高效液相色谱流动相选择
简述高效液相色谱法中流动相的要求
简述高效液相色谱法中流动相的要求高效液相色谱法（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种用于分离和分析化学、生物和制药样品的色谱技术。
在高效液相色谱过程中，流动相的选择和性能对分析的准确性和分离效果有着重要的影响。
下面将详细介绍高效液相色谱法中流动相的要求。
1.基础流动相特性：流动相应具有一定的极性和溶解性能。
常用的流动相包括水和有机溶剂，如甲醇、乙醇和乙腈等。
流动相的选择应考虑到待分离组分的性质和分析目的，要保证样品能够溶解并很好的分离。
常用的流动相配比为水/有机溶剂（如乙腈）的比例，比如常见的70:30、50:50等。
2.pH值调节：根据待分离物和色谱柱的性质，适当调节流动相的pH值可以改变待分离物的电离状态，从而影响它们在色谱柱上的分配行为。
比如，对于具有酸性基团的分析物，可以通过酸或碱的加入来调节流动相的pH值，以影响它们与色谱固定相之间的相互作用。
3.离子强度调节：有些样品中可能存在电解质，其离子强度会对分离产生影响。
在这种情况下，可以通过添加相应的盐来调节流动相的离子强度，以改变分析物与色谱固定相的相互作用。
常用的盐有甲酸铵、硫酸铵、三氟乙酸等。
4.流速控制：流动相的流速也对色谱分离的效果有着重要的影响。
流速过快可能导致分离不充分，流速过慢则会增加分析时间。
流速的选择需根据待分离物的性质、色谱柱的尺寸和色谱仪的性能等因素综合考虑。
5.除气和过滤：流动相中的气泡和杂质会影响液相的流动性和检测信号的稳定性。
因此，在使用前应对流动相进行除气处理，以减小气泡对色谱分离的干扰。
同时，对流动相进行过滤处理，可以去除其中的固体颗粒和微生物等。
通常使用0.45μm的滤膜进行过滤。
6.流动相稳定性：流动相应具有良好的稳定性，以保证分析结果的准确性和重复性。
一般来说，流动相中的溶液成分要充分溶解，不发生相分离和析出现象。
所以，流动相的配制要求严格，要遵循相应的配方和混合方法，并在使用前进行充分的搅拌和均匀。
简述高效液相色谱法中流动相的要求
简述高效液相色谱法中流动相的要求
高效液相色谱法是一种分离和分析化学样品的优秀技术。
在高效液相
色谱法中，流动相的选择是非常重要的，因为它不仅影响色谱分离的效率，也决定了检测灵敏度和分离度。
在高效液相色谱法中，流动相的要求主要包括以下几个方面：
1.溶解度：流动相应当是对分离物有较好的溶解度。
如果流动相的溶
解度不够好，则可能会导致某些物质无法被很好地分离出来。
此外，流动
相的溶解度过高则可能导致某些物质在固定相上直接沉淀或附着。
2.稳定性：流动相应当在一定时间内保持稳定，以便对样本进行分离
和分析。
如果流动相的稳定性不够好，则可能会出现峰形变、噪声等问题。
3.精度：流动相应当具备一定的精度，以便保证样品分离和检测结果
的准确性和可重复性。
如果流动相的精度不够好，则可能导致结果不一致
或无法进行复现性研究。
4.兼容性：流动相应当与固定相兼容，以便保证正确的分离。
如果流
动相与固定相不兼容，则可能导致某些固定相材料受损，影响分离质量。
5.选择性：流动相应当具备一定的选择性，以便对不同化学物质进行
分离。
选择不同的流动相可以实现对物质的不同选择性和分离效果。
液相色谱流动相的选择依据及使用注意事项
液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种常用的分离和分析方法，它使用液体作为流动相，在不同组分之间进行分配和分离。
在液相色谱分析中，流动相是至关重要的，它直接影响分离效果、分析速度和结果准确度。
合理选择液相色谱流动相并注意使用时的一些问题是非常重要的。
一、液相色谱流动相的选择依据1. 样品的性质液相色谱中流动相的选择应考虑样品的性质，包括溶解性、稳定性、挥发性等。
对于极性样品，常使用极性溶剂作为流动相；对于不容易溶解的非极性样品，可以选择非极性溶剂作为流动相。
2. 柱子的选择不同的柱子需要选择不同的流动相，以保证分离效果。
对于反相色谱柱，一般使用的是乙腈或甲醇和水的混合物作为流动相；对于正相色谱柱，则需要选用不同的极性溶剂作为流动相。
3. 分离效果流动相的选择应考虑到所需的分离效果。
对于需要高分离效果的分析，流动相的组成和流速需要进行精细调控；对于一些不需要高分离效果的分析，可以适当简化流动相的组成，提高分析效率。
4. 色谱柱的保护对于某些对色谱柱有损害的物质，可以考虑在流动相中添加一些保护剂，以延长柱子的使用寿命。
二、使用注意事项1. 流动相的配制在使用液相色谱分析时，需要注意流动相的配制。
流动相的配制应准确、稳定，避免在实验中因流动相的质量问题导致结果失真。
2. 流速的控制流速的控制对于分析结果的准确性和重现性有着重要影响。
在选择流速时，需要根据分离效果的要求以及柱子的性能来进行合理的设定。
3. 流动相的贮存流动相在储存和使用过程中需要注意避免受到污染和氧化。
定期更换和清洗流动相的储存容器，保持流动相的纯净度和稳定性。
4. 流动相的回收在实验结束后，应注意对流动相进行回收和处理，避免对环境造成污染。
总结回顾：液相色谱分析中流动相的选择和使用是至关重要的。
合理选择流动相，可以提高分析的准确性和重现性；注意使用时的一些问题，可以延长柱子的使用寿命并保护环境。
需要根据样品的性质、柱子的选择以及分离效果来综合考虑流动相的配制和使用。
高效液相色谱流动相
高效液相色谱流动相高效液相色谱的流动相(Mobile Phase)液相色谱流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。
与气相色谱相比较，液相色谱流动相不仅可选择范围比较大，而且它是影响分离的一个非常重要的可调节因素。
在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的主要工作。
