反相高效液相色谱法直接测定茶叶水提取物中的嘌呤碱
重要 4种动物药水提液中3种嘌呤碱HPLC法测定
4种动物药水提液中3种嘌呤碱HP LC 法测定李 楠 王琳琳 刘海艳 张 洁 刘 军 王英华3(吉林大学化学学院 长春130012)摘 要 以甲醇/水为流动相,反相高效液相色谱2紫外检测器测定了乌蛇、蟾蜍、土虫、地龙水提取液中黄嘌呤、次黄嘌呤、腺嘌呤的含量,对样品提取和高效液相色谱条件进行了优化。
黄嘌呤、次黄嘌呤、腺嘌呤的检出限分别为01012×10-6、01041×10-6、01042×10-6g/mL,样品分析的日内测定相对标准偏差分别小于411%、713%、415%,日间测定相对标准偏差分别小于518%、219%、311%,平均加标回收率为94%～107%。
关键词 高效液相色谱,超声提取,嘌呤,动物药中图分类号:O652 文献标识码:A 文章编号:100020518(2009)08209962032008207207收稿,2008212228修回通讯联系人:王英华,女,教授;E 2mail:wangyh@jlu .edu .cn;研究方向:食品分析、化学计量学技术应用测定嘌呤类物质含量的方法有高效液相色谱法[1～3]、紫外分光光度法[4]、纸基质磷光法[5]和毛细管电泳法等。
高效液相色谱法流动相大多用H 2P O -42HP O 2-4等缓冲盐[1,2],其易堵塞仪器管路并影响色谱柱使用寿命,测定样品多为饮料和体液,有关食品及动物药中嘌呤含量测定的报道很少,而食品、医药等研究领域急需相关数据。
本文以水为提取溶剂,对乌蛇、蟾蜍、土虫和地龙干燥粉末进行超声提取、离心分离、滤膜过滤后直接注入高效液相色谱仪中测定,紫外检测黄嘌呤、次黄嘌呤、腺嘌呤含量。
Agilent 21100型HP LC 配有紫外检测器(美国Agilent 公司);K Q 2200VOE 型超声波提取仪(昆山市超声仪器有限公司);Agilent TC 2C 18色谱柱(250mm ×416mm ,5μm ,美国Agilent 公司),色谱条件:流动相为V (甲醇)∶V (水)=5∶95,流速为110mL /m in,柱温为30℃,紫外检测波长为254n m ,进样量为20μL,标准品:次黄嘌呤(hypoxanthine )、黄嘌呤(xanthine )、腺嘌呤(adenine )(北京经科宏达生物公司)配制成浓度为015g/L 标准储备液,储存于冰箱内(4℃);甲醇(色谱纯,美国Fisher 公司)。
超高效液相色谱法同时检测茶叶中的没食子酸咖啡碱和儿茶素
超高效液相色谱法同时检测茶叶中的没食子酸咖啡碱和儿茶素一、超高效液相色谱法的原理超高效液相色谱法是一种在液相色谱法基础上发展起来的新技术，其原理是利用高压将流动相送入色谱柱进行快速分离，通过控制流速和柱温来实现对分离效果和分析时间的优化。
超高效液相色谱法具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高和分辨率好等优点，逐渐成为茶叶中活性成分分析的首选方法。
二、茶叶中的没食子酸、咖啡碱和儿茶素1. 没食子酸没食子酸是茶叶中的一种重要成分，具有抗氧化、抗炎和抗菌等多种生物活性。
没食子酸可保护人体细胞不受自由基的伤害，有助于预防癌症、心脏病和糖尿病等疾病。
对没食子酸在茶叶中的含量进行准确分析具有重要的现实意义。
2. 咖啡碱咖啡碱是茶叶中的另一种重要成分，具有提神醒脑、抗疲劳和促进新陈代谢的作用，还可以帮助减轻哮喘和支气管炎等疾病的症状。
对茶叶中咖啡碱的含量进行准确检测，有助于了解茶叶的品质和功效。
3. 儿茶素儿茶素是茶叶中的主要成分，包括儿茶素、表儿茶素和咖啡儿茶素等多种类别。
儿茶素具有抗氧化、抗癌、抗衰老和降血压等多种保健作用，对人体健康具有重要意义。
对茶叶中儿茶素的含量进行快速、准确的检测具有重要的现实价值。
1. 样品制备取一定量的茶叶样品，进行粉碎和均质处理，然后采用适当的溶剂将样品中的活性成分提取出来。
2. 超高效液相色谱条件使用C18色谱柱进行分离，选择合适的移动相和梯度洗脱程序，控制流速和柱温，以确保分离效果和分析时间的优化。
3. 检测方法采用紫外检测器对没食子酸、咖啡碱和儿茶素的浓度进行检测，根据标准曲线计算样品中的活性成分含量。
通过上述方法，可以快速、准确地同时检测茶叶中的没食子酸、咖啡碱和儿茶素的含量，为茶叶品质的评价和功效的研究提供了重要的技术支持。
四、超高效液相色谱法在茶叶中活性成分检测中的应用超高效液相色谱法已经广泛应用于茶叶中活性成分的检测中，为茶叶品质的评价、功效的研究和生产的控制提供了重要的技术手段。
反相高效液相色谱法测定可乐,茶叶中的咖啡因
可乐 、 叶样 品 中的咖啡 因含量 茶 １ 实验 部分 １１ 仪器 与试剂 ．
Hale Waihona Puke 。同时， 它也是某些抗癌药物和中枢神经药物的
