微生物实验操作

合集下载

微生物实验室操作规程【SOP】2024

微生物实验室操作规程【SOP】2024

正文内容:1. 培养基和试剂的制备和保存1.1 培养基的制备- 确保实验室用水质量符合要求,执行水质监测。

- 配制培养基时,按照配方的比例准确称量和混合各种成分。

- 制备后的培养基要经过高温高压灭菌处理,并记录相关信息。

1.2 试剂的准备与保存- 确保试剂的纯度和质量。

- 试剂的保存应遵循相应的储存条件,如低温、干燥、避光等。

2. 微生物实验室的清洁和消毒2.1 实验台面和设备的清洁- 实验结束后,及时清洁实验台面和设备,移除残余的微生物和污渍。

- 使用合适的清洁剂和消毒剂,遵循正确的清洁和消毒程序。

2.2 垃圾处理和废弃物管理- 将实验室生活垃圾与实验废弃物分类投放,遵循垃圾分类和废物管理的要求。

- 在实验室内配备明显的废弃物容器,并定期清理和更换。

3. 生物安全操作和防护3.1 实验室内的个人防护- 实验室工作人员应穿戴实验室指定的个人防护装备,包括实验服、手套、口罩等。

- 定期检查和更换个人防护装备,确保其完好无损。

3.2 操作台上的生物安全柜使用- 使用生物安全柜操作时,按照正确的使用方法进行操作。

- 养生物安全柜使用后,要及时清洁和消毒。

4. 微生物实验的准备和操作4.1 实验准备- 在进行微生物实验前,要仔细阅读实验方案和相关文献,了解实验目的和操作步骤。

- 准备所需的培养基、试剂、设备等,并确认其完整性和有效期。

4.2 微生物实验操作- 操作前要洗手并戴好手套,保持操作台面的清洁。

- 严格按照实验方案的指导进行操作,确保实验过程的准确性和可重复性。

- 实验过程中注意观察实验样品的变化,并记录相关数据和观察结果。

5. 实验数据记录和结果分析5.1 数据记录- 在实验过程中,实验人员要及时、准确地记录实验数据和观察结果。

- 记录的数据要清晰可辨,并加以正确的标注和注释,以便后续的数据分析和结果验证。

5.2 结果分析与总结- 在实验完成后,仔细整理和分析实验数据,得出结论并进行结果的可靠性评估。

微生物检测操作流程

微生物检测操作流程

微生物检测操作流程《微生物检测操作流程》微生物检测是一项重要的实验室技术,用于检测和鉴定各种微生物,包括细菌、真菌、病毒等。

本文将介绍一般的微生物检测操作流程。

一、样品采集与处理1. 样品选择:根据实验目的选择适当的样品类型,如水样、食品样、土壤样等。

2. 采集样品:采集样品时要注意避免污染和交叉污染。

3. 处理样品:根据具体情况,对样品进行处理,如稀释、研磨、过滤等。

二、培养基的制备1. 选择合适的培养基:根据待检微生物的特性选择适当的培养基类型。

2. 制备培养基:按照标准的配方和操作规程制备培养基。

三、菌落计数1. 加样和摇匀:将样品加入培养基中,并充分摇匀。

2. 培养:将培养基装入培养皿或培养瓶中,进行恒温培养。

3. 菌落计数:根据菌落的外观、形态等特征,进行菌落计数。

四、纯化和鉴定1. 提取纯种菌:从培养基上选取单个菌落,进行传代培养,获得纯种菌。

2. 形态鉴定:通过观察微生物的形态特征,如形状、大小、颜色等,进行初步鉴定。

3. 生理生化特性鉴定:通过对微生物的生理生化特性进行检测,如氧需求性、产气性、酶活性等,进一步鉴定。

五、分子生物学检测(可选)1. 提取DNA/RNA:采用适当的方法提取待检微生物的DNA或RNA。

2. PCR扩增:利用聚合酶链式反应(PCR)扩增目标序列。

3. 凝胶电泳:将PCR产物进行凝胶电泳分析,确定目标序列的存在与否。

六、结果分析与报告1. 结果解读:根据实验结果判断待检微生物是否合格。

2. 报告编写:撰写实验报告,包括实验方法、结果、分析和结论。

3. 结果验证:可以进行复核实验或委托第三方实验室进行验证。

以上即是一般的微生物检测操作流程,不同类型的微生物检测可能会有一些差异。

在实验中,操作人员应严格遵循操作规程,做好实验安全和样品处理,保证检测结果的准确性和可靠性。

《微生物学实验》操作步骤

《微生物学实验》操作步骤

实验一培养基的制备与灭菌实验步骤:(一)伊红美蓝培养基(EMB,用成品,分离大肠杆菌用)每组1瓶,250 ml三角瓶×200 ml培养基。

按成品说明称量、放入搪瓷杯,加水,加热完全溶化,倒入三角瓶,塞棉花塞,牛皮纸封口,包扎,作标记(培养基名称、批次组别、日期,下同),灭菌。

(二)营养琼脂培养基(即牛肉膏蛋白胨培养基,用成品,分离芽孢杆菌用)每组1瓶,250 ml三角瓶×200 ml培养基,方法同上,灭菌。

(三)PDA培养基(即马铃薯蔗糖培养基,分离酵母菌、根霉用)每组1瓶,250 ml三角瓶×200 ml培养基。

培养基配方:马铃薯20%、蔗糖(白砂糖)2%、琼脂 2%,加水至所需体积,pH自然。

配制方法:马铃薯去皮,称量,切成小方块,放入搪瓷杯,加水适量,煮沸20 min,取汁液,补水至所需体积,加入蔗糖(白砂糖),加热溶化,最后加入琼脂(琼脂要预先单独用水浸泡,然后挤干再加入),加热至琼脂完全溶化,分装三角瓶,塞棉花塞,牛皮纸封口,包扎,灭菌。

