晖1,才学鹏2(.石河子大学动物科技学院，新疆石河子832003；.中国农业科学院兰州兽医研究所，甘肃兰州73004 6)摘要：将弓形虫致密颗粒蛋白11(GRA11)部分基因片段插入pET32a ( + )载体，构建原核表达载体pET-32a ( + )GRA11,并转化至大肠埃希氏菌BL21(DE3)中进行诱导表达，用SDS-PAGE 和 Western blot.对诱导表达的重组蛋白GRA11 (1-GRA11)进行反应原性鉴定。

以1-GRA11为检测线，兔抗犬IgG 为质控线，制备胶体金免疫层析试纸条，与商品化的弓形虫抗体检测试剂盒对119份临床血清样品进行检测对比试验。

成功构建了 p ET-32a ( + )-GRA11原核表达载体，SDS-PAGE 检测到的蛋白大小约36 ku . Westernblot.结果表明，弓形虫rGRA11蛋白可被弓形虫阳性血清所识别，具有较强的反应原性。

与商品化弓形虫抗体间接血凝试剂盒相比，建立的免疫胶体金层析法敏感性为81.25 %，特异性为100%，两种方法的总符合率为97.4%，为弓形虫病临床诊断方法研究奠定基础。

关键词：弓形虫；原核表达；胶体金免疫层析试纸条中图分类号:S852.71弓形虫病是由专性胞内寄生性原虫弓形虫感染机体所引起的人兽共患性疾病，对于免疫能力正常的成年人，弓形虫侵染机体一般无明显的临床症状；当机体免疫功能低下或有缺陷时，弓形虫可侵害其各个组织器官引起严重的临床症状，如弓形虫脑炎、眼病和心肌心包炎等，严重时可危及生命。

妊娠期妇女感染弓形虫后可导致流产、胎儿畸形、死亡据统计，全世界健康人群弓形虫的感染率在7.5%~80%。

一种甲氨基阿维菌素胶体金免疫快速检测试纸条的研制

分析与检测Oct 2020 CHINA FOOD SAFETY 43甲氨基阿维菌素是从发酵产品阿维菌素B 1开始合成的一种新型高效半合成抗生素杀虫剂，溶于丙酮和甲醇、微溶于水、不溶于己烷。

因其具有超高效、低毒、低残留、无公害等生物农药的特点，故被广泛应用于蔬菜、果树、棉花等农作物中以防治多种害虫。

但是，该药物具有神经毒性和发育毒性，脂溶性强，在动物体内分布广泛且代谢周期长，容易造成药物残留，进而通过食物链危害人体健康。

因此，对食品中的甲氨基阿维菌素残留量进行检测十分必要。

目前，用于检测甲氨基阿维菌素残留量的方法大多为仪器方法，但仪器采购成本高、检测时间长、操作复杂，不符合基层实验室高效、便捷的检测要求。

因此，本文制备出一种甲氨基阿维菌素的单克隆抗体，并将其应用于胶体金免疫层析试纸条，使其能够满足基层实验室的检测需求，有利于丰富监管手段和提高监督水平。

1 材料与方法1.1 材料与仪器甲氨基阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素等标准品（纯度≥95%），购自北京标准物质研究中心；氯金酸（HAuCl 4•3H 2O）、牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA），购自美国Sigma 公司；柠檬酸三钠、碳酸钾，购自北京百欣试剂公司；样本提取剂、样本复溶液、胶体金分析仪，由北京勤邦生物技术有限公司提供；涡旋仪、均质器，购自湖南湘立科学仪器有限公司。

1.2 试验方法1.2.1 甲氨基阿维菌素半抗原的制备取0.886g 甲氨基阿维菌素，加乙腈70mL 溶解，加0.91g 氨基丙酸的水溶液2mL，充分搅拌后加入37%甲醛0.32mL 与三氯乙酸0.77g，加热，于60℃反应12h，反应停止后加水80mL 与乙酸乙酯100mL，萃取分离，减压蒸干，上硅胶柱，石油醚/乙酸乙酯体积比5：1洗脱分离，得到丙酸甲氨基阿维菌素半抗原0.76g，收率为77%。

1.2.2 免疫原的制备——甲氨基阿维菌素半抗原与牛血清白蛋白（BSA）偶联物合成一种甲氨基阿维菌素胶体金免疫快速检测试纸条的研制□ 吴广贾芳芳冯才伟崔娜崔海峰北京勤邦生物技术有限公司北京市食品安全免疫快速检测工程技术研究中心□ 杨筑稀贵州民族大学社会学与公共管理学院本文通过制备甲氨基阿维菌素半抗原，研制出一种能够检测蔬菜、水果中甲氨基阿维菌素的胶体金免疫层析试纸条，检测限为5μg/kg，检测时间为15min，假阳性率和假阴性率均为零，符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求。

