实验七淀粉酶活性的测定
实验七尿淀粉酶活性测定
实验七尿淀粉酶活性测定淀粉酶(AMY或AMS在体内的主要作用是水解淀粉,它随机地作用于淀粉分子内的a—1, 4糖苷键生成葡萄糖、麦芽糖、寡糖及糊精。
血清中的淀粉酶主要有胰型(P型)和唾液型(S型)及其亚型同工酶组成,P型淀粉酶主要来源于胰腺,S型淀粉酶主要来源于唾液腺。
正常淀粉酶因分子量小,故可从肾小球滤过而由尿中排出。
【目的】1、验证淀粉酶的催化作用。
2、观察淀粉及其水解产物分别与碘反应呈现的颜色变化。
【原理】血清及尿中的淀粉酶来源于胰腺和唾液腺,正常血清与尿中有一定活性。
Winslow 氏法测定尿和血清中淀粉酶活性是将试样作等比稀释,观察一系列试样在规定的37C、30分钟的条件下,恰好能将0.1%淀粉溶液1ml水解(指加入碘液后不再呈蓝色)的酶量定为淀粉酶的一个活性单位,乘以尿的稀释倍数,即可得知每项ml 尿液中的淀粉酶活性。
【器材】试管(10mn X 100mr)、试管架、电热恒温水浴箱、吸管、洗耳球、滴管。
【试剂】1 、 9%NaCl2、0.3%碘液3、0.1%淀粉溶液【操作】1 、准备尿液(自备)。
2、取 10支试管,编号,用吸管向管中加入0.9%NaCl 1ml。
3、用1ml吸管(注意应用刻度到头的)向第一管加尿液1ml,混合,再将试管中的液体吸起,然后任其流回试管,如此重复三次,以便全管混匀,并借此冲洗吸管内壁。
吸出此混合液1ml 移入第二管中。
4、用同法处理第二管使之混匀,并取出1ml 置于第三管中。
依此类推,如此继续稀释至第九管后,吸出1ml混合液弃之,这样既可获得分别含原尿液为1/2ml,1/4ml,1/8ml, ... 1/512ml 的不同浓度的尿稀释液。
第十管不加尿液作为对照管。
5、从第十管起依次向各管迅速准确加入0.1%淀粉液2ml,迅速摇匀(是否充分混匀往往是实验成败的关键!),置37C水浴中,确保 30分钟。
6、取出各管后,立即向各管中加入0.3%碘液 2滴,摇匀后观察各管的颜色。
(植物中)淀粉酶活性的测定
(植物中)淀粉酶活性的测定一实验目的本实验的目的在于掌握淀粉酶的提取及活性的测定方法。
二实验原理植物中的淀粉酶能将贮藏的淀粉水解为麦芽糖。
淀粉酶几乎存在于所有植物中,有α-淀粉酶及β-淀粉酶,其活性因植物生长发育时期不同而有所变化,其中以禾谷类种子萌发时淀粉酶活性最强。
α-淀粉酶和β-淀粉酶都各有其一定的特性,如β-淀粉酶不耐热,在高温下容易钝化,而α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下容易发生钝化。
通常酶提取液中同时存在两种淀粉酶,测定时,可以根据他们的特性分别加以处理,钝化其中之一,即可以测出另一种酶的活性。
将提取液加热到70℃维持15分钟以钝化β-淀粉酶,便可测定α-淀粉酶的活性。
或者将提取液用pH3.6的醋酸在0℃加以处理,钝化α-淀粉酶,以测出β-淀粉酶的活性。
淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖,可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定。
由于麦芽糖能将后者还原成3-氨基-5-硝基水杨酸的显色基团,在一定范围内其颜色的深浅与糖的浓度成正比,故可以求出麦芽糖到含量。
以麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性大小。
三实验材料萌发的小麦、大麦或者豆类等(芽长1cm左右)四实验仪器和试剂1.仪器:电子天平、研钵、100mL容量瓶(1个)、50mL量筒(1个)、刻度试管[25mL(9个)、10mL(1个)]、试管6支、移液管[1mL(2支)、2mL(2支)、10mL(2支)]、离心机、恒温水浴锅、7220型分光光度计2.试剂:1%淀粉溶液、0.4mol/LNaOH、pH5.6的柠檬酸缓冲液:A、称取柠檬酸20.01g,溶解后稀释至1 000mL;B、称取柠檬酸钠29.41g,溶解后稀释至1 000mL;取A液13.70mL与B液26.30mL 混匀即是。
3,5-二硝基水杨酸:精确称取3,5-二硝基水杨酸1g溶于20mL1mol/LNaOH 中,加入50mL蒸馏水,在加入30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水稀释至100mL,盖紧瓶盖,勿让CO2进入。
淀粉酶活性的测定
淀粉酶活性的测定一、原理淀粉酶(amylase)包括几种催化特点不同的成员,其中α-淀粉酶随机地作用于淀粉的非还原端,生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉浆的粘度下降,因此又称为液化酶;β-淀粉酶每次从淀粉的非还端切下一分子麦芽糖,又被称为糖化酶;葡萄糖淀粉酶则从淀粉的非还原端每次切下一个葡萄糖。
淀粉酶产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原,生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。
可以用麦芽糖制作标准曲线,用比色法测定淀粉生成的还原糖的量,以单位重量样品在一定时间内生成的还原糖的量表示酶活力。
几乎所有植物中都存在有淀粉酶,特别是萌发后的禾谷类种子淀粉酶活性最强,主要是α-和β-淀粉酶。
Α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下迅速钝化;而β-淀粉酶不耐热,在70℃15min则被钝化。
根据它们的这种特性,在测定时钝化其中之一,就可测出另一个的活力。
本实验采用加热钝化β-淀粉酶测出α-淀粉酶的活力,再与非钝化条件下测定的总活力(α+β)比较,求出β-淀粉酶的活力。
二、材料、仪器设备及试剂(一)材料:萌发的小麦种子(芽长约1cm)。
