小鼠海马剥离
地黄饮子调节海马神经突触可塑性作用机制研究
地黄饮子调节海马神经突触可塑性作用机制研究李少创1，2，韩 诚1，2，张 正1，2，赵雅飞1，2，秦亚莉1，2，刘 昕1，2，贺文彬1，2，张俊龙1，2（1.山西中医药大学分子中医药学国家级国际联合研究中心，山西 太原 030024；2.山西中医药大学中医脑病学山西省重点实验室，山西 太原 030024）［摘要］ 目的：观察地黄饮子改善阿尔茨海默病（AD ）模型小鼠学习记忆能力及对海马突触可塑性的影响，探讨AD 治疗机制。
方法：选用50只6月龄SAMP8小鼠构建AD 动物模型，采用RANDBETWEEN 随机函数将其分为模型组、盐酸美金刚组及地黄饮子低、中、高剂量组各10只，选用同龄SAMR1小鼠10只作为正常组。
地黄饮子各剂量组及盐酸美金刚组按照给药剂量给予相应药物灌胃，正常组和模型组给予等体积纯水灌胃，连续给药12周。
新物体识别、Morris 水迷宫、巴恩斯迷宫法分别检测小鼠的学习记忆能力，在体海马场电位实验记录小鼠海马长时程增强（LTP ）效应，免疫组化实验检测突触后致密蛋白-95（PSD -95）、突触素（SYN ）蛋白水平的变化，蛋白质印迹法检测海马神经元NMDAR1、NMDAR2B 、Ca 2+在细胞内所结合钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）蛋白表达情况。
结果：与模型组比较，地黄饮子各剂量组小鼠新物体识别系数增加，差异有统计学意义（P ＜0.001）；在目标象限停留时间明显增加，差异均有统计学意义（P ＜0.05，P ＜0.01），且平台穿越次数增加，逃避潜伏期缩短；进入逃生箱所需时间减少，但差异无统计学意义（P ＞0.05），在逃生箱所在象限停留时间明显增加，差异有统计学意义（P ＜0.05）。
在体海马场电位记录实验表明，高频刺激前各组小鼠fEPSPs 斜率无明显差异，高频刺激后30 min 、60 min 地黄饮子各剂量组较模型组斜率增高，差异均有统计学意义（P ＜0.05）。
抗阻运动对胰岛素抵抗小鼠海马内焦亡相关蛋白的影响
抗阻运动对胰岛素抵抗小鼠海马内焦亡相关蛋白的影响姬瑞方１＋，卞学鹏１＋，刘蓓蓓２，胡静芸１，薛香莉１，娄淑杰１△（１．上海体育学院，上海２００４３８；２．潍坊医学院，山东潍坊２６１０４２）【摘要】 目的：探讨胰岛素抵抗小鼠海马内焦亡相关蛋白的变化，以及抗阻训练对海马内焦亡相关蛋白的调节作用。
方法：６周龄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄性小鼠随机分为对照组（Ｃ，ｎ＝１２）和高脂膳食组（ＨＦＤ，ｎ＝２６）分别进行普通膳食或高脂膳食喂养１２周。
随后根据葡萄糖耐量实验（ＧＴＴ）和胰岛素耐量实验（ＩＴＴ）的结果，将ＨＦＤ组分为胰岛素抵抗组（ＩＲ，ｎ＝１０）和抗阻运动组（ＲＴ，ｎ＝１０），维持高脂膳食喂养同时ＲＴ组小鼠进行抗阻训练。
１２周后，全部小鼠麻醉后处死，取脑并剥离出海马组织，通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测焦亡相关蛋白的表达。
结果：与Ｃ组相比，ＩＲ组小鼠海马内ＮＦ κＢ、ＮＬＲＰ３炎症小体、下游焦亡相关蛋白ＧＳＤＭＤ Ｎ和ＧＳＤＭＤ以及炎症因子ＩＬ １β和ＩＬ １８的蛋白表达量显著性上升（Ｐ＜０．０５），ＳＩＲＴ１蛋白表达量以及ｐ ＡＭＰＫ蛋白水平显著性下降（Ｐ＜０．０５）；与ＩＲ组相比，ＲＴ组小鼠海马内ＮＦ κＢ、ＮＬＲＰ３炎症小体、下游焦亡相关蛋白ＧＳＤＭＤ Ｎ和ＧＳＤＭＤ以及炎症因子ＩＬ １β和ＩＬ １８的蛋白表达量显著性下降（Ｐ＜０．０５），ＳＩＲＴ１蛋白表达量以及ｐ ＡＭＰＫ蛋白水平显著性上升（Ｐ＜０．０１）。
结论：胰岛素抵抗小鼠海马内ＮＬＲＰ３炎症小体被激活，介导海马内发生细胞焦亡；经过１２周的抗阻运动可有效抑制ＮＬＲＰ３炎症小体激活，改善海马内细胞焦亡和炎症状态。
【关键词】 抗阻运动；胰岛素抵抗；海马；ＮＬＲＰ３炎症小体；焦亡；小鼠【中图分类号】Ｇ８０４．２ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１０００ ６８３４（２０２０）０５ ４５６ ００６【ＤＯＩ】１０．１２０４７／ｊ．ｃｊａｐ．５９６９．２０２０．０９７Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｅｘｅｒｃｉｓｅｏｎｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔｍｉｃｅＪＩＲｕｉ ｆａｎｇ１＋，ＢＩＡＮＸｕｅ ｐｅｎｇ１＋，ＬＩＵＢｅｉ ｂｅｉ２，ＨＵＪｉｎｇ ｙｕｎ１，ＸＵＥＸｉａｎｇ ｌｉ１，ＬＯＵＳｈｕ ｊｉｅ１△（１．ＳｈａｎｇｈａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｐｏｒｔ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００４３８；２．ＷｅｉｆａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｉｆａｎｇ２６１０４２，Ｃｈｉｎａ）【ＡＢＳＴＲＡＣＴ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｏｆｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｍｉｃｅａｎｄｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｒａｉｎｉｎｇｏｎｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｓｉｘ ｗｅｅｋ ｏｌｄｍａｌｅＣ５７ＢＬ／６Ｊｍｉｃｅｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｃ，ｎ＝１２）ａｎｄｈｉｇｈ ｆａｔｄｉｅｔｇｒｏｕｐ（ＨＦＤ，ｎ＝２６）ｆｏｒｎｏｒｍａｌｏｒｈｉｇｈ ｆａｔｄｉｅｔｆｏｒ１２ｗｅｅｋｓ．Ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ，ａｃｃｏｒｄ ｉｎｇｔｏｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｇｌｕｃｏｓｅｔｏｌｅｒａｎｃｅｔｅｓｔ（ＧＴＴ）ａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｔｏｌｅｒａｎｃｅｔｅｓｔ（ＩＴＴ），ｔｈｅｒａｔｓｆｅｄｗｉｔｈｈｉｇｈ ｆａｔｄｉｅｔｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｉｎ ｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｒｏｕｐ（ＩＲ，ｎ＝１０）ａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｅｘｅｒｃｉｓｅｇｒｏｕｐ（ＲＴ，ｎ＝１０）ａｓｗｅｌｌａｓｔｏｍａｉｎｔａｉｎｈｉｇｈ ｆａｔｄｉｅｔ．Ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ｍｉｃｅｉｎｔｈｅＲＴｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｒａｉｎｉｎｇ．Ａｆｔｅｒ１２ｗｅｅｋｓ，ａｌｌｍｉｃｅｗｅｒｅｓａｃｒｉｆｉｃｅｄａｆｔｅｒａｎｅｓｔｈｅｓｉａ，ｂｒａｉｎｗａｓｒｅ ｍｏｖｅｄａｎｄｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｗａｓｅｘｆｏｌｉａｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＣｇｒｏｕｐ，ＮＦ κＢ，ｔｈｅＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｔｈｅｉｒｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓＧＳＤＭＤ ＮａｎｄＧＳＤＭＤａｓｗｅｌｌａｓｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓＩＬ １βａｎｄＩＬ １８ｉｎｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｏｆＩＲｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＳＩＲＴ１ａｎｄｐ ＡＭＰＫｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＩＲｇｒｏｕｐ，ＮＦ κＢ，ｔｈｅＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｔｈｅｉｒｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓＧＳＤＭＤ ＮａｎｄＧＳＤＭＤａｓｗｅｌｌａｓｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓＩＬ １βａｎｄＩＬ １８ｉｎｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｏｆＲＴｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＳＩＲＴ１ａｎｄｐ ＡＭＰＫｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｏｆｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｍｉｃｅｉｓａｃ ｔｉｖａｔｅｄ，ｗｈｉｃｈｍｅｄｉａｔｅｓｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．ＴｗｅｌｖｅｗｅｅｋｓｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｒａｉｎｉｎｇｃａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＮＬ ＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．【ＫＥＹＷＯＲＤＳ】 ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｒａｉｎｉｎｇ； ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ； ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ； ＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ； ｍｉｃｅ 【基金项目】国家自然科学基金资助项目（８１５７２２４１）；上海市人类运动能力开发与保障重点实验室（上海体育学院）资助项目（１１ＤＺ２２６１１００）【收稿日期】２０１９ １１ ０８【修回日期】２０２０ ０５ １９ △【通讯作者】Ｔｅｌ：（０２１）５１２５３２４３；Ｅ ｍａｉｌ：ｓｈｕｊｉｅｌｏｕ３１９＠１６３．ｃｏｍ．＋：为共同第一作者 高脂膳食可诱发多种代谢紊乱，例如肥胖、高血压、胰岛素抵抗、２型糖尿病和胰岛素抵抗［１］，其中胰岛素抵抗（ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＩＲ）是指脂肪细胞、神经元、骨骼肌等靶细胞对正常循环水平的胰岛素反应降低［２］，使胰岛素信号传导发生障碍，继而诱发氧化应激、氮化应激和内质网应激等多种细胞应激。
小鼠在体海马LTP实验技术方法的建立及定位方法的优化
中 国药 理 通 讯 ２０ ０ ８年 第 二 十 五 卷 第 四 期
维时的电位 图，并 以此作 为电极下插深度的标准 。并考察 了不 同刺激参数对 Ｌ１ １ Ｐ诱
发 的 影 响 ， 以便 在 不 同需 要 时 选 用 。而 后 对 定 位 方 法 进 行 了优 化 ，通 过 优 化 后 的定
中 国药 理 通 讯 ２ ０ ０ ８年 第 二 十 五 卷 第 四 期
法 ：采 用人 胚 肾细胞 株 （９ Ｔ）转 染Ａ Ｚ、野 生型Ｈ ｄ 或Ｅ 酶 失活 型Ｈ ｄ Ｃ１ ２３ Ｔ ｒｌ ３ ｒｌ Ａ， Ｗｅｔｒ—ｌｔｎ 检测相关 蛋 白表达情 况 ，ｃ ｃ ｈ ｘｍｉｅ（ ＨＸ ）ｃａｅ ｓ ｎ ｂｏｔ ｇ ｅ ｉ ｙｌ ｅ ｉ ｄ Ｃ ｏ ｈｓ法观 察Ａ Ｚ Ｔ 降 解情况 ，ＭＧ１２ ３ 抑制 蛋 白酶体功能， 观察泛素化蛋 白变化 ，免疫共沉 淀方法检 测Ａ ｚ Ｔ
与Ｈ ｄ 的相 互 作 用 ， 免疫 荧 光 观 察 蛋 白定 位 及 细 胞 形 态 。 ｒｌ
结果 ： ｒ ｌ 以降低过度表达Ａ Ｚ Ｈ ｄ可 Ｔ 细胞 内的Ａ Ｚ Ｔ 水平 ，尤其是沉淀 （ 不溶于Ｓ ） ＤＳ 部分 的Ａ Ｚ Ｔ 水平 ，而且这种 降低作用依赖于其Ｅ 活性 。同时，Ｈｒｌ 以提高Ａ Ｚ ３ ｄ可 Ｔ 在细 胞 内的溶解性及 减少Ａ Ｚ多聚 体 的形 成 。Ｃ Ｘ ｈｓ法 以及 蛋 白酶体抑 制实验 显示 Ｔ Ｈ ｃ ａｅ
成年小鼠海马区神经干细胞的分离 培养及鉴定
成年小鼠海马区神经干细胞的分离
朱 欢
培养及鉴定
唐金 熹 李 云 秦琬 莹 王 晓侠 伍 学恒 刘 晓灿 杨 柳 广 西 师范 大学 生命科 学 学院 ，广 西 桂 林 ５ ４ １ ０ ０ ４