２０ ／８Ａ Ｔ Ｒ Ｏ Ｉ液相色谱仪 （ ０Ｂ７５ ／ Ｕ Ｂ Ｅ 珀金． 埃尔 默公 司 ， Ｓ ）７５ Ｕ Ａ ；８Ａ紫 外． 见分 光 光 度 计 （ 金 ． 可 珀 埃尔默公 司， Ｓ ）５７双波长双光束分光光度计 ＵＡ ； ５ （ 本 日立）Ａ ６ 超声清洗器（ 日 ； Ｓ ００ ２ 奥特赛恩斯仪器 有限公司， 天津）微孔溶剂过滤器 （ ； 津腾过滤器件 厂， 天津 ） 咖啡因标准 品（ 口分装 ） 甲醇， 进 ； 冰醋酸等试 剂均为 分析纯 以上 ， 为去 离子水 水
帅 琴 ， 龚 宇． 杨 薇， 王 丽
（ 中国地质大学材料科学与化学工程学院， 武汉 ４０ ７） ３０４
摘 要 ： 究 了反 相 高效液相 色谱 ＇ （ Ｐ Ｈ Ｌ ） 研 ￣ Ｒ － Ｐ Ｃ 直接 测 定茶 叶水 提鼠 物 、 乐饮 可
料 中的咖啡 因的新 方法 ， 用 Ｐ —１ ， ｃ １Ｈ． ０Ｉ （０６ ． ：．８ 溶 采 ＥＣ ８柱 以 ＨＯ ．Ａｅ３ ：９９ ００ ） － ２ 液作流动 相 ， 紫外捡 测波 长为 ２０ｎ ６ ｍ。可在 ８ｍｎ内将咖啡 因与基体 分 离， 啡 ｉ 咖
１２ 色谱条件 ．
基础结构单元 。因此 ， 研究简便 、 快速分离和测定 咖啡因的分析方法在生化、 医学 、 药物和食品研 究 中都具有很重要的意义 可乐 、 茶叶等饮料 中都含 有一定量的咖啡因 ， 对其中咖啡因进行有效分离与 准确测定将有助于对饮料的生产工艺、 产品质量进 行准确监控 ， 有利于产 品真伪 的辨别 ， 同时也有利
茶叶中儿茶素类物质的含量测定方法比较研究
茶叶中儿茶素类物质的含量测定方法比较研究茶叶中的儿茶素类物质是茶叶的主要活性成分之一，对人体健康具有多种益处。
因此，准确测定茶叶中儿茶素类物质的含量对于茶叶加工和消费者选择茶叶具有重要意义。
随着科技的发展和科研水平的提高，出现了多种测定茶叶中儿茶素类物质含量的方法。
本文将对其中的方法进行比较研究，以期为茶叶行业提供科学依据和指导。
一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前广泛应用于儿茶素含量测定的方法之一。
该方法通过将茶叶中的儿茶素类物质溶解并分离后，利用具有高灵敏度的检测器进行测定。
该方法具有准确度高、灵敏度好、分离效果好等优点，能够分析茶叶中多种儿茶素的含量。
然而，该方法的仪器设备较为昂贵，操作复杂，需要较长的分析时间，对于一些小型茶叶生产企业来说可能不太适用。
二、紫外光谱法紫外光谱法也是一种常用的测定茶叶中儿茶素含量的方法。
该方法利用儿茶素类物质在紫外光下的吸收特性，通过测量茶叶浸出液的吸光度来确定儿茶素的含量。
紫外光谱法操作简便，成本相对较低，适用于一些实验室和小型茶叶企业。
然而，该方法只能估测总儿茶素的含量，对于不同种类的儿茶素类物质的分析能力较弱。
三、自动显微镜法自动显微镜法是一种近年来新兴的儿茶素含量测定方法。
该方法通过对茶叶中儿茶素类物质的细胞结构进行显微观察和图像分析，以评估茶叶中儿茶素的含量。
该方法具有非破坏性、快速、简便等优点，能够准确测定茶叶中儿茶素的分布情况。
然而，该方法需要高性能的显微镜和先进的图像处理软件等设备，成本较高，不适用于一些资源有限的茶叶企业。
四、核磁共振法核磁共振法是一种先进的儿茶素含量测定方法，通过测量茶叶中儿茶素类物质在核磁共振谱图上的峰面积或峰高来计算其含量。
该方法具有准确性高、可定量多个成分等特点，能够同时测定茶叶中多种儿茶素类物质的含量。
然而，核磁共振法设备昂贵，对于资源有限的茶叶企业来说不太经济实用。
综上所述，茶叶中儿茶素类物质的含量测定方法主要包括高效液相色谱法、紫外光谱法、自动显微镜法和核磁共振法。
茶叶农残检测方法
茶叶农残检测方法茶叶是我国传统的饮品，拥有悠久的历史和广泛的消费者基础。
然而，茶叶上可能残留有农药、重金属等有害物质，对人体健康造成潜在威胁。
因此，茶叶农残检测方法的发展对于保障消费者的健康至关重要。
本文将介绍几种常用的茶叶农残检测方法，并对其原理和应用进行详细阐述。
一、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种常见的茶叶农残检测方法。
它基于样品中的农残物质在特定条件下与固定相发生非常相互作用，进而实现物质的分离与定量。
该方法具有灵敏度高、准确性好、操作简便等优点。
此外，高效液相色谱法还可以同时检测多种农残物质，从而提高检测效率。
然而，该方法需要昂贵的仪器设备和复杂的分析技术，因此在实际应用中受到一定的限制。
二、气相色谱法气相色谱法是一种常用的茶叶农残检测方法，其原理是利用样品中的农残物质在高温下瞬间蒸发，然后进入气相色谱柱进行分离和定量。
该方法具有灵敏度高、选择性好、分离效果好等优点。
此外，气相色谱法还可以通过耳目或荧光探测器等检测器件对农残物质进行测定。
然而，该方法对仪器设备的要求较高，而且不能同时检测多种农残物质，因此它在实际应用中的可行性需要综合考虑。
三、质谱法质谱法是一种常用的茶叶农残检测方法，其原理是通过质谱仪对样品中的农残物质进行分析和鉴定。
质谱法具有灵敏度高、准确性好、选择性强等优点。
该方法可以同时分析多个农残物质，且可以对复杂的样品矩阵进行分离和鉴定。
此外，质谱法还可以通过质子化或电离法对农残物质进行定性和定量分析。
然而，该方法需要昂贵的仪器设备、复杂的分析技术和专业的操作人员，限制了其在实际应用中的广泛性。
