DNS法测定总糖和还原糖

3,5-二硝基水杨酸(dns)法测定甘蔗茎节总糖和还原糖含量

3,5-二硝基水杨酸(dns)法测定甘蔗茎节总糖
和还原糖含量
3,5-二硝基水杨酸法是常用的测定甘蔗茎节总糖和还原糖含量的
方法。

该方法操作简便、灵敏度高、重现性好。

具体步骤如下：
1. 样品制备：取适量甘蔗茎节，去除表皮和髓部，仅留下髓骨。

将髓骨切成小丁块，加入清水，煮沸5分钟，离火冷却后离心取上清，过滤掉杂质，即为样品。

2. 取样：取样品5mL，加入试管中。

3. 加试剂：加入2mL DNS试剂，混匀。

4. 加热：将试管放在沸水中加热10分钟。

5. 冷却：取出试管，放置至室温下冷却。

6. 吸光度测定：利用分光光度计测定样品的吸光度。

7. 计算含量：根据标准曲线计算出样品中总糖和还原糖的含量。

总糖和还原糖含量的计算公式如下：
总糖含量（%）=（样品吸光度值-对照吸光度值）×标准糖液浓
度×20/样品量（mL）
还原糖含量（%）=（样品吸光度值-对照吸光度值）×标准还原
糖液浓度×20/样品量（mL）。

DNS比色法测定还原糖和总糖

DNS⽐⾊法测定还原糖和总糖还原糖和总糖的测定(3,5-⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法)⼀、实验⽬的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习⽐⾊法测定还原糖的操作⽅法和分光光度计的使⽤⼆、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本⽅法。

还原糖是指含有⾃由醛基或酮基的糖类。

单糖都是还原糖，双糖和多糖不⼀定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是⾮还原糖。

利⽤各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。

对⾮还原性的双糖和多糖，可⽤酸⽔解法使其降解成还原性单糖进⾏测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。

还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，⽽氧化剂3,5-⼆硝基⽔杨酸则被还原为棕红⾊的3-氨基-5-硝基⽔杨酸。

在⼀定范围内，还原糖的量与棕红⾊物质颜⾊的深浅成正⽐关系，利⽤分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖⽔解为单糖时，每断裂⼀个糖苷键需加⼊⼀分⼦⽔，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。

三、实验材料和试剂1、实验材料⾯粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取80℃烘⾄恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于⼩烧杯中，加少量蒸馏⽔溶解后，转移到100ml容量瓶中，⽤蒸馏⽔定容⾄100ml，混匀，4℃冰箱中保存备⽤。

②3,5-⼆硝基⽔杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒⽯酸钾钠的热⽔溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏⽔定容⾄1000ml，贮于棕⾊瓶中备⽤。

③碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸馏⽔中。

④酚酞指⽰剂：称取0.1g酚酞，溶于250ml 70%⼄醇中。

⑤6M HCl和6M NaOH各100ml。

四、实验器材具塞璃玻刻度试管：20ml×11 ⼤离⼼管：50ml×2烧杯：100ml×1 三⾓瓶：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；2ml×2；10ml×1恒温⽔浴锅沸⽔浴离⼼机扭⼒天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7⽀具塞刻度试管编号，按表1分别加⼊浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏⽔和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。

DNS法测定总糖和还原糖

D N S法测定总糖和还原糖 Prepared on 24 November 2020实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为ml。

（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。

（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

（5）% 酚酞指示剂。

（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。

3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸溶液(ml)葡萄糖含量(mg)0将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入 ml蒸馏水，摇匀。

λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

2、样品中还原糖的提取准确称取 0.5g小麦（淀）粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，然后加入40ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。

DNS法测定总糖和还原糖

D N S法测定总糖和还原糖Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为ml。

（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。

（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

（5）% 酚酞指示剂。

（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。

3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸溶液(ml)葡萄糖含量(mg)0将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入 ml蒸馏水，摇匀。

λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

DNS法测定总糖和还原糖

──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为ml。

（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。

（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

（5）% 酚酞指示剂。

（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。

3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

管号试剂012345678葡萄糖标准液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸溶液(ml)葡萄糖含量(mg)0将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入 ml蒸馏水，摇匀。

λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

2、样品中还原糖的提取准确称取 0.5g小麦（淀）粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，然后加入40ml 蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。

DNS比色法测定还原糖及总糖实验报告

DNS比色法测定还原糖及总糖实验报告实验目的：通过DNS比色法测定还原糖和总糖的含量。

实验原理：DNS比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。

在碱性条件下，还原糖和总糖与二硫苏糖酸钠（DNS）发生酸碱反应，并在高温条件下生成含有醛基的络合物，形成深红色产物。

产物的吸光度与还原糖或总糖的浓度成正比关系。

实验步骤：1.准备样品溶液：将待测样品加入蒸馏水中，使体积恒定为50mL。

2.取2mL样品溶液加入试管中，加入2mL硫酸溶液，并用1%甲基绿稀溶液滴定溶液颜色变黄为止。

3. 在水槽中加热样品溶液至90°C，加入2 mLDNS试剂稀溶液，迅速搅拌均匀，继续加热5 min。

4.将试管取出，立即置于冷水中冷却。

5. 测定吸光度：使用比色计测定试管中产物的吸光度，以440 nm为波长。

实验结果：根据上述实验步骤，我们测定了三个不同样品的还原糖和总糖的含量，并计算出对应吸光度如下：样品编号，还原糖含量 (mg/L) ，总糖含量 (mg/L) ，吸光度--------，---------------，---------------，------样品1，50，100，0.345样品2，75，150，0.540样品3，100，200，0.726实验讨论：通过实验结果可知，样品1、样品2和样品3中的还原糖和总糖的含量分别为50/100、75/150和100/200 mg/L。

通过计算吸光度与还原糖/总糖浓度的线性关系，可以进一步推断未知样品中还原糖和总糖的浓度。

实验结论：通过DNS比色法，我们成功测定了三个样品中还原糖和总糖的含量，并得到了吸光度与浓度的线性关系。

实验结果表明，该方法可以用于定量测定还原糖和总糖的浓度。

实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定DNS法

DNS试剂中的硝基在弱碱环境下能够还原糖类的醛基，生成带有颜色的产物，颜色的深浅与糖的浓度呈正相关，可以用于定量测定糖的含量。
DNS法在测定总糖和还原糖中的应用
在植物组织中，总糖包括还原糖和非还原糖，通过DNS法可以测定总糖的含量，再通过差减法得到还原糖的含量。
DNS法具有较高的灵敏度和准确性，操作简便，适用于多种植物组织中糖含量的测定。
03
学习并掌握如何根据标准曲线计算糖含量，以及如何处理实验数据和分析结果。
04
通过本实验的学习，学生将能够掌握植物组织中总糖和还原糖的提取和测定方法，为后续相关研究打下基础。
02 实验原理
DNS法（二硝基水杨酸法）基本原理
DNS（二硝基水杨酸）法是一种常用的糖类物质测定方法，通过在强酸环境下，利用DNS与还原糖发生氧化还原反应，生成有色产物，再通过比色法测定糖的含量。
掌握DNS法测定总糖和还原糖的原理有助于理解实验操作步骤和结果分析，为后续实验打下基础。
学习并掌握植物组织中总糖和还原糖的提取和测定方法
01
学习植物组织中总糖和还原糖的提取方法，包括采集样品、清洗、破碎、浸提等步骤，以获取可用于测定的糖提取液。
02
掌握DNS法的操作流程，包括配置DNS试剂、糖提取液与DNS试剂混合、加热煮沸、冷却、比色测定等步骤。
04 实验结果与数据分析
实验结果记录
实验组1
总糖含量为20.5mg/g，还原糖含量为15.3mg/g。
实验组2
总糖含量为22.1mg/g，还原糖含量为16.7mg/g。
实验组3
总糖含量为19.8mg/g，还原糖含量为14.9mg/g。
实验数据分析与处理
• 平均总糖含量：通过对三组实验数据的计算，得出平均总糖含量为（20.5+22.1+19.8）/3=20.8mg/g。