摘 要 ： 目的 ：从 成 年 小鼠 海 马 区分 离 出潜 在 的 神 经 干 细 胞 （ ｎ ｅ ｕ ｒ ａ ｌ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ，Ｎ Ｓ Ｃ ｓ ） 亚 群 ， 同 时建 立 一种 简 单 有 效 的成 年 小鼠海马 区神经干细胞 的分离、培养及鉴定的方法。方法：结合酶消化法和机械 吹打法从 Ｃ ５ ７ ／ Ｂ ６小鼠脑 组织海马 区分 离出神 经细胞 ，行 Ｃ Ｄ １ ３ ３和 Ｇ Ｆ Ａ Ｐ抗体 染色，经流式细胞分选仪 分选 出 Ｃ Ｄ １ ３ ３ ＋ Ｇ Ｆ Ａ Ｐ ＋ 细胞 群 ：经无血 清培 养鉴定其体 外 自我更新与增 殖 能力 ： 用免 疫 荧 光 法鉴 定 其 体 外 分 化 潜 能 。结 果 ：从 成 年 小 鼠 海 马 区分 离 出 了一 群 可 以体 外 增 殖 的 Ｃ Ｄ １ ３ ３ ＋ Ｇ Ｆ Ａ Ｐ ＋ ￣胞 群 ， 且 该 群 细 胞 在 体 外 可 以分 化 为 Ｂ…－ ｔ ｕ ｂ ｕ ｌ ｉ ｎ阳性 神 经 元 （ ｎ ｅ ｕ ｒ ｏ ｎ ） 、Ｇ Ｆ Ａ Ｐ阳性 星形 胶 质 细胞 （ ａ ｓ ｔ ｒ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ）和 Ｍ Ｂ Ｐ阳性 少 突胶 质细胞 （ ｏ Ｉ ｉ ｇ ｏ ｄ ｅ ｎ ｄ ｒ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ） 。结论 ：Ｃ Ｄ １ ３ ３ ＋ Ｇ Ｆ Ａ Ｐ ＋ ￣胞 群具有体 外增殖 与分化 的能力，是一群真正的神经干细胞亚群 ，并建 立 了稳 定 且 简便 的 分 离 、 培 养 及 鉴 定 成 年 小 鼠 脑 海 马 区神 经 干 细 胞 的 方 法 。 关 键 词 ：神 经干 细胞 ：海 马 区 ；增 殖 ；分 化
小鼠大脑皮层和海马神经元的分离与培养20110110
小鼠大脑皮层和海马神经元的分离与培养一、玻片的准备A．玻片的清洗1. 第一天，将玻片(12mm，633009，Carolina) 逐片置于装有浓硝酸(HNO3) 或者洗液的平皿中，混匀，然后浸泡过夜。
2. 第二天，将玻片放在有单蒸水的陶瓷盘中，搁在摇床上晃动，速度为200rpm，将玻片上的硝酸残液清洗干净。
每10min换水一次，要换20次以上。
晚上置于双蒸水中浸泡过夜。
3. 第三天，换双蒸水，重洗两次，每次速度为200rpm ，时间为60min，去除玻片上的离子和其它杂质，最后再换用无水乙醇，清洗三次以上。
洗完后置于小烧杯中，拿到细胞房超净台将玻片浸泡在无水乙醇中室温保存。
4. 解剖小鼠取细胞前两天将玻片从无水乙醇中取出，在酒精灯焰上烘干，稍微在空气中停一下，再放到灭菌的parafilm膜上。
玻片高温易碎，速度要快。
完成后在紫外下照射1h。
B. 玻片的包被（PDL包被）用0.1M的硼酸钠溶液将PDL配成0.01mg/ml PDL的溶液(pH 8.4)。
1.准备500ml 0.1M的硼酸钠（Na2B4O7·10H2O, B3545-500G，Sigma）溶液。
2.在超净台中，往一整瓶Poly-D-Lysine（PDL，5mg/ml，Sigma, P6407-5MG）中加入25ml的该硼酸钠溶液。
盖上瓶盖，溶解5min，可以轻轻晃动。
然后将该溶液加到剩下的硼酸钠溶液中。
即为所配溶液，0.22μm过滤，用锡纸包好，4℃避光保存。
3.使用的时候，6/12/24孔板每孔加1ml/500μl/250ul的PDL溶液，12mm盖玻片每片加50μl的PDL溶液，放在超净台中，室温包被4hrs或者过夜。
4.第二天，紫外照射超净台1-2hrs，再将PDL吸干。
将板和玻片盖揭开，室温晾过夜。
5.第三天，将每个孔/玻片用灭菌水洗两遍，吸干，盖上盖，避光待用。
二. 大脑皮层与海马的解剖A. 解剖前的准备1.解剖器械的灭菌解剖前将器械放在铝饭盒中，倒入75%乙醇，并在超净台中放入适量卷纸，打开紫外杀菌1-2hrs。
解郁安神颗粒对卒中后抑郁小鼠模型的抗抑郁作用
解郁安神颗粒对卒中后抑郁小鼠模型的抗抑郁作用邹龑;杜源;傅风华【摘要】目的探讨解郁安神颗粒(JY)对卒中后抑郁(PSD)小鼠模型的抗抑郁作用.方法将雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、艾司西酞普兰组(5 mg?kg-1)及JY小、中、大剂量组(JY 0.75,1.50,3.00 g?kg-1),每组12只.采用双侧颈总动脉线栓再灌注制备脑缺血小鼠模型,给予慢性不可预知性温和刺激制备PSD小鼠模型.艾司西酞普兰及JY灌胃给药,每天1次,连续给药28 d.通过悬尾实验及强迫游泳实验评价JY对PSD小鼠抑郁行为的影响.采用高效液相色谱法检测PSD小鼠海马去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)及5-羟色胺(5-HT)水平.采用Western blotting检测PSD小鼠海马5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)表达.结果与正常对照组比较,模型对照组小鼠悬尾及游泳不动时间明显增加(P<0.05);与模型对照组比较,JY小、中、大剂量组小鼠悬尾及游泳不动时间明显减少(P<0.05或P<0.01).与正常对照组比较,模型对照组小鼠海马NE、DA及5-HT水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),海马5-HT1A R表达明显降低(P<0.05).与模型对照组比较,JY小、中剂量组小鼠海马NE、DA及5-HT水平明显升高(P<0.05或P<0.01),海马5-HT1A R表达明显升高(P<0.05).结论 JY对PSD小鼠模型具有抗抑郁作用,其作用机制可能与提高海马NE、DA及5-HT水平,以及上调海马5-HT1A R表达有关.【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2019(038)001【总页数】5页(P22-26)【关键词】解郁安神颗粒;抑郁,卒中后;神经递质【作者】邹龑;杜源;傅风华【作者单位】山东中医药大学药学院,济南 250014;烟台大学药学院,烟台 264005;山东中医药大学药学院,济南 250014;烟台大学药学院,烟台 264005【正文语种】中文【中图分类】R964;R741.05卒中后抑郁(post-stroke depression，PSD)是最常见的脑血管疾病并发症，是卒中后出现的以思维缓慢、情感低落、语言动作迟滞为主要表现的情感障碍性疾病[1]，其卒中后发病率29%～70%[2]。
小鼠原代神经元提取
小鼠原代神经元提取
1. 背景介绍
小鼠是神经科学研究中常用的实验动物，尤其是小鼠原代神经元是研究神经细胞生长、形态及功能的理想模型。
提取小鼠原代神经元是展开这类研究的重要步骤。
2. 提取方法
2.1 原代神经元分离
将小鼠脑的皮层或海马区取出，用酶消化等方法分离出原代神经元。
其中，较为常用的来源是阿霉素（Ara-C）处理后，剥离出菜花状星形胶质细胞后得到神经元。
2.2 细胞贴附
将原代神经元移植到附着于玻璃片或培养皿的细胞培养基中，使其附着并生长。
2.3 细胞培养