四、光谱法光谱法是一种常见的茶叶农残检测方法，其原理是通过样品中农残物质的吸收、发射、散射等光学特性来分析和鉴定。
光谱法具有灵敏度高、非破坏性、操作简便等优点。
该方法可以使用紫外-可见吸收光谱、荧光光谱、红外光谱等不同的光谱仪器进行分析。
此外，光谱法还可以通过建立农残物质与光谱特征之间的定量关系，对农残物质进行定量分析。
06 反相高效液相色谱法测定茶叶提取物咖啡因的纯度.doc
实验反相高效液相色谱法测定茶叶提取物咖啡因的纯度一、目的要求1.理解反相高效液相色谱的分离原理。
2.掌握HPLC定性定量方法。
3.了解流动相组成对样品组分保留时间的影响。
二、方法原理反相键合相色谱法是一种最常见的高效液相色谱法，70％以上的HPLC分离分析工作是用它完成的。
这种方法特别适用于同系物、苯并系物等的分离。
十八烷基键合相（ODS或C18）是一种最常用的非极性化学键合固定相，而甲醇－水或乙腈－水体系是最常见的极性流动相。
反相键合相色谱法的保留机理目前多用疏溶剂理论解释。
疏溶剂理论假定羟基键合相表面是一层均匀的非极性羟类配位基，并认为极性溶剂分子与非极性溶质分子或与溶质分子中的非极性部分互有排斥力，溶质与键合相的结合是为了减少受溶剂排斥的面积，而不是由于非极性溶质分子或与溶质分子的非极性部分与键合相烷基之间的作用力，也就是说反相键合相的保留机理主要是疏水效应起主导作用。
在反相键合相色谱法中，溶质的疏水结构差异是分离的基础。
对非离子型化合物，溶质极性愈大，保留值愈小；对非极性化合物，溶质的表面积愈大，保留值愈大；对同系化合物，链长愈长或苯环愈多，保留值愈大。
在反相键合相色谱法中，溶剂的组成对样品组分的保留值有很大的影响。
溶质的保留值随流动相表面张力的减小而减小。
常用的溶剂中以水的表面张力最大。
若流动相中有机溶剂含量增加，流动相的表面张力将下降，则溶质的保留值减小。
利用保留值tR定性：在相同条件下，通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰，来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中的位置，初步定性。
定量则采用峰面积进行计算。
三、仪器与试剂仪器：岛津液相色谱仪；六通进样阀；反相C18柱；20μLHPLC微量注射器；微孔滤膜杯式滤器；超声波清洗器及玻璃器皿一套。
试剂：咖啡因标准，采用色谱纯甲醇配制浓度为10mg/mL的咖啡因储备液（准确称取0.5g定容于50mL）；取1.00mL 10mg/mL的咖啡因标准再用甲醇稀释至100mL的浓度为100μg/mL咖啡因标准中间液。
超高效液相色谱法同时检测茶叶中的没食子酸咖啡碱和儿茶素
超高效液相色谱法同时检测茶叶中的没食子酸咖啡碱和儿茶素一、没食子酸、咖啡碱和儿茶素的化学特性没食子酸是茶叶中主要的黄酮类化合物，具有抗氧化、抗菌、抗病毒等多种生物活性。
而咖啡碱是一种生物碱，其具有兴奋中枢神经系统、提神醒脑的作用。
儿茶素是茶叶中最主要的黄酮类化合物，具有抗氧化、抗癌、抗炎等作用。
这三种成分在茶叶中的含量不仅直接影响着茶叶的质量和功效，还与茶叶的生长环境、处理工艺等密切相关。
对茶叶中的这些成分进行准确快速的检测具有非常重要的意义。
二、UHPLC技术在茶叶中没食子酸、咖啡碱和儿茶素的同时检测1. 样品前处理茶叶样品通常需经过粉碎、称量、提取等处理步骤。
提取方法通常采用乙酸乙酯等有机溶剂，将茶叶中的有机成分充分提取出来，制备成待测样品。
2. 色谱条件UHPLC技术需要选用高效的色谱柱和流动相，以确保样品的快速分离和准确检测。
对于没食子酸、咖啡碱和儿茶素的同时检测，可以选择C18反相色谱柱，并采用甲醇-水混合溶剂系统作为流动相，通过梯度洗脱的方式完成对这三种成分的分离检测。
3. 方法验证在UHPLC技术中，方法验证非常重要。
要保证测定结果的准确性和可靠性，需对分离和检测方法进行系统的验证实验，包括线性范围、灵敏度、重现性、稳定性等指标的评价。
以确保所建立的UHPLC分析方法能够满足对没食子酸、咖啡碱和儿茶素进行快速准确检测的要求。
4. 结果分析利用建立的UHPLC分析方法进行茶叶中没食子酸、咖啡碱和儿茶素的检测，并对所得数据进行分析和解释。
通过比对标准物质的色谱图谱，可以对样品中的目标成分进行定性和定量分析，从而获得茶叶样品中这三种成分的含量信息。
三、技术应用通过UHPLC技术实现茶叶中没食子酸、咖啡碱和儿茶素的同时检测，可以为茶叶生产和加工提供技术支持和质量控制手段。
一方面，可以通过对这些成分含量的检测，评价茶叶的品质和功效，指导生产加工工艺的改进和优化，提高茶叶的市场竞争力。
也可为对茶叶成分进行科学研究提供技术保障，进一步挖掘茶叶中的有益成分，并探索其在保健食品、药品等领域的应用价值。
茶叶中5种酚酸类化合物的hplc测定方法
茶叶中5种酚酸类化合物的hplc测定方法茶叶是一种常见的饮品，不仅有清凉的口感，还具有丰富的营养成分。
其中，酚酸类化合物是茶叶中重要的活性成分之一。
本文将介绍一种利用高效液相色谱（HPLC）测定茶叶中5种酚酸类化合物的方法。