一、流动相溶剂的选择高效液相色谱中所选用的流动相溶剂必须能保证该色谱系统的分离过程可重复进行:溶剂的纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求;溶剂应当不干扰检测器的工作;在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。
从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。
对液相色谱溶剂的要求: 1)溶剂要有一定的化学稳定性, 不与固定相和样品组分起反应。
2)溶剂应与检测器匹配，不影响检测器正常工作。
3)溶剂对样品要有足够的溶解能力，以提高检测灵敏度。
4) 溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。
5) 溶剂的沸点低，有利于制备色谱的样品回收。
液相色谱流动相溶剂的选择步骤选择具有合适物理性质的溶剂，如沸点、粘度、紫外截止波长等选择合适洗脱强度的溶剂:简单样品，2 ? k'? 5;复杂样品，0.5 ? k'? 20 改变溶剂的选择性，使被分离组分具有较高的α值二、表征溶剂特性的重要参数 1)溶剂沸点、分子量、相对密度、介电常数、偶极距、折射指数、紫外吸收截止波长、与液相色谱分离密切相关的最重要的溶剂特性参数是溶剂强度参数?? ，溶解度参数?? ，极性参数P'和粘度η。
2) 溶剂洗脱强度溶剂洗脱强度指流动相中溶剂的洗脱能力。
在吸附色谱中, "溶剂洗脱强度"与溶剂极性成正比;而在反相色谱中，溶剂极性越大, 洗脱能力越小。
在液相色谱常用混合溶剂作流动相。
混合溶剂的P'具有加和性: P'ab= ??aP'a，?? bP'b , ??为某一溶剂的体积分数。
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生命科学、化学、医药、环境等多个领域。
其中，流动相的选择对于色谱分离性能和分析结果的准确性有着重要的影响。
一、流动相的组成流动相是指用于在高效液相色谱仪中运载样品溶液，推动样品通过固定相柱的溶剂体系。
一般情况下，流动相由溶剂和缓冲剂组成。
溶剂用于将样品带入色谱柱，而缓冲剂则用于调整流动相的pH值。
在选择流动相的溶剂时，主要要考虑以下因素：1.溶剂极性：色谱柱的固定相特性和待分析的样品特性决定了所需的溶剂极性。
一般来说，溶剂可以选择非极性溶剂、极性溶剂或者两者的混合物，以适应不同的分析要求。
2.溶剂选择：常用的溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、乙腈等有机溶剂，以及水。
甲醇和乙腈是最常用的有机溶剂，由于它们的极性较低，因此溶解性广泛。
水是最常用的极性溶剂，可以提供更好的分离效果。
3.透过性：一些样品需要在其中一种溶剂中分离，因此选择适当的溶剂对于分析结果的准确性至关重要。
在选择缓冲剂时，需要考虑以下因素：1.pH值的调整：一些分析需要在特定的pH值下进行，需选择合适的缓冲剂，以维持所需的pH值。
2.缓冲能力：缓冲剂应具有良好的缓冲能力，以维持流动相的pH值的稳定性，避免pH值对分离效果的干扰。
3.溶解度：缓冲剂应具有较高的溶解度，以便在高浓度下使用，从而提供稳定的pH值。
二、常用的流动相系统1.等相流动相系统（Isocratic elution）：等相流动相系统是指流动相组成在整个分析过程中保持不变。
这种系统适用于分离度较差的样品，具有简单、稳定、易操作的特点。
2. 梯度流动相系统（Gradient elution）：梯度流动相系统是指在分析过程中，通过改变流动相组成来实现样品的分离。
这种系统适用于需要分离程度较高的样品，提供了更好的分离效果。
高效液相色谱的工作原理及操作注意事项
高效液相色谱的工作原理及操作注意事项高效液相色谱的工作原理及操作注意事项一、高效液相色谱的工作原理高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，主要应用于化学、生物、医药等领域。
其工作原理是利用不同物质在固定相和移动相之间的分配平衡，实现对待测组分的高效分离。
以下是高效液相色谱的工作原理：1.流动相：高效液相色谱中的流动相也称为溶剂或载体，是携带待测组分通过色谱柱的介质。
流动相的选择应根据样品的性质、检测器的类型以及分离效果等因素进行选择。
2.固定相：高效液相色谱中的固定相是色谱柱中的填料，通常是涂布在硅胶或氧化铝等载体上的高分子聚合物。
不同物质根据其在固定相和流动相之间的分配系数进行分离。
3.洗脱过程：在高效液相色谱中，待测组分随流动相通过色谱柱，经过固定相和流动相之间的分配平衡实现分离。
分离后的组分会按照其在固定相和流动相之间的分配系数依次流出色谱柱，进入检测器进行检测。
4.检测器：高效液相色谱中使用的检测器根据待测组分的性质和检测要求进行选择，常见的有紫外-可见光检测器、荧光检测器、电导检测器等。
检测器的作用是将组分的浓度转化为可测量的电信号，以便进行记录和分析。
二、高效液相色谱的操作注意事项在使用高效液相色谱进行实验操作时，需要注意以下事项：1.样品准备：在进行高效液相色谱分析前，需要对样品进行必要的处理和制备。
应尽可能避免样品中的杂质和干扰物质对分离和分析的影响。
同时，样品的浓度应适中，以避免色谱柱过载或检测器过载。
2.流动相选择：流动相的选择对高效液相色谱的分离效果和分析结果至关重要。
应根据样品的性质、实验要求以及分离效果等因素选择合适的流动相。
同时，应注意流动相的纯度和稳定性，以保证实验结果的可靠性。
3.色谱柱选择：高效液相色谱中使用的色谱柱是分离和分析的关键元件。
应根据样品的性质、待测组分的类型以及分离要求等因素选择合适的色谱柱。
同时，应注意色谱柱的粒径、孔径和填料性质等参数，以确保达到最佳的分离效果。