(二)仪器设备:1. 分光光度计;2. 离心机;3. 恒温水浴(37℃,70℃,100℃);4.具塞刻度试管;5. 刻度吸管;6. 容量瓶。
(三)试剂(均为分析纯):1. 标准麦芽糖溶液(1mg/ml):精确称取100mg麦芽糖,用蒸馏水溶解并定容至100ml;2. 3,5-二硝基水杨酸试剂:精确称取1g3,5-二硝基水杨酸,溶于20ml2mol/L NaOH溶液中,加入50ml蒸馏水,再加入30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水定容至100ml。
盖紧瓶塞,勿使CO2进入。
若溶液混浊可过滤后使用;3.01mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液(0.1mol/L 柠檬酸):称取C6H8O7.H2O 21.01g,用蒸馏水溶解并定容至1L;B液(0.1mol/L 柠檬酸钠):称取Na3C6H5O7.2H2O 29.41g,用蒸馏水溶解并定容至1L。
淀粉酶活力的测定方法
淀粉酶活力的测定方法淀粉酶是一种能够降解淀粉的酶类。
测定淀粉酶活力的方法主要有光密度法、滴定法、浊度法、电极法等。
下面将详细介绍这几种方法。
一、光密度法光密度法是利用淀粉酶在一定温度和pH值条件下降解淀粉产生的葡萄糖,与p-二硫化苯胺生成的被称为多脱氧萘酚蓝的有色物质在特定波长下的吸光度变化来测定淀粉酶活力。
测定步骤:1. 准备试剂:液体缓冲液、淀粉溶液、pH 7.0缓冲液、2%~4%淀粉溶液、0.1% p-二硫化苯胺、1%酶液。
2. 在试管中加入2 mL pH 7.0缓冲液、2 mL 2%~4%淀粉溶液和1 mL 酶液,置于37恒温槽中培养10分钟。
3. 取出试管后,立即加入5 mL p-二硫化苯胺试剂和1 mL液体缓冲液,混匀后,放置15分钟使产生的多脱氧萘酚蓝发色充分。
4. 测定吸光度:使用特定波长的光源(通常为540 nm)对反应液进行吸光度测定。
5. 用纯水代替酶液重复上述步骤,结果作为对照组。
6. 计算淀粉酶活力:对照组的吸光度减去实验组的吸光度,乘以吸光度系数K (由标准淀粉酶活力校准得出),即可得出淀粉酶的活力。
二、滴定法滴定法是通过滴定试剂滴定淀粉酶产生的葡萄糖来测定淀粉酶活力的方法。
测定步骤:1. 准备试剂:碘滴定剂(0.02 mol/L碘酸钾,0.2 mol/L硫酸),0.1 mol/L氢氧化钠溶液,0.1%淀粉溶液。
2. 取一定量的淀粉酶加入试管中。
3. 预热培养:将试管放置于37水浴中预热,约5分钟。
4. 添加滴定剂:将试管中的淀粉加入10 mL淀粉溶液中,迅速搅拌。
5. 滴定:在反应时加入少量滴定剂,然后滴定到反应性红色消失的那一点为止。
6. 计算淀粉酶活力:滴定所使用的硫酸溶液的体积与滴定所使用的碘滴定剂的体积之间的比值即为滴定效价,根据滴定效价计算淀粉酶的活力。
三、浊度法浊度法是通过测定淀粉酶降解淀粉导致溶液浑浊度变化来测定淀粉酶活力的方法。
测定步骤:1. 准备试剂:0.1 mol/L淀粉溶液,0.1 mol/L缓冲液,1%淀粉酶溶液。
淀粉酶活性的测定实验报告
淀粉酶活性的测定实验报告淀粉酶活性的测定实验报告引言淀粉酶是一种重要的酶类,能够催化淀粉的降解为葡萄糖。
淀粉酶活性的测定对于了解酶的特性以及其在生物化学过程中的作用具有重要意义。
本实验旨在通过测定淀粉酶的活性,探究其受到不同因素的影响,为进一步研究酶的功能提供基础数据。
材料与方法1. 实验材料:淀粉酶溶液、淀粉溶液、缓冲液、I2-KI试剂、洗涤液。
2. 实验仪器:比色皿、移液管、离心机、恒温水浴。
实验步骤:1. 预热水浴至37°C。
2. 准备不同浓度的淀粉溶液(0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%),并分别加入比色皿中。
3. 向每个比色皿中加入相同体积的淀粉酶溶液,混匀后立即放入预热的水浴中。
4. 在反应开始后的不同时间点(如0、5、10、15、20分钟),取出一个比色皿,立即加入I2-KI试剂,形成蓝色淀粉-碘复合物。
5. 使用比色计测定各比色皿中的吸光度,并记录下实验数据。
6. 重复实验步骤2-5,以获得可靠的结果。
结果与讨论通过实验测定得到各个时间点下不同淀粉浓度的吸光度值,进而计算出淀粉酶的活性。
实验结果显示,随着淀粉浓度的增加,淀粉酶的活性也随之增加。
这是因为淀粉浓度的增加会提供更多的底物供淀粉酶催化反应,从而增加反应速率。
然而,当淀粉浓度超过一定范围时,淀粉酶的活性开始饱和,即使再增加淀粉浓度,反应速率也不再显著增加。
此外,实验结果还显示,随着反应时间的增加,淀粉酶的活性逐渐增加,但增加速率逐渐减缓。
这是因为淀粉酶需要一定的时间来结合底物,并催化反应发生。
随着反应进行,底物逐渐减少,淀粉酶与底物的结合也变得更加困难,从而导致反应速率的下降。
此外,实验还可以探究其他因素对淀粉酶活性的影响,如温度、pH值等。
通过调节这些因素,可以进一步了解淀粉酶的特性以及其在生物体内的作用机制。
结论通过本实验的测定,我们得出了淀粉酶活性与淀粉浓度和反应时间的关系。
实验结果表明,淀粉酶活性随着淀粉浓度的增加而增加,并随着反应时间的增加而逐渐饱和。
淀粉酶活力的测定
收集1管的同学,将0.05 mL稀释到15 mL 收集2管的同学,将0.05 mL稀释到10 mL
1、分别计算0时刻、5 min时刻的A540nm平均值。 2、根据图表中的实验结果,并利用实验 “3,5-二
硝基水杨酸比色法测定糖的含量”中制作的标准 曲线,计算淀粉酶的活力。
需要详细过程。
5 min时刻吸光值
5 min时刻还原糖mg数
0 min时刻吸光值
0 min时刻还原糖mg数
二者相减,计算酶活力。 1 U=1 mg 还原糖/min·mL 酶*稀释倍数
七. 思考题
1、在测定酶活力时应注意哪些反应条件?为什么? 2、本实验中两次加入NaOH溶液的意义是什么?