我们需要了解一下茶叶中的酚酸类化合物。
茶叶中含有多种酚酸类化合物，其中比较常见的有咖啡酸、橙酸、苹果酸、柠檬酸和藤黄酸等。
这些化合物具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种生物活性，对人体健康有益。
接下来是HPLC测定方法的介绍。
HPLC是一种分离和定量分析的常用技术，具有高灵敏度、高分辨率和高重现性等优点。
在测定茶叶中的酚酸类化合物时，我们可以选择用反相色谱柱进行分离。
反相色谱柱能够有效地分离茶叶中的酚酸类化合物，使其达到良好的分离度和分析结果。
在进行HPLC测定前，我们需要准备样品的提取和制备工作。
首先，将茶叶样品研磨成细粉，然后加入适量的甲醇进行提取，振荡一段时间后离心。
离心后，将上清液取出并过滤，得到茶叶提取液。
接下来，将提取液进行稀释，并进行滤过，以去除悬浮物和杂质。
在HPLC测定中，我们可以选择使用紫外检测器进行检测。
紫外检测器对茶叶中的酚酸类化合物具有较高的灵敏度和选择性。
此外，为了提高分析结果的准确性和重现性，我们可以选择内标法进行定量分析。
在进行HPLC测定时，我们需要设置适当的流动相和梯度条件。
常用的流动相是乙腈和水的混合溶液，可以根据需要添加一些缓冲剂来调节pH值。
在梯度条件下，我们可以通过调整流动相的乙腈浓度来实现酚酸类化合物的分离和定量。
根据茶叶中的酚酸类化合物的峰面积和内标峰面积的比值，可以计算出茶叶中各种酚酸类化合物的含量。
通过比较样品与标准品的峰面积比值，可以确定茶叶中酚酸类化合物的种类和含量。
利用HPLC测定茶叶中5种酚酸类化合物的方法是一种准确且可靠的分析技术。
通过合理的样品提取和制备工作，选择适当的色谱柱和检测器，以及优化的流动相和梯度条件，我们可以准确地测定茶叶中的酚酸类化合物含量，为茶叶的质量评估和研究提供有力支持。
高效液相色谱法测定茶饮料中的咖啡因
咖啡 因 ，很 多 自然 来 源 的咖啡 因也含 有 多种 其他 黄 嘌呤 生 物碱 ，包括 强 心剂 茶碱 、可 可碱 以及其 他 物质 ，例 如
红 茶饮 料
购 自超市 ；甲醇 、乙腈
均为 色谱 纯 。
１ ． ２ 仪器与 设备 Ｗａ ｔ ｅ ｒ ｓ ｅ ２ ６ ９ ５高 效 液 相 色 谱 仪 ；ＤＯＳ色 谱 柱 为
检测 条件 为 ： 波长 ２ ７ ３ ｎ ｍ， 流动相 乙腈 ： 水＝ ２ ０： ８ ０ ， 柱温 ２ ０ ￣ Ｃ， 流动相流速 ｌ ｍＬ ／ ｍｉ ｎ 。 在０ ～ ２ ０ ｍＬ的浓度范围内 线性关 系良好 ， 加标 回收率为 ９ ９ ． ６ ９ ％。建立 的方法 能够 准确 的测定茶饮料 中的咖啡因含量。 关键词 ：高效液色谱法 ； 饮料 ； 咖啡 因； 测定
Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｃａ ｆ ｆ ｅ ｉ ｎ ｅ ｉ ｎ Ｔｅ ａ Ｄｒ ｉ ｎｋ ｓ ｂ ｙ ＨＰ ＬＣ
ＨＵＡＮＧ Ｘｉ ａ ｎ ・ ｑ ｉ ｎ ｇ
（ Ｈ ｅ ｎ ａ ｎ ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｚ ｈ ｅ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ４ ５ ０ ０ ０ ２ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
１ 材料与方法
ＡＰ Ｃ药 片 中均 含 有咖 啡 因。有 咖啡 因成 分 的咖啡 、茶 饮
茶叶中咖啡因的高效液相色谱分析
实验八 可乐、咖啡、茶叶中咖啡因的高效液相色谱分析一、实验目的：⑴ 解反相色谱的原理和应用⑵ 握标准曲线定量法二、实验原理：咖啡因又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称1,3,7-三甲基黄嘌呤，可由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱。
它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。
咖啡中含咖啡因1.2%－1.8％，茶叶约含2.0%－4.7％。
可乐、APC 药片中均含有咖啡因。
其分子式为C 8H 10O 2N 4，结构式： N NN N CH 3CH 3CH 3OO样品在碱性条件下，用氯仿定量提取，采用反相液相色谱柱进行分离，以紫外检测器进行检测，以咖啡因标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度作工作曲线，再根据样品中的咖啡因面积，由工作曲线算出浓度。
三、实验仪器与药品⑴仪器LC-10A 液相色谱仪 C-R6A 数据处理机 色谱柱（EconosphereC 18） 平头微量进样器⑵药品① 甲醇（色谱纯） 双蒸水 氯仿（A.R ） 1mol/LNaOH;NaCl(A.R.) Na 2SO 4(A.R.) 咖啡因（A.R.） 可口可乐（1.25L 瓶装） 雀巢咖啡 茶叶②1000mg/L 咖啡因储备液 将咖啡因在110℃下烘干1小时，准确称取0.1000g 咖啡因，用氯仿溶解，转移至100mL 容量瓶中，定容至刻度。