高效液相色谱法的原理
高效液相色谱法的原理高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，它是在液相色谱法的基础上发展起来的，具有高效、灵敏、准确、快速等特点。
其原理是利用液相在固定填料上的分配作用，通过样品在流动相中的分配系数不同，实现对混合物中各成分的分离和检测。
HPLC的原理主要包括样品的进样、流动相的选择、填料的选择和柱温控制等几个方面。
首先是样品的进样。
样品通过进样装置进入流动相中，然后被输送到填料柱中进行分离。
在进样过程中，要求样品能够均匀、快速地进入流动相中，以保证分析结果的准确性。
其次是流动相的选择。
流动相是HPLC分离的关键，它可以是有机溶剂、水、缓冲液等。
不同的流动相对于不同的样品具有不同的适用性，因此在选择流动相时需要考虑样品的性质和分离的要求。
填料的选择也是HPLC分离的重要因素。
填料是HPLC柱中的固定相，它的种类和粒径大小直接影响到分离的效果。
常用的填料有C18、C8、SiO2等，它们具有不同的分离机理和适用范围，需要根据具体的分析要求进行选择。
此外，柱温的控制也对HPLC分离有着重要的影响。
柱温的升高可以提高分离效率和分辨率，减少分离时间，但也会增加柱的压力和流动相的挥发，因此在实际应用中需要综合考虑。
总的来说，HPLC的原理是通过样品在流动相和固定相之间的分配作用，实现对混合物中各成分的分离和检测。
在实际应用中，需要根据具体的分析要求选择合适的进样方式、流动相、填料和柱温控制，以达到最佳的分离效果。
通过对HPLC原理的深入了解，可以更好地应用HPLC技术进行分离和分析，为科研和生产提供准确、可靠的数据支持。
同时，不断探索和创新HPLC技术，将有助于提高其分离效率和应用范围，推动科学研究和工程技术的发展。
简述液相色谱中流动相的选择
简述液相色谱中流动相的选择
液相色谱 (Liquid Chromatography, LC) 中的流动相，也叫做溶
剂或移动相，是指样品在色谱柱中流动的溶液。
液相色谱的分离效果受到流动相的选择和配比的影响，因此流动相的选择是液相色谱分离技术中十分重要的一环。
液相色谱中常用的流动相包括有机溶剂、水、酸、盐酸/氢氧
化钠、醋酸/乙酸盐以及缓冲液等。
不同类型的溶剂或混合溶
剂可以用来分离不同性质的化合物：
1. 极性化合物的分离一般采用水和一些极性有机溶剂（如甲醇、乙醇、乙腈等）的混合物作为流动相。
2. 非极性化合物的分离则需要使用非极性有机溶剂（如正己烷、甲苯、乙酸乙酯等）或者混合有机溶剂（如乙醚和正己烷的混合物）作为流动相。
3. 酸类化合物和有机酸类化合物的分离用含有少量酸的水溶液（如醋酸溶液等）作为流动相。
4. 离子性化合物的分离则需要使用缓冲液作为流动相。
如果需要可逆电渗析检测器，则流动相需要含有离子对。
需要注意的是，在选择流动相时，不仅要考虑其相容性、带电性、缓冲效应等因素，还要考虑其挥发性、毒性和成本等因素。
因此，流动相的选择应该根据需要的分离效果、性质、成本和实验条件等综合因素进行考虑和选择。
高效液相色谱流动相的选择
按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。
常用溶剂：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、 乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
3. 流动相选择
在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂， 若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。也可 在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间 缩短。
（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期 累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂。 在液—液色谱中，流动相与固定性不互溶，否则固定性 流失，柱的保留特性改变。
（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉 淀并在柱头沉积。 （4）溶剂的黏度小些为好，黏度大降低组分的扩散系 数，造成柱效下降，温度相同柱压随着黏度的增加而增 加。 （ 5）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外 检测器时，流动相不应有紫外吸收。
流动相的选择 与注意事项
1. 流动相性质
（1）液相色谱的流动相根据作用可分为底剂和洗脱剂。
底剂决定基本的色谱分离情况，洗脱剂对某几个组分选择分
离。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况；
（ 2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极 性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正
相柱。正相柱的底剂若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液
液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上
的出峰顺序相反。反相柱通常以水为流动相的主体，再加入 不同配比的有机溶剂做调节剂。
2. 流动相类别
按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性；
液相色谱流动相的选择