在培养基中加入营养物质，如神经生长因子、谷氨酸等，加速神经元的生长，并使组成更加丰富多彩。
2.4 细胞鉴定
通过标记染色、光镜观察等手段，检测培养出来的细胞是否为神经元。
3. 应用领域
小鼠原代神经元的提取及培养成为研究神经科学和神经元特性的
重要手段。
研究重点主要包括神经元的细胞膜特性、各种信号转导途径、神经元与神经胶质细胞之间的相互作用及神经元发育等问题。
此外，还可运用于药理学研究、癫痫及脑防护药物的开发研究等。
4. 注意事项
提取方法中，对原代神经元的提取、分离及培养有许多细节问题，包括材料选择、酶消化时间调节、培养基添加条件等。
在实验过程中，需要注意操作规范化、洁净化，并遵守实验室安全规范。
原代海马及皮质神经元培养方法
原代海马及皮质神经元培养方法海马和皮质神经元是神经系统的重要组成部分，在研究神经生物学和药物疗效等方面具有重要价值。
为了研究这些神经元的生理特性和功能，我们常常需要从动物体内分离和培养这些神经元。
以下是针对原代海马和皮质神经元的培养方法。
1.实验动物准备：首先，需要准备实验所需的动物。
一般情况下，小鼠是最常用的实验动物。
在实验进行前，需要确保动物符合实验伦理和动物保护要求，并获得相应的实验动物使用许可。
2.动物脑组织的获取：在实验动物处死后，需要尽快取出脑组织。
使用无菌技术将大脑取出，并将其放入生理盐水或培养基中。
3.脑组织的分离和消化：将脑组织放入含有0.02％的溴酚红的磷酸缓冲生理盐水中，用无菌剪刀和镊子将其剪碎成小块。
然后，将组织块放入含有0.25％胰酶的溶液中，在37℃的恒温培养箱中消化2至5分钟。
然后，将溶液过滤并离心，以去除细胞碎片和大块组织。
4.细胞的分离和培养：将离心沉淀涂布在含有25％培养基和10％胎牛血清的培养皿中，然后放入37℃的恒温培养箱中。
培养基的成分可以根据具体需要进行调整。
细胞会附着在培养皿上，并开始生长和繁殖。
在细胞培养过程中，需要定期更换培养基，以提供细胞所需的营养物质。
5.细胞的处理和分选：在培养4至7天后，细胞会形成较为密集的神经元网络。
在这个时候，可以通过处理和分选细胞来提高神经元的纯度。
例如，使用抗体标记法可以针对神经元选择性地杀死胶质细胞。
此外，还可以使用细胞遗传方法，如转染特定基因或使用荧光探针标记细胞。
6.测试和分析：经过特定时间的培养后，可以对原代海马和皮质神经元进行测试和分析。
这些测试和分析可以包括细胞生存率、纯度、形态特征、电生理活性、细胞内信号和细胞功能等方面的内容。
这些测试和分析的方法可以通过显微镜观察、电生理仪器、蛋白质和基因分析等手段进行。
7.特殊处理：有时对于特定的研究需要，还可以对原代海马和皮质神经元进行特殊处理。
例如，可以通过给予特定药物、激素或其他刺激条件，来模拟不同的疾病模型或研究特定功能。
海马神经细胞特异性DRD2基因条件性敲除小鼠模型的建立与鉴定
海马神经细胞特异性DRD2基因条件性敲除小鼠模型的建立与鉴定段朝霞;陈魁君;张东冬;张洁元;王建民【摘要】目的拟构建DRD2基因大脑海马组织特异性敲除小鼠模型,旨在进一步深入研究DRD2的生物学功能.方法运用逆转录病毒基因标记技术,结合Cre-loxP重组酶系统,设计和构建打靶载体,然后将打靶载体电转至小鼠胚胎细胞,用PCR和Southern blot验证ES克隆的正确性,最后将筛选出的ES显微注射到胚囊内,经过PCR鉴定得到Neo delete杂合子小鼠(flox/+).将Neo delete杂合子小鼠(flox/+)自交获得Neo delete纯合子小鼠(flox/flox)小鼠,经PCR筛选出的在DRD2flox/flox纯合子小鼠与海马组织特异性表达Cre基因的CaMKⅡα-Cre工具鼠杂交,获得了DRD2 flox/flox的特异性组织条件性敲除小鼠,并用定量PCR和Western blot法对其进行鉴定.利用PCR和Western blot方法检测成年DRD2条件性敲除小鼠大脑不同部位(前额、海马)的DRD2表达情况.结果经过多层筛选、鉴定,最后得到DRD2 flox/flox的特异性组织条件性敲除小鼠.所制备的DRD2条件性敲除小鼠基因缺失主要发生在海马组织中,前额组织中表达水平变化不大.DRD2表达水平在不同小鼠的海马组织中降低.DRD2海马组织特异性敲除小鼠在交配饲养过程中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象,也未发现其他器官组织结构的异常改变.结论成功建立大脑海马神经细胞特异性DRD2基因敲除模型,为进一步深入研究DRD2的生物学功能,尤其是DRD2在精神类疾病的发生、发展中的作用机制提供了研究基础.【期刊名称】《解放军医药杂志》【年(卷),期】2019(031)004【总页数】5页(P1-5)【关键词】DRD2;小鼠,基因敲除;精神病【作者】段朝霞;陈魁君;张东冬;张洁元;王建民【作者单位】400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室【正文语种】中文【中图分类】R-332;R74多巴胺是机体内非常重要的一类神经递质，在调节认知、记忆、运动及情绪等多种功能中起至关重要的作用，多巴胺信号通路及其相关分子的基因改变与多种精神异常的易感性相关[1-8]。
小鼠海马组织提取过程
小鼠海马组织提取过程
小鼠海马组织提取过程
海马是大脑皮层中与记忆处理相关的区域，小鼠海马组织提取过程是神经科学研究中重要的一步。
下面将介绍小鼠海马组织提取的步骤和注意事项。
步骤一：准备实验材料
需要准备组织切片刀、显微镜、培养培养皿、离心机等实验材料；还需要购买磷酸盐缓冲液(PBS)、胶原酶等药品。
步骤二：准备小鼠海马
在实验前将小鼠捕捉并消毒，随后在其头部进行开颅手术，取出大脑组织样本，分离出小鼠海马组织。
步骤三：组织分离
将小鼠海马组织切成小块，用胶原酶等酶类溶液进行处理，避免组织死亡和堆积。
处理后的组织可以通过显微镜进行查看，并且在操作中应让操作规范化和标准化，以避免人为干扰。
步骤四：离心处理
将处理后的小鼠海马组织进行离心处理，取出其上清液，用PBS溶液进行洗涤，防止污染物质残留。
步骤五：离心沉淀
将洗涤后的小鼠海马组织进行离心沉淀，分离出其中的细胞块，获得目标提取物质。
注意事项：
1. 在处理小鼠海马组织的过程中，应防止组织的氧化和干燥，避免影响实验结果。
2. 在组织分离的过程中，应选择合适的酶类溶液，并进行恰当的组织处理处理。
3. 在离心沉淀的时候，顶部要避免和底部过于接近，避免损坏组织和提取物。
小鼠海马组织的提取对于神经科学研究具有重要的作用，在实验中应遵守实验规范，保护动物权益，准确完成实验操作。
泽兰素缓解丙泊酚诱导的小鼠海马组织损伤的作用机制
Special Wild Economic Animal and Plant Research 特产研究98DOI ：10.16720/ki.tcyj.2023.084泽兰素缓解丙泊酚诱导的小鼠海马组织损伤的作用机制周进国1，白丽梅2（1.邯郸市第一医院麻醉科，河北邯郸056000；2.邯郸市第一医院东区急诊内科，河北邯郸056000）摘要：探讨泽兰素对丙泊酚麻醉诱导C57小鼠海马组织炎性损伤的实际保护作用及初步机制。
