血清甲胎蛋白检测方法及临床应用研究进展_周晓萍

血清甲胎蛋白检测方法及临床应用研究进展周晓萍1综述张玲2审校（1广西中医药大学第一附属医院检验科，南宁市530022；2广西中医药大学瑞康医院肝病科，南宁市530011）【摘要】甲胎蛋白（AFP）属于一种糖蛋白，主要来源于胚胎时期的卵黄囊和肝脏细胞，正常人血清中AFP的含量很少。

多种肿瘤性疾病患者血清AFP水平明显高于正常水平，AFP已经成为诊断原发性肝癌的重要辅助指标。

随着对血清AFP研究的不断深入及检测方法的不断改进成熟，血清AFP在肿瘤性疾病的筛查和临床上观察肿瘤性疾病的发生与发展中具有极大的价值。

本文从AFP的理化性质，检测方法的发展及其在临床上的应用方面作一综述。

【关键词】甲胎蛋白；原发性肝癌；肿瘤；临床意义【中图分类号】Ｒ446．1【文献标识码】A【文章编号】1673-7768（2015）02-0264-03DOI：10．16121/j．cnki．cn45-1347/r．2015．02．50肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是一种最常见肝脏肿瘤类型，在全球癌症相关死因排在第3位，在中国居于第2位；亚洲和非洲地区HCC的发病率最高，而大多数肝细胞癌的形成与肝炎病毒（乙型肝炎病毒或者丙型肝炎病）的感染和慢性肝硬化有关［1－2］。

有关肝癌治疗的预后研究表明，肿瘤大小和血清AFP水平是其独立的预后影响因素［3－4］，因此早发现、早诊断、早治疗是提高HCC患者总体生存时间，改善患者生活质量的最佳途径。

血清甲胎蛋白（Alpha-Fetal Protein，AFP）作为诊断原发性肝癌（primary hepatocellular carcinoma，PHC）的特异性血清标志物，广泛用于PHC的早期筛查、诊断、疾病发展监测、治疗及预后观察［5］。

本文就AFP的理化性质、检测方法的发展及其在临床上的应用综述如下。

1AFP的理化性质甲胎蛋白（Alpha-Fetal Protein，AFP）是一种糖蛋白，分子是单一多肽链，属于白蛋白家族，其主要在胎儿时期的卵黄囊和肝脏细胞中合成，分子量约为6800D。

AFP中蛋白质占96%，碳水化合物占4%。

1964年Tatarinov证实原发性肝癌患者血清中存在大量AFP，在临床症状出现前8个月就可以从血清中检测出，检测血清AFP水平对早期诊断原发性肝癌具有极好的临床价值，AFP已经成为诊断原发性肝癌的重要辅助指标。

在妊娠13周时AFP含量约占血浆蛋白总量的1/3，妊娠30周左右含量最高，随后逐渐下降，出生后两周内接近成人水平（＜30ng/mL）。

当患者血清中出现高浓度的AFP时，机体的免疫功能将出现典型的抑制作用。

其作用机理可能是AFP可抑制T细胞的功能，使T细胞不表达任何免疫活性。

另外，胎儿发育、肝脏再生、肿瘤细胞增殖等生长状态均可被AFP抑制。

AFP还可以与某些抗肿瘤药物（如阿霉素、柔红霉素、顺铂、甲氨蝶呤等）结合，通过胞吞作用转移到肿瘤细胞内，起到抗肿瘤作用。

2AFP的检测方法正常成人血清中AFP水平很低（＜30ng/mL），在肝细胞发生恶变的情况下，血清水平含量可出现明显升高（＞400ng/mL），特别是在PHC患者血清中，AFP水平升高更加明显，因此，异常增高的AFP可作为早期发现和诊断原发性肝癌的重要指标之一，某些肿瘤性疾病患者血清也出现高水平的AFP。

现用于检测血清AFP 的方法有多种，各种方法都有其优缺点，在应用过程中应该根据实际情况取舍。

2．1化学发光免疫分析（CLIA）是采用现代全自动仪器操作控制，单克隆抗体标记发光物质吖啶酯或碱性磷酸酶促化学发光最新的微磁粒子标记反应的技术，是光的高灵敏性、单克隆抗体高特异性结合的自动化、智能化程序的现代免疫定量技术。