液相色谱流动相的选择选择原则1 选择色谱醇的溶剂作为流动相不要随意加满溶剂瓶。
作为分析流动相，应避免不必要的浪费，防止污染环境，危害身体健康。
应该根据样哦数量，计算需要使用的溶剂体积，添加适量流动相到试剂瓶中作为流动相。
因为有些有机溶剂长期放置易变质，比如四氢呋喃在光照下就容易变质，甲醇或乙醇长期放置会生成酯类，乙腈水溶液会分解为醋酸与氨，在分析时导致基线抬高，对一些分析，特别是质谱分析造成影响。
2 配置某些酸或碱性流动相时要考虑色谱柱的使用pH范围有些酸并不适宜作为流动相，如盐酸、长期使用可能损坏泵及相关的钢制管线。
注意选择合适的截止波长的溶剂作为流动相。
紫外分析时，样品的检测波长至少应大于所用溶剂的截止波长20nm上。
3 配置的盐溶液一定用滤膜过滤常规液相用0.45µm滤膜过滤，高效液相色谱使用0.2µm滤膜过滤。
水或缓冲盐溶液好置于棕色瓶中，以防长菌，阻塞溶剂过滤器，降低泵的操作性能。
质谱分析不能使用不挥发性盐作为流动相。
使用挥发性盐作为流动相时，在保证分析的条件下，流动相中的盐尽量保持低浓度。
流动相的要求利用高效液相色谱法测定物质的含量时，流动相的选择至关重要。
对于流动相的要求一般有以下几点：1.作为流动相的溶剂，黏度要小。
2.与固定相不发生化学反应，不互溶。
3.对待测样品有适当的溶解度。
4.应与检测器匹配。
当然了，流动相的选择主要还是看具体的实验，但可以根据溶剂极性来选择。
常见溶剂极性大小为：水＞甲酰胺＞乙腈＞甲醇＞乙醇＞丙醇＞丙酮＞二氧六环＞四氢呋喃＞甲乙醇＞正丁醇＞乙酸乙酯＞乙醚＞异丙醇＞二氯甲烷＞氯仿＞溴乙烷＞苯＞氯丙烷＞甲苯＞四氯化碳＞二硫化碳＞环己烷＞己烷＞庚烷流动相的纯度对最后的测定结果有很大的影响，所以在检测中中一定要按照实验要求选择合适纯度的试剂进行配制。
高效液相色谱分析法(仪器+组成+分离类型+流动相选择)
2、主 要 部 件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：30MPa以上。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（ <10μm），液体的流动相高速通过时，将产生 很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱 的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、 流量稳定可调、耐腐蚀等特性
(2)梯度淋洗装置
3.离子交换色谱分离固定相
结构类别： （1）薄壳型离子交换树脂
薄壳玻璃珠为担体，表 面涂约1%的离子交换树脂； （2）离子交换键合固定相
薄壳键合型；微粒硅胶 键合型（键合离子交换基团）
树脂类别： （1） 阳离子交换树脂（强酸 性、弱酸性） （2） 阴离子交换树脂（强碱 性、弱碱性）
4. 空间排阻分离固定相
liquid-solid adsorption chromatography 固定相：固体吸附剂如硅胶、氧化铝等，较
常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；
流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：利用溶质分子占据固定相表面吸 附活性中心能力的差异；适用于分离相对分子 质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合 物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
GC：H = A + B / u + C • u （填充柱）
A = 2λ • dp
A ∝ λ • dp
B = 2γ • Dm = 2γ • Dg B ∝ t R ，B ∝ Dg
Dg
∝
T η
或Dg
∝
T M
B = 2γ • Dm
Dm
∝
T η
柱温T ↓低，流动相η ↑大 ⇒B相忽略
在高效液相色谱中, 液体的扩散系数
(4) 高效分离柱
高效液相色谱 固定相和流动相
高压液相色谱HPLC培训教程(六)IV．固定相和流动相在色谱分析中，如何选择最佳的色谱条件以实现最理想分离，是色谱工作者的重要工作，也是用计算机实现HPLC分析方法建立和优化的任务之一。
本章着重讨论填料基质、化学键合固定相和流动相的性质及其选择。
一、基质（担体）HPLC填料可以是陶瓷性质的无机物基质，也可以是有机聚合物基质。
无机物基质主要是硅胶和氧化铝。
无机物基质刚性大，在溶剂中不容易膨胀。
有机聚合物基质主要有交联苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。
有机聚合物基质刚性小、易压缩，溶剂或溶质容易渗入有机基质中，导致填料颗粒膨胀，结果减少传质，最终使柱效降低。
1．基质的种类1）硅胶硅胶是HPLC填料中最普遍的基质。
除具有高强度外，还提供一个表面，可以通过成熟的硅烷化技术键合上各种配基，制成反相、离子交换、疏水作用、亲水作用或分子排阻色谱用填料。
硅胶基质填料适用于广泛的极性和非极性溶剂。
缺点是在碱性水溶性流动相中不稳定。
通常，硅胶基质的填料推荐的常规分析pH范围为2~8。
硅胶的主要性能参数有：①平均粒度及其分布。
②平均孔径及其分布。
与比表面积成反比。
③比表面积。
在液固吸附色谱法中，硅胶的比表面积越大，溶质的k值越大。
④含碳量及表面覆盖度（率）。
在反相色谱法中，含碳量越大，溶质的k值越大。
⑤含水量及表面活性。
在液固吸附色谱法中，硅胶的含水量越小，其表面硅醇基的活性越强，对溶质的吸附作用越大。
⑥端基封尾。
在反相色谱法中，主要影响碱性化合物的峰形。
⑦几何形状。
硅胶可分为无定形全多孔硅胶和球形全多孔硅胶，前者价格较便宜，缺点是涡流扩散项及柱渗透性差；后者无此缺点。
⑧硅胶纯度。