八、分析
1.三种酶活力大小顺序是怎样,为什么是这样? 2.酶液的稀释倍数是否要改变。 3.计算酶液的总活力、回收率。
操作
0号管 0时刻 5min时刻 0时刻 5min时刻 0时刻 5min时刻 B1 B1’ F1 F1’ B2 B2’ F2 F2’ B3 B3’ F3 F3’
淀粉酶液 (ml)
0.3
0.2
0.5
H2O (ml) 3.5 pH 6.8缓冲液 0.3 % NaCl
预热
各 1 ml 各 1 ml 摇匀, 37 ℃ 水浴 2 min
实验七 淀粉酶活力的测定
一、实验目的
掌握测定淀粉酶活力的原理和基本方法
二、实验原理
淀粉酶活性的测定
淀粉酶活性的测定
1、实验试剂:
(1)1%淀粉磷酸缓冲液称取1.0g的可溶性淀粉,加热溶于磷酸缓冲液,冷却后定容至100ml
(2)磷酸缓冲液(ph6.9)称取0.712g Na2HPO4.2H2O 和0.07nacl溶于150ml 的蒸馏水,用浓正磷酸将ph调制6.9,并用蒸馏水定容至200ml.
(3)2mol/l的NaOH溶液称取8g的NaOH溶于蒸馏水,100ml容量瓶定容. (4)显色剂称取1.0g的3,5二硝基水杨酸滴入少许蒸馏水,20ml的NaOH (2mol/l),溶解后取30.0g的酒石酸钾钠溶于该溶液,然后用蒸馏水定容至100ml (5)麦芽糖溶液称取180mg一水麦芽糖溶于蒸馏水,定容至100ml.
2、实验仪器:.
容量瓶:100ml(5)200(1)
烧杯:100ml(6)500ml (1)
移液管:10ml(2)1ml(3)
试管:若干
3、实验步骤:
(1)不同酶量
(2)平行实验(酶量30ul)。
淀粉酶活性测定实验报告
淀粉酶活性测定实验报告淀粉酶活性测定实验报告引言:淀粉酶是一种重要的酶类,它在生物体内起着关键的消化和代谢作用。
淀粉酶能够将淀粉降解为较小的分子,以供生物体吸收和利用。
因此,测定淀粉酶的活性对于了解生物体的消化系统以及酶的功能机制具有重要意义。
本实验旨在通过测定淀粉酶的活性,探究其在不同条件下的变化规律,从而加深对淀粉酶的认识。
材料与方法:1. 实验器材:试管、移液管、恒温水浴、分光光度计。
2. 实验试剂:淀粉溶液、淀粉酶溶液、碘液、磷酸盐缓冲液。
3. 实验步骤:a. 准备一系列稀释淀粉酶溶液,分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL。
b. 取一定量的淀粉溶液置于试管中,加入相应浓度的淀粉酶溶液,混匀。
c. 将试管置于恒温水浴中,保持温度在37°C,反应10分钟。
d. 在反应结束后,加入适量的磷酸盐缓冲液停止反应。
e. 加入适量的碘液,使溶液变为蓝黑色。
f. 使用分光光度计测定溶液的吸光度,记录下吸光度值。
g. 重复以上步骤,分别测定其他浓度的淀粉酶溶液。
结果与讨论:通过实验测定,我们得到了不同浓度淀粉酶溶液的吸光度值,并以吸光度值作为淀粉酶活性的指标。
根据实验结果,我们可以得出以下结论:1. 淀粉酶活性与浓度呈正相关关系:实验结果显示,随着淀粉酶溶液浓度的增加,吸光度值也随之增加。
这表明淀粉酶的活性与其浓度呈正相关关系。
当淀粉酶溶液浓度较低时,其活性较弱,无法有效降解淀粉;而当浓度增加时,淀粉酶活性也相应增强,能够更快速地将淀粉降解为较小的分子。
2. 淀粉酶活性受温度影响较大:实验中将反应温度保持在37°C,这是因为淀粉酶在人体内的最适温度为37°C。
然而,当温度偏离最适温度时,淀粉酶的活性会受到显著影响。
过高或过低的温度都会导致淀粉酶的构象变化,从而影响其催化效率。
因此,合适的温度对于淀粉酶的活性至关重要。
3. 淀粉酶活性受pH值影响:酶活性与pH值之间存在一定的关系。
检测淀粉酶活性的方法
检测淀粉酶活性的方法
淀粉酶活性可以使用多种方法来检测,常用的有以下几种:
1.比色法:使用酶活性与颜色变化有关的试剂,如
比色剂,来检测淀粉酶活性。
2.电位检测法:使用电位计来直接测量酶酶解淀粉
过程中产生的电流。
3.磷酸酶试剂盒法:使用含有磷酸的试剂盒,在酶
解淀粉过程中产生的磷酸可以通过酶解磷酸酶来酶消耗,由此反映淀粉酶活性。
4.放射性检测法: 淀粉酶将淀粉分解成葡萄糖,葡
萄糖可以通过磷酸甘油酶合成磷酸甘油,这种合成过程中产生的14C碳可以通过放射性计数来检测淀粉酶活性。
这些方法都有其特点和适用范围,需要根据实验需求来选择最合适的方法。
1.比色法是最常见的检测淀粉酶活性的方法之一,
它通过酶解淀粉产生的葡萄糖或其他物质的颜色变化来检测淀粉酶活性。
常用的比色剂有银离子试剂、染料试剂等。
2.电位检测法是一种直接测量淀粉酶活性的方法,
它通过测量酶解淀粉产生的电流来检测淀粉酶活性。
3.磷酸酶试剂盒法是通过检测淀粉酶酶解淀粉产生
磷酸,再由磷酸酶进行消耗来反映淀粉酶活性。
4.放射性检测法是一种特殊的检测方法,它使用含
有放射性碳的淀粉或磷酸甘油试剂,通过检测放射性碳的计数变化来检测淀粉酶活性。
这些方法都有其优缺点,选择其中一种方法需要根据实验需求和条件来确定,如实验灵敏度、试剂成本、操作难度等因素。
淀粉酶活性测定
淀粉酶活性测定淀粉酶是一种非常重要的酶类,是一种负责水解淀粉质的消化酶。
淀粉酶活性测定可以用于评价淀粉酶的水解能力和功能,有助于监测动物体内的淀粉酶活性水平,以及在食品、农业、医学等方面的应用。
在此文中,我们将详细介绍淀粉酶活性测定的方法、原理、重要性等相关知识。
1、Iodine-starch法此方法是基于淀粉直接加热与淀粉酶水解后不同的化学反应。
淀粉水解后的葡萄糖分子,会使加入碘化钾后的淀粉溶液变成淡黄色或透明状态,因而用这种方法来测定淀粉酶活性。
操作步骤:(1)将淀粉溶液分配到不同的试管中,并分别加入一定量的淀粉酶和缓冲液;(2)将试管随之放入水浴器中,在一定的温度下反应一定时间后;(3)将反应好的样品加入适量的碘化钾溶液,混合均匀;(4)观察样品颜色的变化与对照样品进行比较。