C57成年小鼠120只随机数法随机分组：丁苯酞阳性药物对照组（丁苯酞组，n =40）、泽兰素给药组（泽兰素组，n =40）和海马损伤模型组（模型组，n =40）；通过50mg/kg 丙泊酚腹腔旋转注射方式诱导C57成年小鼠海马组织脑损伤模型，另选取同批次小鼠作为空白对照组（空白组，n =40）。
丁苯酞组、泽兰素组、模型组和空白组以灌胃方式分别给予2mg/kg 丁苯酞、1.24mL/kg 自备泽兰素混悬液1mL 、0.9%生理盐水1mL 和0.9%生理盐水1mL ，1次/d ，持续28d 。
Nissl 染色法检测大鼠海马组织神经元损伤程度；神经功能评分、Morris 水迷宫试验和糖水偏好试验，3种试验方式检测干预前后神经行为变化；ELISA方法比较各组TNF-/NF-B 及脑源性神经营养因子（brain-derived neuro-trophic factor,BDNF ）的水平。
Morris 水迷宫结果表示：泽兰素组、丁苯酞组单位逃避时间和对侧象限停留时间显著缩短；试验后泽兰素组、丁苯酞组神经功能缺损程度评分明显下降（P <0.05）；泽兰素组、丁苯酞组NF-B 、BNDF明显上升，TNF-明显下降（P <0.05）。
泽兰素可以通过抑制TNF-，促进NF-B 分泌调节BDNF 的表达从而发挥神经元保护作用，有望为治疗海马组织损伤提供治疗策略。
关键词：泽兰素；TNF-/NF-B ；丙泊酚；海马组织损伤中图分类号：R285.5文献标识码：A 文章编号：1001-4721（2023）03-0098-05Mechanism of Action of Zeolanthin in Alleviating Propofol-Induced Hip-pocampal Tissue Damage in MiceZHOU Jinguo 1,BAI Limei 2(1.Department of Anesthesiology,Handan First Hospital,Handan 056000,China;2.Department of Emergency Medicine,Handan First Hospital East,Handan 056000,China )Absrtact :To investigate the actual protective effect and preliminary mechanism of zeranolin on propofol anesthesia-induced inflammatory damage in hippocampal tissue of C57mice.One hundred and twenty adult C57mice were randomly grouped by the random number method,butylphthalein positive drug control group (Butylphthalein group,n =40),zelanolin administration group (Zelanolin group,n =40)and hip-pocampal injury model group (Model group,n =40),and the hippocampal tissue brain injury model was induced by 50mg/kg propofol in-traperitoneal rotary injection in adult C57mice.as a blank control group (Blank group,n =40).The rats were given with 2mg/kg butylphtha-lein,1.24mL/kg self-prepared zeolanthin suspension 1mL,0.9%saline 1mL,0.9%saline 1mL by gavage for 28d.Nissl staining to detect neuronal damage in rat hippocampal tissue;Neurological function score,Morris water maze test,and sugar water preference test to detect neuro-behavioral changes before and afterthe intervention;The levels of TNF-/NF-B and brain-derived neurotrophic factor (BDNF )were compared between groups by ELISA.The results of the Morris water maze suggested that the unit escape time and contralateral quadrant dwell time were significantly shorter in the Zeelandin and butylphthalide groups;The degree of neurological deficit scores decreased sig-nificantly in the Zeelandin and butylphthalide groups after the experiment,and the difference was statistically significant (P <0.05);NF-B and BNDF increased significantly in the Zeelandinand butylphthalide groups,and TNF-decreased significantly,and the difference was statistically significant (P <0.05).The differences were statistically significant (P <0.05).Zeolanthin can play aneuronal protective role by inhibiting TNF-and promoting NF-B secretion to regulate BDNF expression,which is expected to provide a therapeutic strategy for the treatment of hippocampaltissue injury.Keywords :Zeolanthin;TNF-/NF-B;propofol;hippocampal tissue injury收稿日期：2023-01-07基金项目：邯郸市科学技术研究与发展计划项目（1823208074ZC ）作者简介：周进国（1980-），男，河北邯郸人，硕士，主治医师，主要从事老年麻醉研究。