对称柱填料使用高纯度硅胶，柱效高，寿命长，碱性成份不拖尾。
2）氧化铝具有与硅胶相同的良好物理性质，也能耐较大的pH范围。
它也是刚性的，不会在溶剂中收缩或膨胀。
但与硅胶不同的是，氧化铝键合相在水性流动相中不稳定。
不过现在已经出现了在水相中稳定的氧化铝键合相，并显示出优秀的pH稳定性。
高效液相色谱法常用的流动相
高效液相色谱法常用的流动相
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，其流动相的选择对分离效果至关重要。
常用的流动相分为以下几种：
1. 甲醇：甲醇是一种常用的有机溶剂，具有良好的溶解性和极性。
在反相色谱中，甲醇常与水混合作为流动相，以实现对极性物质的分离。
2. 乙腈：乙腈是一种有机溶剂，具有较高的极性。
与甲醇类似，乙腈也可以与水混合作为流动相，用于反相色谱中对极性物质的分离。
3. 水：水是一种无机溶剂，具有良好的极性。
在正相色谱中，水常与有机溶剂（如甲醇、乙腈等）混合作为流动相，以实现对极性物质的分离。
4. 乙酸乙酯：乙酸乙酯是一种有机溶剂，具有较弱的极性。
在正相色谱中，乙酸乙酯可以与水混合作为流动相，用于分离弱极性物质。
5. 庚烷：庚烷是一种非极性有机溶剂，适用于分离非极性物质。
在反相色谱中，庚烷可以与甲醇或乙腈混合作为流动相。
6. 混合溶剂：根据被测物的极性和分离需求，可以选用两种或多种溶剂混合作为流动相。
例如，甲醇与水混合用于反相色谱，乙腈与水混合用于正相色谱等。
流动相的选择应考虑以下因素：
1. 被测物的极性：根据被测物的极性选择相应的流动相，以实现良好的分离效果。
2. 固定相的选择：根据固定相的极性，选择与之匹配的流动相。
3. 检测器的要求：某些检测器对流动相的极性有要求，需根据检测器类型选择合适的流动相。
4. 实验条件：如流速、柱温等实验条件，也会影响流动相的选择。
在高效液相色谱法中，常用的流动相包括甲醇、乙腈、水、乙酸乙酯、庚烷等，具体选择需根据被测物的极性、固定相、检测器要求等因素综合考虑。
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢高效液相色谱仪（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种将混合物分离成单一组分的有效工具。
为了实现这种分离，高效液相色谱需要两种相：固定相和流动相。
其中，流动相是高效液相色谱仪中至关重要的组成部分之一，因为它决定着分离效果和分离时间。
因此，选择正确的流动相对于分离的精度和效率来说非常重要。
流动相简介流动相是指在柱床中连续流动的溶液。
在高效液相色谱中，流动相主要由溶剂和缓冲液组成。
溶剂是用于将样品分离的液体，在高效液相色谱仪中通常采用多种溶剂的混合物，称为流动相溶剂或者移动相溶剂。
缓冲液是在溶剂中加入的一种化学物质来调节流动相的pH值，缓冲液的作用是保持样品成分的稳定性和防止封堵柱床。
流动相的选择取决于样品的特性、分离要求和分析环境的条件。
因此，选择合适的流动相是高效液相色谱仪分离分析的关键因素之一。
流动相的分类根据溶剂的极性，流动相可分为两种类型：有机相和水相。
具体分类如下：有机相有机相通常由疏水性的有机溶剂组成，这些有机溶剂的极性比水低。
主要有以下三类：•极性较小的有机溶剂：含有醚、酮或者类似于苯、四氢呋喃等非极性有机溶剂的混合物。
•极性中等的有机溶剂：含有乙腈、甲醇、乙醇等极性有机溶剂的混合物。
•极性较大的有机溶剂：如乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等。
水相水相是由水和缓冲液组成的混合物。
水是极性溶剂，本身具有良好的溶解性和稳定性。
缓冲液是在水中加入的一种化学物质来调节流动相的pH值。
流动相的选择原则在选择流动相时，需要考虑分析的目标和样品的特性。
下面列举几种常见的流动相选择原则：根据分析目标选择流动相首先，需要根据分析目标选择流动相。
如果需要分离极性物质，则应选择相对极性较强的水相，如果需要分离非极性物质，则应选择相对极性较弱的有机相。
如果需要同时分离多种溶质，则可以选择相组合。
根据样品的特性选择流动相如果样品是非极性的，则应选择相对极性较弱的有机相，例如乙酸乙酯-甲醇体系。
HPLC方法开发——流动相的选择
HPLC方法开发——流动相的选择高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析技术，广泛应用于各个领域的分析和质量控制。
在HPLC方法开发中，流动相的选择是非常重要的一步，它直接关系到分析物的分离和检测的灵敏度。
在选择流动相时，需要考虑以下几个因素：1.溶解性：流动相应具有较好的溶解性，以溶解待测样品，保证样品能够均匀地进入和流出色谱柱，并使分离柱表面保持通透性。
2.酸碱性：流动相的pH值对于分离和保护色谱柱都有一定的影响。
如果待测物具有弱酸或弱碱性，应选择酸性或碱性流动相，以提供足够的离子态物质，促进待测物与色谱柱的相互作用。
3.性能物质：流动相中的性能物质可分为有机和无机两类。
有机性能物质通常用作有机试剂，如甲醇、乙酸乙酯等。
无机性能物质通常用作缓冲剂，如磷酸二氢钠、草酸钠等。
4.流动相比例：流动相比例指的是有机相和水相的比例。
比例的选择应该根据待测样品的特性、分析目的以及色谱柱的类型和性能来确定。
一般来说，比例的选择应该尽量保证样品在色谱柱中保持均匀分布。
5.流速：流动相的流速直接影响色谱柱的分离效果和分析时间。
一般来说，流速越快，分离效果可能越差，但分析时间会缩短。
因此，在流速选择时需要在分离效果和分析时间之间做一个权衡，使得两者达到一个较好的平衡。
在选择流动相时，还需要考虑其他可能的影响因素，如温度、压力等。
温度对于很多分析物的分离效果有重要影响，通常来说，提高温度可以加快分离速度，但也可能导致一些物质不稳定。
