微免实验4

暨南大学本科实验报告专用纸
课程名称微生物与免疫学实验成绩评定
实验项目名称溶菌酶试验、血脑屏障及豚鼠过敏性休克指导教师
实验项目编号实验四实验项目类型实验地点
一、溶菌酶试验
（一）、实验目的
1、测定人的唾液中是否含有溶菌酶
2、了解溶菌酶的杀菌原理和掌握琼脂平板测定法。

（二）、实验原理
溶菌酶是一种小分子蛋白，分子量约为14Kd,由129个氨基酸组成，属一种碱性蛋白质，它能与细菌牢固结合，并通过水解革兰阳性菌细胞壁中的肽聚糖，而致细菌发生渗透性溶解。

革兰阴性菌的细胞壁粘肽层的外面含有脂多糖和脂蛋白，在一般情况下不受溶菌酶的影响。

（三）、实验材料
1、菌种培养基：含有溶壁微球菌的1%高层琼脂培养基
2、人的唾液和生理盐水
3、无菌打孔器，无菌干皿和无菌滴管、恒温箱
（四）、实验步骤
1、打开培养好溶壁微球菌的培养基盖子，在琼脂上打孔，上方两个，下方一个，
孔间距离相等。

2、两个实验操作者将自己的唾液盛于干燥的培养皿中，用滴管吸取适量的唾液
分别加入培养基上方的两个孔中，下方的孔中加入等量的生理盐水作为空白对照，均加满孔为止。

3、盖上盖子，在盖子上做好标记，然后放入恒温箱中保存18小时，观察孔周围
的溶菌环。

（五）、实验结果与分析
从左图可以看到，由于生理盐水中无溶菌酶，故下方加入生
理盐水孔的周围无溶菌环出现。

上方两个孔的周围则都出现了
透明的无菌环，说明人的唾液中是含有溶菌酶，可以使溶壁微
球菌溶解。

且右边的无菌环直径大于左边，由于环的直径与溶
菌酶的浓度成正比，说明右边唾液所含的溶菌酶浓度大于左边
唾液所含的溶菌酶浓度。

暨南大学本科实验报告专用纸(附页)
（六）实验结论
人的唾液中含有溶菌酶，能够使溶壁微球菌溶解，出现透明的无菌环。

二、小鼠血脑屏障实验
（一）实验目的
1、观察血脑屏障的作用，掌握实验方法
（二）实验原理
血脑屏障室友软脑膜、脉络丛的毛细血管和包在壁外的神经胶质细胞形成的胶质膜构成，起着天然的屏障作用，可以阻挡病原微生物及毒性产物、异物颗粒包括染料颗粒等从血流进入脑组织和脑脊液内，从而保护中枢神经系统免受损害。

（三）实验材料
1、仪器：无菌注射器、小鼠拘束器、眼科剪、、镊子、小鼠手术板
2、材料：医用棉签、锥蓝溶液，乙醇溶液
（四）实验步骤
1、将小鼠引入拘束管中，然后放下出口的“门闸”，将尾巴露在外面。

2、用医用棉签蘸取适量乙醇溶液后在小鼠的尾巴上擦拭，使其静脉血管暴露更加明显。

然后一人按住尾巴根部，一人用注射器吸取0.7ml的锥蓝溶液，在小鼠尾巴2/3与1/2之间平行小鼠尾巴注射进小鼠静脉，打完用干的医用棉签按压止血。

3、观察小鼠眼睛，耳朵，嘴巴和四只爪子的颜色变化，发现变蓝之后，用脱颈法处死小鼠，然后放到手术木板上，用镊子和眼科剪配合使用，沿背中线剪开小鼠背部的皮肤，暴露内脏，观察内脏的颜色。

然后再将脊柱从中间剪断，观察脊髓的颜色。

最后将脑部皮肤剪开，将脑壳剪开，观察里面的颜色。

（五）实验结果与分析
实验结果发现小鼠的耳朵，四肢的爪子，嘴巴都变蓝色。

解剖之后，发现小鼠的肠子变成淡蓝色，而脊柱和脑组织的颜色仍为白色，没有变蓝。

这说明中枢神经系统与血管之间存在着血脑屏障，能够使物质有选择性的通过，而染料颗粒是无法通过血脑屏障的，这可以在一定程度地保护中枢神经系统免受损害。

（六）实验结论
染料颗粒不能通过小鼠的血脑屏障进入中枢神经系统，血脑屏障能够在一定程度保护中枢神经系统不受损伤。

暨南大学本科实验报告专用纸(附页)
三、豚鼠过敏性休克实验
（一）实验目的
1、掌握豚鼠过敏性休克的原理
2、观察豚鼠发生过敏性休克的现象
（二）实验原理
这种现象是由超敏反应引起的，当豚鼠被注射异种蛋白时，体内就会产生新的IgE就会结合到肥大细胞和嗜碱性粒细胞上，处于致敏状态，一般可维持一个月左右。

如果在豚鼠处于致敏状态时再次注射大剂量的相同抗原，此时抗原与体内的IgE结合，会导致肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放活性介质，导致小鼠过敏性休克。

（三）实验材料
1、动物：豚鼠一只
2、材料：大容量的注射器，马血清
（四）实验步骤
1、取豚鼠一只，将豚鼠翻过来，腹部朝上，一人抓紧豚鼠后肢，一人按
压豚鼠颈部，起固定作用。

2、然后一人用左手触摸小鼠胸部，找到心跳跳动最强烈的地方，右手拿
吸有大剂量马血清的注射器，插入心跳最强的地方，回抽一下，如果有
血，说明位置正确，此时可以放心地注射。

3、观察豚鼠的反应。

（五）实验现象
豚鼠被注射马血清之后，出现了兴奋不安，抓鼻，呃逆，竖毛的现象，且豚鼠一边倒，一直努力想要站起来但都没有力气站起来，不断地抽搐几
分钟之后死亡。

上面现象说明注射成功，引起了豚鼠的过敏性休克，出现了一系列不正常的反应，肺脏可能高度水肿导致了死亡。

（六）实验结论
处于致敏状态的豚鼠再次注射大剂量相同抗原之后，会发生过敏性休克现象，引起一系列不良反应现象，甚至死亡。