培养基统一高压蒸汽灭菌(121℃25 min)。

(四)无菌平皿准备(下次实验倒平板用)每组10套,报纸包扎,高压蒸汽灭菌(121℃25 min)后,置干燥箱80℃烘干1 h。

(五)枯草样预处理及预培养(下次实验分离芽孢杆菌用)枯草样预处理:每组1瓶。

100 ml三角瓶+自来水约50 ml,加5%可溶性淀粉,溶解。

枯草若干,剪短,浸入三角瓶水中,牛皮纸封口,包扎,置水浴中煮沸10 min,然后置培养箱30℃预培养3~7 d。

(六)葡萄样(或其它水果)酵母菌预培养(下次实验分离酵母菌用)每组1瓶。

葡萄(或其它水果)适量,捏碎,皮渣与汁液一起放入250 ml 三角瓶(装量1/2~2/3),封口,置培养箱25℃预培养3~7 d,观察自然发酵过程。

实验二微生物的分离与纯化实验步骤:(一)污水中大肠杆菌的分离(稀释倒平板法)1)用三角瓶取污水样适量。

微生物实验技术操作手册

微生物实验技术操作手册

微生物实验技术操作手册一、实验介绍微生物实验技术操作手册旨在为研究人员提供详细的实验步骤和操作指南,以确保实验的准确性和可重复性。

本手册涵盖了微生物实验的基本原理、实验材料和设备的准备、实验步骤以及结果分析等内容。

通过遵循本手册的操作指南,研究人员可以顺利进行微生物实验,并获得可靠的实验结果。

二、实验材料和设备准备1. 实验材料:- 微生物培养基:根据实验需要选择适当的培养基,如LB培养基、TSB培养基等。

- 微生物菌种:根据实验目的选择所需的微生物菌种。

- 试剂:如抗生素、染料等。

- 培养皿、试管、移液器等实验器材。

2. 实验设备:- 培养箱:用于控制培养温度。

- 离心机:用于离心培养物。

- 恒温振荡器:用于培养物的摇床培养。

- 显微镜:用于观察微生物的形态和结构。

三、实验步骤1. 准备工作:- 消毒操作台和实验器材:使用适当的消毒剂对操作台和实验器材进行消毒处理,以确保实验环境的无菌。

- 培养基制备:按照培养基配方准备培养基,并进行高压灭菌处理。

- 微生物菌种制备:选择适当的菌种进行预培养,以获得足够的菌量。

2. 培养操作:- 接种:将预培养的菌种接种到含有适当培养基的培养皿或试管中。

- 培养条件控制:根据菌种的生长要求,设置适当的培养温度、pH值和培养时间。

- 培养物观察:使用显微镜观察培养物的生长情况,并记录相关数据。

3. 实验操作:- 抗生素敏感性实验:将不同浓度的抗生素添加到含菌培养基中,观察菌落的生长情况,以确定菌株对抗生素的敏感性。

- 染色实验:使用适当的染料对微生物进行染色,观察染色后的微生物形态和结构。

四、结果分析根据实验操作所获得的结果,进行相应的数据分析和结果解读。

通过比较不同实验组的结果,可以得出结论并提出相应的讨论。

五、注意事项- 操作前需仔细阅读实验操作手册,并按照操作指南进行实验。

- 严格遵守实验室的安全操作规程,佩戴适当的个人防护装备。

- 实验过程中保持实验环境的无菌和洁净。

微生物常用实验3篇

微生物常用实验3篇

微生物常用实验第一篇:细菌涂片染色实验细菌涂片染色实验是微生物学中最基本的实验之一。

通过染色方法,使细菌变得可见,便于观察形态、结构、数量等特征,有利于研究其生长、代谢、致病性等方面。

下面,我们来介绍细菌涂片染色实验的具体步骤:一、制备细菌涂片1.取出培养基上生长良好的细菌菌落,用不锈钢嵌片环沿中心点轻压一下。

2.将嵌片环中的菌落涂匀于无菌载玻片上,制备成直径约1厘米的薄片。

3.待载玻片上的细菌涂片晾干,并用火焰消毒。

二、涂片染色1.用火焰将铺有细菌涂片的玻片烤干。

2.将烤干的玻片浸入甲醇中,固定一分钟,再用水漱洗。

3.将玻片浸入碘酒中,固定一分钟,再用水漱洗。

4.将玻片浸入乙醇中,使背景颜色褪去,再用水漱洗。

5.将玻片浸入洋红染色液中,染色时间不超过1分钟。

6.用水冲洗干净,晾干后可以在显微镜下观察。

通过细菌涂片染色实验,我们可以直观地观察到细菌的形态、大小、聚集情况、颜色等,有助于鉴定细菌种类,并进一步深入研究其生物学特性。

第二篇:厌氧培养实验厌氧菌是一类生长需要在完全无氧条件下进行的微生物。

在许多疾病的发病机制中,厌氧菌都发挥着重要作用,因此,研究厌氧菌对于认识疾病的发病机制具有极其重要的意义。

下面,我们来介绍厌氧培养实验的具体步骤:一、制备厌氧培养基制备厌氧培养基是进行厌氧菌培养的关键。

具体操作步骤如下:1.准备培养基,并在其中加入培养菌株所需的配方和其他适宜的添加剂。

2.将培养基分装到无菌针筒或暗口瓶中。

3.在体积的一半至三分之二处加入去氧剂(一般为Thioglycolate或Dithiothreitol)。

二、厌氧细菌接种与培养1.准备厌氧细菌培养物的接种种子。

一般情况下,把生长适应在厌氧条件下的细菌进行分生处理来获得设计数量的细胞,并将其重新悬浮在与培养基相同的缓冲液中。

2.在无氧条件下接种厌氧菌,避免暴露于空气中。

可以通过使用瓶盖和橡胶塞的局部替代或全封闭气密容器的方法来实现无氧条件。

微生物培养实验方法_

微生物培养实验方法_

微生物培养实验方法_一、选材和操作环境1.选材:根据实验目的,选择适当的微生物进行培养。

可以选择广谱微生物培养基来适应多种微生物的生长,或者选用特定的微生物培养基来培养其中一种特定的微生物。

2.操作环境:为了避免实验污染和交叉感染,实验室应该严格执行无菌操作,使用无菌操作台进行培养实验。

二、无菌技术1.灭菌:使用高压蒸汽灭菌器或者乙醇灭菌器将培养器具、培养基和植物培养基灭菌,以杀灭存在的菌种。

2.无菌操作:将培养器具放在无菌操作台上,进行接种、移植以及采样等操作,确保操作过程中不受外界菌种污染。

三、液体培养实验1.静态培养:在无菌培养基中接种微生物,放入试管或培养瓶中,静置培养。

根据需求,可以在静态培养过程中添加适量的养分补充剂。

2.摇床培养:将含有微生物的培养基放在摇床上进行培养,设置合适的温度和摇动速度,可以促进微生物的生长和代谢。

3.发酵罐培养:将含有微生物的培养基放入发酵罐中进行大规模培养。

控制发酵罐内的温度、pH值、氧气供应等条件,可以实现微生物的高密度培养。

四、固体培养实验1.平板培养:将含有微生物的培养基倒入培养皿中,使其均匀分布在培养皿表面,待其凝固后,将微生物接种于其上。