四、实验步骤：⑴ 色谱条件：柱温：室温流动相：甲醇／水＝60：40流量：1.0mL/min检测波长：275nm⑵ 咖啡因标准系列溶液配制：分别用吸量管吸取0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40mL 咖啡因储备液于六只容量瓶中，用氯仿定容至刻度，浓度分别为40、60、80、100、120、140mg/L⑶ 样品处理：①将100mL 可口可乐置于250mL 烧杯中，剧烈搅拌30min 或用超声波脱气5min ，以赶净二氧化碳。
②准确称取咖啡0.25g ，用水溶解定容至100mL 。
③准确称取茶叶0.3g,加蒸馏水30mL 煮沸10min ，冷却后将清液转移至100mL 容量瓶，并按此操作重复两次，定容至刻度。
高效液相色谱法分析茶叶中多酚类物质
高效液相色谱法分析茶叶中多酚类物质茶叶是一种常见的饮品，具有许多健康益处。
茶叶中含有丰富的多酚类物质，如儿茶素和茶黄素等。
这些多酚类物质具有很高的抗氧化活性，可以预防心脑血管疾病和抗癌作用。
因此，分析茶叶中的多酚类物质是非常重要的。
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析方法，特别适用于分离和定量茶叶中的多酚类物质。
HPLC法通过将混合物分离成各种成分，并测量它们的相对浓度。
这种方法具有精确、准确和快速的优点，因此在茶叶分析中得到广泛应用。
首先，我们需要准备样品。
茶叶中的多酚类物质通常以固体形式存在，所以我们需要将茶叶样品研磨成粉末，以增加其表面积，使得提取更为充分。
接下来，我们使用溶剂（如醇）来提取样品中的多酚类物质。
溶剂的选择要根据样品的性质和我们需要提取的化合物来确定。
提取完成后，我们将提取物过滤并进一步纯化。
这一步骤可以去除悬浮物和杂质，以使我们得到纯净的提取物。
接下来，我们将提取物注入HPLC仪器进行分离和定量。
在HPLC分析中，样品会被注入柱中，柱内充满了固定相。
样品中的化合物会在这个固定相的作用下发生各种各样的相互作用，如吸附和分离。
这些相互作用使得样品中的化合物按照它们的特性和极性被分离出来。
HPLC仪器还包括一个检测器，用于检测样品中的化合物。
最常用的检测器是紫外可见光检测器，它可以测量样品中化合物的吸光度。
通过与标准品进行比较，我们可以确定样品中各种多酚类物质的浓度。
不同种类的茶叶中的多酚类物质含量有所不同，这取决于茶树的品种、种植环境和加工方法等因素。
例如，在绿茶中，儿茶素是主要的多酚类物质；而在红茶中，儿茶素与茶黄素的含量相对平衡。
因此，通过HPLC分析，我们可以了解茶叶中多酚类物质的相对含量和不同茶叶之间的差异。
除了茶叶中的多酚类物质，HPLC还可以用于分析其他类型的茶叶成分，如咖啡碱和儿茶素衍生物。
咖啡碱是茶叶中的一种重要活性成分，具有兴奋神经、增加新陈代谢和促进脂肪氧化等作用。
嘌呤碱的鉴定原理
嘌呤碱的鉴定原理嘌呤碱是一类重要的生物碱，广泛存在于植物和动物的细胞中，具有重要的生物学功能。
在医学、生物化学、食品科学等领域，对嘌呤碱的鉴定具有重要意义。
下面将介绍嘌呤碱的鉴定原理。
首先，嘌呤碱的鉴定可以通过色谱法进行。
色谱法是一种分离和鉴定化合物的常用方法，其中高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的色谱技术。
利用HPLC技术，可以将样品中的嘌呤碱分离出来，并通过检测器进行检测和定量分析。
这种方法具有分离效率高、灵敏度高、准确性高的特点，因此被广泛应用于嘌呤碱的鉴定领域。
其次，嘌呤碱的鉴定还可以通过质谱法进行。
质谱法是一种利用质谱仪对化合物进行分析和鉴定的方法。
通过质谱技术，可以获得嘌呤碱分子的质谱图谱，通过分子离子峰、碎裂峰等特征进行鉴定。
这种方法具有高灵敏度、高分辨率和高准确性的特点，可以对嘌呤碱进行精确的鉴定和定量分析。
此外，嘌呤碱的鉴定还可以通过光谱法进行。
光谱法是一种利用物质对光的吸收、发射、散射等特性进行分析和鉴定的方法。
在紫外-可见光谱领域，可以利用嘌呤碱的吸收特性进行鉴定；在红外光谱领域，可以利用嘌呤碱的分子振动特性进行鉴定。
这些方法具有简便、快速、非破坏性的特点，适用于嘌呤碱的常规鉴定和分析。
综上所述，嘌呤碱的鉴定原理主要包括色谱法、质谱法和光谱法。
这些方法各具特点，可以相互补充，从不同角度对嘌呤碱进行鉴定和分析。
在实际应用中，可以根据需要选择合适的方法，进行嘌呤碱的鉴定工作，为相关领域的研究和应用提供可靠的数据支持。
[新版]试验4高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因含量
![[新版]试验4高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因含量](https://img.taocdn.com/s3/m/60bb0020a22d7375a417866fb84ae45c3b35c2e0.png)