小鼠皮层分区
小鼠皮层分区
小鼠脑皮层是一个高度分化的结构，根据功能和解剖特征，可以将其分为多个区域。
下面是小鼠脑皮层的主要分区：
1.大脑皮层（Neocortex）：大脑皮层是小鼠脑的最外层，也是最大的部分。
它负责感知、思考和决策等高级认知功能。
大脑皮层可以进一步分为多个区域，包括运动皮质、感觉皮质、前额皮质等。
2.海马回（Hippocampus）：海马回是与学习和记忆有关的重要结构。
它包括背侧、腹侧和颞侧等不同的区域。
3.杏仁核（Amygdala）：杏仁核是情绪和记忆处理的关键区域。
它在小鼠脑中有多个亚区，每个亚区都与不同的情绪和认知过程相关。
4.腹侧被盖区（Medial Prefrontal Cortex）：这个区域涉及到认知控制、社交行为、情感调节等功能。
它包括前扣带皮质（Anterior Cingulate Cortex）和顶叶皮质（Orbital Prefrontal Cortex）等亚区。
5.纹状体（Striatum）：纹状体在小鼠脑中负责运动控制和奖赏系统的调节。
它包括背侧纹状体和腹侧纹状体等不同的部分。
6.运动皮层（Motor Cortex）：运动皮层负责运动控制，控制小鼠身体的运动和协调。
7.感觉皮层（Sensory Cortex）：感觉皮层接收和处理来自感觉器官的信息，包括视觉、听觉、触觉等。
这些分区只是小鼠脑皮层中的一部分，实际上，小鼠脑有许多其他次要的、更细致的分区，每个区域都执行特定的神经功能。
神经科学家使用各种技术，如脑电图、脑磁图、功能性磁共振成像（fMRI）等，来研究这些区域的功能和相互关系。
小鼠大脑皮层和海马神经元的分离与培养20110110
小鼠大脑皮层和海马神经元的分离与培养一、玻片的准备A．玻片的清洗1. 第一天，将玻片(12mm，633009，Carolina) 逐片置于装有浓硝酸(HNO3) 或者洗液的平皿中，混匀，然后浸泡过夜。
2. 第二天，将玻片放在有单蒸水的陶瓷盘中，搁在摇床上晃动，速度为200rpm，将玻片上的硝酸残液清洗干净。
每10min换水一次，要换20次以上。
晚上置于双蒸水中浸泡过夜。
3. 第三天，换双蒸水，重洗两次，每次速度为200rpm ，时间为60min，去除玻片上的离子和其它杂质，最后再换用无水乙醇，清洗三次以上。
洗完后置于小烧杯中，拿到细胞房超净台将玻片浸泡在无水乙醇中室温保存。
4. 解剖小鼠取细胞前两天将玻片从无水乙醇中取出，在酒精灯焰上烘干，稍微在空气中停一下，再放到灭菌的parafilm膜上。
玻片高温易碎，速度要快。
完成后在紫外下照射1h。
B. 玻片的包被（PDL包被）用0.1M的硼酸钠溶液将PDL配成0.01mg/ml PDL的溶液(pH 8.4)。
1.准备500ml 0.1M的硼酸钠（Na2B4O7·10H2O, B3545-500G，Sigma）溶液。
2.在超净台中，往一整瓶Poly-D-Lysine（PDL，5mg/ml，Sigma, P6407-5MG）中加入25ml的该硼酸钠溶液。
盖上瓶盖，溶解5min，可以轻轻晃动。
然后将该溶液加到剩下的硼酸钠溶液中。
即为所配溶液，0.22μm过滤，用锡纸包好，4℃避光保存。
3.使用的时候，6/12/24孔板每孔加1ml/500μl/250ul的PDL溶液，12mm盖玻片每片加50μl的PDL溶液，放在超净台中，室温包被4hrs或者过夜。
4.第二天，紫外照射超净台1-2hrs，再将PDL吸干。
将板和玻片盖揭开，室温晾过夜。
5.第三天，将每个孔/玻片用灭菌水洗两遍，吸干，盖上盖，避光待用。
二. 大脑皮层与海马的解剖A. 解剖前的准备1.解剖器械的灭菌解剖前将器械放在铝饭盒中，倒入75%乙醇，并在超净台中放入适量卷纸，打开紫外杀菌1-2hrs。
海马细胞实验记录方案
实验记录一、实验名称：海马细胞培养二、实验目的：在细胞水平评估给药后是否能够提高突触可塑性三、实验时间：年月日四、实验地点：五、实验人：六、实验试剂：1.完全DMEM培养基：2.1×PBS：厂家：HyClone；3.0.25%胰酶消化液：4.硼酸盐缓冲液（poly-L-lysine)：5.Neurobasal全培+双抗：6.HBSS缓冲液：七、实验仪器：1.湘仪TD5A-WS台式低速离心机，转子号为853590，水平转子，容量为32×15 ml。
2.培养箱：Thermo SCIENTIFIC培养箱，HERACELL 150i CO2 Incubator。
3.倒置显微镜4.解剖镜八、实验过程：1.准备24孔板，每孔放入一个处理好的玻片，共24孔。
分别加poly-L-lysineBuffer 500μl/孔，放入37℃培养箱中包被2小时以上。
2.4小时后，准备3个10-cm无菌培养皿，分别加20ml的HBSS-buffer，放在冰袋上预冷。
3.用75% 乙醇喷洗剪刀一把、尖头镊子两把、称量勺一把、手术刀片一个；将新生E19小鼠的头和身体分离，把头放在其中一个预冷的平皿中。
4.取大脑：左手用一把尖头镊子压住小鼠头部的眼睛处，右手用手术刀片将头顶处划开，再用另一把尖头镊子扒开头部的皮和脑壳，（注意不要弄坏大脑）右手拿称量勺尾端轻轻插入需出的大脑的底部，轻挑出大脑，放入到另一个干净的平皿中。
5.用上述取大脑的方法将剩余的小鼠大脑取出。
6.取海马体：在解剖镜下，左手用尖头镊子压住小脑处，右手翻开大脑的半球，去除血网，分离血网下的海马体（带状深色，半透明，靠近大脑半球的边缘），将海马体移入最后一个干净的平皿中。
7.用上述取海马体的方法将剩余的海马体取出。
8.全部海马体取出出后，用1ml 枪把海马体轻吸到1个无菌的1.5 ml EP管中，等海马体沉淀后，吸出上清，用PBS清洗10次，1ml/次。
瘦素在海人酸诱导小鼠颞叶癫痫海马损伤中的作用
瘦素在海人酸诱导小鼠颞叶癫痫海马损伤中的作用冯杰;邓子辉;张金英;薛辉;梁辰;李建华;颜光涛【摘要】Objective To study the association of leptin with the occurrence and development of temporal lobe epilepsy. Methods After injection of exogenous leptin, a normal dose of kainic acid (KA, 200 ng per mouse) were microinjected into the right hippocampus of C57BL/6J mice to induce temporal lobe epilepsy. Then, seizureswere scored with the Racine scores,the hippocampal pathogenesis of mice on day 7 after the KA injection were observed, the expression level of Bax was measured by Western blot, the neuron loss of hippocampal