培养过程中可以观察到微生物的孤悬、菌落的形成和生长情况。

2.涂布法:将含有微生物的培养基均匀涂布在玻璃片、培养皿或者培养瓶内壁上,形成薄膜状,待其凝固后,进行微生物的接种。

3.动植物体内培养:将微生物接种在动植物的体内,如动物的腹腔、皮肤或者植物的叶片、根系等,利用动植体提供的养分来满足微生物的生长需求。

五、检测微生物生长和代谢特性1.可视方法:通过观察培养基上微生物的生长情况、菌落的形态和颜色等,判断微生物的生长情况。

2.双抗法:使用特定的抗体和染料来染色微生物,使其表现出不同的颜色或者形态,以便于鉴别和分析微生物。

3.生化检测方法:通过检测微生物在培养基上产生的特定代谢产物,如酶活性、气体产生等,来评估微生物的生长情况和代谢特性。

微生物操作规程

微生物操作规程

微生物操作规程
《微生物操作规程》
微生物操作是实验室中常见的操作,但由于微生物具有一定的危害性,因此对微生物操作有严格的规程。

以下是对微生物操作规程的一些要点:
1. 穿着适当的防护装备:在进行微生物操作时,实验人员应该穿着适当的防护装备,包括实验服、手套、口罩和护目镜等。

这可以有效预防微生物和其代谢产物对皮肤和呼吸系统造成危害。

2. 操作实验室的卫生消毒:在进行微生物操作前,需要对实验室进行必要的卫生消毒,确保操作环境的清洁与无菌环境。

3. 严格的操作流程:在进行微生物操作时,需要严格按照规程进行操作,避免出现操作失误导致微生物泄漏或污染的情况发生。

4. 正确处理微生物废弃物:在微生物操作结束后,实验人员需要将微生物废弃物进行正确处理,避免对环境和人体造成危害。

5. 定期进行培训和检查:对从事微生物操作的实验人员需要进行定期的培训和检查,以提高其微生物操作的安全性和准确性。

总之,微生物操作规程是保证微生物操作安全的基础,严格遵
守微生物操作规程可以有效预防微生物的危害,并保障实验人员和环境的安全。

微生物检测操作规程

微生物检测操作规程

微生物检测操作规程《微生物检测操作规程》一、目的微生物检测操作规程旨在规范微生物检测实验的操作流程,确保检测结果的准确性和可靠性。

二、适用范围本规程适用于实验室内进行微生物检测实验的操作人员,包括但不限于食品、医药、环境等领域的微生物检测。

三、操作流程1. 实验前准备(1)检查所需物品和设备的完整性和清洁度;(2)准备好所需的培养基、培养皿、移液器等实验用品;(3)佩戴实验服和手套,保持操作环境清洁。

2. 样品处理(1)按照标准操作程序采集样品,并确保准确记录样品信息;(2)样品处理前进行必要的预处理,如稀释、离心等。

3. 培养和检测(1)按照操作规程在培养基上均匀涂布样品;(2)标注培养皿的信息,包括样品编号、培养基种类、培养温度等;(3)放置在适当的培养温度下培养一定时间;(4)观察培养皿的生长情况,记录培养时间和结果。

4. 结果分析(1)根据培养结果进行初步鉴定和计数;(2)必要时进行进一步的分离、鉴定和鉴定。

四、质控要求(1)实验操作人员应具备相应的微生物检测知识和技能,并接受相关的培训;(2)严格遵守操作规程,确保实验操作的准确性和一致性;(3)定期对实验室设备、试剂和培养基等进行检查和质量控制,确保其完好和有效。

五、记录和报告实验过程中产生的数据和结果应当及时记录,并进行审查和验证。

对于检测结果,应当制作详细的技术报告,包括检测方法、样品信息、结果分析和结论等内容。

六、实施本规程由实验室主管负责组织实施,并由实验室操作人员严格遵守。

七、附则本规程自发布之日起施行,如有变动将另行制定修订,并及时通知相关人员。

以上即为《微生物检测操作规程》的内容,希望广大实验室操作人员严格按照规程执行,确保微生物检测工作的准确性和可靠性。

微生物实验

微生物实验

首先,采集新鲜土样,回来后需要马上处理。

第二,做梯度稀释,准确称取1g土样,溶于9mL无菌水中,一般来讲,稀释到-8——--10就可以了。

第三,吸取100微升菌液,均匀的涂布于NA平板上,一定要马上涂布,均匀涂开,因为培养菌吸收很快,不快速均匀涂开的话,会长成一片。

第四,37度培养24-48h,挑取形态各异的单菌落于NA斜面上,4度保存备用。

以上为初筛,需要重复几次,直到形态不同的菌都采集好了。

第五,就是鉴定这些菌了,可以先做片子看一下形态,做初步判断,可以使用结晶紫染色。

第六,如果需要确定菌属,就要做生理生化和菌株16SrDNA鉴定了。

采集土样后,应该先将土样过筛,在生理盐水中置摇床震荡一会,根据你分离菌的情况选择是否要富集,选择合适的培养基再者,有些菌在37可能长不好,更适合再28长1、培养基的制备:(1)称量:根据培养基的配方,称取适量药品于搪瓷杯中;(2)溶解:用量筒量取所需水量,置电炉上加热,一边搅拌,至完全溶解,加热至沸腾,拔掉电源,待冷却;(3)分装:根据不同需要,立即趁热分装入三角瓶或试管中,分装三角瓶以不超过三角瓶一半为宜,分装试管一般为管长的1/5(需根据试管的大小而定)。

液体培养基如乳糖胆盐发酵培养基约分装10毫升左右。

(4)塞硅胶塞:装好培养基的试管应塞上硅胶塞,松紧合适,紧贴管壁,不留缝隙,约1/2塞入内,这样即可过滤空气,避免杂菌侵入,又可减缓培养基水分的蒸发。

(5)包装:三角瓶棉塞头部应用锡箔纸包扎,试管集中于试管篓。

2、无菌水的制备:(1)用10ml移液管量取9.2ml蒸馏水(稀释水)装入试管中。

(2)用100ml量筒量取95ml蒸馏水(稀释水)装入150ml的三角瓶中。

可置少许玻璃珠于三角瓶内,防止暴沸。

(3)量取240ml蒸馏水(稀释水)于250ml的三角瓶中,塞上瓶塞用牛皮纸包扎好,高压灭菌备用。

A.选择适宜的营养物质,实验室的常用培养基:细菌:牛肉膏蛋白胨培养基(或简称普通肉汤培养基);放线菌:高氏1号合成培养基培养;酵母菌:麦芽汁培养基;霉菌:查氏合成培养基;pH各大类微生物都有其生长适宜的pH范围,培养基的pH必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。

微生物检验流程及操作标准

微生物检验流程及操作标准

微生物检验流程及操作标准全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:微生物检验是一种重要的实验室技术,用于检测食品、水质、环境等样品中的微生物存在情况。