淀粉酶活性越强,颜色变化越明显。
2、DNS法(3,5-dinitrosalicylic acid)此法是由3,5-二硝基水杨酸和淀粉水解后形成的糖类反应,也是一种将淀粉水解后产生的葡萄糖利用于测定淀粉酶活性的方法。
(3)在沸水中进行加热封闭处理,使淀粉酶反应后产生的糖分子与DNS反应生成产物,颜色变化呈红色。
淀粉直接加热会发生硫酸化反应,而加入淀粉酶水解后,形成的产物降解了银离子和碘化物的复合物,导致样品中碘的浓度下降,进而改变样品的颜色。
2、DNS法淀粉酶活性水平是衡量动物消化能力的重要指标之一,同时,则涉及到食品、中药、农业等领域相关工作的研究。
用于测定淀粉酶活性,在动物营养研究和饲料生产中具有广泛的应用。
在动物营养领域中,淀粉酶活性测定可以用来评价不同饲料淀粉的消化能力和饲料营养价值,甚至可以评价不同品种和不同饲料来源的淀粉酶活性差异。
在饲料生产方面,淀粉酶活性测定有助于优化饲料制造流程和配方,从而提高生产效率和经济效益。
此外,在工业领域,淀粉酶的活性测定也具有重要的应用价值。
例如,在酿酒过程中,淀粉酶活性的测定可以使发酵操作更加稳定和高效。
测定淀粉酶活性实验报告
一、实验目的1. 了解淀粉酶的生物学特性及其在生物体内的作用。
2. 掌握淀粉酶活性的测定方法。
3. 分析淀粉酶活性受温度、pH值等因素的影响。
二、实验原理淀粉酶是一种水解淀粉的酶,可以将淀粉分解为麦芽糖和葡萄糖。
淀粉酶活性是指单位时间内淀粉酶催化淀粉分解的速率。
本实验采用DNS法测定淀粉酶活性,DNS 法是一种灵敏、准确、精确度高的测定方法,适用于测定小样品淀粉酶活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:淀粉酶、淀粉、DNS试剂、标准葡萄糖溶液、pH缓冲液、蒸馏水、试管、恒温水浴锅、移液器、量筒、滴定管等。
2. 实验仪器:pH计、电子天平、电子显微镜、分光光度计等。
四、实验步骤1. 配制淀粉酶溶液:称取适量淀粉酶,用蒸馏水溶解,配制成一定浓度的淀粉酶溶液。
2. 配制淀粉溶液:称取适量淀粉,用蒸馏水溶解,配制成一定浓度的淀粉溶液。
3. 测定淀粉酶活性:取一定量的淀粉溶液于试管中,加入适量淀粉酶溶液,置于恒温水浴锅中,在一定温度下反应一定时间。
4. 测定DNS反应液:取一定量的反应液,加入DNS试剂,置于沸水浴中反应一定时间。
5. 比色:用分光光度计在特定波长下测定DNS反应液的吸光度。
6. 计算淀粉酶活性:根据标准葡萄糖溶液的吸光度值,绘制标准曲线,计算反应液中葡萄糖的浓度,进而计算淀粉酶活性。
五、结果与分析1. 淀粉酶活性随温度升高而增加,在一定温度范围内达到最大值,之后随温度升高而降低。
2. 淀粉酶活性随pH值升高而增加,在一定pH范围内达到最大值,之后随pH值升高而降低。
3. 淀粉酶活性受激活剂和抑制剂的影响,其中激活剂可以增强淀粉酶活性,抑制剂可以抑制淀粉酶活性。
六、实验结论1. 淀粉酶是一种水解淀粉的酶,在生物体内具有重要作用。
2. DNS法是一种灵敏、准确、精确度高的测定淀粉酶活性的方法。
3. 淀粉酶活性受温度、pH值、激活剂和抑制剂等因素的影响。
七、实验讨论1. 实验过程中,淀粉酶溶液和淀粉溶液的浓度对实验结果有较大影响,需要严格控制浓度。
淀粉酶活性测定实验报告
一、实验目的1. 了解淀粉酶的生物学特性及其在生物体内的重要作用;2. 掌握淀粉酶活性测定的原理和方法;3. 通过实验,探究温度、pH值等因素对淀粉酶活性的影响。
二、实验原理淀粉酶是一种能够水解淀粉的酶,其活性高低可以反映酶的催化能力。
本实验采用DNS 法测定淀粉酶活性,DNS 法是利用淀粉酶催化淀粉水解生成还原糖,还原糖与DNS 试剂发生反应,产生黄色化合物,通过比色法测定还原糖的浓度,从而间接反映淀粉酶的活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:- 淀粉酶(市售)- 淀粉溶液- DNS 试剂- 碘液- 酚酞指示剂- 蒸馏水- pH 试纸- 温度计2. 实验仪器:- 721分光光度计- 磁力搅拌器- 电子天平- 试管- 移液器四、实验步骤1. 配制淀粉酶溶液:将市售淀粉酶按照说明书配制一定浓度的淀粉酶溶液。
2. 设置实验组:- 温度实验组:分别设置30℃、40℃、50℃、60℃、70℃ 的温度梯度,每组加入相同量的淀粉酶溶液和淀粉溶液,搅拌反应 10 分钟。
- pH 值实验组:分别设置 pH 3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0 的 pH 值梯度,每组加入相同量的淀粉酶溶液和淀粉溶液,搅拌反应 10 分钟。
3. DNS 反应:- 取反应后的溶液,加入 DNS 试剂,沸水浴加热 5 分钟。
- 取出后,加入 1 滴酚酞指示剂,继续沸水浴加热 5 分钟。
4. 比色:- 使用 721 分光光度计在 540 nm 波长下测定溶液的吸光度值。
5. 数据处理:- 根据标准曲线,计算各组反应生成的还原糖浓度。
- 比较各组实验结果,分析温度、pH 值等因素对淀粉酶活性的影响。
五、实验结果与分析1. 温度对淀粉酶活性的影响:- 从实验结果可以看出,淀粉酶活性随着温度的升高而增加,在60℃ 时达到峰值,之后随着温度的继续升高,淀粉酶活性逐渐降低。
2. pH 值对淀粉酶活性的影响:- 从实验结果可以看出,淀粉酶活性在 pH 6.0 时达到峰值,之后随着 pH 值的继续升高或降低,淀粉酶活性逐渐降低。
淀粉酶活性测定实验报告
淀粉酶活性测定实验报告2 淀粉酶活性测定实验报告一、实验目的1. 学习使用淀粉酶活性测定方法来评估淀粉酶的活性。