Hilus was detected by Nissl staining, and the astrocyte activation and proliferation of hippocampal Hilus were tested by immunofluorescence method.Results Compared with KA-induced model, seizure scores increased by about 52%, the expression of Bax significantly increased by about 75%, the neuron loss significantly accelerated, and astrocyte was over activated in the KA-induced model combined with the exogenous leptin (10 mg/kg) pretreatment.Conclusion Leptin pretreatment aggravates the neuron apoptosis and pathogenesis induced by KA.%目的：探讨瘦素(Leptin)与颞叶癫痫发生、发展过程的关系。
帕金森病模型小鼠海马神经炎症、凋亡及自噬蛋白的表达研究
帕金森病模型小鼠海马神经炎症、凋亡及自噬蛋白的表达研究张培浩;孙孟菲;徐一达;朱营利;贾雪冰;李阳;陈赛男;申延琴【摘要】目的观察MPTP诱导的帕金森病模型小鼠海马区域神经炎症,细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达.方法雄性C57BL/6J小鼠连续腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)30 mg/kg 5 d,对照组小鼠腹腔注射生理盐水5d,与模型组小鼠同日处死取材.用RT-PCR、Western blot和免疫荧光等方法检测小鼠海马内神经炎症相关因子NF-кB,凋亡相关因子PARP1、Caspase-3、Drp1和细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达情况.结果模型组海马NF-кB表达水平(1.81 ±0.62)较对照组(1.21 ±0.28)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);模型组海马Caspase-3表达水平(1.05 ±0.22)较对照组(0.81±0.14)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);模型组海马Drp1表达水平(1.18±0.21)较对照组(0.85±0.24)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);模型组海马LC3-Ⅱ表达水平(1.76±0.71)较对照组(1.16±0.27)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);模型组海马PARP1表达水平(1.17 ±0.35)较对照组(1.62±0.45)明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MPTP造模可以诱导NF-кB介导的海马神经炎症发生,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP1、Drp1参与其中.【期刊名称】《延安大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2018(016)004【总页数】6页(P1-5,9)【关键词】帕金森病;海马;神经炎症;细胞自噬;细胞凋亡【作者】张培浩;孙孟菲;徐一达;朱营利;贾雪冰;李阳;陈赛男;申延琴【作者单位】江南大学无锡医学院神经退行和损伤研究室,江苏无锡214122;江南大学无锡医学院神经退行和损伤研究室,江苏无锡214122;江南大学无锡医学院神经退行和损伤研究室,江苏无锡214122;江南大学无锡医学院神经退行和损伤研究室,江苏无锡214122;江南大学无锡医学院神经退行和损伤研究室,江苏无锡214122;江南大学无锡医学院神经退行和损伤研究室,江苏无锡214122;江南大学无锡医学院神经退行和损伤研究室,江苏无锡214122;江南大学无锡医学院神经退行和损伤研究室,江苏无锡214122【正文语种】中文【中图分类】R742.5帕金森病(Parkinson’sdisease，PD)是最常见的中枢神经系统退行性疾病之一，患者主要表现为运动障碍，包括运动迟缓、肌强直、姿势异常与静止性震颤等[1],并且在疾病后期也会出现认知障碍。
小鼠海马LTP
一．背景知识Morris 水迷宫实验是检测动物空间学习记忆功能的重要行为学方法，海马LTP 实验可以了解突触可塑性变化，反映行为学的发生机制。
脑片是指从动物脑区制备的厚度为100~700μm能够在体外存活一定的时间的脑薄片，脑片技术起始于20世纪50年代Li和McIlwain 的离体脑片电生理研究。
脑片兼有在体脑实验和离体神经细胞培养的某些特点，在体外48小时内依然能保持良好的活性，离子通道性质不会发生变化，离体脑片保持有完整的神经突起和神经解剖通路，便于研究突触活性。
在脑片的电生理过程中排除了活体血压、温度、电解质、血脑屏障等因素的干扰，可以按不同的实验目的直接准确地改变脑片灌流液的成份和条件，如温度、酸度和渗透压、通氧状态、以及离子通道或细胞信号转导通路的阻断剂等；还能借助显微镜准确地放置记录电极和刺激电极。
维持脑片活性有两种不同的技术：交界式脑片孵育：脑片部分浸入人工脑脊液（ACSF）中，上表面暴露在湿化的含95% O2 和5% CO2 的气体，这种孵育方式，脑片得到氧气是通过氧气在脑片上表面的扩散；全浸式脑片孵育：脑片全部浸入在人工脑脊液中，在这种孵育方式中，脑片是从溶解在人工脑脊液中得到氧气。
孵育脑片方式的选用取决于实验目的。
例如当采用共聚焦成像技术时采用全浸式脑片孵育。
这两种不同的脑片孵育方式对脑片的细胞生理有不同的影响，例如，最近研究发现α-钙调蛋白依赖性激酶ІІ的磷酸化，这种酶在LTP 诱导中起关键作用，在全浸式脑片中短暂升高，而在交界式脑片孵育方式中则持续降低。
脑片切片后，必须恢复1.5 小时后才开始记录，在恢复和记录过程中不一定要采用同一种孵育方式。
离体脑片上做LTP实验，周围环境容易控制，可以人为调节ACSF 里面的离子成分到需要的浓度，而且可以持续给予脑片通饱和氧和二氧化碳，维持脑片的活性，还可以控制记录时候的温度，方便给予稳定浓度的药物，可控性比较好，比较适合研究急性药物对突触可塑性的影响。
MED64平面微电极阵列技术记录小鼠海马脑片自发放电
