扩增循环阈值在乙肝病毒核酸室内质控的应用

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乙肝dna定量检测质控行标

乙肝dna定量检测质控行标

乙肝dna定量检测质控行标
乙肝DNA定量检测的质控行标是指用于确保检测结果准确可靠的内部参照物或校正因子。

常用的乙肝DNA定量检测质控行标有以下几种:
1. 标准曲线法:通过制备一系列已知浓度的乙肝DNA 标准品,构建标准曲线。

然后将待测样品的乙肝DNA浓度与标准曲线进行比对,从而确定其浓度。

2. 外源引物法:引入一个外源的DNA序列作为内部参照,与待测样品中的乙肝DNA一起扩增。

通过比较外源引物的扩增效率和乙肝DNA的扩增效率,计算出乙肝DNA的浓度。

3. 内部控制法:在PCR反应中加入一个内部控制(IC),它与待测样品一起扩增。

这个内部控制可以是一个稳定且数量已知的基因或DNA序列。

通过比较内部控制的扩增效果和乙肝DNA的扩增效果,计算出乙肝DNA的浓度。

以上方法都需要在实验过程中采用合适的技术和试剂来进行准确测量,并且需要严格控制实验条件和标准操作流程,以确保可靠的定量结果。

具体的质控行标选择应根据实
验室设备和试剂的可用性以及实验要求来确定。

HBV-DNA定量检测的室内质控分析

HBV-DNA定量检测的室内质控分析

率可达 90 % 】 .9 J 。长期 以来 , 乙肝的实验室诊断大 多靠抗 原抗 体反 应 来 进 行 定 性 , 来 又发 展 到更 为 后
展, 乙肝 诊断 已 由原 来 的定 性 飞跃 到可 以利 用 P R C
1 材 料 与方法 11 标本来源 . 所 有标 本 均 取 自昆 明医 学 院
李 关兰 , 旭 胡 莹。 杨 , (. 1 大理 学院 附属 医院检验科 , 南 大理 云
2 昆 医附二 院检 验科 , 南 昆 明 . 云
【 摘要 】 目的
6 10 ; 7 0 0
600 ) 5 1 1
采用
探讨实时荧光定量技术在 H V— N B D A定量检测 过程 中的室 内质控 问题 。方法
准确 、 敏度 更 高 的酶 法 。 随 着 捡 验 技 术 的 迅猛 发 第 二附属 医院 的门诊 和住 院病人 。 灵
12 试 剂 .
P R试 剂盒 由深 圳 匹基 公 司提供 , C
技术 检 测 病 毒 载 量 , 与传 统 的 P R技术 相 比 , 时 荧光 P R检 测仪 为 M ot o nt 。 C 实 C jpi nMo i r c o 荧光 定 量技术 具 有 特异 性 高 , 能有 效解 决 P R产物 C 13 方法 严格按试剂盒 的操作说明 , . 待检血 污染 问题 , 而且 自动化程度较高 等特点C s 2 - 。为了 J 清 与试 剂盒 中的质粒标 准 品在 同一条 件下 进行 D A N
参 考 文 献
[ ] 宓庆 梅 , 巍字 , 婉莹, E T 1 施 郝 等. D A依赖性假性血小板 减少症 1
例[ ] 中华检验 医学杂志 , 0 , (0 : 1 . J. 2 4 2 1 )7 9 0 7 [ ] 叶应妩 , 2 王毓三 . 国临床检验操作规程 [ . 全 M] 2版. 南京 : 东南

HBV—DNA定量检测的室内质量控制

HBV—DNA定量检测的室内质量控制
பைடு நூலகம்
70 3 ) 3 0 0
探 讨 HB — NA 定 量检 测 的 室 内质 量控 制 措 施 , 定 可 行 的 室 内质 量 控 制 方 法 。方 法 自制 乙肝 病 毒 栽 量 VD 制 临
为 1 的 室 内质 控 物 , 临 床 标 本 的 同步 处理 检 测进 行 1 0次试 验 , 不 同批 号 试 剂 求 出试 剂 盒 携 带 对 照 样 本 、 准 曲 线 O 与 0 按 标
有 效 的 室 内质 量 控 制 措 施 。
关键 词 : 内质 量控 制 ; 室 标准差 ; 变异 系数
中图分类 号 : 4 . 9 文献 标志码 : R4 6 6 A
文章编 号 :6 17 1 (0 0 0 — 5 "3 1 7— 4 4 2 1 ) 31 20
d i 1 . 9 9 j is . 6 1 7 1 . 0 0 0 . 5 o : 0 3 6 / .sn 1 7 — 4 4 2 1 . 3 0 6
Ab ta t Ob etv Tosu yt eme s r fitr a u n iyc n r l(QC)o e V— sr c . jcie t d h a u eo en l a tt o to I n q v rHB DNA u n iaied tcint e q a ttt eeto od — v
在 0 0 66 O 1 4 6 2 2 ~ 5 1 , . 1 ~ 1 1 5 . 7 ~ . 7 和 . 4 . 7 08 9 4 . 1 8和 1 7 ~ 3 O 。 内质 控 物 在 不 同批 号试 剂 同 的标 准差 和 .9 .6 室
变异 _ 范 围 分 别 在 0 1 52 . 3 系数 . 9 ~O 4 65和 3 1 ~7 6 , 批 次 正 常 累加 计 算标 准 差 和 变异 系数 为 0 37和 6 5 。 .2 .2 五 .8 .5 结 论 对 H V- B DNA 定 量 检 测 实行 试 剂 盒 的 有 效性 、 准 曲线 的有 效性 和 室 内质 控 物 是 否 在 控 三个 层 次 的 质 量控 制 是 最 标