压力对于色谱柱的分离效果和寿命有一定影响，高压可以提高分离速度，但也可能损坏色谱柱。
综上所述，流动相的选择在HPLC方法开发中是非常重要的一步。
通过合理选择溶剂、酸碱性、性能物质、比例和流速，可以得到一个合适的流动相组合，以获得较好的分离效果和检测灵敏度。
在选择过程中还需要考虑其他可能的影响因素，以确保色谱分析的准确性和可靠性。
高效液相流动相的选择
高效液相流动相的选择 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020高效液相色谱流动相选择流动相1.流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
流动相选择1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
2：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。
这是一个聪明而又省力的办法。
调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。
低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
②纯度。
色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
③必须与检测器匹配。
使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。
当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
④粘度要低(应<2cp)。
高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。
最好选择沸点在100℃以下的流动相。
⑤对样品的溶解度要适宜。
如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。
⑥样品易于回收。
应选用挥发性溶剂。
流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。
高效液相流动相缓冲盐选择
下面内容综合了A g i l e n t和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。
甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。
但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。
在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。
对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。
考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。
当待分析物pKa或pKb未知时，应测试一种以上流动相p H（如p H2.0和p H6.5缓冲盐溶液），可提供最好结果。
对流动相的优化主要体现在水相上。
流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。
如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。
如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随p H改变非常明显。
（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。
了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。
缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。
例如，醋酸盐的pKa为 4.8，缓冲范围为p H3.8~5.8。
液相色谱仪流动相的选择与优化 液相色谱操作规程
液相色谱仪流动相的选择与优化液相色谱操作规程液相色谱是目前应用多的色谱分析方法，液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器构成，其整体构成仿佛于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。
液相色谱的流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。
它是影响分别的一个特别紧要因素。
在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的紧要工作。
选择方法1、由强到弱：一般先用90%的乙腈（或甲醇）/水（或缓冲溶液）进行试验，这样可以很快地得到分别结果，然后依据出峰情况调整有机溶剂（乙腈或甲醇）的比例。
2、三倍规定：每削减10%的有机溶剂（甲醇或乙腈）的量，保留因子约加添3倍，此为三倍规定。
这是一个聪慧而又省力的方法。
调整的过程中，注意察看各个峰的分别情况。
3、粗调转微调：当分别达到确定程度，应将有机溶剂10%的更改量调整为5%，并据此规定渐渐降低调整率，直至各组分的分别情况不再更改。
脱气方法1、吹氦脱气法利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性，在0.1MPa压力下，以约60mL/min流速通入流动相储液容器中10～15min，可以很有效地从流动相中排出溶解的空气，能排出接近80%的氧气。