目前以电化学发光免疫分析为代表，实现了免疫测定的自动化，具有测定结果稳定、线性范围宽、测定速度快、试剂保存期长等优点，但检测成本高。

王燕华［6］通过比较电化学发光免疫分析和微粒子酶联免疫分析在检测血清AFP水平的性能发现，两种方法的检测结果无统计学差异，都可以满足临床对患者血清AFP检测的要求，但电化学发光免疫分析具有更宽的线性范围，更好的检测重复性和更高的回收率，在出现高浓度的AFP时，用电化学发光免疫分析能获得更准确的结果。

电化学发光免疫分析不足之处是需要昂贵的检测仪器，检测成本高，适合有经济条件的实验室使用［7］。

2．2时间分辨荧光免疫分析法（TＲFIA）TＲFIA的基本原理是以具有独特荧光特性的镧系元素及其螯合物为标记物，用时间分辨荧光免疫分析检测仪测定最后462Internal Medicine of China，Apr．2015，Vol．10，No．2产物中的荧光强度，根据产物荧光强度和相对荧光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分析的目的。

杨凤爱等［8］研究发现，TＲFIA检测血清AFP水平的线性范围精密度均大于放射免疫分析（ＲIA），且TＲFIA法具有灵敏度高、稳定性好且无放射性污染等优点，值得在临床检测中广泛推广，但TＲFIA 同样需要昂贵的检测仪器，检测的成本也高，不适合用于筛查大范围人群血清AFP。

2．3放射免疫分析（ＲIA）具有较高的灵敏度和检测的准确度，可以满足临床检测要求，且检测成本较适中［7］，但该法采用放射性元素标记抗体，试剂中存在放射性物质环境污染的潜在危险性及标记物半衰期短，保存时间短，批间差异大的缺点。

ＲIA检测血清AFP的线性范围一般为5 400ng/mL，但每次检测均要做标准曲线，反应时间长，精密度不及TＲFIA［9］。

2．4酶法检测（ELISA）多采用双抗体夹心法的反应原理检测待测样本中AFP含量，包括定性试验和定量检测，操作简单，具有较高的灵敏度，不需要特殊的仪器，检测费用低，适合自然人群早期肝癌的普查，是发现早期肝癌的重要手段之一。

不足之处是检测过程中影响因素较多，重复性不高，检测范围较窄，定性试验结果的判断受主观人为因素的影响，每次定量检测必须做标准曲线。

临床实践中为了提高检测结果的可靠性和降低检测成本，可以先用ELISA方法大范围筛查血清AFP水平，如果结果为阳性，进而采用电化学发光免疫分析定量检测［10］。

2．5金标快速检测以胶体金作为指示标记，交联-AFP单克隆抗体，与血清中AFP结合，形成双抗体夹心一步法，是当前国际上最简便理想的AFP检测方法。

金标法是一种定性的检测方法，具有简单、方便、快速的特点，不需要使用仪器进行辅助，仅凭肉眼就可以对检测结果进行观察，十分有利于健康体检筛查中应用。

其优点是在检测AFP上具有较高的特异性、准确性、检测成本低、检测时间短、操作人员无需特殊的培训即可完成检测，不足之处是敏感性不高，无法定量检测，临床实践中建议在使用金标法检测发现AFP阳性后，采用电化学发光免疫分析法进行定量分析，以提高检测的准确率，并有效降低假阳性病例的发生［11］。

3AFP的临床应用3．1在原发性肝癌（PHC）的应用AFP水平增加作为PHC的重要指标之一，具有极高的特异性，因此检测AFP水平是十分有价值的临床检查及普及项目，阳性率可达到90%。

血清AFP水平≥400ng/mL持续1个月或≥200ng/mL持续2个月，在没有其他疾病，包括妊娠、生殖系胚胎源性肿瘤、活动性肝病及继发性肝癌等引起AFP增高的情况下，应该考虑PHC。