PCR室内质控数据图Excel

PCR室内质控数据图Excel
XXX医院检验科PCR室来自内质控总结报告13S 10X
为失控限
且小于累积变异系数9.83%,本月质控数据较为集中且稳定,所以变异系数小.描点数据有正有负,接上月分析,无趋势。
质控负责人: 室主管: 主任: 备注: 1.用结果的对数值来计算标准差和变异系数 2.描点值的计算公式为(结果的对数值-累积质控均值)/累积标准差,以±2SD为告警限,±3SD为失控线
表格编号:CCL-ZYT-FZSW-023-01 靶值 2.14E+03 试剂厂家 达安基因 试剂批号 2013004 质控名称 HBV临界值质控 质控批号 2012004 质控来源 自制血清 9.94% 累积均值 3.22 累积标准差 0.32 累积变异系数 起止日期 2013年11月1日至2013年11月30日 日期 结果 对数值 描点值 低值HBV-DNA室内质控图 3 11.1 8.65E+03 3.94 2.24 11.2 #NUM! #NUM! 2 11.3 #NUM! #NUM! 1 11.5 #NUM! #NUM! 标 标 0 准 准 11.6 #NUM! #NUM! 差 差 1 0 22 2 23 3 2 4334 5 4 5 64 3 76 5 5 8 7 49 6 8 610 7 11 9 7 5 12 10 8 13 8 11 14 9 12 6 9 10 15 13 16 10 717 14 11 18 15 11 12 19 81620 1213 17 21 13 9 22 18 14 23 19 14 15 24 10 2025 15 16 21 26 22 16 27 11 17 1 11.7 #NUM! #NUM! -1 11.8 #NUM! #NUM! -2 11.12 #NUM! #NUM! 次数 -3 次数 11.13 #NUM! #NUM! 11.14 #NUM! #NUM! 12S 11.15 #NUM! #NUM! 质控规则: 为告警限 11.19 #NUM! #NUM! 11.19 #NUM! #NUM! 当连续10次检测值在均值的同一测时为失控。 11.20 #NUM! #NUM! 本月标准差: #NUM! 11.21 #NUM! #NUM! 本月均值: #NUM! 11.22 #NUM! #NUM! 本月变异系数: 7.26% 11.23 #NUM! #NUM! 11.26 #NUM! #NUM! 11.27 #NUM! #NUM! 11.28 #NUM! #NUM! 11.28 #NUM! #NUM! 11.30 #NUM! #NUM! 评价: 本月共有19个质控点,其中19个点在2SD之内,占100%,本月无失控点。本月变异系数7.26%与上月8.6%相比较小,

乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书

乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书

乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书-模板1.目的采用PCR技术、实时荧光探针技术,用于临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸的定量检测,或用于乙型肝炎的辅助诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察。

2.范围适用于乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)定量检测(PCR-荧光探针法)。

3.职责3.1操作人员:负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。

3.2专业组组长:负责本组耗材的请购,监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。

3.3实验室主任:负责监督和指导实验室各方面工作。

4.原理采用荧光PCR技术,以HBV基因组中相对保守区为靶区域,设计特异性引物及荧光探针,在样品核酸纯化之后,通过荧光定量PCR对HBV DNA进行扩增,并检测荧光信号,仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线,根据阈循环值(CT)实现对未知样品的检测。

另外,本试剂盒带有内标物质,用于对核酸提取的整个过程进行监控,减少假阴性结果的出现。

5.样品要求5.1适用样品类型:血清或血浆。

5.2样品采集:5.2.1血清用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2:^,注入无菌的真空采血管中(未加抗凝剂),室温(22-25℃)放置30-60min血标本可自发完全凝集析出血清,或直接使用水平离心机,1500rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5ml灭菌离心管。

5.2.2血浆用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml,注入含EDTA (乙二胺四乙酸二钠)抗凝剂的真空采血管,立即轻轻颠倒混匀5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后分离血浆于无菌的1.5ml 灭菌离心管。

5.3样品保存和运送使用专用样品0c冰壶送检,温度约维持在4℃左右。

分离后的血清或血浆可立即用于测试,也可以保存于-20℃待测,保存期为6个月。

5.4拒收样品:拒绝重度溶血样品、肝素抗凝的血浆。

6.仪器和试剂6.1仪器AB7500核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。

实时荧光核酸恒温扩增试验和定量反转录-聚合酶链反应对血清乙型肝炎病毒RNA定量检测的一致性评价

实时荧光核酸恒温扩增试验和定量反转录-聚合酶链反应对血清乙型肝炎病毒RNA定量检测的一致性评价

.158-微F物与感染Journal of Microbes and Infctons#June25,2020,15(3):158-165http:/i .cddoi:10.3969/j.issn.1673-6184.2020.03.004•论著・实时荧光核酸恒温扩增试验和定量反转录-聚合酶链反应对血清乙型肝炎病毒RNA定量检测的一致性评价黄晨璐1,许伟1,胡乾坤1,张小楠1,李强1,黄玉仙12,陈良11.复旦大学附属公共卫生临床中心,上海201508;2.复旦大学附属华山医院感染科,上海200040摘要:为评价实时荧光核酸恒温扩增试验(simultaneous amplification testing,SAT)与定量反转录-聚合酶链反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测血清样本中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)RNA的相关性与一致性,本研究收集了在复旦大学附属公共卫生临床中心就诊的212例患者的血清样本,其中慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者HBV DNA(100IU/mL81例、HBV DNA V100IU/mL76例,以及作为对照的非HBV感染患者55例。

采用SAT和qRT-PCR方法分别检测所有血清样本中的HBV RNA,对检测结果进行统计学分析。

在HBV DNA(100IU/mL的CHB患者中,SAT和qRT-PCR的HBV RNA阳性检出率均为95.06%(77/81)*2种方法具有较好的相关性与一致性(R2=0.803和CCC=0.882)。