微生物检验需要严格遵守一系列操作标准和流程,以确保检验结果的准确性和可靠性。

下面我们将介绍一下微生物检验的流程及操作标准。

一、样品采集1. 样品的采集需要采用无菌工具,并保持样品在采集过程中不受到外界环境的污染。

2. 样品的采集过程应尽量避免接触到任何可能引入外源微生物的物质,比如皮肤、空气等。

3. 采集的样品应标明正确的标识信息,包括样品名称、采集地点、采集日期等。

二、样品处理1. 样品收到实验室后,需要尽快进行处理,避免样品内的微生物增殖或死亡。

2. 样品处理过程需要保持在无菌条件下进行,使用无菌工具进行操作。

3. 样品处理过程中需要按照检验要求进行适当的稀释,以确保实验得出准确的结果。

三、培养基准备1. 培养基的制备需要按照标准的配方和步骤进行,以确保培养基的质量符合要求。

2. 制备培养基时需要严格遵守无菌操作规范,避免细菌、真菌等外源微生物的污染。

3. 制备好的培养基需要在适当的条件下保存,确保培养基的稳定性和有效性。

四、接种操作1. 在进行微生物检验之前,需要准备好无菌的接种环、移液器等工具。

2. 采取适当的方法将处理好的样品接种到培养基上,避免接种时引入外源微生物。

3. 接种操作需要在无菌条件下进行,避免培养物受到任何污染。

五、培养与观察1. 接种后的培养基需要置于适当的温度和湿度条件下进行培养,促使样品中的微生物生长。

2. 定期观察培养基上的生长情况,记录生长的数量和形态,用于后续的分析和鉴定。

3. 在观察过程中需要注意反复进行无菌操作,避免细菌、真菌等外源微生物的污染。

六、鉴定与结果解读1. 当样品中的微生物生长到一定程度时,需要进行鉴定和分析,确定其种属和数量。

2. 鉴定过程需要参考相关的鉴定手册和标准,进行适当的试验和测试。

3. 根据鉴定结果进行结果解读,判断样品中微生物的种类和数量是否符合标准要求。

微生物实验操作规范

微生物实验操作规范

细菌实验操作部分㈠培养基的配置操作步骤1.称量:按培养基配方比例依次准确称量放入烧杯中(用称量勺,称量纸和电子天平)。

2.在烧杯中先加入少量所需蒸馏水,用玻璃棒搅匀,然后再石棉网上加热使其溶解。

待药品完全溶解后,补充水分到所需总体积。

如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底。

3.调pH:在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基pH值,如果偏酸,用滴管向培养基中加入1mol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测,反之用1mol/L HCL。

4.分装:(1)液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。

(2)固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面,分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。

5.加塞:培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞或硅胶塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能。

6.包扎:加赛后,将全部试管用皮筋捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸(报纸即可),以防止灭菌时冷凝水润湿。

用记号笔注明日期名称。

7.灭菌:将上述培养基放入121摄氏度,20分钟高压蒸汽灭菌。

8.搁置斜面:将灭菌的试管培养基冷至50°C左右,将试管塞端搁在玻璃帮上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

9.无菌检查:将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24至48小时,以检查灭菌是否彻底。

几种常用培养基成分1.LB Medium (LB 培养基)Yeast extact (酵母膏) 5g Peptone (蛋白胨) 10gNaCl 10g Agar (琼脂) 1-2%Distilled water (蒸馏水) 1000ml pH 7.0适用范围:大肠埃希氏菌(大肠杆菌)2.Trypton Soy Agar胰蛋白胨17.0g 大豆胨 3.0g葡萄糖2.5g 琼脂20.0gNaCl 5.0g K2HPO4 2.5g蒸馏水1000ml3.Nutrient Agar (营养肉汁琼脂)Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30gNaCl 5g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.24.RSL-盐酸鸟氨酸6.5g 氯化钠5.0gL-盐酸赖氨酸5.0g 脱氧胆酸钠1.0gL-盐酸半胱氨酸0.3g 酵母提取物3.0g麦芽糖 3.5g 溴麝香草酚蓝0.03g硫代硫酸钠6.8g 新生毒素0.005g枸橼酸铁铵0.8g 琼脂12.5g蒸馏水1000mL5.麦康凯蛋白胨20.0g 乳糖10.0g牛胆盐5.0g 氯化钠5.0g中性红0.03g 琼脂14.0gpH 6.9-7.3㈡几种试剂的制备波恩试剂:75% 饱和苦味酸25%福尔马林5%冰乙酸㈢细菌的分离1.待检材料的处理无菌采集的病料不经处理可直接用于分离;污染较严重的病料,接种前必须处理后方可进行分离培养。