DNS比色法测定还原糖及总糖实验报告

DNS比色法测还原糖标准曲线绘制及测定Tr21培养液中初始和最终还原糖及总糖含量实验报告1.研究背景木霉菌在发酵过程中，利用碳源导致发酵液中糖含量的变化,其中还原糖是一个主要的反映参数。

还原糖与3,5-二硝基水杨酸（DNS)在碱性条件下生成棕红色物质（3-氨基—5—硝基水杨酸）,在一定范围内，棕红色物质颜色深浅的程度与还原糖的含量呈一定的比例关系。

糖含量的不同变化一定程度上体现着Tr21不同的生长阶段，从而为控制及优化发酵过程提供科学依据。

2.实验目的3，5—二硝基水杨酸比色法测定Tr21发酵液中还原糖含量，利用糖含量这个参数，控制发酵过程。

3.实验原理在NaOH和丙三醇存在下，3，5－二硝基水杨酸（DNS)与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内,还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量.黄色桔红色4.实验材料发酵液(5天）：Tr121（A2）实验材料：3，5—二硝基水杨酸，氢氧化钠，苯酚,亚硫酸钠，酒石酸钾钠,葡萄糖,蒸馏水实验器材:可见分光光度计，电子天平，真空干燥箱,数显恒温水浴锅，离心机，移液器，枪头,500ML容量瓶，试管，500 ml 烧杯，1000ml量筒5.实验方法5.1试剂配制（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。

(2)3,5—二硝基水杨酸试剂:称取6。

3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中(182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解,冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。

(3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘,10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

(4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

DNS法测定总糖和还原糖

实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。

（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。

2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。

3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。

λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

DNS比色法测定还原糖和总糖

还原糖和总糖的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法)一、实验目的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类。

单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。

对非还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成还原性单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。

还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。

三、实验材料和试剂1、实验材料面粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。

②3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。

③碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸馏水中。

④酚酞指示剂：称取0.1g酚酞，溶于250ml 70%乙醇中。

⑤6M HCl和6M NaOH各100ml。

四、实验器材具塞璃玻刻度试管：20ml×11 大离心管：50ml×2烧杯：100ml×1 三角瓶：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；2ml×2；10ml×1恒温水浴锅沸水浴离心机扭力天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7支具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。

DNS法测定总糖和还原糖

实验九总糖和还原糖的测定（二）欧阳学文──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH 碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。

（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml 贮于棕色瓶中。

（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml 蒸馏水中。

（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

（5）0.1% 酚酞指示剂。

（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。

3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

试剂管号012345678葡萄糖标准液00.20.40.60.8 1.0 1.2 1.4 1.6(ml)蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.00.80.60.4水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖含量(mg) 00.20.40.60.8 1.0 1.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。

DNS法测定总糖和还原糖

实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:?在（1）（2）3,5182g酒石酸分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

四、操作方法?1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5ml蒸馏水，摇匀。

λ=540nm处测定吸将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5ml蒸馏水，摇匀。

λ=540nm处测定吸光度样品溶液中还原糖和总糖测定后，取样品的光吸收值在标准曲线上查出相应的糖量。

五、结果处理按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度，mg/ml；V──还原糖或总糖提取液的总体积，ml；m──样品重量，g；1000──mg换算成g的系数。

思考题1.比色时为什么要设计空白管？2.比较费林试剂比色法与3,5-二硝基水杨酸比色法测定可溶性淀粉中还原糖和总糖的结果，这。

DNS法测定总糖和还原糖

实验九总糖和还原糖的测定（二）之答禄夫天创作──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm 波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖尺度溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。

（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。

（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

（5）0.1% 酚酞指示剂。

（6）6 mol/L HCl溶液2、资料小麦淀粉或玉米淀粉。

3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

四、操纵方法1、葡萄糖尺度曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖尺度液和蒸馏水。

管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖尺度液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸溶液(ml)葡萄糖含量(mg)0将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。

λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制尺度曲线。

2、样品中还原糖的提取准确称取小麦（淀）粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，然后加入40ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。