弓形虫胶体金免疫层析试纸条的研制

弓形虫胶体金免疫层析试纸条的研制王钊哲;江嘉欣;李嘉静;朱传刚;许瑞;洪炀;林矫矫;陆珂;李浩;陈兆国;唐亚兰;吴思敏【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2017(025)005【摘要】为了研制一种可用于检测弓形虫的快速诊断胶体金免疫层析试纸条,本研究对弓形虫表面抗原(surface antigen,SAG)SAG1和SAG2的基因片段进行重构合成,与PET-28a(+)载体连接后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中表达,利用His亲和层析柱对融合蛋白进行纯化,获得SAG重组表位抗原,Western blot对重组蛋白免疫原性进行分析.用rSAG重组蛋白及rSPG分别划线,作为检测线和质控线,制作胶体金免疫层析试纸条,利用小鼠弓形虫阳性血清及小鼠阴性血清检验胶体金免疫层析试纸条检查效果.本研究成功表达纯化了SAG抗原表位的重组蛋白,且该重组蛋白具有较好的免疫原性.以此多抗原表位的重组蛋白作为检查抗原研制了胶体金免疫层析试纸条,能够快速检测弓形虫的阳性血清,为基层弓形虫病的快速诊断奠定了基础.%In order to develop a colloidal gold immunochromatographic strip assay for toxoplasmosis diagnosis, the surface antigen genes of SAG1 and SAG2 of Toxoplasma gondiiwere synthesized and subcloned into plasmid pET-28a(+) to be expressed in Escherichia coliBL21(DE3). To obtain high concentrations of recombinant SAGs, the target proteins were purified using His-fusion protein purification kit and analyzed in Western blotting. Recombinant SAG1 and SAG2 were blotted on the nitrocellulose membrane and murine T. gondiipositive and negative serum samples were then added as primary antibodies to test the sensitivity of colloidal goldimmune chromatography strip. Development of the method laid a foundation for rapid diagnosis of toxoplasmosis at the grass-roots levels.【总页数】5页(P68-72)【作者】王钊哲;江嘉欣;李嘉静;朱传刚;许瑞;洪炀;林矫矫;陆珂;李浩;陈兆国;唐亚兰;吴思敏【作者单位】中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室,上海200241;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州 225009;中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室,上海200241【正文语种】中文【中图分类】S852.723【相关文献】1.弓形虫单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析试纸条研制 [J], 马亮;任鹏飞;马艳玲;陈云翔;张艳凤2.检测4种有机磷农药胶体金免疫层析试纸条的研制 [J], 朱亮亮; 王琳琛; 王兆芹; 崔海峰; 张坤; 冯才伟; 万宇平3.马铃薯S病毒胶体金免疫层析试纸条的研制 [J], 张微; 李志新; 付春江; 刘卫平4.牛β-乳球蛋白胶体金免疫层析试纸条的研制及检测应用 [J], 薛海燕;吴剑;张颖;宋宏新;贺宝元5.非洲猪瘟病毒胶体金免疫层析试纸条的研制 [J], 邬旭龙;刘波;王印;张鹏飞;江地科;肖璐因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

弓形虫抗体免疫印迹试剂盒的研制

弓形虫抗体免疫印迹试剂盒的研制蒋守富;张述义;曹琳;潘彩娥;魏梅雄【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》【年(卷),期】2005(23)6【摘要】目的研制敏感、特异的检测弓形虫IgM和IgG抗体免疫印迹试剂盒。

方法收集人工感染RH株弓形虫速殖子昆明系小鼠的腹腔液,提取弓形虫胞质蛋白,采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离弓形虫可溶性抗原,并经电泳转印至硝酸纤维膜,以无毒灵敏的四甲基联苯胺(TMB)为底物分别检测30份弓形虫IgM和28份IgG阳性血清,40份健康人血清。

通过比较抗原制备方法和使用剂量、封闭剂、洗涤和稀释剂、工作浓度、作用时间以及反应带出现率,选择最佳实验条件,以敏感性、特异性、Youden指数以及稳定性作为试剂盒评价标准。

结果用免疫印迹试剂盒检测30份弓形虫IgM和28份IgG阳性血清,敏感性分别为90.0%(27/30)和85.7%(24/28),40份健康对照者血清的弓形虫IgM和IgG抗体均为阴性,特异性均为100%,Youden指数分别为0.9和0.86。