微生物室实验操作方法

微生物室实验操作方法

微生物室实验操作方法
微生物室实验操作方法可以分为以下几个步骤:
1. 消毒准备:将实验室器具、培养基和培养物消毒处理,以防止外源微生物的污染。

2. 样本采集:从环境中采集微生物样本,可以是土壤、水、空气或其他生物体表面等,要保持采样过程的无菌。

3. 培养基制备:根据需要选择适当的培养基,添加所需的营养成分,并将其煮沸杀菌,然后冷却至适宜温度。

4. 样本接种:将采集的微生物样本加入到培养基中,可以用接种环、接种棒或移液管等器具进行接种,避免污染其他培养基。

5. 培养:将接种好的培养基置于恰当的温度和湿度条件下进行培养,培养时间和条件根据微生物种类的不同而异。

6. 处理和观察:在培养完后,观察培养物的形态、颜色和生长情况,如有必要,可以进行染色或其他处理以进一步观察微生物形态和结构。

7. 数据记录和分析:记录实验结果,并对微生物的生长、存活情况进行分析。

8. 清洗和消毒:实验结束后,将所有使用的器具和设备进行清洗和消毒,以防止微生物的传播和污染。

在实验操作中,严格遵守实验室安全操作规程,佩戴防护手套、实验外套、眼镜或面罩,并遵循实验室中的无菌操作和生物安全防范措施。

微生物基本操作方法

微生物基本操作方法

微生物基本操作方法
微生物基本操作方法如下:
1. 消毒:为了保障实验的可靠性和安全性,应用高压蒸汽灭菌器或紫外灯等方法进行消毒,以杀灭潜在的微生物污染。

2. 分离:利用Koch 定律对微生物进行分离,通常采用平板法、滤膜法、胶质法等方法进行分离。

3. 鉴定:对分离出的微生物进行鉴定,采用微生物生理、生化、利用等特征进行鉴定,如形态、染色、代谢等,最后确定菌株的种属。

4. 保存:对分离鉴定出的微生物进行保存,通常采用低温冷冻法或干燥法等方法进行保存。

5. 实验操作:在细菌实验室中进行微生物实验操作时,需要保持实验室的清洁和消毒,采用洁净的操作工具进行实验操作,以防止微生物的污染。

6. 贮存:对于培养基、针筒和试管等实验用具,应当按照规定进行分类贮存,防止交叉感染。

7. 废弃物处理:对实验过程中产生的废弃物要进行正确处理,标记好种类,进
行特定的消毒处理,防止污染环境和人体。

微生物实验室操作规程

微生物实验室操作规程

微生物实验室操作规程一、引言微生物实验室是进行微生物研究和实验的重要场所,为了确保实验室操作的安全性、准确性和可重复性,制定了本实验室操作规程。

本规程旨在规范实验室操作流程,保障实验室工作人员的健康和安全,防止微生物的交叉污染,并提高实验结果的可靠性。

二、实验室安全1. 实验室进入与离开:a. 进入实验室前,必须穿戴适当的实验室服装,包括实验室专用外套、手套、实验鞋等。

长发应该束起来,避免遮挡面部。

b. 进入实验室前,应该洗手,并使用消毒剂进行手部消毒。

c. 离开实验室时,应该将实验室服装放置在指定的地方,避免污染其他区域。

d. 离开实验室时,应该洗手并使用消毒剂进行手部消毒。

2. 实验室操作安全:a. 实验室内严禁进食、饮水和吸烟。

b. 实验室内不得随意更换实验器材和试剂,必要时应经过主管人员的批准。

c. 实验室内不得进行未经授权的实验操作。

d. 实验室内使用的器材和试剂应按照规定进行妥善存放,避免交叉污染和损坏。

三、实验室操作流程1. 准备工作:a. 在实验室操作前,应检查实验室设备和器材的完好性,并记录在实验记录表中。

b. 检查实验室内的消防设施和应急设备是否齐全,并确保其正常运行。

2. 实验室操作流程:a. 根据实验要求,准备所需的培养基、试剂和实验器材。

b. 在操作前,应对实验台面和实验器材进行消毒处理,避免交叉污染。

c. 操作过程中,应按照实验要求进行实验操作,严格控制操作时间和温度。

d. 操作结束后,应及时清理实验台面和实验器材,避免残留物的交叉污染。

四、微生物实验室操作注意事项1. 遵守实验室操作规程,严格按照实验要求进行操作,确保实验结果的准确性和可重复性。

2. 注意个人卫生,时常洗手并使用消毒剂进行手部消毒,避免微生物的交叉污染。

3. 在操作过程中,注意实验室设备和试剂的正确使用方法,避免操作失误和事故发生。

4. 注意实验室的通风情况,保持室内空气流通,避免微生物的扩散和滋生。

微生物实验操作注意事项

微生物实验操作注意事项

微生物实验操作注意事项
1.实验室准备:
在进行微生物实验前,需要确保实验室环境的清洁、整齐和符合实验
的要求。

实验室桌面、培养皿和仪器设备等都应该进行消毒和清洁,并且
要检查培养基、试剂和培养物等材料的储存和保存情况,确认其适用性。

2.实验操作:
在进行微生物实验的操作中需要严格遵守操作规程,按照实验方案进
行实施。

操作过程中要注意仪器仪表的正确使用和操作方法的规范性,保
证实验的准确性和可重复性。

3.个人卫生:
个人卫生在微生物实验中尤为重要,操作人员应该严格按照实验室卫
生操作规程进行操作,包括佩戴实验服、手套、口罩和护目镜等防护装备,保持皮肤的干燥和清洁,及时剪指甲,防止微生物的交叉污染。