Bland Altman分析显示绝对偏倚为0.1log copies/mL,相对偏倚为0.97%。

配对t检验显示,结果无统计学差异(t=1.617,P=0.110)。

在HBV DNA V100IU/mL的CHB患者血清样本中,HBV RNA阳性检出率不同,SAT为98.68%(75/76),qRT-PCR为8&16%(67/76),2种方法相关性与一致性较差(R2=0.326和CCC=0.438)。

PCR室内质量控制标准操作程序

PCR室内质量控制标准操作程序

PCR室内质量控制标准操作程序1.目的:随时了解并控制实验室检测的精密度变化。

2.适用范围:核酸扩增荧光定量检测实验室。

3.负责人:操作人:4.程序:4.1血清质量控制品制备及操作4.1.1质控品制备:收集本室检测的临床样本,HBV DNA定量为106copies/ml的样本混匀,并分装于0.5ml的离心管中,每支110µl,编号后(如Qb0201-n),-20℃保存。

4.1.2 操作:每次检测过程中将此分装的室内质控品与样本同时检测,记录此标本的检测结果;计算前10次检测结果的平均值作为本批质控品的靶值。

4.1.3如果使用商品化的质控品,按4.1.2要求执行。

4.2 室内质控图的使用方法4.2.1 描点a)图中X线为靶线,X±2s为警告线,X±3s为失控线。

对于同一批号的质控血清不论使用几个月,其空图均不变化。

只要将图纸上方“起止日期”项填入每个月的实际起止日期即可。

b)每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。

将日期、检测结果和操作者如实记录在图下方的相应位置,并按前面的方法画出图上的对应点,用直线将该点与前一天的点连接。

c)月底计算当月全部质控血清检测结果的X、s和CV,并进行图形分析和小结,将质量控制图存入质控资料档案。

4.2.2 图形分析a)如果在X±3s线以外,则为失控,应立即报告有关负责人,迅速查找原因。

必要时复测标本,然后方可发出报告,并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。

b)如果在X±2s线以外,或出现连续6点以上在一侧等规律变化,均应即使向有关负责人反映,并积极查找原因。

但当天的检验结果一般可以发出。

4.2.3 通过观察图形的规律性变化进行误差分析,消除误差来源a)曲线漂移:提示有系统误差,准确度发生了一次性的向上或向下改变。

这种变化往往是由于一个新的情况引起的。

如更换不同批号试剂,启用新批号的质控血清、操作人员的变换等。

定量PCR HBV DNA室间质量评价可接受范围的探讨

定量PCR HBV DNA室间质量评价可接受范围的探讨

值表示 ) 比较 ,1 、15差值均超过了 04 4个不同浓度样本其 s C 均超过了允许总误差为 04时的 5 C 。 14 14 .; 和 V . 和 V
3种评价方式评价实验室成绩合格率分别为 10 、82 、 . %。结论 0 % 8 .% 6 7 4 采用组均值 4 s - 为定量 P R B N 3 C H VD A 室问质量评价的可接受范 围更合理 , 更能真实地反 映和监控实验室检测能力。
关键词 : 乙型 肝 炎 病 毒 ; N 聚 合 酶 链 反 应 ; 间 质量 评 价 ; 接 受 范 围 D A; 室 可
I v s ia i n o a c p a l a g f e t r a q a i a s s me t f q a t a i e PCR o n e t t n c e t b e r n e o x e n l u l y s e s n o u n i t g o t t v f r HBV DNA
a n a i u e g n r u s we e c mpa e mo g v ro sr a e tg o p r o rd, r s ciey. The v l o o a t e pe tv l aue f lg r hm - 4 ac lt d fo g o p m e n i 4 0. c l u ae r m r u a vl 3 aue4 s. go me n v l e ± 0.5 o 1 a d es v le ta e b e o a in l tn r s s d o v la e h - r up a au 1 g 0 n t t au s r c a l t n to a sa dads wa u e t e au t t e dee to e u t f ci c ll b r tr . Re uls Th d tci n r s t o lnc l a o a o e a ng ai u ra e t t cin rs ls o l a a o ao y ni s t e ee to e uls f ci ia lb r tr s mo v ro s e g n i r u s h d sgnf a tdfe e c g o p a i i c n ifr n e. Co p r d wih t r a e tg o p,h i m a e t he B e g n r u te A ra e t r up d tc in r s ls f s mp e e g n g o ee to e u t o a l

乙肝dna室内质控控制流程

乙肝dna室内质控控制流程

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【新知解读】二代测序核酸质控环节怎么做?看完就懂!

【新知解读】二代测序核酸质控环节怎么做?看完就懂!

【新知解读】二代测序核酸质控环节怎么做?看完就懂!核酸质控是NGS(Next Generation Sequencing)实验中必不可少的环节,精确的NGS实验结果也离不开合格的核酸质控。

核酸质控主要是评估核酸的浓度,完整性、纯度及片段大小。

核酸样本涉及的下游实验很多,质控不合格会影响实验结果的准确性,甚至得到错误的结论。

NGS实验中使用质量差,如降解程度高的核酸样本建库可能导致文库浓度低,文库复杂度低,甚至文库构建失败等;文库浓度定量不准确可能导致测序实际分配数据量不均,或簇密度波动甚至导致实验失败。

详情可参考往期内容【新知解读】测序失败风险排查——多的是你不知道的事现在市面上主流的核酸质控方法有紫外可见吸收光度法(UV-Vis)(如Nanodrop)、荧光染料法(如Qubit)、琼脂糖凝胶电泳法(如Gel-electrophoresis)、自动化电泳法(如2100 Bioanalyzer)、荧光定量PCR法(如qPCR)等。