高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因含量一目的要求：1 学习高效液相色谱定性和定量分析的方法；2 熟悉高效液相色谱仪的结构；3 熟悉高效液相色谱分析操作和条件的设置。
二实验原理：茶叶中咖啡因的含量是衡量茶叶质量的重要指标之一，也具有多种药理活性，咖啡因又名咖啡碱，属甲基黄嘌呤化合物，具有提神醒脑等刺激中枢神经的作用。
对于茶叶中咖啡因含量测定的常用方法有紫外分光光谱法，高效液相色谱法。
茶叶中的成分较多，色谱法具有分离和检测双重功能，用色谱法更好。
目前茶叶中咖啡因含量的测定采用反相高效液相色谱法较普遍。
本实验采用紫外检测器，水提取茶叶中的咖啡碱，用0.45的滤膜过滤，用0.2%H3PO4：CH3OH(80:20)流动相，检测波长276nm，用咖啡因对照品的保留时间进行定性，用外标法定量。
三试剂和仪器：LC-2010AHT高效液相色谱仪(日本岛津)，自动进样系统和紫外检测器；KQ3200E型超声波清洗器；0.45μm的水系滤膜和有机滤膜；TDL-40B离心机。
100mL的容量瓶。
对照品工作溶液为：咖啡碱标样，乙醇；磷酸；纯净水；甲醇；茶叶样品四茶叶样品的处理准确称取茶叶样品1 g（0.0001 g）于100 mL容量瓶，加入约70mL纯净水，在超声波中超声20min，平行3份，定容至100mL。
0.45μm的水系滤膜抽滤，取续滤液与比色管（或者用5000转/min以上的离心机离心15min，取上清液），待用。
五色谱条件（实验时自己记录）色谱柱：流动相体系：0.2%磷酸–甲醇（体积比为80 : 20）(注意：在做样品时用梯度洗涤，咖啡因出峰后用100% CH3OH冲洗7-8min的柱子，再用0.2%磷酸–甲醇（体积比为80 : 20）平衡7-8min柱子才能进下一样品)流速：1.000 mL/min柱温：30.0 ºC进样量：5 µL 检测波长：276 nm六咖啡因标准曲线绘制和样品测定用相同浓度的咖啡碱标准溶液，按照下表1中的不同体积进样。
反相高效液相色谱测定白毛茶水提取物中的嘌呤碱
反相高效液相色谱测定白毛茶水提取物中的嘌呤碱
凌育赵
【期刊名称】《现代食品科技》
【年(卷),期】2005(021)002
【摘要】以市售五个普通茶叶样品为对照,利用反相高效液相色谱法直接测定白毛茶水提取物中3种嘌呤碱,方法简便快速.在SpherisorbC18柱上,以甲醇-
KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液(pH 8.2)作流动相,同时分离和测定可可碱、茶碱和咖啡碱.检出限为pg/L级,标准加入回收率97.13%～107.31%.结果表明,南昆山白毛茶的H P L C图谱具有特殊性,其嘌呤碱成分结构异于普通茶叶,含有丰富的可可碱,高达3.13～4.69%,比普通对照样高出11.9～15.2倍.
【总页数】4页(P147-149,137)
【作者】凌育赵
【作者单位】仲恺农业技术学院化学与化工系广东广州 510225
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.HPLC法测定广东南昆山白毛茶中的嘌呤碱 [J], 凌育赵;曾满枝
2.反相高效液相色谱法测定硫唑嘌呤代谢产物6-巯基嘌呤血浆药物浓度 [J], 朱妍妍;柏智能;唐丽琴
3.反相高效液相色谱法测定治糜康栓中苦参碱和氧化苦参碱的含量 [J], 于澎;宋凤媛;钱圳;董坤园;许天阳
4.反相高效液相色谱法直接测定茶叶水提取物中的嘌呤碱 [J], 丁明玉;杨海军;肖善强
5.反相高效液相色谱法测定黄龙止咳颗粒中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量 [J], 郑风敏;刘会艳
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
反相高效液相法测定血清中茶碱的浓度
反相高效液相法测定血清中茶碱的浓度
洪冰
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】2009(21)5
【摘要】目的建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定血清中的茶碱浓度的方法 .方法以苯巴比妥为内标,血清样品用二氯甲烷提取,采用Venusil XBP-C18柱(4.6×200mm,5μm)分析.流动相为甲醇∶水(50∶50),流速1.0mL·min-1,检测波长275nm,柱温25℃.结果本法在6.25～25μg·mL-1间线性关系良好.血清中茶碱的标准曲线方程为y=1.1386x-0.8262,r=0.9991,RSD 1.18%(n=5),最低检测质量浓度为0.31μg·mL-1.日内、日间精密度RSD均小于5%.茶碱的回收率为91.89%～105.15%.结论该方法灵敏度高、准确、重复性好,可以用于常规茶碱血药浓度的测定.