接受一个分布式喷射流装置，一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排出。
这意味着1L氦气通过1L流动相就可完成排气这个工作。
这种脱气方法虽然好，但氦气价格较高，很少使用。
2、加热回流法此法的脱气效果较好。
在操作时要注意冷凝塔的冷却效率，否则溶剂会丢失，混合流动相的比例会有变化。
3、抽真空脱气法此法可使用真空泵，降压至0.05～0.07MPa，即可除去溶解的气体。
但是由于真空脱气会使混合溶剂构成发生变化，从而影响到试验的重现性，因此多用于单溶剂体系的简单分析。
4、超声波脱气法将欲脱气的流动相置于超声波清洗器中，用超声波震荡10～20min。
此法的脱气效果差。
5、在线脱气法HPLC仪器均可配置专门的在线脱气机。
高效液相色谱法中流动相的配制方法
高效液相色谱法中流动相的配制方法
高效液相色谱法是一种常用的化学分析方法，其高灵敏、快速、准确、经济等优点促进了其在大量分析样品应用中的广泛使用。
为了获得良好的分析数据，必须精确控制注射体系的流动条件。
因此，流动相的配制是色谱方法的一个关键环节。
首先，要确定配制流动相的目的，它可以用于配制正常峰、鹰嘴峰和宽峰等，从而挑选出最适宜的离子型色谱柱。
在确定了色谱柱的基础上，可以利用油脂指数、离子水平、取向型窗口和平衡型等方法选择最适合的流动相。
例如，油脂指数量测法是一种综合量测离子强度和交互作用的一种有用方法。
此外，还有一些量测方法，如氢质取向型窗口反应技术和平衡型反应技术，可以帮助快速确定最佳流动相。
配制完流动相之后，接下来就要将它们加入色谱柱中进行分析色谱。
为了能够获得完美的分析结果，必须使流动相的温度保持在一个相对恒定的范围内，这可以通过传统的热带和冷却范围来控制，也可以通过洗脱面积和洗脱高度来调节流动相参数，必要时可以增加流动相的清洗时间。
总之，在配制流动相的过程中，要分析它们的组成以及性能，通过量测、取向型窗口反应技术和平衡型反应技术等等方法来快速选择出最佳的组合，再将其加入色谱柱中，以控制流动条件，实现良好的色谱检测效果，以达到分析的最终目的。
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高效液相色谱流动相选择
流动相
流动相的性质要求：一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
流动相选择
1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
2：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。
这是一个聪明而又省力的办法。
调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
选择流动相时应考虑以下几个方面：
①流动相应不改变填料的任何性质。
低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
②纯度。
色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
③必须与检测器匹配。
使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。
当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
④粘度要低(应<2cp)。
高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。
最好选择沸点在100℃以下的流动相。
⑤对样品的溶解度要适宜。
如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。
⑥样品易于回收。
应选用挥发性溶剂。
流动相的pH值
采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。
对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在;对弱碱，情况相反。
分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液;分析弱碱样品
时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。
注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。
所以在这种情况下有机胺 (如三乙胺)又称为减尾剂或或除尾剂。
(三乙胺triethylamine 氨分子中的氢原子被3个乙基取代的产物。
分子式
(CH3CH2)3N。
易挥发的无色液体，有氨的气味。
熔点-114.7℃，沸点89.3℃，相对密度0.7275(20/4℃)。
溶于水和乙醇、乙醚等有机溶剂。
三乙胺有碱性，与无机酸能生成易溶于水的盐类。
可由N，N- 二乙基乙酰氨与氢化铝锂反应制取，也可用乙醇胺进行气相烷基化反应合成。
用于制橡胶硫化促进剂、润湿剂和杀菌剂等，也可用作溶剂和用于合成四级铵化合物。
)
如何选择缓冲液PH值
在选择缓冲液PH值之前，应先了解被分析物的Pka，高于或低于Pka两个PH值单位的，有助于获得好的、尖锐的峰，从HH公式：PH=Pka+log([A-]/[A])得知，溶液PH 值高于或低于Pka两个单位，化合物中99%以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。
显示的是它的离子形式和中性化合物的转变，苯甲酸的Pka等于4.2，理论上由HH公示得知，当溶液PH值等于 2.2时，99%的苯甲酸以中性化合物存在，PH值等于6.2时99%的苯甲酸以离子形式存在，所以当缓冲液PH值等于2.2时，中性化合物以羧酸形式保留于反相柱，表1列出了一般缓冲液和他们的缓冲范围。