2. 了解淀粉酶在不同条件下的活性变化规律。
3. 探究影响淀粉酶活性的因素。
二、实验原理淀粉酶是一种水解淀粉的酶,可将淀粉水解为糖。
淀粉酶活性的测定方法是通过测定淀粉酶作用下淀粉水解产生的糖的含量来评估淀粉酶的活性。
实验中使用碘液来检测淀粉的含量,通过比色法测定样品中碘与淀粉结合生成的淀粉-碘复合物的光吸收值,进而计算淀粉酶的活性。
三、实验步骤1. 准备工作(1)将淀粉酶溶液和淀粉溶液放置在室温下适应30分钟。
(2)调整分光光度计波长为550nm。
(3)用0.1mol/L HCl稀释0.1mol/L NaOH。
2. 样品处理(1)分别取10ml淀粉酶溶液和10ml淀粉溶液分别放入两个试管中作为对照组。
(2)取10ml淀粉酶溶液和10ml淀粉溶液混合放入一个试管中作为实验组。
(3)将试管放入37℃恒温水浴中反应10分钟。
3. 反应终止(1)将样品分别取出,加入5ml稀释后的HCl。
(2)用1%淀粉溶液稀释碘液。
(3)向每个试管中加入1ml稀释后的碘液。
4. 比色测定(1)将试管放入分光光度计中,设置波长为550nm。
(2)调零分光光度计,记录对照组和实验组的吸光度值。
5. 计算淀粉酶活性(1)计算对照组的吸光度平均值,并减去实验组的吸光度值。
(2)根据标准曲线,计算实验组中淀粉的含量。
(3)根据淀粉-碘复合物生成的酶解糖的量,计算淀粉酶的活性。
四、实验结果对照组吸光度平均值为0.3,实验组吸光度值为0.6,经过计算,实验组中淀粉的含量为2mg。
根据淀粉-碘复合物生成的酶解糖的量,计算得到淀粉酶的活性为20U。
五、实验讨论根据实验结果,淀粉酶的活性为20U。
通过对照组和实验组的吸光度值的比较,可以看出淀粉酶在实验组中得到了激活,使淀粉水解为糖的速度加快。
这表明淀粉酶在37℃的条件下具有较高的活性。
实验七 探索影响淀粉酶活性的条件
2ml
煮沸 1mil
有砖红色沉淀
2ml
煮沸 1mil
无砖红色沉淀
2ml
煮沸 1mil
无砖红色沉淀
实验现象
淀粉遇碘后,形成蓝紫色的复合物。淀粉酶可以 使淀粉逐步水解成麦芽糖和葡萄糖。麦芽糖和葡 萄糖遇碘后,不形成蓝紫色的复合物。麦芽糖和 葡萄糖能够与斐林试剂发生氧化还原反应,生成 砖红色的氧化亚铜沉淀。
1、初步学会探索影响酶活性条件的方法。 2、探索理解淀粉酶在不同的温度和PH催化淀粉 水解的情况。
试管,量筒,大、小烧杯,滴管,试管夹,酒精灯, 三脚架,石棉网,温度计,火柴。 质量分数为2%的新鲜淀粉酶溶液,质量分数为 3%的可溶性淀粉溶液,质量分数为5%的盐酸, 质量分数为5%的氢氧化钠溶液,热水,蒸馏水, 冰块, , 碘液,斐林试剂。
1
2
3
2、加蒸馏水1ml
加NaOH1ml
加HCl1ml
1
2
3
3、各加可溶性淀粉溶液2ml
1
2
3
4、放入60º C热水中
5、加斐林试剂2ml
1
2
3
60º C热水
60º C热水 温度条件保持5min
60º C热水
6、煮沸1min
1 2 3
7、实验现象
1
2
3
二、PH对酶活性的影响 :取三支洁净试管编上号分别按下表中序
取三支洁净试管,编上号,并分别按下表中序 号1至5要求操作。
序 号 1 2 3
项
目
试
管
可溶性淀粉溶液 温度条件 (保持5min) 新鲜淀粉酶溶液 (保持5min)
1 2ml
60º C热水
2 2ml
淀粉酶活力测定实验报告
淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告实验三、淀粉酶活性的测定实验报告实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的:1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义;2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。
二、实验原理:淀粉酶存在于几乎所有植物中,特别是萌发后的禾谷类种子,淀粉酶活力最强,其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。
根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同,α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热,70? 15min 则被钝化。
测定时,使其中一种酶失活,即可测出另一种酶的活性。
淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖,利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸,测定其吸光度,从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。
三、实验用具:1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管,分光光度计,酸度计,电热恒温水浴锅,离心机,电磁炉。
2、实验材料与试剂(1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g,定容至1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g,定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。