如何挑选合适的核酸质控方法来保证NGS实验的顺利进展?相信是小伙伴们十分关注的问题。

不要担心!今天小石头带大家来回顾各种核酸质控方法的原理及应用。

常用的核酸质控方法01紫外可见吸收光度法生物有机分子中的芳香环,具有紫外吸收的特性。

核酸,蛋白质、多肽、芳香基团、苯酚以及碳氢化合物均可吸收紫外光。

核酸在260 nm波长处具有最高吸收峰,蛋白质在280 nm波长处具有最高吸收峰,碳水化合物在230 nm波长处具有最高吸收峰。

根据朗伯-比尔(Beer-Lambert)光吸收定律:当一束平行单色光垂直入射通过均匀、透明的吸光物质的稀溶液时,溶液对光的吸收程度(K)与溶液的浓度(c)及液层厚度(b)的乘积成正比。

即:A=Kbc,式中K为吸光系数;A为吸光度;b为溶液液层厚度(或称光程长度);c为溶液浓度。

一般在260 nm下,1 μg/ml DNA溶液在1 cm光径比色皿中的吸光系数为0.020,1 μg/ml RNA溶液在1 cm光径比色皿中的吸光系数为0.022。

核酸检测考核试题及答案

核酸检测考核试题及答案

核酸检测考核试题及答案1.在对检测系统进行性能核实时,需要进行精密度和准确性实验。

2.基因芯片技术的本质是核酸分子杂交技术。

3.当肺炎患者行有创机械通气时,正确的方法是使用小潮气量和低吸气压力。

4.合成RNA的原料是NTP。

5.个人防护装置是用于防止人员个体受到生物性、化学性或物理性等危险因素伤害的器材和用品。

6.参与杂交反应的已知核酸序列是探针。

7.级A1型和A2型生物安全柜的通风连接是使用套管或伞型罩连接。

8.第三代测序技术的特征是单分子测序。

9.在新冠病毒核酸检测实验室中,净化实验室专用门不是其专有特点。

10.敏感性一一真阳性/真阳性+假阴性*100%是正确的对应关系。

11.目前的DNA自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约为1000bp。

12.分子信标技术的设计并不简单。

13.国内的生物安全实验室必须按照国务院发布的《病原微生物实验室生物安全管理条例》进行管理。

14.从鼻咽拭子中提取的检测的剩余核酸提取物不可用于丙型肝炎病毒的诊断。

15.退火温度是决定PCR反应特异性的关键因素,通常退火温度为Tm减5℃。

16.实验室人员培训的主要内容包括以上所有内容。

17.Taq DNA聚合酶在引物的3-OH末端加入脱氧单核苷酸,形成3',5磷酸二酯键。

18.错误的说法是在孔位不足时,可以将0.5mEP管放入1.5m加热孔中进行热裂解,加热时间不变。

19.脱卸三级防护装备的顺序是:鞋套→护目镜→外层手套→防护服→帽子→内层手套→口罩。

20.进行核酸提取的有效性评价不是临床分子生物学检验分析前质量控制的内容。

21.在核酸检测体系中加入内部质控的作用不仅是监测单项,还包括检测样本吸取错误导致的假阴性结果。

22.生物危害是指各种生物因子对人类健康、环境和社会造成的危害。

29.室间质量评价的目的和作用不包括提高实验室的社会地位。

30.R4s规贝是指一种质控规则,可以指示随机误差造成的失控。

31.性能验证计划应包括验证项目内容、待验证性能指标、验证实施方案和结果判断标准等内容。

荧光定量PCR中基线、阈值、Ct值

荧光定量PCR中基线、阈值、Ct值

荧光定量PCR中基线、阈值、Ct值荧光定量PCR中基线、阈值、Ct值、扩增曲线、熔解曲线等基本概念基线(Baseline):是指在PCR扩增反应的最初数个循环里,荧光信号变化不大。

接近一条直线,这样的直线即是基线。

荧光域值(threshold)的设定:一般将PCR反应前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号,荧光域值是PCR3—15个循环荧光信号标准差的10倍,荧光域值设定在PCR扩增的指数期。

CT值:表示每个PCR反应管内荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。

研究表明,各模板的CT值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,CT值越小。

反之亦然。

利用已知起始拷贝数的标准品可作出标难曲线,其中横坐标代表起始拷贝数的对数。

纵坐标代表CT值。

因此,只要获得未知样品的CT值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。

扩增曲线PCR过程中,以循环数为横坐标,以反应过程中实时荧光强度为纵坐标所做的曲线判断扩增曲线是否良好的指标主要有几个方面:1、曲线拐点清楚,特别是低浓度样本指数期明显,扩增曲线整体平行性好,基线平而无上扬现象,低浓度样本扩增曲线指数期明显。

2、曲线指数期斜率与扩增效率成正比,斜率越大扩增效率越高。

3、标准的基线平直或略微下降,无明显的上扬趋势。

4、各管的扩增曲线平行性好,表明各反应管的扩增效率相近。

熔解曲线对PCR产物加热,随着温度的升高,双链扩增产物逐渐解链,导致荧光强度下降,到达某一温度时,会导致大量的产物解链,荧光急剧下降。

利用该特点以及不同PCR产物其Tm 值的不同,因此使其荧光信号发生迅速下降的温度也不同,可通过此对PCR的特异性进行鉴定。

自制质控品在实时荧光法HBV-DNA定量室内质控中的应用

自制质控品在实时荧光法HBV-DNA定量室内质控中的应用

自制质控品在实时荧光法HBV-DNA定量室内质控中的应用摘要】目的研究实时荧光定量(RT-PCR)检测乙肝病毒核酸(HBV—DNA)时,自制质控品的扩增循环阈值(CT)作为靶值在室内质控中应用的可行性。

