细胞工程第四章细胞培养(ppt)

1. 水：新鲜配置的三蒸水或超纯水
2.平衡盐溶液(balanced salt solution，BSS)又称生理盐
水或盐溶液，是细胞培养中常用的基本液体。它主要由 无机盐和葡萄糖配制而成，起着维持渗透压、缓冲和调 节酸碱度等重要作用。 ➢ 常用的缓冲液：生理盐水、PBS、PBS(注意有无钙镁离 子)、 Hank’s液（含有钙镁离子、葡萄糖、酚红） ➢ 配液时注意：（1）用水；配制先后顺序；称量，要看 清药品的规格、纯度、结晶水的数量等。（2）物质的 纯度，常用的纯度有优级纯(特级纯)，分析纯（AR）和 化学纯（CD）三种。（3）物质的可溶性，避免沉淀析 出。（4）物质的稳定性，如葡萄糖只能在10磅下维持 15～20分钟。（5）贮存液 通常先配制成10倍或100倍 的一系列母液，用前临时混合和稀释，过滤除菌备用。
(1) 主要表现 失去原有组织结构和细胞形态 可能出现脱分化或去分化 细胞趋向单一化；
（2）与体内主要不同点
相对孤立、相对单一 缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节 和细胞相互间的影响
(3) 提示
要正确认识体外培养细胞 是一种特定条件下生长的细胞群体。
4.2 细 胞 培 养 液
4.2.1 细 胞 的 常 用 液 体
3. 组织培养细胞一代生存期
细胞传一代后，一般要经过以下三个阶段： ➢ 潜伏期（Latent Phase）; ➢ 指数生长期（Logarithmic growth Phase）; ➢ 停止期/平台期（Stagnate Phase）.
4.1.5 体内外细胞的差异和分化
4.1.5 体内外细胞的差异和分化
来源：自血，脾或骨髓，尤以血中白细胞癌肿细胞也可能 特点：在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团 优点：生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)，
易于收获，可获得稳定状态 缺点：观察不方便，很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞)
4.1.2 培养细胞的生长特点
1.贴附 贴附并伸展是贴壁细胞体外培养时的 基本生长特点。
为新鲜组织自体内取出并在体外
原代培养期
细
培养生长至第一次传代的时期。
胞 系 的 传代期 生 长
原代培养的细胞生长一定时间之后， 如贴附型细胞即融合成片而逐渐铺 满底物的表面，此时，便应将原代 细胞分开接种至2个或更多的新的培 养器皿中，即传代，此即成细胞系。
过
程
衰退期
一般有限细胞系在此期的细胞开始 时虽仍然存活，但增殖已很缓慢并 逐渐完全停止，进而细胞发生衰退
乳腺癌细胞
成纤维细胞型：
胞体呈梭型或不规则三角 形，中央有卵圆形核，胞质突 起，生长时呈放射状。除真正 的成纤维细胞外，凡由中胚层 间充质起源的组织，如心肌、 平滑肌、成骨细胞、血管内皮 等常呈本型状态。另外，凡培 养中细胞的形态与成纤维类似 时皆可称之为成纤维细胞。
游走细胞型：
呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起， 呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞 不稳定，有时难以和其他细胞相区别。单核细胞、 巨噬细胞等。
3.密度抑制
细胞接触汇合后，虽发生接触抑制，但只要营养充分，细 胞仍然能够进行增殖分裂，数量仍然增多。但当细胞密度进一 步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营 养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞分裂停 止。
4.1.3 培养细胞的生长和增殖过程
细胞系的生长过程 分为：原代培养期、传代期和衰退期。
3
0.25%
➢胶原酶
4. pH调节液
(1)碳酸氢钠液 可根据需要与使用方便配制10%以下的各种浓度。 先用双蒸水溶解后，需经过滤除菌，分装小瓶中。亦可使用高 压蒸气灭菌，密封，4℃冰箱保存。市售有5%～10%浓度的安瓿 封装品，使用也很方便。在调节pH过程中或超过要求值时，可 用高压灭菌的10%醋酸溶液或以CO2调节之。 (2)Hepes缓冲液 是一种可以保持细胞培养过程中pH值较长时间 稳定的氢离子缓冲剂。通常使用浓度为10～15mmol/L。配制时， 称取所需的Hepes量，用培养液溶解，用1mmol/LNaOH调节pH 至7.0，过滤除菌分装小瓶中，4℃冰箱保存。
2. 悬浮型：见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌 细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈 悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。
上皮细胞型：
细胞呈扁平不规则多角 形，中央有圆形核，细胞彼 此紧密相连成单层膜。生长 时呈膜状移动，处于膜边缘 的细胞总与膜相连，很少单 独行动。起源于内、外胚层 的细胞如皮肤表皮及其衍生 物、消化管上皮、肝胰、肺 泡上皮等皆成上皮型形态。
体外培养的小鼠子宫上皮细胞 (a) 消化分离得到的细胞团块； (b) 生长至第3天的细胞单层； (c) 生长至第4天的细 胞单层； (d) 生长至第6天的细胞单层
4.1.2 培养细胞的生长特点
2.接触抑制
接触抑制是体外培养中某些贴附型细胞生长特性之一。一 般情况下，正常细胞不停顿的活动或移动，其外周的细胞膜呈 现一些特征性皱褶样活动。但是，当两个细胞由于移动而相互 靠近发生接触时，细胞不再移动，在接触区域的细胞膜皱褶样 活动停止，从而使细胞停止运动。这种由细胞接触而抑制细胞 运动的现象称为接触抑制。
细胞工程第四章细胞培养(ppt)
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（优选）细胞工程第四章细胞 培养
4.1 培养细胞的生物学特征
4.1.1 体外培养细胞的分型
1. 贴附型：大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依 赖性细胞，判断细胞形态时不能按照体内组织学标推 判定，仅大致分成以下四型：
➢上皮细胞型 ➢成纤维细胞型 ➢游走细胞型 ➢百度文库形型细胞
死亡。
每代细胞的生长过程 所谓细胞“一代”一词，仅指从 细胞接种到分离再培养时的一段时间，这已成为培养工 作中的一种习惯说法，它与细胞倍增一代非同一含义。 如某一细胞系为第153代细胞，即指该细胞系已传代153 次。它与细胞世代（Generation）或倍增( Doubling） 不同；在细胞一代中，细胞能倍增3～6次。
多型细胞型： 有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和
稳定的形态，可统归于此类。神经元神经胶质细 胞。
2. 悬浮型
见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。 胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁 殖。
概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长
4.1.2 培养细胞的生长特点
2.接触抑制
由于细胞之间有接触抑制生长特性，一般正常生长细胞并 不互相重叠于其上而生长，而是呈单层生长。但是肿瘤细胞由 于无接触抑制而能够继续移动和增殖，导致细胞向三维空间扩 展，使细胞发生堆积。因此，（接触抑制）可作为区分正常细 胞与癌细胞的标志之一。
4.1.2 培养细胞的生长特点