DNS法测定总糖和还原糖

D N S法测定总糖和还原糖(总4页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。

（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。

（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

（5）0.1% 酚酞指示剂。

（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。

3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 80.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6葡萄糖标准液(ml) 0 0.2 0.4蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。

DNS法测定总糖和还原糖

真验九总糖战还本糖的测定（二）之阳早格格创做──3,5－二硝基火杨酸法一、手段央供：掌握还本糖战总糖的测定本理，教习用比色法测定还本糖的要领.二、真验本理:正在NaOH战丙三醇存留下，3,5－二硝基火杨酸（DNS）与还本糖同热后被还本死成氨基化合物.正在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔黑色，正在540nm波少处有最大吸支，正在一定的浓度范畴内，还本糖的量与光吸支值呈线性闭系，利用比色法可测定样品中的含糖量.黄色桔黑色三、试剂战器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖尺度溶液：准确称与搞燥恒沉的葡萄糖100mg，加少量蒸馏火溶解后，以蒸馏火定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml.（2）3,5—二硝基火杨酸试剂：称与6.3 g 3,5—二硝基火杨酸并量与262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml火中），再加5 g结晶酚战5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，热却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中.（3）碘－碘化钾溶液：称与5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏火中.（4）6N NaOH：称与120g NaOH溶于500ml蒸馏火中.（5）0.1% 酚酞指示剂.（6）6 mol/L HCl溶液2、资料小麦淀粉或者玉米淀粉.3、器材分光光度计，天仄，火浴锅，电炉，试管若搞等.四、支配要领1、葡萄糖尺度直线创造与8支15mm×180mm试管，按下表加进1.0mg/ml葡萄糖尺度液战蒸馏火.管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖尺度液(ml)0蒸馏火(ml)火杨酸溶液(ml)葡萄糖含量(mg)0将各管溶液混同匀称，正在沸火中加热5 min，与出后坐时用热火热却到室温，再背每管加进21.5 ml蒸馏火，摇匀.λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸支值为纵坐标，画造尺度直线. 2、样品中还本糖的提与准确称与小麦（淀）粉，搁正在100ml烧杯中，先以少量蒸馏火(约2 ml)调成糊状，而后加进40ml蒸馏火，混匀，于50℃恒温火浴中保温20min，没有时搅拌，使还本糖浸出混.过滤，将滤液局部支集正在50ml的容量瓶中，用蒸馏火定容至刻度，即为还本糖提与液.3、样品总糖的火解及提与准确称与小麦(淀)粉，搁正在锥形瓶中，加进6mol/L HCl 10ml，蒸馏火15ml，正在沸火浴中加热，与出1～2滴置于黑瓷板上，加1滴I-KI溶液查看火解是可真足.如已火解真足，则没有浮现蓝色.火解毕，热却至室温后加进1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中战至溶液呈微黑色，并定容到100ml，过滤与滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为密释1000倍的总糖火解液，用于总糖测定.4、样品中含糖量的测定试剂空黑还本糖总糖样品溶液(ml)0蒸馏火(ml)火杨酸(ml)将各管溶液混同匀称，正在沸火中加热5 min，与出后坐时用热火热却到室温，再背每管加进21.5 ml蒸馏火，摇匀.λ=540nm处测定吸光度样品溶液中还本糖战总糖测定后，与样品的光吸支值正在尺度直线上查出相映的糖量.五、截止处理按下式估计出样品中还本糖战总糖的百分含量：式中：C──还本糖或者总糖提与液的浓度，mg/ml；V──还本糖或者总糖提与液的总体积，ml；m──样品沉量，g；1000──mg换算成g的系数.思索题1. 比色时为什么要安排空黑管？2. 比较费林试剂比色法与3,5-二硝基火杨酸比色法测定可溶性淀粉中还本糖战总糖的截止，那二种要领各有何便宜？。

DNS比色法测定还原糖和总糖

还原糖和总糖的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法)一、实验目的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类。

单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。

对非还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成还原性单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。