(2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液;(3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g,定容至100ml水中,紧盖瓶塞,勿使CO2进入;(4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中;(5)pH 6.8的磷酸缓冲液: 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8,加水稀释至1000ml即得。
(6)0.4mol/L的NaOH溶液;(7)1%NaCl溶液。
(8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm)四、操作步骤1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料,去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液,磨碎后以2000r/min 离心10min,转出上清液备用。
淀粉酶活性测定实验报告
实验七淀粉酶活性的测定一、研究背景及目的酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白,几乎所有的生化反应都离不开酶的催化,所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色,因此对酶的研究有着非常重要的意义。
酶的活力是酶的重要参数,反映的是酶的催化能力,因此测定酶活力是研究酶的基础。
二、实验原理萌发的种子中存在两种淀粉酶,分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶,β-淀粉酶不耐热,在高温下易钝化,而α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6下则发生钝化。
本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性,在高温下(70℃)下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。
酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的,淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖,可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定,由于麦芽糖能将后者还原生成硝基氨基水杨酸的显色基团,将其颜色的深浅与糖的含量成正比,故可求出麦芽糖的含量。
常用单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。
然后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性。
实验中为了消除非酶促反应引起的麦芽糖的生成带来的误差,每组实验都做了相应的对照实验,在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。
在实验中要严格控制温度及时间,以减小误差。
并且在酶的作用过程中,四支测定管及空白管不要混淆。
三、材料、试剂与仪器1、实验材料:萌发的小麦种子(芽长1厘米左右)2、仪器:722光栅分光光度计:DK-S24型电热恒温水浴锅:离心机:3、试剂:①1%淀粉溶液(称取1克可溶性淀粉,加入80ml蒸馏水,加热熔解,冷却后定容至100ml);②pH5.6的柠檬缓冲液:A液(称取柠檬酸20.01克,溶解后定容至1L)B液(称取柠檬酸钠29.41克,溶解后定容至1L)取A液5.5ml、B液14.5ml混匀即为pH5.5柠檬酸缓冲液;③3,5-二硝基水杨酸溶液(称取3,5-二硝基水杨酸1.00克,溶于20ml 1M氢氧化钠中,加入50ml蒸馏水,再加入30克酒石酸钠,待溶解后,用蒸馏水稀释至100ml,盖紧瓶盖保存);④麦芽糖标准液(称取0.100克麦芽糖,溶于少量蒸馏水中,小心移入100ml容量瓶中定容);⑤0.4M NaOH四、实验步骤1. 酶液的制备称取2克萌发的小麦种子与研钵中,加少量石英砂,研磨至匀浆,转移到50ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,混匀后在室温下放置,每隔数分钟振荡一次,提取15-20分钟,于3500转/分离心15分钟,取上清液备用。
淀粉酶活力测定实验报告
淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告引言:淀粉是一种常见的多糖类物质,广泛存在于植物的种子、块茎和根部等部位。
淀粉酶是一类能够催化淀粉水解为糖类的酶,广泛存在于植物、动物和微生物中。
淀粉酶活力的测定对于研究淀粉酶的性质、功能以及酶的催化机制具有重要意义。
本实验旨在通过测定淀粉酶活力的方法,探究淀粉酶的催化作用及其影响因素。
实验材料与方法:材料:1. 淀粉溶液2. 淀粉酶溶液3. 碘液4. 盐酸5. 碘化钾溶液6. 蒸馏水方法:1. 预先制备好一定浓度的淀粉溶液和淀粉酶溶液。
2. 取一定量的淀粉溶液,加入适量的淀粉酶溶液,混匀后放置一段时间。
3. 取适量的混合液,加入盐酸,停止淀粉酶的活性。
4. 加入碘液,使混合液呈现蓝黑色。
5. 用碘化钾溶液滴定至混合液呈现淡黄色,记录滴定所需的碘化钾溶液体积。
6. 重复上述步骤,分别改变淀粉酶的浓度、温度和pH值等条件,进行多组实验。
结果与讨论:通过实验测定,我们得到了不同条件下淀粉酶活力的数据,并进行了分析和讨论。
1. 淀粉酶浓度对活力的影响:在一定温度和pH值下,我们分别取不同浓度的淀粉酶溶液进行实验。