【总页数】2页(P90-91)
【作者】洪冰
【作者单位】浙江省三门县人民医院药剂科,三门,317100
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2;R969
【相关文献】
1.反相高效液相梯度洗脱法测定人血浆中丙泊酚浓度 [J], 李莉;李培
2.改良反相高效液相色谱法测定血清中茶碱浓度 [J], 黄惠丽;陈锦珊;杜青云
3.反相高效液相色谱法测定人血清中多索茶碱浓度 [J], 陈锦珊;杜青云;黄惠丽;张家祥
4.反相高效液相色谱法测定人血清中茶碱血药浓度 [J], 蔡震;张三平;韦敏;梁建成
5.优化高效液相法快速测定血清中氨茶碱的血药浓度 [J], 邓利娟;李为洲;肖学秀;童向霞
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法同时测定茶叶中8种儿茶素、3种嘌呤碱和没食子酸
高效液相色谱法同时测定茶叶中8种儿茶素、3种嘌呤碱和没食子酸李银花;李娟;龚雪;刘仲华【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2011(032)018【摘要】建立高效液相色谱同时测定茶叶中8种儿茶素（EGC、DL-C、EC、EGCG、GCG、EGCG4″Me、EGCG3″Me、ECG）、3种生物碱（茶碱、可可碱、咖啡碱）和没食子酸的方法。
色谱条件为Welchrom C18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱、磷酸缓冲液-乙腈溶液为流动相、梯度洗脱、波长278nm、流速1.0mL/min、柱温30℃。
采用此方法,茶叶中各种成分都能达到基线分离的效果,线性关系良好,具有良好的稳定性和准确度。
【总页数】4页(P214-217)【作者】李银花;李娟;龚雪;刘仲华【作者单位】国家植物功能成分利用工程技术研究中心;湖南农业大学茶学教育部重点实验室,湖南长沙410128;国家植物功能成分利用工程技术研究中心;湖南农业大学茶学教育部重点实验室,湖南长沙410128;国家植物功能成分利用工程技术研究中心;湖南农业大学茶学教育部重点实验室,湖南长沙410128;国家植物功能成分利用工程技术研究中心;湖南农业大学茶学教育部重点实验室,湖南长沙410128【正文语种】中文【中图分类】TS272.7【相关文献】1.茶叶中没食子酸、儿茶素类和生物碱的 HPLC检测方法研究 [J], 王丽丽;陈键;宋振硕;陈林2.RP-HPLC测定茶叶中没食子酸、儿茶素和表儿茶素的含量 [J], 邹盛勤;姜琼3.毛细管区带电泳法测定茶叶中咖啡因、茶氨酸、表儿茶素和表没食子儿茶素没食子酸酯 [J], 衷明华;严赞开;林燕如4.高效液相色谱法同时测定茶叶中维生素C、没食子酸和咖啡碱的含量 [J], 熊凤麒;袁吕江;吴光权5.超高效液相色谱法同时检测茶叶中的没食子酸、咖啡碱和儿茶素 [J], 赵明明; 周聪; 彭茂民; 周有祥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
件下 咖啡因与其它成分都能完全分离 即使流动相
组成和体积比有一个小的变动 咖啡因仍能与邻近
峰完全分离∀ 图 是 甲醇水溶液作流动相时广
东绿茶水提取物的色谱图 在此条件下 可可碱峰
的尾部重叠了一小峰 茶碱 标准品的
保留时间
峰完全被邻近的多酚峰
所掩盖∀
参考文献
中华人民共和国国家标准
夏贤明 丁 宁 分析化学
括号内范围对应峰高标准曲线
∀
茶叶中嘌呤碱的定量
首先 我们参照国标 用分光光度法测定了
种茶叶中总嘌呤碱的质量分数 测得干茶叶中总嘌
呤碱的质量分数为 云南普茸茶
广东绿茶
京华花茶
∀
将本文建立的方法用于 种茶叶中嘌呤碱的直
接测定 所得结果见表 ∀ 咖啡因的质量分数较高 受邻近峰的影响也小 结果的重现性较好 而茶碱的
第 卷第 期 年月
色
谱
反相高效液相色谱法直接测定茶叶水提取物中的嘌呤碱Ξ
丁明玉
杨海军 肖善强
清华大学化学系 北京
陈培榕
摘要 用反相高效液相色谱法直接测定茶叶水提取物中的咖啡因 可可碱和茶碱 方法简便快速∀ 在
检
测波长下 可可碱 茶碱和咖啡因的检测下限分别为 和 Ù 峰面积标准曲线在 ∗
实验方法
准确称取干茶叶 加蒸馏水约
加热
至沸 保持微沸 适当冷却后用
Λ 滤膜过
滤 用少量蒸馏水洗茶叶 次 最后定容至
容量瓶中 直接进样进行
分析∀
叶中嘌呤碱总量 并且还可能受到共存非嘌呤碱类
物质的干扰∀ 用高效液相色谱
分离和测定
结果与讨论
嘌呤碱已有报道 但都必须预先分离大量存在的
种嘌呤碱的同时分离
多酚化合物∀ 本文通过对流动相进行详细研究后所
Ù
范围内具有良好的线性关系 线性相关系数为 以上∀
关键词 高效液相色谱法 嘌呤碱 茶叶
中图分类号
前言
文献标识码
文章编号
谱柱温度为室温 进样量
∀
Λ 紫外检测波长为
茶叶中含有的嘌呤碱主要有咖啡因 可可碱和 茶碱∀不同种类和产地的茶叶 其嘌呤碱的质量分数 及相对比例有很大差异∀在茶叶质量评价方面 嘌呤 碱质量分数的测定很重要∀ 用分光光度法 或近红 外光谱法 只能测定包括上述 种嘌呤碱在内的茶
组分
可可碱 茶碱 咖啡因
βασεσ φορ θυαντιτατιϖε αναλψσισ
线性范围
ρ
Ù
∗
∗
∗
∗
∗
∗
检测下限 Ù
图 云南普茸茶水提取物色谱图
Φιγ Χηρο ατογ ρα 流动相
ς
Βς
οφ αθυεουσ εξτραχτ οφ Ψυνναν τεα
ς ΒΒ
Βς Β
Β 流速
Ù∀
峰
可可碱
Βς
ΒΒ