血清AFP在PHC患者临床症状出现前8个月左右可查出，有约90%的PHC患者AFP≥200ng/mL，70%患者AFP水平明显高于诊断标准（≥400ng/mL），此时许多患者已经处于疾病的中晚期阶段，可探查到孤立性结节。

大部分PHC 患者血清AFP水平呈持续性明显升高，部分患者呈低水平升高。

高浓度的AFP可逃避Fas/FasL通路的免疫监视达到调控肝癌细胞生长的目的。

AFP浓度高低与PHC病情进展有密切的关系，可作为PHC患者治疗效果及病情状态的监测指标。

AFP还可以抑制PHC患者的T淋巴细胞免疫应答，并诱导T淋巴细胞的凋亡。

裴冬萍等［12］通过分析AFP水平与肝病的相关性发现，肝病患者的血清AFP水平明显高于其他疾病患者，而以PHC患者的AFP水平最高，提示在患者出现血清AFP 水平极度增高的情况下应该考虑原发性肝癌的可能性。

黄延平等［13］用电化学发光免疫分析方法比较PHC患者、肝硬化患者及正常对照者的血清AFP水平发现，PHC患者血清AFP水平明显高于肝硬化患者和正常对照者，进一步说明高水平AFP对诊断PHC具有良好的特异性。

部分PHC患者血清AFP水平并不升高，因此需要联合其他肿瘤相关血清标志物检测，以便提高诊断的阳性率［14］。

小扁豆凝集素（LCA）结合型AFP （AFP-L3）属于肝癌细胞所特有，在良性慢性肝脏疾病中，肝细胞不表达AFP-L3，AFP联合AFP-L3检测可明显提高PHC诊断的阳性率［15］，AFP-L3占总AFP的比值越高，提示肿瘤的恶性程度越高，更容易发生肝外转移，因此AFP联合AFP-L3普遍被作为PHC的分子标志物［16］。

3．2在胎儿发育检测中的应用AFP主要是在胎儿发育过程中的卵黄囊和胎儿肝脏合成，在怀孕过程中，胎儿AFP随胎儿小便排泄到羊水，因羊水中浓度较高，AFP以主动扩散的方式从胎盘或胎膜两侧进入母体血液循环中，因此，AFP可以在早孕末的母体血清中被检测到。

妇女血清AFP水平随着孕期的增加而增高，可以通过AFP水平评价胎龄［17］。

AFP在胎儿血液循环中具有较高的浓度，出生后则下降，至生后2 3个月AFP基本被白蛋白替代，血液中较难检出。

胎儿先天性脊柱裂、神经管畸形及唐氏综合征等均可导致孕妇血清AFP 含量发生改变，妊娠期可通过AFP监测进行上述疾病的筛查和诊断。

何素琼［18］通过研究156例孕妇血清AFP 水平发现，异常妊娠（双胎、胎儿宫内窘迫、先兆流产、早产及先天愚型胎儿等）妇女血清AFP水平明显高于同孕期正常妇女，认为明显升高的AFP水平可以提示胎儿的异常，且孕妇年龄越高，发生胎儿发育异常的几率也越高。

龙峰等［19］报道，唐氏综合征孕妇血清中AFP浓562内科2015年4月第10卷第2期度明显低于正常孕妇，而AFP-L3比率明显高于正常孕妇，提示AFP联合AFP-L3比率检测可作为唐氏综合征筛查的有效手段。

3．3其他肿瘤卵巢卵黄囊肿瘤患者术前血清AFP水平与患者总体生存时间无关，但如果患者术后出现高水平血清AFP，其总体生存时间和无疾病进展生存时间明显短于血清AFP水平低的患者，特别是术后血清AFP 水平＞1000ng/mL的患者总体生存时间更短，术后AFP水平可以作为卵巢卵黄囊肿瘤患者的预后指标之一［20］。

胃癌、结肠癌等由内胚层衍生的组织发生的癌，即使未发生肝转移也合成AFP，而非内胚层衍生组织的癌，即使转移到肝也不合成AFP。