结果显示,淀粉酶活力随着酶浓度的增加而增加,但当酶浓度达到一定程度后,活力的增加趋势趋于平缓。
这说明在一定范围内,淀粉酶活力与酶浓度呈正相关关系。
2. 温度对活力的影响:我们分别在不同温度下进行实验,结果显示,淀粉酶活力随着温度的升高而增加,但当温度超过一定范围后,活力开始下降。
这是因为温度的升高可以增加酶分子的运动速度和碰撞频率,促进酶与底物的结合,从而提高活力。
然而,过高的温度会导致酶分子的构象变化和热失活,从而降低活力。
3. pH值对活力的影响:我们在不同pH值下进行实验,结果显示,淀粉酶活力在一定范围内随着pH值的变化而增加。
这是因为pH值的变化可以改变酶分子的电荷状态和离子化程度,从而影响酶与底物的结合能力和催化效率。
然而,当pH值偏离酶的最适pH值时,酶分子的构象发生改变,导致活力的降低。
生化实验04-淀粉酶活性的测定
生化实验04-淀粉酶活性的测定淀粉酶活性的测定是一种重要的生物化学检测,其基本原理是用淀粉作为底物,利用酶介导的过程,将淀粉水解成低聚糖,并通过苯二酚(Folin-Ciocalteu法)测定反应,形成羟基苯并联二肽,从而可以准确测定淀粉酶活性。
该检测方法的特别之处在于无需半乳糖基转化,能直接检测细胞内活性淀粉酶。
本实验采用淀粉酶活性的测定来反映样品内活性淀粉酶的含量和性质。
实验原理淀粉酶活性的测定主要是利用酶促反应,将淀粉水解成支链水解物,此过程会改变样品中反应物的形态和特性,从而通过苯二酚(Folin-Ciocalteu法)测得淀粉酶的活性。
该反应是将样品与Folin-Ciocalteu反应液混合,使反应液中的苯二酚与水解后的淀粉低聚糖发生反应,形成羟基苯并联二肽,这些二肽经过光度测定能独立出来,最后得到淀粉酶活性的测定结果。
实验步骤1. 准备试剂a) 苯二酚 Folin-Ciocalteu反应液:将250毫升2.5mol/L碳酸钠溶液加入50毫升10mol/L硫酸钠溶液,搅混,然后加入90毫升1mol/L硫酸钾溶液,苯二酚Folin-Ciocalteu反应液准备完毕。
b) 反应系统:放入1.0 ml淀粉溶液,0.2 ml苯二酚Folin-Ciocalteu反应液,0.8 ml缓冲液,搅拌均匀即可。
2.淀粉酶活性的测定:a) 将反应系统中放入多余的样品添加到实验管中,转移到光度仪中进行测定,观察测定结果。
b) 计算淀粉酶活性指数:以质量发射率550nm处的发射峰值为参考标准,按照公式计算淀粉酶活性指数。
应用淀粉酶活性的测定在非植物细胞(如固氮细菌、氨基酸分解的细菌)中也广泛应用。
淀粉水解系统有助于研究和控制细胞内的淀粉合成与消耗,从而洞察活动的工程机制,帮助揭示物质的重要功能以及研究物质之间的相互作用。
由于其易处理,快速,稳定,准确,淀粉酶活性测定技术,广泛应用于药物研究和药物质量控制,生物燃料,环境污染检测,食品检测,生物技术,等等。
淀粉酶活力的测定
淀粉酶活力测定一、实验目的以所筛选出的芽孢杆菌为实验菌株,通过种子扩大培养,选出生长力旺盛的菌株进行液体摇瓶发酵。
通过测定不同发酵时间生产的酶活,来初步估计发酵最佳时期和终点。
通过本实验要掌握测定酶活的方法。
二、实验原理淀粉酶是能够分解淀粉糖苷键的一类酶的总称,包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶和异淀粉酶。
芽孢杆菌主要用来产生α-淀粉酶和异淀粉酶,其中α-淀粉酶又称淀粉1,4-糊精酶,能够切开淀粉链内部的α-1,4-糖苷键,将淀粉水解为麦芽糖、含有6 个葡萄糖单位的寡糖和带有支链的寡糖与DNS试剂共热呈阳性反应,产生红棕色;而异淀粉酶又称淀粉α-1,6-葡萄糖苷酶、分枝酶,此酶作用于支链淀粉分子分枝点处的α-1,6-糖苷键,将支链淀粉的整个侧链切下变成直链淀粉。
通过发酵实验,我们可以以酶活为依据,初步估计发酵的最佳时期和发酵终点。
酶活力也称酶活性,是以酶在最适温度、最适pH等条件下,催化一定的化学反应的初速度来表示。
本实验是以一定量的淀粉酶液,于37°C、pH6.8的条件下,在一定的初始作用时间里将淀粉转化为还原糖,然后通过与DNS试剂作用,比色测定,求得还原糖的生成量,从而计算出酶反应的初速度,即酶的活力。
这里规定,一个淀粉酶活力单位定义为在37°C、pH6.8的条件下,每分钟水解淀粉生成1mg还原糖所需的酶量。
三、实验材料及设备1、筛选出来的产淀粉酶芽孢杆菌。
2、菌种:从商丘师院土壤中分离出的产淀粉酶的芽孢杆菌3、种子培养基:蛋白胨1 % ,酵母浸出物0. 5 % ,氯化钠1 % , pH自然4、发酵培养基:按正交试验所选的最佳方案来配置5、仪器:控温摇床、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、分光光度计、烧杯、玻璃棒、锥形瓶、离心机、刻度试管:25mL×4、容量瓶: 100mL×1、烧杯:250mL×1、滴管 2支、洗耳球2支、洗瓶、试管架、移液管架、移液管、玻棒:各1支四、试剂的配制1、培养基的配制按上述配方称量、溶解、灭菌2、淀粉溶液(0.5%)称取5g可溶性淀粉,溶于1000mL热水中。
淀粉酶活力的测定实验报告
淀粉酶活力的测定实验报告淀粉酶活力的测定实验报告引言:淀粉酶是一种重要的酶类,广泛存在于生物体内。
它能够催化淀粉的水解反应,将淀粉分解为可溶性糖类。
淀粉酶活力的测定对于了解酶的功能和特性具有重要意义。
本实验旨在通过测定淀粉酶活力的方法,探究酶的催化作用以及影响酶活力的因素。
实验材料与方法:材料:- 淀粉溶液- 淀粉酶溶液- 盐酸溶液- 碘液- 试管- 恒温水浴方法:1. 准备一系列浓度不同的淀粉溶液,如0.1%、0.2%、0.3%等。
2. 将试管标记为不同的浓度,并分别加入相应浓度的淀粉溶液。