ς
Βς
Βς
ΒΒ
图 茶叶中咖啡因的分离
Φιγ 流动相 Β 流速
Σε αρατιον οφ χαφφεινε ιν τεα
ς
Βς
Ù∀
咖啡因的快速测定法 在很多情况下 人们最关心的是茶叶中咖啡因 的质量分数 因此简便快速测定咖啡因的方法有很
大的实用价值∀ 我们发现将咖啡因与其它成分分离
的条件很宽松∀从表 也可看出 在众多的流动相条
说
明该茶叶中还含有一定量的其它嘌呤碱∀
茶叶
云南普茸茶 广东绿茶
京华花茶
Τ αβ λε
表 茶叶中嘌呤碱的测定结果 质量分数
∆ ετερ ινατιον ρεσυλτσ οφ υρινε βασεσ ιν τεα
可可碱
茶碱
Ρ Σ∆
Ρ Σ∆
ν 咖啡碱
ν Ρ Σ∆
未检出
合计
为了验证本方法的准确性 我们以云南普茸茶 为例 在不同流动相条件下定量测定了 种嘌呤碱 的质量分数 测定结果列于表 ∀ 当嘌呤碱与邻近峰 分离不完全 用峰面积定量误差较大时 则采用峰高 定量法∀用体积分数为 的甲醇作流动相时 种 嘌呤碱与其邻近多酚峰的分离都不完全 在其它流
的保留值明显变小 峰变得更加尖锐 检测灵敏度也
略有提高∀ 但单独加入磷酸或乙酸仍难使 种嘌呤
碱完全与多酚类化合物分离∀ 加入碱性的
对
嘌呤碱保留值的影响较小 但
可以显著地抑
制茶多酚 使很多茶多酚的色谱峰减小或消失 种
嘌呤碱可与其它成分完全分离∀ 不过 由于
的
加入 使噪音增大 检测下限提高了约 倍 致使茶
Τ αβλε
表 不同流动相条件下云南普茸茶中嘌呤碱的测定结果 质量分数
∆ ετερ ινατιον ρεσυλτσ οφ υρινε βασεσ ιν Ψυνναν τεα υσινγ διφφερεντ ελυεντσ
流动相
可可碱
茶碱
咖啡因
ς
Βς
Β
ς
Βς
Β
ς
Βς
Β
ς
Βς
Βς
ΒΒ
ς
Βς
ΒςHale Waihona Puke ΒΒςΒς
叶中质量分数很低的茶碱难以同时检测到 ∀ 我们试
验 了在流动相中同时加入适当体积分数的乙酸和
Ξ 收稿日期
修回日期
本校化学工程系学生
色
谱
第卷
后对分离的影响 结果发现 种嘌呤碱能同时
与多酚类化合物完全分离 且检测灵敏度也几乎和
流动相中不加酸碱性电解质时相同∀ 图 是在流动
相中同时加入乙酸和
咖啡因
∀
茶碱
嘌呤碱的检测与定量参数
通过测定 种嘌呤碱的紫外吸收光谱得知
种嘌呤碱均在
和
附近有最大吸收
且
附近的吸收强度要比
附近大 倍
以上∀但是 由于在
附近溶剂仍有微弱吸收
而且可能产生干扰的有机物更多 因此 本文选择检
测波长为
∀
以 节所述的甲醇水溶液作流动相时 种
嘌呤碱的检测下限和标准曲线线性范围见表 ∀ 嘌
动相条件下 可可碱和咖啡因与其邻近峰的分离都 比较完全 但茶碱与其邻近峰完全重叠或部分重叠∀ 表 所列不同流动相条件下云南普茸茶中嘌呤碱的 质量分数测定值与表 中该茶测定结果基本一致 说明本文建立的 种嘌呤碱的同时测定方法是准确 可靠的∀
第期
丁明玉等 反相高效液相色谱法直接测定茶叶水提取物中的嘌呤碱
型高效液相色谱仪 带
数据处理系统 美国
型超声波脱气装置∀
试剂 将咖啡因 生化试剂 中国军事医学科学
院药材供应站 茶碱 生化试剂 上海试剂二厂 和
可可碱
溶于水或甲醇中配制成
Ù 储备液 冷藏保存 使用时用流动相溶液稀释成
适当的质量浓度∀ 甲醇
为色谱纯 其它试
剂为分析纯∀
色谱条件
色谱 柱为
≅
Λ 流动相为 ς 甲醇 Β ς 水 Β ς 乙
Χηινα
Α βστραχτ
≅
Λ
Ν Ν
Ù
Σ ÙΝ
Ù
Ù
Ù
ρ
Κ εψ ωορδσ
质量分数很低 容易受邻近较大的多酚类色谱峰的
影响 所以测定结果的相对标准偏差 Ρ Σ∆ 较大∀ 另外 广东绿茶和京华花茶中 种嘌呤碱的质量分
数之和基本接近用分光光度法测得的嘌呤碱值 说
明这两种茶叶中几乎不再含有其它嘌呤碱∀ 云南普
茸茶中 种嘌呤碱的质量分数之和为
而用
分光光度法测得的嘌呤碱总质量分数是
后得到的云南普茸茶叶
水提取物的色谱图∀
呤碱质量浓度在
Ù 以内时 峰面积与质量
浓度呈良好的线性关系 线性相关系数为
∗
∀ 在稍窄一点的质量浓度范围内 嘌呤碱质量
浓度与峰高也呈良好的线性关系∀ 当取信噪比为
时 种嘌呤碱的检测下限为 ∗
Ù∀
表
种嘌呤碱的定量参数
Ταβλε Σο ε αρα ετερσ οφ τηρεε υρινε
∗
熊凤麟 袁吕江 吴光权等 色谱
∗
杨志洁 叶建农 刘 彤等 色谱
∗
∆ ιρεχτ ∆ ετερ ινατιον οφ Πυρινε Βασεσ ιν Τεα βψ Ρ εϖερσεδ Πηασε Η ιγ η Περφορ ανχε Λιθυιδ Χηρο ατογ ρα ηψ
∆ ε αρτ εντ οφ Χηε ιστρψ Τ σινγ ηυα Υ νιϖερσιτψ Β ειϕινγ
酸 Β ς Ν Ν 二甲基甲酰胺 简称
ΒΒ
Β
的 溶液 流速
Ù色
到完全分离 但却难以使它们与茶叶中的多酚类成
分分离∀ 我们发现在甲醇中加入少量 体积分数为
∗
酸性或碱性电解质会对组分的保留
时间 分离效果和峰形产生明显影响 并且对不同组
分的影响程度不同 从而为流动相的选择赋予了更
多的灵活性∀加入磷酸或乙酸等酸性电解质 各组分
茶叶的水提取物具有较强的极性 采用以极性
建立的反相
法 可以直接测定茶叶水提取物 溶剂作流动相 以非 弱 极性填料作固定相的反相
中上述 种嘌呤碱∀
是较理想的分离模式∀ 反相
最典型的
实验部分
流动相是甲醇或乙腈的水溶液 适当体积比的甲醇 或乙腈水溶液都能使咖啡因 可可碱和茶碱三者达
仪器与试剂
仪器 美国