4.微生物菌种的选择、储存和传代:
在进行微生物实验前,应该对微生物菌种进行合理选择,并妥善保存。

菌种的储存应遵循适当的方法和条件,例如在低温下保存,使用无菌的条
件和培养基等。

同时,传代的方法和周期也需要根据实验的需要进行合理
安排,以保证菌种的生长和稳定性。

5.消毒和废物处理:
6.数据记录和分析:
7.安全意识:
在微生物实验中,操作人员应具备良好的安全意识,遵守实验室安全
规定,正确使用实验器材和试剂。

如果发生意外或者突发情况,要及时报
告并寻求专业的帮助。

总之,微生物实验操作需要严格遵守操作规程,保持良好的操作技巧
和实验室卫生,确保实验的可靠性和安全性。

同时,要具备科学精神和严
谨的态度,进行数据的准确记录和分析,为科学研究提供可靠的实验依据。

微生物实验

微生物实验

微生物实验微生物是一类微小的生物体,包括细菌、真菌、原生动物和病毒等。

在科学研究和实验室环境中,微生物实验是一项重要的活动,有助于我们更深入地了解微生物的特性、功能和影响。

本文将介绍微生物实验的一般步骤和常用方法。

实验步骤1.实验准备在进行微生物实验之前,需要准备好实验室所需的工具和试剂,包括培养基、试管、移液器、灭菌器等。

确保实验环境整洁,并做好实验防护措施。

2.微生物培养将待研究的微生物分离在富含营养物质的培养基上,利用培养皿或试管培养微生物至达到所需数量。

3.微生物观察利用显微镜观察培养基上微生物的形态、结构、数量等特征,记录观察结果并进行分类。

4.微生物实验根据研究目的设计实验方案,如抗生素敏感性测试、发酵实验等,进行相关实验操作并记录实验数据。

5.数据分析对实验所得数据进行统计分析和对比,评估实验结果的可靠性和意义,并撰写实验报告。

常用方法1.培养方法包括液体培养、平板培养、深层培养等,用于增殖微生物数量和纯化微生物种群。

2.显微观察利用不同倍数的显微镜观察微生物的形态、结构和运动特征,有助于微生物的种类识别和性质研究。

3.鉴定方法常用的微生物鉴定方法包括生理生化反应、PCR方法、基因测序等,可确定微生物种属和亚属分类。

4.实验设计根据研究目的和假设设计实验方案,包括控制组、处理组、重复次数等,确保实验结果的可信度。

5.数据处理利用统计学方法对实验数据进行分析和解读,探索微生物在不同条件下的表现和响应规律。

结语微生物实验作为研究微生物学特性的重要手段,具有广泛的应用价值和科学意义。

通过系统的实验操作和数据分析,我们可以更全面地了解微生物世界的奥秘,为人类卫生、环境保护等领域的发展做出贡献。

让我们共同努力,探索微生物世界的未知领域!。

实验微生物操作规程

实验微生物操作规程

实验微生物操作规程微生物操作是指在实验室中进行与微生物相关的实验操作,包括培养、分离、鉴定、保存等。

为了确保实验的准确性和安全性,制定一套规范的微生物操作规程是必要的。

以下是一个简单的微生物操作规程,供参考。

一、实验室准备工作1. 实验室应保持整洁干净,工作平台、仪器、培养箱、试剂瓶等应定期清洁消毒。

2. 实验室应配置必要的生物安全设施,如生物安全柜或层流净化工作台,确保操作过程中的生物安全。

3. 实验室人员应定期接受相关培训并了解操作规程,熟悉实验室安全操作规定。

二、材料准备1. 培养基的配制应按照标准操作流程进行,注意消毒、灭菌过程,避免交叉污染。

2. 试剂瓶、吸管、移液器等实验器皿应定期消毒,并正确分类存放。

3. 实验过程中使用的培养皿、试管等培养器具应事先标注清晰,避免混淆。

三、实验操作步骤1. 实验前应仔细阅读实验方案,并准备好所需材料和装备。

2. 打开生物安全柜或层流净化工作台,并按照规定操作。

3. 进行微生物培养时,使用无菌吸管、移液器等工具进行操作,避免细菌的交叉污染。

4. 实验操作过程中避免直接接触微生物,要佩戴手套并注意手部卫生,特别是实验结束后应及时清洁双手。

5. 在进行微生物分离时,要采取无菌操作,避免外源菌的污染。

同时,应做好菌落计数和记录工作,以便后期分析。

6. 进行微生物鉴定时,应遵循相应的实验方法和检测标准,并注意保存鉴定样品以备查验。

7. 在进行微生物保存时,应使用适当的保存方法和条件,以确保微生物的长期保存。

四、废物处理和实验室清洁1. 实验结束后,实验废物应正确分类处理,避免对环境和人体造成污染和伤害。

2. 实验室工作台、仪器仪表等应定期清洁消毒,保持整洁干净。

3. 实验结束后,要检查实验设备是否关闭,消毒柜是否关闭,确保实验室的安全。

五、实验安全措施1. 操作过程中应戴好防护眼镜、实验服、手套等个人防护装备。

2. 避免在实验室内进食、饮水,以防误将细菌或化学物质带入体内。

微生物实验操作规程

微生物实验操作规程

微生物实验操作规程
1. 实验目的
本操作规程旨在确保微生物实验的安全进行,并保证实验结果的准确性和可靠性。

2. 实验器材准备
- 高温灭菌器
- 密封培养皿
- 不锈钢接种环
- 培养基
- 显微镜
- 实验台
3. 实验步骤
3.1. 准备工作
1. 确保实验台面干净整洁,并消毒实验器材。

2. 检查培养基是否符合要求,如有需要,根据实验要求进行调配。

3.2. 培养菌种
1. 使用无菌的不锈钢接种环在培养基表面划线,接种菌种。


免污染其他区域。

2. 密封培养皿,标记上菌种信息和日期,放入高温灭菌器中进
行培养。

3.3. 现场观察
1. 从高温灭菌器取出培养皿,置于实验台上。

2. 使用显微镜观察菌落的形态和生长情况。

记录实验结果。

3.4. 数据处理
1. 将观察到的数据整理成表格或图表。

2. 分析数据并得出结论。

4. 实验注意事项
- 操作过程中要佩戴实验手套,避免污染。

- 实验器材要经过高温灭菌处理,确保无菌状态。

- 实验完毕后及时清理实验台面和器材,保持实验环境的卫生。

- 严格遵守实验操作规程,避免操作失误和意外发生。

5. 实验结果分析
根据实验结果分析,我们可以得出结论并进一步探索微生物的特性和应用领域。

以上为微生物实验操作规程,详细描述了实验的步骤和注意事项,希望能对实验操作提供指导和帮助。

----------
> 注:以上内容仅供参考,实际操作请根据实验要求和实验室安全规定进行。

基础生物学实验(微生物学部分)_ 微生物基本实验操作技术篇_ 无菌操作技术_

基础生物学实验(微生物学部分)_  微生物基本实验操作技术篇_  无菌操作技术_

基础生物学实验微生物学部分1 倒平板技术宦海霞原理倒平板就是火焰旁,将三角瓶中已融化的琼脂培养基倒入无菌培养皿中,然后置水平位置待凝,凝固后即成无菌培养基平板(简称平板),完成此操作的过程称为倒平板。

实验目的及原理*010203培养基其他:酒精灯,打火机,标签纸,记号笔等。

无菌培养皿若干套实验材料1右手持瓶,保持瓶口处于酒精灯火焰旁的无菌操作区域内并面向火焰。

迅速倒出瓶内融化的培养基液至无菌培养皿内。

一般倒入量为12~15ml 。

融化培养基,可用微波炉融化,也可用沸水浴融化或压力锅融化等左手取培养皿,用食指和拇指开启培养皿成一缝,恰好能让三角瓶口伸入。

倒无菌平板⏹持皿法倒无菌平板 ⏹叠皿法清洁桌面,正式倒平板前须清理与清洁台面,以减少台面尘埃,降低平板污染的概率。

盖上培养皿盖,置水平位置冷凝42方法和步骤567注意事项用于倒平板的培养基一定要彻底融化,否则会再所倒的平板培养基表面出现未融化的琼脂块。

倒平板时的培养基温度不能过高(50~60℃为宜),否则会在皿盖内侧或凝固的平板表面形成许多冷凝水,不利于单菌落的形成。

在无菌操作倒平板过程中,切忌用手抓、握三角瓶的瓶口处,以防灼热的瓶口烫伤手指,同时,手指上的微生物也会污染瓶口,进而严重污染培养基。

谢谢您的观看基础生物学实验微生物学部分2 平板划线技术张曈实验原理实验原理1 平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。

一般是将混杂在一起的不同种微生物戒同种微生物群体中的不同细胞,通过在分区的平板表面上作多次划线稀释,形成较多的独立分布的单个细胞,经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。

通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯种”。

在实验中,我们将平板分成A、B、C、D 4个面积不同的小区进行划线,A区面积最小,作为待分离菌的菌源区,B和C区为经初步划线稀释的过渡区,D区则是关键的单菌落收获区,它的面积最大,出现单菌落的概率也最高。

因此,这4个区的面积安排应做到D>C>B>A。

微生物实验操作共12页

微生物实验操作共12页

油镜的使用和维护目的:掌握油镜的使用与维护,熟悉油镜的使用原理。

材料:显微镜,拭镜纸,液体石蜡油,二甲苯原理:油镜的透镜极小,工作焦距最短,光线通过玻璃和空气,由于介质密度不同发生折射,射入镜筒的光线极少,视野暗,物象不清晰。

如在玻片与镜头(透镜)之间加上折光率和玻片(n=1.52)相近的香柏油(n=1.515)就可减少光线的折射,加强视野的亮度,获得清晰的物象。

步骤:显微镜油镜的使用和维护1.将显微镜平稳地安放在实验台适宜处。

识别油镜头:标有100×、OIL、HI等字样。

2. 打开电源,用低倍镜对光,打开光圈,调节聚光镜的位置,使视野光线充足。

3. 标本上加镜油一滴,转动粗螺旋,使油镜头缓缓下降,用眼从侧面观察,直到油镜头浸入油中接近玻片为止。

4. 从目镜观察,同时徐徐转动粗螺旋提升,见模糊物象后再用细螺旋调节,直到见到清晰物象为止。

5. 观察完毕,粗螺旋提高镜头,取下标本片,油镜头使用后立即用擦镜纸擦净镜头上的油。

如油已干,可在擦镜纸上滴少许二甲苯擦拭,并立即用另一擦镜纸擦去二甲苯,因二甲苯能溶解镜头上的固定胶以致使镜头脱落。

6.将镜头转呈“八”字,调低聚光器,对号送入柜子内存放。

革兰染色目的:掌握革兰染色的原理及操作。

材料:干净玻片,接种环,葡萄球菌和大肠杆菌18-24h 培养后的混合菌液,酒精灯,一套革兰染液原理:主要为细胞壁结构的差异。

G+三维肽聚糖结构的交联度大,通透性低,脂质少或无,酒精作用使孔径缩小;而G-肽聚糖为二维疏松结构,薄,外膜含大量脂质,易被酒精溶解,使细胞壁通透性增高,结晶紫-碘复合物被酒精溶解而脱色。