方法留取已知HBV—DNA浓度的患者血清和甲、乙、丙、戊肝和HIV血清学标志物全阴性的患者血清,通过一定比例稀释得到预期浓度的质控物,分装并-70℃保存。

分别计算出靶值,标准差和变异系数(OCV%、RCV%),以CT值在±2S为质控警告线±3S为质控失控线,绘制Levey—Jennings质控图。

分析结果质控物最佳条件下的、S和OCV分别为27.5、0.65和2.36%;常规条件下的、S和RCV分别为28.7、0.73和2.54%。

RCV值<2 OCV值,此RCV可以接受。

结论自制质控品的CT值作为靶值应用于RT-PCR法HB—VDNA定量的室内质控中,制图方便,结果准确可靠,可以推广。

【关键词】HBV-DNA 扩增循环阈值室内质控【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2013)51-0159-02实时荧光定量PCR具有特异性强,能有效解决PCR产物污染、自动化程度高等特点。

在临床PCR检验中,通常使用质控样本扩增后的“拷贝数/ml”或“U/ml”来进行质控数据的统计分析[1],但应用起来很不方便,本研究试用自制血清质控品的扩增循环阈值(CT)绘制质控图,研究其在HBV-DNA检测室内质控中的应用价值。

1 材料和方法1.1材料1.1.1质控品来源:质控血清来自抚顺市中心医院门诊和住院患者血清,经乙肝五项和甲、丙、戊肝血清学标志物全阴性的患者血清20人份;已知HBV-DNA检测结果为5.67×106IU/ml的血清样本一份。

以上血清均无肉眼可见的脂血、溶血和黄疸,将其进行56℃30min灭活处理。

1.1.2仪器设备:德国凯杰Rotor-GeneQ实时荧光定量PCR分析仪。

核酸检测考核试题和答案大全

核酸检测考核试题和答案大全

核酸检测考核试题和答案大全(总17页)--本页仅作为文档封面,使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--1.临床实验室若对检测系统进行性能核实,需要进行以下哪组实验(单项该题正确答案:A.精密度、准确2.基因芯片技术的本质是(单项)该题正确答案:A、核酸分子杂交技术3.新型冠状病毒肺炎患者行有创机械通气时,正确的方法是(。

(单项)该题正确答案:D.小潮气量和低吸气压力4.合成RNA的原料是:(单功该题正确答案:C、NTP5.个人防护装置是用于防止人员个体受到生物性、化学性或物理性等()伤害的器材和用品。

(单项该题正确答案:A危险因子6.标记的参与杂交反应的已知核酸序列是(单项该题正确答案探针7.级A1型和A2型生物安全柜的通风连接是使用:(单项该题正确答案A套管“或“伞型罩“连接8.第三代测序技术的特征(单项该题正确答案E、单分子测序9.新冠病毒核酸检测实验室中,不属于净化实验室专用门特点的是:(单项该题正确答案D以上均不是10.以下对应关系正确的是()(单项)该题正确答案:B.敏感性一一真阳性/真阳性+假阴性)*100%11.目前的DNA自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约(单项)该题正确答案 D、1000bp关于分子信标技术的描述,不正确的是(单项该题正确答案E、分子信标设计简单13.国内的生物安全实验室一定要按照国务院发布的()进行管理。

(单项)该题正确答案:A《病原微生物实验室生物安全管理条例》14.从鼻咽拭子中提取的检测新型冠状病毒的剩余核酸提取物不可用于哪种病原体诊断(单项该题正确答案D丙型肝炎病毒15.退火温度是决定PCR反应特异性的关键因素,通常退火温度为()该题正确答案减5℃16.实验室人员培训的主要内容:0(单项该题正确答案E以上都是17.下列关于 Taq DNA聚合酶的描述,正确的是(单项该题正确答案E、在引物的3-OH末端加入脱氧单核苷酸,形成3',5磷酸二酯键18.下列关于恒温金属浴的使用说法错误的是()(单项该题正确答案D孔位不足时,可将管放入加热孔中进行热裂解,加热时间不变。

ct值的名词解释

ct值的名词解释

ct值的名词解释CT值是一种常见的测量指标,被广泛应用于医学、生物学、化学、物理学等领域。

CT值,全称为“Cycle Threshold”,是指在聚合酶链式反应(PCR)中,所需的循环数目,达到目标信号强度的阈值。

本文将对CT值的定义、原理、应用以及相关注意事项进行解释。

一、CT值的定义与原理CT值是PCR技术中的关键参数,用于描述目标序列在反应混合物中的浓度。

在PCR反应中,通过一系列的循环,DNA片段得以不断扩增,产生指数级增加。

每经过一个循环,DNA量翻倍,PCR仪器会检测到此增加并将其表示为荧光信号。

CT值即为扩增目标的特定荧光信号与阈值相交的循环数。

CT值的计算可通过多种方法实现,如传统的阈值法、二次导数最大值法、模型拟合法等。

无论采用何种计算方法,都需要确保CT值的准确性和可重复性。

通常,较低的CT值表示反应物的起始浓度较高,或反应速度较快,而较高的CT值则表示浓度较低或反应速度较慢。

二、CT值的应用1. 病毒检测:CT值在病毒检测中具有重要意义。

例如在COVID-19检测中,通过实时聚合酶链反应(RT-PCR)测量病毒的CT值,即可判断患者是否感染。

一般来说,CT值越低,病毒的浓度越高,感染程度也就越重。

2. 基因表达分析:CT值在基因表达分析中被广泛使用。

通过对不同样本中目标基因的CT值进行比较,可以推断目标基因的表达水平。

通常,CT值越低,目标基因表达水平越高,反之亦然。

这为研究基因调控机制、疾病诊断和药物研发提供了重要依据。

3. 质量控制:CT值可以用作质量控制的指标,确保PCR反应的准确性和可靠性。

通过检测负对照样本的CT值,可以评估实验的无污染性和特异性。

如果负对照样本产生了较低的CT值或有明显阳性信号,说明PCR反应存在污染或非特异性扩增。

三、注意事项1.PCR反应条件的选择:不同样品、不同试剂或不同目标所需的PCR反应条件可能有所不同。

因此,在进行实验时,需根据具体情况调整PCR反应体系、温度、时间等参数,以获得准确可靠的CT值结果。

香港核酸ct值标准

香港核酸ct值标准

香港核酸ct值标准香港核酸CT值标准是指用于衡量新冠病毒检测结果的一个指标,即逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的循环阈值(Cycle Threshold,简称CT 值)。