MED64平面微电极阵列技术记录小鼠海马脑片自发放电李华; 刘丽娜; 魏华; 许晴; 薛奋勤; 薛冰【期刊名称】《《中国医疗器械信息》》【年(卷),期】2019(025)019【总页数】3页(P33-35)【关键词】MED64平面微电极阵列; 海马脑片; 自发放电【作者】李华; 刘丽娜; 魏华; 许晴; 薛奋勤; 薛冰【作者单位】首都医科大学中心实验室北京 100069【正文语种】中文【中图分类】R742.1微电极阵列（Multi-Electrode Array）记录系统是包括了离体电生理研究所需的一整套硬件设备耗材和分析软件。
自从第一套微电极阵列系统问世后，它主要是通过如何取得更好的胞外记录信号和增加电极的密度数量上这两方面来发展的[1-3]。
本校中心试验室的MED64平面微电极阵列是日本Alpha MED Sciences公司研发的多通道离体电生理记录系统。
它可通过64个平面微电极对离体组织或细胞进行多通道电生理同步记录。
适用于神经、视网膜和心肌细胞电生理特性和离子通道生物学特性研究。
由于同时记录脑片多个神经元或可兴奋组织的放电，采集数据多，大大地扩展了研究的视野，有助于对整个神经核团或器官的神经元之间联系和功能的研究[4,5]。
并且由于平面微电极阵列技术对于细胞来说是无创性的，这样既保持了对单细胞的准确记录，又能记录对药物刺激响应的较长时间的演变。
这些特点使得其具有不可替代的优势。
目前本校已有多个神经生物学、生理学PI组对记录分析活体组织神经元自发性活动有迫切需求，尤其是癫痫病研究领域。
这就需要建立一套平面微电极阵列记录离体神经组织自发放电的方法。
1.材料与方法1.1 一般材料实验动物：选取清洁级健康成年雄性C57BL/6小鼠，由首都医科大学动物部提供，实验动物许可证号：SCXK（京）2016-0011。
实验动物的使用均按照首都医科大学实验动物中心和北京实验动物协会的标准执行。
整个实验过程中尽可能地减少对动物的伤害及所用动物的数量。
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step 1:This is a dorsal view of a mouse’s skull, in order to access the brain you can cut along the coronal suture and sagittal suture then pull off both sides of parietal bone and interparietal bone
step 2: Now the skull is open and you can see the brain clearly, in order to get the hippocampus you’d better keep the brain in the cranial cavity so the brain will not move when you continue with the following steps
step 3: In order to expose the hippocampus you need to remove the cerebral cortex covering it. The first incision is at the end of the hemisphere; the incision should be about 0.7mm deep for most adult mouse that you might not hurt the hippocampus while to expose it. The 2nd incision is about 1.5-2mm in front of the first one, this incision you need cut into the lateral ventricle, both of the incisions go to the ventral of the brain and meet there. Now this piece of cortex is free, pull it up, you will see the hippocampus just like in this picture, also you can see the CSF in the opened ventricle.
step 4: Keep working on the other side of the brain pull up both sides of the cortex that covering the hippocampus along the ventricle. Now you can see the dorsal part of the hippocampus. Separate the rest of the hippocampus from the cortex covering
it along the surface of the hippocampus towards the ventral part of the hippocampus. 0
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step 5: Keep working on the other side of the brain pull up both sides of the cortex that covering the hippocampus along the ventricle. Now you can see the dorsal part of the hippocampus. Separate the rest of the hippocampus from the cortex covering it along the surface of the hippocampus towards the ventral part of the hippocampus.
step 6: Now you need to free the hippocampus from the surrounding tissue 0
step 7: Here is the hippocampus picked out from the brain.
The hippocampal formation is a bilateral structure sandwiched between the cerebral cortex and the thalamus. Figure 1 depicts a reconstruction of the hippocampus (yellow) in its three-dimensional (3D) position within the rat's brain. These 3D reconstructions were made from the serial sections of LONI's Rat Brain Atlas.。