试剂盒于4℃保存约6个月的检测结果一致。

结论该免疫印迹试剂盒敏感性和特异性均较高,且操作简便、快速。

【总页数】4页(P449-452)【关键词】弓肜虫;免疫印迹;试剂盒;敏感性;特异性【作者】蒋守富;张述义;曹琳;潘彩娥;魏梅雄【作者单位】上海市疾病预防控制中心上海市弓形虫病检测中心【正文语种】中文【中图分类】R382.5【相关文献】1.弓形虫感染者血清IgM和IgG抗体免疫印迹谱分析 [J], 蒋守富;张述义;曹琳;潘彩娥;魏梅雄2.ELISA弓形虫IgG抗体试剂盒的研制 [J], 陈丽萍;陈慰;桂馨3.SPA-ELISA检测弓形虫抗体诊断试剂盒的研制 [J], 刘佩梅;杨秀珍;吴增强4.弓形虫(TOXO)IgG抗体ELISA诊断试剂盒的研制 [J], 邓文;姜敏5.实验小鼠豚鼠弓形虫抗体ELISA试剂盒的研制及应用 [J], 范文平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

猪弓形虫重组MIC3蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用

猪弓形虫重组MIC3蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用白昀;王海燕;王占伟;纪燕;吴叙苏;刘冬霞;邵国青【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2013(044)010【摘要】为获得针对猪弓形虫MIC3蛋白的单克隆抗体,为进一步研制免疫金标试纸条提供材料,作者以纯化的重组MIC3蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备单克隆抗体(McAb).经ELISA筛选阳性克隆和亚克隆建株,体内诱生腹水法制备McAb,测定其亚类、效价,进行Western blot分析,并利用胶体金颗粒标记的McAb制备免疫金标试纸条.成功制备了2株稳定分泌抗MIC3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株B7和D3,2株McAb的免疫球蛋白亚类均为IgG2a,其ELISA腹水效价分别为1∶64万和1∶192万,Western blot结果表明,2株McAbs腹水均能分别与纯化的重组MIC3蛋白和猪弓形虫全虫蛋白中大小为56和38 ku左右的蛋白发生特异性反应;用纯化后McAb标记的胶体金颗粒制备的免疫金标试纸条可以检测到最低浓度为4×104 CFU·mL-1的弓形虫速殖子.本研究为猪弓形虫病的现场诊断提供了有效的方法,显示出很好的临床应用前景.【总页数】7页(P1622-1628)【作者】白昀;王海燕;王占伟;纪燕;吴叙苏;刘冬霞;邵国青【作者单位】江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;南京天邦生物科技有限公司,南京211102;江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;南京天邦生物科技有限公司,南京211102;南京农业大学,南京210095;江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014【正文语种】中文【中图分类】S852.7【相关文献】1.猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白单克隆抗体的制备及初步应用 [J], 王琳琳;陈长春;徐婷婷;戴丽红2.猪戊型肝炎病毒重组蛋白ORF2-V1单克隆抗体的制备及抗原表位差异分析 [J], 李丹丹;张小莺3.抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和初步应用 [J], 赵宇;陈文学;孟继鸿;季晓辉4.