从表1知磷酸盐和柠檬酸盐缓冲液能用于PH值等于2.2。
当化合物只有氨基时，缓冲体系的选择十分简单，大多数氨基化合物在PH值小于9时都被质子化，所以所有PH值在7或更低的溶液均适合应用，你也许会问水的PH值大约是7，为什么还用缓冲盐，因为缓冲盐有助于增加方法的可靠性，以及色谱峰的尖锐性，PH值的降低有助于氨基化合物保留的减弱，减小化合物与硅胶表面硅羟基的作用，而使峰更尖锐，从表1 可值，任何缓冲液均可应用于氨基化合物的分析，但我们认为PH 值等于3的磷酸钾盐最适合用于氨基化合物的分析。
在上面两个例子中，PH=3的磷酸钾盐都能获得良好的应用，在一般情况下，它是含羧基和氨基化合物分析中最好的缓冲液，并且我们认为在氨基化合物分析中钾盐比钠盐更好。
流动相的脱气
HPLC 所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。
气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。
(噪声增大，基线不稳，突然跳动)。
此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相(如烷基胺)反应。
溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。
溶解氧能与某些溶剂(如甲醇、四氢呋喃)形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收(特别是在260nm以下)，并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移或形成鬼峰(假峰)。
在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。
在某些情况下，荧光响应可降低达95%。
在电化学检测中(特别是还原电化学法)，氧的影响更大。
除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。
常用的脱气方法有：加热煮沸、抽真空、超声、吹氦等。
对混合溶剂，若采用抽气或煮沸法，则需要考虑低沸点溶剂挥发造成的组成变化。
超声脱气比较好，10～20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了(一般500ml溶液需超声20～30min方可)，此法不影响溶剂组成。
超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。
离线(系统外)脱气法不能维持溶剂的脱气状态，在你停止脱气后，气体立即开始回到溶剂中。
在1～4小时内，溶剂又将被环境气体所饱和。
在线(系统内)脱气法无此缺点。
最常用的在线脱气法为鼓泡，即在色谱操作前和进行时，将惰性气体喷入溶剂中。
严格来说，此方法不能将溶剂脱气，它只是用一种低溶解度的惰性气体(通常是氦)将空气替换出来。
此外还有在线脱气机。
一般说来有机溶剂中的气体易脱除，而水溶液中的气体较顽固。
在溶液中吹氦是相当有效的脱气方法，这种连续脱气法在电化学检测时经常使用。
但氦气昂贵，难于普及。
流动相的滤过
所有溶剂使用前都必须经0.45μm(或0.22μm)滤过，以除去杂质微粒，色谱纯试剂也不例外(除非在标签上标明“已滤过”)。
用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相(脂溶性)滤膜和水相(水溶性)滤膜。
有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。
水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解!溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。
对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后滤过，首选有机相滤膜。
现在已有混合型滤膜出售。
流动相的贮存
流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。
因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。
这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。
贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。
磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要贮存。
如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。
容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。
因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子无此现象。
卤代有机溶剂应特别注意的问题
卤代溶剂可能含有微量的酸性杂质，能与HPLC系统中的不锈钢反应。
卤代溶剂与水的混合物比较容易分解，不能存放太久。
卤代溶剂(如CCl4、CHCl3 等)与各种醚类(如乙醚、二异丙醚、四氢呋喃等)混合后，可能会反应生成一些对不锈钢有较大腐蚀性的产物，这种混合流动相应尽量不采用，或新鲜配制。
此外，卤代溶剂(如CH2Cl2)与一些反应性有机溶剂(如乙腈)混合静置时，还会产生结晶。
总之，卤代溶剂最好新鲜配制使用。
如果是和干燥的饱和烷烃混合，则不会产生类似问题。