步骤:1. 细菌标本的制作(1)涂片:无菌操作。

取一接种环混合细菌悬液,涂布成直径约1cm的涂片,涂片应薄而均匀。

(2)干燥:涂片最好在室温中自然干燥。

必要时可将标本面向上,放在酒精灯上方微火处干燥。

(3)固定:标本面向上,在酒精灯火焰外焰按钟摆的速度来回通过3次,放置待冷后染色。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

油镜的使用和维护目的:掌握油镜的使用与维护,熟悉油镜的使用原理。

材料:显微镜,拭镜纸,液体石蜡油,二甲苯原理:油镜的透镜极小,工作焦距最短,光线通过玻璃和空气,由于介质密度不同发生折射,射入镜筒的光线极少,视野暗,物象不清晰。

如在玻片与镜头(透镜)之间加上折光率和玻片(n=1.52)相近的香柏油(n=1.515)就可减少光线的折射,加强视野的亮度,获得清晰的物象。

步骤:显微镜油镜的使用和维护1.将显微镜平稳地安放在实验台适宜处。

识别油镜头:标有100×、OIL、HI等字样。

2. 打开电源,用低倍镜对光,打开光圈,调节聚光镜的位置,使视野光线充足。

3. 标本上加镜油一滴,转动粗螺旋,使油镜头缓缓下降,用眼从侧面观察,直到油镜头浸入油中接近玻片为止。

4. 从目镜观察,同时徐徐转动粗螺旋提升,见模糊物象后再用细螺旋调节,直到见到清晰物象为止。

5. 观察完毕,粗螺旋提高镜头,取下标本片,油镜头使用后立即用擦镜纸擦净镜头上的油。

如油已干,可在擦镜纸上滴少许二甲苯擦拭,并立即用另一擦镜纸擦去二甲苯,因二甲苯能溶解镜头上的固定胶以致使镜头脱落。

6.将镜头转呈“八”字,调低聚光器,对号送入柜子内存放。

革兰染色目的:掌握革兰染色的原理及操作。

材料:干净玻片,接种环,葡萄球菌和大肠杆菌18-24h 培养后的混合菌液,酒精灯,一套革兰染液原理:主要为细胞壁结构的差异。

G+三维肽聚糖结构的交联度大,通透性低,脂质少或无,酒精作用使孔径缩小;而G-肽聚糖为二维疏松结构,薄,外膜含大量脂质,易被酒精溶解,使细胞壁通透性增高,结晶紫-碘复合物被酒精溶解而脱色。

步骤:1. 细菌标本的制作(1)涂片:无菌操作。

取一接种环混合细菌悬液,涂布成直径约1cm的涂片,涂片应薄而均匀。

(2)干燥:涂片最好在室温中自然干燥。

必要时可将标本面向上,放在酒精灯上方微火处干燥。

(3)固定:标本面向上,在酒精灯火焰外焰按钟摆的速度来回通过3次,放置待冷后染色。

固定的目的是杀死细菌,使细菌与玻片黏附较牢固。

菌体蛋白质变性后,提高与染料的亲和力。

2. 革兰染色(1)初染:滴加结晶紫染液1-2滴于涂片上,1min 钟后用自来水缓缓冲洗。

(2)媒染:滴加碘液1-2滴,1min后用自来水缓缓冲洗。

(3)脱色:加95%酒精数滴,摆动玻片使酒精与细菌充分接触,约20-30s后,立即用自来水缓缓冲洗。

(4)复染:滴加稀释碳酸品红液,30-60s后,自来水缓缓冲洗。

用吸水纸吸干后,用油镜观察。

镜检后,载片放入消毒缸。

细菌特殊结构的观察目的:观察并掌握细菌的形态及特殊结构。

材料:细菌鞭毛、芽孢、荚膜的标本片;革兰阳性菌、革兰阴性菌染色标本片示教:革兰阳性菌:葡萄球菌,紫色革兰阴性菌:大肠杆菌,红色细菌鞭毛细菌芽孢细菌荚膜细菌的分布目的:了解细菌在自然界中的分布情况。

材料:普通琼脂平板培养基、血平板、镊子、无菌棉拭子、革兰染液。

操作步骤:1.空气中细菌的检查(1)采用沉降法:取普通琼脂平板培养基1只,任意置一处,启盖约15分钟,再盖上,37oC培养24小时,观察有无细菌生长。

(2)结果判定:培养基表面可见多种大小、形态不一的菌落。

2. 皮肤表面细茵检查(1)采用涂抹法: 先在平板底面用记号笔分成两区,作标记,将未消毒的手指在平板的1/2处表面轻轻涂抹划线,然后用碘酒、乙醇擦拭手指皮肤,用消毒后的手指在平板另一1/2处进行涂抹,操作完毕,置37℃培养24小时后,取出观察结果。