人弓形虫病重组蛋白MIC3诊断抗原纯化方法的比较 [J], 江涛;刘锦宏;赵俊龙5.弓形虫卵囊壁蛋白OWP1的重组表达和特异性单克隆抗体制备 [J], 白宇;李培德;胡景炎;何杰;陈欢利;吴春琴;金俊杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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ｃ，ｉｎＣｉ，ｉｎＰｏ．３０１３ＡｎｍａｓａｄｙａｄＶｔｒｎｒｔｔｏｎｑｔｅｅｇｎｓｉｔＪｌｔ．ｈＪｌｔＪｌｒｖ１２０；．ｉｌｉｙｉＨｕｂｎｒｎｅｅｉａｙＳａｉｎＨｏｇｉｒｔｎｍａＤｉｔｃ．ｉｎＣｉＳｅＦｒｉｙ
【摘要】弓形虫病（ｏｏｌｍｓ）由刚地弓形虫（ｏｏｌｍｏｄ，Ｏ引起的一种重要人兽共患寄生Ｔｘｐｓｏｉ是ａｓＴｘｐｓａｇｎｉＴＸ）ａｉ虫病，虫是一种可寄生于有核细胞的原虫。当前对弓形虫病的诊断和治疗虽已有一些方法，均不够理该但想。文就该病的免疫学诊断方法的研究进展加以概述，本以研究Ｓ２为检测抗原，制备弓形虫ＳＧ２蛋ＡＧ以Ａ白的单克隆抗体和免疫胶体金试纸条为核心，立一种快速、异、捷的检测方法，建特便为我国弓形虫病的诊断与防治、弓形虫与宿主关系、以及弓形虫的分子生物学等研究奠定良好基础。
ＧｏｄＩｌｍｍｕｏｈｏｔｇａｈｓｙ（Ａ）ｅｔａｅｎｃｒｍａｏｒｐｙＡｓａＩＣＴｓＰｐｒ
ＭＡＬｉｎｇ。ＲＥＮＰｅ－ｅＭＡＹａｌＣＨＥＮＹｕｘａＺＨＡＮＧＹａ —ｅａ，ｎｇｆｉ，ｎ—ｉ，ｎｇｎ— ｉｎｇ，ｎｆｎｇ
Ｊｌｒｖ１２０）ｉｎＰｏ．３０１ｉ
［ｓａｔＴｘｐａｍｏｉｉａｏｔｔａａｉｃｚｏｏｅａｓｄｙＴｘｐａｍａｏｄｉＯｗｈｈｉａｉｄｏｏＡｂｔｃ］ｏｏｌｒｓｓｉｒｎｒｓｉｏｎｓｓｕｅｏｏｌｓｎｉＴＸ，ｉｋｎｐ — ｓｓｎｍｐａｐｔｃｂｇ，ｃｓｆｒ
ＤｉｇｏｉａｄＣｏｔｌｆｏｏｌｓｓｓｉｔｒｃｉｎｏｔｘｐａｍａａｄｉｏｔｄＭｏｅｕａｏｏｙｏＯＸ．ａｎｓｎｒＴｘｐａｍｏｉ，ｎｅａｔｆｏｏｌｓｓｈｓｌｃｌｒｓｎｏｏｏｎｔｎａＢｉｌｇｎＴ
ｔｚｏａａｉｃｏａｏｌｓ．ｏｇｅｅａｅｎｓｍｅｍｅｈｄｆａｎｓｓａｄＴｅｔｎｆｏｏｌｓｓｓｆｒｈｏｏｎｐｒｓｉｎｋｒｐａｔＴｈｕｈｔｒｓｅｏｔｏｓＤｉｇｏｉｎｒａｍｅｔＴｘｐａｍｏｉｏｅｔｙｈｈｂｏｏｔ
ｎｃｒｍａｇａｈｓｙ（Ａ）ｅｔａｅ，ｔｅｕｐｓｆｓｂｉｉｇａａｉ，ｐｃｃａｄｓｌｔｓｎｔｏｒｏｈｏｔｒｙｓａＩｏｐａＣｔｓｐｐｒｗｉｔｒｏｅｔｌｈｐｄｓｅｉｍｐｅｅｔｇｈｈｐｏｅａｓｎｒｉｆｎｉｉｍｅｈｄｏｆ
（．ｎｍａＱａｎｉｅｔｉｉ．ｉｎｉ，ｉｎｒｖ１２１；．ｈｇｈｎｎｄｅｅｉｒｕｍｐｙｉｎｒｎ１ｉｌｕｒｔａｏＪｎＪｉｔＪｉｏ．３０３２ＣａｃｕＡａｎＳｔｎｌｌＣｙｌＰｎＷａａｔｒａｙｄｇｏａｌａ — ＶｎｒｃｎＪｉｂ
ｍａｉｇｓｕｙｎｎＳｋｎｔｄｉｇｏＡＧ２ａｅｎｄａｔｅ，ｏｃｄｏｅｐｅａａｉｎｏＯＸ－ｏｏｌｎｌｎｉｏｉｓｎｏｄｉｓｄｆｅｉｎｆｒｅｎｔｒｐｒｔｆｉｎｇｈｏＴＭｎｃｏａｔｄｅｄｇｌａｂａｍｍｕ－
ｍｏｎ，ｅｅｍｅｏｓｉｏｆｃｉｅＴｉａｔｌｅｉｗｅｅｐｏｒｓｆｉｍｅｔｔｓｔｄｓｎｔｅｔ．ｈｈｅｖｈｓｒｉｅｒｖｅｄｔｒｇｅｓｏｃｈｍｍｕｏｉａｔｏｓｏｏｏｌｓｓｓｎｇｃｌｍｅｈｄｎＴｘｐａｍｏｉ，
・
专综・论述固
２年９总２３：第期第０１０嚣ｌ０７期第卷
弓形虫单克隆抗体的制备
及胶体金免疫层析试纸条研制
马亮任鹏飞马艳玲陈云翔张艳凤，，，，（．林市动物检疫站，林吉林市１吉吉市１２１；，春万达兽药公司吉林市分公司，林吉林３０３２长吉１２０；．林市丰满区红旗街道畜牧兽医站，林吉林市１２０）３０１３吉吉３０１
【关键词】弓形虫；单克隆抗体；胶体金；试纸条
【中图分类号１８２７Ｓ５．９２
【献标识码Ｉ文Ａ
【文章编号］６２— ２７（０００１７０８２１）９— ０１００４— ３
ＰｅａａｉｎＭｅｈｄＯｆ０ＸｏｏｌｎｌｔｏｉｓｄｒｐｒｔｔｏｏＴＭｎｃｏａｉｄｅ