CT值是指在进行RT-PCR检测时,通过测量反应体系中病毒基因的扩增周期数,来确定样本是否含有病毒。

在香港,核酸检测主要用于新冠病毒的筛查和诊断。

新冠病毒主要通过鼻咽部样本或咳嗽痰液进行检测,样本中的RNA将通过RT-PCR反应体系进行扩增,扩增过程中测量的循环数即为CT值。

CT值越低,表示样本中的病毒含量越高;反之,CT值越高,表示样本中的病毒含量越低。

常规情况下,CT值低于40视为阳性结果,CT值大于40视为阴性结果,这通常意味着样本中没有检测到新冠病毒。

然而,需要强调的是,CT值标准并不仅仅受到病毒含量的影响,还受到其他因素的影响,如样本收集和处理的质量、实验室操作的标准化程度等。

因此,单纯依据CT值来判断新冠病毒感染的程度是不准确的,充分的临床病情判断和其他检测方法的综合应用是必要的。

在临床实践中,CT值的变化会随着病程的进展而有所不同。

一般来说,新冠病毒感染初期,病毒载量较高,CT值相对较低;而在病程发展过程中,随着免疫系统的作用和病毒清除,病毒载量会逐渐降低,CT值会逐渐增加。

因此,CT值的动态变化可以提供一定的指导意义,用于评估病情的变化趋势。

此外,由于CT值不仅受到病毒载量的影响,还受到实验室检测方法的差异等因素的影响,不同实验室间的CT值可能会存在一定差别。

为了统一检测标准,许多地方和机构会进行内部验证和标定,以确保单个实验室的结果可靠和可比性。

总结起来,香港核酸CT值标准是指用于新冠病毒检测的一个指标,通过测量反应体系中病毒基因的扩增周期数来判断样本是否含有病毒。

CT 值越低,表示病毒含量越高;反之,CT值越高,表示病毒含量越低。

然而,CT值标准受到多种因素的影响,单纯依据CT值来判断感染程度是不准确的,需要综合临床病情和其他检测方法的结果来进行判断。

HBV-DNA定量检测的室内质量控制

HBV-DNA定量检测的室内质量控制

HBV-DNA定量检测的室内质量控制尤崇革;李飞;潘云燕;李光迪【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2010(025)003【摘要】目的探讨HBV-DNA定量检测的室内质量控制措施,制定可行的室内质量控制方法.方法自制乙肝病毒载量为105的室内质控物,与临床标本的同步处理检测进行100次试验,按不同批号试剂求出试剂盒携带对照样本、标准曲线斜率和截距以及室内质控物的均值、标准差和变异系数,并对室内质控物进行20次一个批次的累加统计学分析.结果临界阳性和强阳性对照在不同批号试剂间定量检测的标准差和变异系数范围分别在0.121 2~0.485 0和2.82%~12.04%,0.168 3~0.408 1和2.69%~6.61%.标准曲线的斜率和截距在不同批号试剂间的标准差和变异系数范围分别在0.076 6~0.174 6和2.24%~5.17%,0.819 4~1.115 8和1.79%~3.06%.室内质控物在不同批号试剂间的标准差和变异系数范围分别在0.195 2~0.436 5和3.12%~7.62%,五批次正常累加计算标准差和变异系数为0.387和6.55%.结论对HBV-DNA定量检测实行试剂盒的有效性、标准曲线的有效性和室内质控物是否在控三个层次的质量控制是最有效的室内质量控制措施.【总页数】3页(P152-153,156)【作者】尤崇革;李飞;潘云燕;李光迪【作者单位】兰州大学第二医院检验科,兰州,730030;兰州大学第二医院检验科,兰州,730030;兰州大学第二医院检验科,兰州,730030;兰州大学第二医院检验科,兰州,730030【正文语种】中文【中图分类】R446.69【相关文献】1.乙肝血清学标志物定量检测与HBV-DNA定量检测结果的相关性分析 [J], 刘志勇;王娜;刘浩;董娟;常东2.用单值-移动极差法建立HBsAg定量检测室内质量控制图 [J], 祝文彩;季伙燕;王惠民3.乙型肝炎血清标志物定量检测与HBV-DNA定量检测的相关性及临床意义 [J], 漆爱红4.乙肝表面抗原定量检测的室内质量控制管理 [J], 巩卫东5.乙型肝炎血清HBV-DNA定量检测与HBV-M定量检测相关性及临床意义 [J], 孙敏因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

PCR室内质量控制标准操作程序-检验科PCR室作业书

PCR室内质量控制标准操作程序-检验科PCR室作业书

PCR室内质量控制标准操作程序1.目的:随时了解并控制实验室检测的精密度变化。

2.适用范围:核酸扩增荧光定量检测实验室。

3.负责人:操作人:4.程序:4.1血清质量控制品制备及操作4.1.1质控品制备:收集本室检测的临床样本,HBVDNA定量为106copies/ml的样本混匀,并分装于0.5ml的离心管中,每支110µl,编号后(如Qb0201-n),-20℃保存。