(2)结果判定:培养基表面有几种大小及形态不同的菌落生长,注意比较消毒前后细菌的生长情况。

3.咽喉部细茵检查(1)用无菌棉拭子在咽喉部涂抹后,涂在血平板上,并划线分离,37oC培养24小时后观察结果。

注意观察平板上菌落种类以及是否有溶血现象,并可挑取菌落进行革兰染色检查。

口腔微生物检查也可用无菌牙签直接挑取少量牙垢,制成涂片,进行革兰染色检查。

(2)结果判定:血平板表面有大小和形态不同的菌落,有的菌落周围可见溶血环。

牙垢涂片镜检可见革兰阳性菌和革兰阴性菌。

紫外线杀菌实验目的:掌握紫外线杀菌的原理,熟悉紫外线杀菌实验的操作。

材料:大肠杆菌,琼脂平板,无菌回形状纸片,接种环,镊子,紫外灯.原理:紫外线波长范围为240~280nm,最适的波长为260nm,这与DNA吸收光谱范围相一致。

其杀菌原理是紫外线易被核蛋白吸收,使DNA的同一条螺旋体上相邻的碱基形成胸腺嘧啶二聚体,从而干拢DNA的复制,导致细菌死亡或变异。

紫外线特点:紫外线的穿透能力弱,不能通过普通玻璃、尘埃。

步骤:1.平板密集划线接种。

2.在平板上贴无菌回形纸片。

3.UV照射30min(打开平板盖子)。

4.取出回形纸,将回形纸放入消毒缸中。

5.37oC培养24h后观察结果。

细菌代谢产物观察和生长现象目的:掌握细菌代谢产物的检测和结果的判断。

熟悉细菌在各种培养基中的生长现象。

材料:各种生化管,大肠杆菌、伤寒杆菌、产气杆菌、变形杆菌等。

原理:不同菌的酶系统不同,对底物的代谢产物也不同,用生化的实验方法可将产物检测出来,从而对细菌鉴定。

步骤:一、细菌代谢产物观察1. 糖发酵实验将大肠杆菌、伤寒杆菌分别接种在葡萄糖发酵管内,37℃培养18-24h进行观察。

培养基中指示剂为溴甲酚紫。

如能分解葡萄糖,则产酸,培养基由原来的紫色变为黄色,记录符合为“+”。

如同时还产生气体,则其中倒置的小管中有气泡出现,记录符合为“⊕”。

如能分解乳糖,则产酸,培养基由原来的紫色变为黄色,记录符合为“+”。

如同时还产生气体,则其中倒置的小管中有气泡出现,记录符合为“⊕”。

如培养基未变色,仍为紫色,则表明细菌不能分解乳糖不能分解乳糖。

记录符合“-”。

2.枸橼酸盐利用实验该培养基中提供的唯一碳源是枸橼酸钠。

指示剂是澳麝香草酚兰。

分别接种大肠杆菌和产气杆菌,37℃培养24h进行观察.若斜面有菌落出现,培养基由原来的绿色变为深兰色,表明细菌能利用枸橼酸钠,记录符合“+”,反之“-”。

3.靛基质吲哚产生实验能产生色氨酸酶的细菌,可分解蛋白胨水培养基中的色氨酸,产生靛基质。

将大肠杆菌和产气杆菌分别接种在蛋白胨水培养基中,37℃培养48h后,每管各加吲哚试剂(对二甲基氨基苯甲醛)3-4滴,若出现红色化合物-玫瑰色吲哚,表明靛基质产生阳性“+”;反之为阴性:“-”。

4. 硫化氢产生实验有的细菌能分解含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸)产生硫化氢。

将大肠杆菌和变形杆菌分别接种在这样的培养基中,37℃培养18-24h。

若培养基中出现黑色沉淀物即为阳性“+”,表明产生的硫化氢与培养基中的铅盐(或铁盐)结合,生成黑色的硫化铅(或硫化铁)。

二、细菌生长现象1、在液体培养基上生长情况(1)表面生长:液体清晰,细菌生长在液面形成菌膜。

如枯草杆菌。

(2)混浊生长:液体均匀混浊,或有少量沉淀。

如大肠埃希菌。

(3)沉淀生长:液体清晰,细菌生长在管底,形成沉淀。

如链球菌。

2、在固体培养基上的生长情况(1)菌苔:在琼脂斜面培养基上长成菌苔。

(2)菌落:在平板上形成肉眼可见的细菌集团,称为菌落。

观察时要注意菌落的大小、形状、表面形状、边缘是否整齐、透明度、颜色等,可作为鉴别细菌的依据之一。

(3)色素:水溶性色素和脂溶性色素。

3、在半固体培养基上的生长情况有鞭毛的细菌,由于能运动,在半固体培养基内沿穿刺线弥漫性生长,使穿刺线变得模糊不清。

无鞭毛的细菌,因为不能运动,接种生仍没穿刺生长,穿刺线与周围界限清楚。

凝集实验(玻片法)目的:掌握抗原抗体反应的基本原理和特异性,熟悉凝集反应的操作。

材料:伤寒杆菌A-F群O多价血清、志贺氏痢疾多价血清、生理盐水、未知菌、玻片。

原理:颗粒性抗原(凝集原)与相应的抗体(凝集素)直接结合,在一定的条件下形成肉眼可见的凝集现象。

如红细胞ABO血型的测定,测定细菌的细菌凝集实验。

步骤:1.取清洁载物玻片一张,用蜡笔划为三格,并注明号码。

于第一格和第二格内各加约30ul伤寒杆菌A-F 群O多价血清及志贺氏痢疾多价血清,第三格内滴加约30ul生理盐水。

2. 用接种环挑取待检菌种少许,分别均匀地涂抹于1、2、3格内的液体中。

接种环每次使用前后均需经酒精灯火焰烧灼灭菌。

3. 轻轻摇动玻片,数分钟后用肉眼观察结果,出现灰白色凝集颗粒者即为阳性反应;仍为均匀混悬液者为阴性反应。

如结果不够清晰,可将玻片放于低倍显微镜下观察。

沉淀反应(双扩散)目的:掌握抗原抗体反应的基本原理和特异性,熟悉沉淀反应的操作。

材料:干净玻片,玻璃蜡笔、打孔器、微量加样器、正常人血清IgG、羊抗人IgG原理:将抗原与抗体分别加到电解质凝胶板相邻的两孔中,抗原与抗体双方自由扩散,在最适当比例处形成抗原抗体复合物(沉淀线)。

步骤:1.制板:取干净玻片一片,用蜡笔分为三格,用吸管将4-5ml加热溶化的1.5%食盐琼脂充盈中格,制备琼脂板。

2. 打孔:待琼脂板凝固后,用打孔器打孔。

孔间距约为5mm。

3. 封底:将打好孔的琼脂板凝板过火焰三次。

4. 加样:用微量加样器在三孔中加入生理盐水,正常人血清IgG和马抗人IgG。

每孔加入约10μl。

注意:加样时勿使液体溢出和孔内出现气泡。

5. 扩散:将琼脂板放入湿盘内,置37℃温箱中(均保持水平位置),于24小时后观察结果。

药敏实验(纸片法)目的:掌握纸片法药敏实验方法,熟悉微生物培养,了解抗生素对细菌的作用机制。

了解含药纸片的制备材料:大肠埃希菌,普通琼脂培养基,无菌镊子,打孔器(直径6cm),抗生素纸片。

原理:药物在琼脂上扩散,形成浓度涕度,在一定的浓度下,对细菌抑制或杀死,浓度过低,则不能抑制或杀死。

从而形成一定大小的抑菌圈。

步骤:1.平板上密集划线接种。

2.贴4-5种含抗生素的纸片于平板上。

药片与平板边缘相距至少1.5cm,药片之间相距至少2cm。

3. 37oC培养24h后观察结果。

测量抑菌圈直径大小,判断敏感性。

消毒剂对细菌的影响目的:掌握含药纸片的制备。

熟悉微生物培养,了解消毒剂对细菌的作用机制。

材料:大肠埃希菌,普通琼脂培养基,无菌镊子,打孔器(直径6cm),滤纸纸片(直径约6 mm),70%酒精,金星消毒水,紫药水、红药水。

原理:药物在琼脂上扩散,形成浓度涕度,在一定的浓度下,对细菌抑制或杀死,浓度过低,则不能抑制或杀死。

从而形成一定大小的抑菌圈。

步骤:1.平板上密集划线接种细菌。

2. 将无菌干燥的滤纸片放入各种消毒剂中浸湿,在容器边缘沥干,即为含药的滤纸片。

3. 将以上含药滤纸片贴于平板上,每块贴4种。

药片与平板边缘相距至少1.5cm,药片之间相距至少2cm。

4. 37oC培养24h后观察结果。

测量抑菌圈直径大小,判断抑菌效果。

(此材料来自精品课程)。

相关文档
最新文档