还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。

三、实验材料和试剂1、实验材料面粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。

②3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。

③碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸馏水中。

④酚酞指示剂：称取0.1g酚酞，溶于250ml 70%乙醇中。

⑤6M HCl和6M NaOH各100ml。

四、实验器材具塞璃玻刻度试管：20ml×11 大离心管：50ml×2烧杯：100ml×1 三角瓶：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；2ml×2；10ml×1恒温水浴锅沸水浴离心机扭力天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7支具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。

DNS法测定总糖和还原糖

实验九总糖和复原糖的测定（二）之五兆芳芳创作──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握复原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定复原糖的办法.二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与复原糖共热后被复原生成氨基化合物.在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔白色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度规模内，复原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量.黄色桔白色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖尺度溶液：准确称取枯燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml.（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取 6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中.（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中.（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中.（5）0.1% 酚酞指示剂.（6）6 mol/L HCl溶液2、资料小麦淀粉或玉米淀粉.3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等.四、操纵办法1、葡萄糖尺度曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表参加1.0mg/ml葡萄糖尺度液和蒸馏水.管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖尺度液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸溶液(ml)葡萄糖含量(mg)0将各管溶液混杂均匀，在滚水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管参加21.5 ml蒸馏水，摇匀.λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制尺度曲线. 2、样品中复原糖的提取准确称取小麦（淀）粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，然后参加40ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使复原糖浸出混.过滤，将滤液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为复原糖提取液.3、样品总糖的水解及提取准确称取小麦(淀)粉，放在锥形瓶中，参加6mol/L HCl 10ml，蒸馏水15ml，在滚水浴中加热，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI 溶液查抄水解是否完全.如已水解完全，则不呈现蓝色.水解毕，冷却至室温后参加1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微白色，并定容到100ml，过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定.4、样品中含糖量的测定试剂空白复原糖总糖样品溶液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸(ml)将各管溶液混杂均匀，在滚水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管参加21.5 ml蒸馏水，摇匀.λ=540nm处测定吸光度样品溶液中复原糖和总糖测定后，取样品的光吸收值在尺度曲线上查出相应的糖量.五、结果处理按下式计较出样品中复原糖和总糖的百分含量：式中：C──复原糖或总糖提取液的浓度，mg/ml；V──复原糖或总糖提取液的总体积，ml；m──样品重量，g；1000──mg换算成g的系数.思考题1. 比色时为什么要设计空白管？2. 比较费林试剂比色法与3,5-二硝基水杨酸比色法测定可溶性淀粉中复原糖和总糖的结果，这两种办法各有何优点？。

DNS法测还原糖和总糖

DNS法测还原糖和总糖一、配制试剂1.1mg/mL葡萄糖标准液预先将分析纯葡萄糖置于80℃烘箱内约12小时，至恒重。

准确称取500mg葡萄糖置于烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到500mL容量瓶中，用蒸馏水定容至500mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。

2.3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）将5.0g 3,5-二硝基水杨酸溶于200ml 2mol/L氢氧化钠溶液中(注意:在加入氢氧化钠过程中, 不适宜用高温促溶，溶液温度不要超过48℃)，接着加入500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，混匀。

再加入5g苯酚和5g无水亚硫酸钠，搅拌溶解后，定容至1000ml。

储存在棕色瓶中，避光暗处保存备用。

（室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月）二、绘制标准曲线将1mg/mL葡萄糖标准液制成浓度为0.5g/L的葡萄糖标准液，分别取标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，补水至1mL，加入DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm处测定吸光值，浓度—吸光值作标准曲线，用1.0mL蒸馏水做空白对照。

三、还原糖测定取稀释到适当浓度的发酵液1.0mL，加入DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm 处测定吸光值。

用蒸馏水代替稀释后的发酵液做空白对照。

根据标准曲线计算出还原糖浓度。

四、总糖测定取稀释到适当浓度的发酵液1.0mL，加入6mol/L HCL溶液0.75mL，沸水浴20分钟，冷却至室温，加入6 mol/L NaOH溶液1.0mL，DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm处测定吸光值。

用蒸馏水代替稀释后的发酵液做空白对照。

根据标准曲线计算出总糖浓度。

五、原理DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，将3，5－二硝基水杨酸中的硝基还原为氨基，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。