4.1.2操作:每次检测过程中将此分装的室内质控品与样本同时检测,记录此标本的检测结果;计算前10次检测结果的平均值作为本批质控品的靶值。

4.1.3如果使用商品化的质控品,按4.1.2要求执行。

4.2室内质控图的使用方法4.2.1描点a)图中X线为靶线,X±2s为警告线,X±3s为失控线。

对于同一批号的质控血清不论使用几个月,其空图均不变化。

只要将图纸上方“起止日期”项填入每个月的实际起止日期即可。

b)每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。

将日期、检测结果和操作者如实记录在图下方的相应位置,并按前面的方法画出图上的对应点,用直线将该点与前一天的点连接。

c)月底计算当月全部质控血清检测结果的X、s和CV,并进行图形分析和小结,将质量控制图存入质控资料档案。

4.2.2图形分析a)如果在X±3s线以外,则为失控,应立即报告有关负责人,迅速查找原因。

必要时复测标本,然后方可发出报告,并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。

b)如果在X±2s线以外,或出现连续6点以上在一侧等规律变化,均应即使向有关负责人反映,并积极查找原因。

但当天的检验结果一般可以发出。

4.2.3通过观察图形的规律性变化进行误差分析,消除误差来源a)曲线漂移:提示有系统误差,准确度发生了一次性的向上或向下改变。

这种变化往往是由于一个新的情况引起的。

如更换不同批号试剂,启用新批号的质控血清、操作人员的变换等。

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中国塞用医'幽笙!旦第j!鲞箍!堡C hi nes e Jour na l of P__9ct i cal M edi cj_ne J ul.2010V oL37N o.14相对较慢所致。

j,诊断时应加注意,观察头围是否进行性增大,避免误诊为EH。

EH是一种暂时性交通性腑积水,它可随着病情的转变在短期内l叶j现增多、吸收或消失等一系列变化,这取决于病情的轻苇程度、治疗及恢复的情况。

本组EH的病因主要与嗣生期因素有关.对早期病闪明确的患儿均针对病因进行了治疗,同时辅以脱水剂、减少脑脊液分泌药物、促进脑细胞代谢药物(如胞二磷胆碱、脑活素)及高压氧治疗。

C T能早期发现,呵及早做出病因诊断,能直接反映其病理变化及程度,并能随访观察其病程愈后的效果。

C T检查在外部性脑积水诊断及豁别诊断方面具有重要价值。

由于C T榆杏存在射线问题.而彩超具有灵敏、可靠、无创、价廉、可蓖复操作等优点,同时能观察早产儿脑窜周围白质软化,适合外部性脯积水观察与随访。

建议EH 75的影像学检杏择优选择,合理应用,使临床能早期干预、早期治疗,采取积极措施,使El l得到早期恢复,避免脑萎缩等并发症出现:参考文献[1]王缉胜,黄柳明.外部件脯积水的cT诊断及临床分析[J].实用放射学杂志.2003.19(6):567-568.[2]何洪浩.婴幼儿外部性脑积水26例c T分析[J].广西医学,2008,30(3):422423.[3]刘本渡,姜副副,高强.外部件脑积水的cT诊断与鉴别诊断[J].医学影像学杂志,2008.18(4):356—358.(收稿日期:2010—03—10)(本文编辑:常青)扩增循环阈值在乙肝病毒核酸室内质控的应用吴秀娟张大军刘亚君张萍【摘要】目的研究荧光定量乙型肝炎核酸扩增(PCR)检测乙肝病毒核酸(H B V—D N A)时。

扩增循环阈值(C T)在室内质控中的应用。

方法通过对厂家提供的同一浓度同一批号质控物在最佳条件和常规条件下连续测定20次,得到该质控物扩增循环值,分别计算出x,s和变异系数(O C V%、R C V%),以循环数在互.t-2s范围内为质控判断标准,对该质控物在最佳检测条件下与每批临床标本同时测定.连续30次,绘制Levey—J enni ngs质控图,分析结果,结果质控物最佳条件下的i±2s和O C V分别为30±3,5.20%;常规条件下的茗士2s和R C V分别为27±4,7.22%;在此质控标准下,30次质控物检测结果均在i±2s范围内,没有一次失控。

结论应用C T值进行H B—V D N A室内质量控制,制图方便,结果准确可靠。

【关键词】乙肝病毒;扩增循环阈值;质控在临床PC R检验中,通常使用质控样本扩增后的“拷贝数/m l”或“U/m l”来进行质控数据的统计分析“,即使取其对数值计算也由于原始数据通常很大,绘制质控图以及统计分析起来很不方便,我们采用实时荧光定量PC R.应用质摔样本的扩增循环阈值(C T)绘制质控图,研究其在乙肝病毒核酸(H B-V D N A)检测中的应用价值。

I材料与方法1.I仪器:罗氏Li ght C yel er2.0全自动荧光定量PC R扩增仪,德国H C一2518低温高速离心机,H B一100恒温金属浴。

B H C一1500H B2一X生物安全柜,SA N Y N一70oC超低温冰箱,全自动立式压力蒸气灭菌器,1.2试剂:卜海科华公司乙型肝炎核酸扩增(PC R)荧光定鼋榆测试剂盒,批号20080410,1.3质控物:阳性质控血清为试剂盒内对照血清,定值浓度为3×106copi es/m l,跫200I xl,批号20080410,阴性稀释用血清是血站复检后J F常献血员血清。

1.4标准品:试剂盒内H BV—D N A质粒,浓度(5×104)一(5×107)c opi e s/m l,批号20080410。

1.5方法:D O!:10.3700/(’m a.j.is c sn.1674-4756.2010.14.044作者单位:834000新疆维爵尔自治区克拉玛依市中心医院检验科1.5.】稀释质控血清:试剂盒标注H B V D N A可检测范围l O’一108copi es/m l,故将质控血清浓度稀释至l O s copi es/m l左右,一次配制,等垦分装,分次使用。

将200ul质控血清3×106copi es/m l 用阴性m清l:10稀释至l O“,反复混匀,每管100斗l,分装于0.5m l的离心管,2000r/r ai n离心数秒,直立放置试管架,一70℃冰箱保存备用。