3. 在每个试管中加入相同体积的淀粉酶溶液,并迅速混合。
4. 将试管放入恒温水浴中,保持恒定的温度。
5. 在一定时间间隔内,取出一定体积的反应液,加入碘液停止反应。
6. 通过比色法测定淀粉的浓度,进而计算淀粉酶的活力。
结果与讨论:实验结果显示,淀粉酶活力随着淀粉溶液浓度的增加而增加。
这是因为淀粉酶需要与淀粉分子结合才能发挥催化作用,高浓度的淀粉溶液提供了更多的底物供给,从而增加了酶的活性。
另外,我们还观察到淀粉酶活力随着反应时间的延长而增加,但在一定时间后趋于稳定。
这是因为酶的活性在反应初期较高,但随着反应进行,底物浓度逐渐减少,酶的活性也会逐渐降低。
此外,实验结果还显示淀粉酶活力受到温度的影响。
在较低温度下,酶的活性较低,而在适宜的温度范围内,酶的活性最高。
然而,当温度过高时,酶会发生变性,活性会显著下降。
结论:通过本实验,我们成功测定了淀粉酶的活力,并探究了影响酶活力的因素。
实验结果表明,淀粉酶活力受到淀粉溶液浓度、反应时间和温度的影响。
深入了解酶的催化作用和特性,有助于我们更好地理解生物体内的代谢过程,并为工业生产中的酶应用提供理论依据。
然而,本实验还存在一些局限性。
首先,我们仅仅测定了淀粉酶活力的影响因素,对于其他酶的活力测定仍需进一步研究。
其次,实验结果受到实验条件和操作的影响,仍需要进一步优化实验方法和控制实验条件。
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石峰
3、绘制标准曲线: 取6支刻度试管,按下表加入各种试剂:
试管号 0 1 2 3 4 5
2014-4-26
麦芽糖标 准液(ml) 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0
蒸馏水 麦芽糖 3,5-二硝基 浓度 (ml) (mg/ml) 水杨酸(ml) 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0
石峰
2ml 40℃预热的淀粉→立即 40℃水浴保温 5min→
取出后迅速向测定管加入4ml 0.4M NaOH;
(4)取对照管和测定管中溶液各2ml,分别加入到刻
度试管中→各加 2ml 3,5- 二硝基水杨酸→沸水浴
5min→冷却→稀释至 20ml 刻度→混匀→ 5 2 0nm 处
比色→记录结果。
2014-4-26
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
混匀各管,在沸水浴中加热5min后取 出冷却,加蒸馏水至20ml刻度。摇匀, 在520nm下比色。最后以麦芽糖的浓度
(mg/ml)为横座标,以光密度为纵座
标,绘制标准曲线。
2014-4-26
石峰
五、实验结果与计算:
2014-4-26 石峰
本实验采用加热法,钝化β-淀粉酶,测定α-淀粉 酶的活性。具体方法是利用3,5-二硝基水杨酸比色 法来测定淀粉酶水解生成的麦芽糖的含量. 酶活性表示:以单位时间淀粉酶分解生成麦芽
糖的毫克数来表示淀粉酶活性的大小。
2014-4-26
石峰
在碱性,加热条件下,还原糖与3,5-二硝基水杨酸 (DNS) 反应,还原糖被氧化成糖酸, DNS被还原为棕红 色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
Please be quiet, 上课了!!
2014-4-26
石峰
实
验
七
α-淀粉酶活性的测定
学时:3
2014-4-26 石峰
一、实验目的:
1、学习并掌握植物体内淀粉酶活性测定 的原理和方法。 2、掌握α,β-两种淀粉酶的理化特性。
2014-4-26
石峰
二、实验原理:
淀粉酶能催化淀粉水解为麦芽糖 , 植物 中淀粉酶有两种,各有其不同的理化特 性,α-淀粉酶耐热不耐酸,70℃加热15min仍 保持其活性 ,pH < 3.6 时钝化;而β- 淀粉酶 耐酸不耐热, 70℃加热15min则钝化,据此钝 化其中之一,即可测出另一种酶的活性。
α-淀粉酶的活性[麦芽糖的毫克数/克鲜重/5分钟]= (A-A′) × C × (V1 / V2) / W A :α-淀粉酶水解淀粉生成麦芽糖的浓度; A′:α-淀粉酶对照管中麦芽糖的浓度; C :酶促反应体积 ;
V1 :酶溶液的总体积 ; V2 :反应所用酶液的体积。 W :样品鲜重
2014-4-26 石峰
六、思考题:
1、分析本实验的误差;
2、植物中两种淀粉酶特性。
2014-44-26
石峰
(4) 3,5-二硝基水杨酸:
(5)麦芽糖标准液(1mg/ml)。
2014-4-26 石峰
四、实验步骤:
1、酶液的制备 :
称取1g萌发的小麦种子 →于研钵中,加
2ml 水研成匀浆→转入离心管→用 15ml 蒸馏
水分三次洗涤研钵→均转入离心管中→用玻
璃 棒 搅 动 5min→ 等 重 → 4000r/min 离 心
3,5-二硝基水杨酸 (DNS)
2014-4-26 石峰
3-氨基-5-硝基水杨酸 (棕红色,A540)
三、实验材料、仪器和试剂:
1、实验材料:萌发的小麦种子 2、仪器:(1)S22-pc可见分光光度计 (2)恒温 水浴锅(3)离心机 (4) 刻度试管 3、试剂:(1)0.4M NaOH标准液 ; (2)0.1M pH=5.6的柠檬酸缓冲液; (3)1%淀粉;
10min→上清夜转入25ml容量瓶→定容.
2014-4-26
石峰
2、α-淀粉酶活性的测定:
(1)取两支试管一支对照,一支测定→ 各加酶液3ml→70℃准确加热15min
→冷却→向对照管加4ml0.4MNaOH;
(2)各管中均加入柠檬酸缓冲液1ml ;
2014-4-26
石峰
( 3 )测定管和对照管放于 40℃水浴 15min→均加入