所有操作均在生物安全柜内进行。

1.5.2最佳条件下变异(O C V):在仪器,试剂处于最佳条件下,由长期从事P C R熟练的技术人员检测以上稀释的质控物,连续测定20次,记录开始进行指数扩增时的循环数cT值,计算20次结果最佳变异(O C V)平均值,标准差和变异系数。

1.5.3常规条件F变异(R C V):在仪器.试剂处于一般条件下,由近期从事PC R的技术人员检测以七稀释的质控品,连续测定20次,记录开始进行指数扩增时的循环数C T值,计算20次结果常规变异(R C V)平均值,标准差和变异系数。

1.5.4绘制质控图:在每1次临床标本检测时,同时测定以上稀释的质控物。

共检测30次,以最佳条件下的x、s确定质控上限和下限.绘制L e ve y—J enni ngs质控图,分析结果。

2结果2.1最佳条件下变异(O C V)与常规条件下变异(R C V)结果:R C V 值与O C V值比较接近,两组均t检验差异无统计学意义(P> 0.05)。

并且R C V值<2O C V值,此R C V可以接受,见表l 。

76.生垦塞旦匡型垫!Q生!旦筮!!鲞箜!堡期g堕望!竺』!望婴璺!堕幽型丛型堕堂』幽!:垫!Q:!!!:≥!:堕!:!兰表l最佳条件下变异与常规条件下变异结果2.230次质控物连续检测室内质控数据结果:以最佳条件叉、S为质控标准,检测的30次质控物,结果均在i±2s范围内,没有一次结果失控。

见图l。

28.6S27.3鼍b25.95旨姆24.623,25砖M一冷’’V图130次质控物连续检测室内质控数据结果3讨论在实时荧光定量PC R过程中,获得的病毒母数据都很大,通常用对数值做质控分析。

cT值是指每个反应管荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数,与模板起始拷贝数的对数存在线性关系‘2j。

文献报道用cT值做质控受到很多实验条件限制,最主要的是N oi s e band C H IV e对C T值大小的影响较大¨。

笔者认为,在标本检测过程中,cT是受到核酸模板提取多少,标本内是否有Taq酶抑制剂等因素的影响,这些测定前因素在影响C T值的同时也必然会影响拷贝数,在数据分析时噪声带会影响C T值,而随着cT值的变化拷贝数同样也在改变。

而本实验室用C T值数据对20份质控血清检测,其O C V均值为5.50%,R C V均值为7.22%,R C V与O C V接近并且R C V <2O CV,此R C V可以接受。

进一步用同一批号试剂检测30次质控血清,所有结果均在孑±2s范围内,在控率100%。

因此,用cT值进行室内质控分析,避免了繁琐的数据换算。

简单易行,结果准确呵信,值得推广应用。

参考文献[1]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].3版.南京:东南大学出版社.2006:939.[2]陈连康,王德明,顾丽华,等.P CR扩增循环数与低拷贝模板D N A的ST R分型[J].中国法医学杂志。

2004,20(3):149-150.[3]肖越胜.单秋,许围荣.荧光定璧PC R法H B VD N A的室内质控[J].现代检验医学杂志,2005,20(2):70-72.(收稿R期:2010—03—30)(本文编辑:方华玲)良性多发性硬化对脑组织轻度损害的多普勒组织成像技术研究轩昂史大鹏樊红光【摘要】目的利用多普勒组织成像技术(D T I)研究良性多发性硬化与复发性多发性硬化对脑组织的损害程度。

方法对15例良性多发性硬化、17例缓解复发多发性硬化及20例健康正常对照组M R I行常规、增强扫描及D TI检查;分别分析三组J.町胼胝体膝部、体部、压部的F A值、A D C值得关系。

结果良性多发性硬化胼胝体膝部FA值(785±24)、A D C值(892±62)、体部FA值(79l±45)、A D C值(900±36)、压部FA值(783±15)、A D C值(915±38);复发性多发性硬化胼胝体膝部FA值、A D C值、体部FA值、A D C值、压部F A值、A D C值分别比较,均具有统计学意义(P<0.001),对照组胼胝体膝部F A值(828±32)、A D C值(845±49)、体部FA值(84l±23)、A D C值(884±27)、压部FA值(850±29)、A D C值(869±36),两组多发性硬化与对照组比较,体部与压部的FA值、A D C值有统计学意义;良性多发性硬化与对照组比较膝部FA值及A D C值无统计学意义。

结论D T I提示良性多发性硬化较复发性多发性硬化对脑组织的损害程度轻,因此D T I是定量分析脑白质的细微结构的改变有力的工具。

【关键词】M R I;D T I;多发性硬化良性多发性硬化指最初经临床诊断为多发性硬化(m ul t i—pi e s cl er osi s,M S),而且在长达十年的时间里没有典型的再发和渐进性加重,是一稳定的过程,常多发,侵犯脑部白质纤维束。

常规的影像学检查仅能发现M S病灶,不能了解病灶对脑D O I:10.3760/cm a.j.j s an,1674-4756.2010.14.045作者单位:450003郑州,河南省人民医院放射科通信作者:史大鹏,E—m ail:cjr.s h i dape“g@r ip.163.co r n 组织的损害程度。

多普勒组织成像技术(D T I)技术对白质纤维柬非常敏感,而且依据水分子的扩散,可反映组织病理学的改变。

因此利用D T I比较良性M S、典型复发性M S引起脑组织的改变,可以更好地了解二者对脑组织的损害程度。

l资料与方法1.1一般资料:收集2008年8月至21309年8月间,河南省人民医院影像学及神经内科检查明确诊断为良性M S及复发性M S 患者为研究对象,排除其他神经系统疾病者。

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