无菌培养基灵敏度验证
培养基的灵敏度测试
培养基的灵敏度测试培养基的灵敏度测试是其质量控制的一个重要检测部分。
方法如下：1.用于菌数计数的半固体琼脂培养基促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查（促菌生长检查）。
取预先制备好的琼脂培养基平皿3~5个，用表面涂布法每块平板表面接种30~100个试验菌，同时用已知质量保证的同型号培养基平皿3~5个（如较著名的如MERCK，DIFICOL产品）做对照试验，待培养基表面的菌液被琼脂培养基吸干或风干后，将培养皿倒置于培养箱的使用温度下培养48~72小时，（也可采用浇碟法进行）取出培养后的平皿点计菌落数。
样品培养基上的微生物数量应不得低于对照培养基上微生物生长数量的70%。
否则，需重新检查，或该培养基被视为不符合促生长要求。
2.用于控制菌检查的富集培养基的促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查。
每100ml培养基内分别接入试验菌小于100cfu，每个菌种接种两瓶培养基，将接过种的培养基置于指定条件下培养。
应在16~18小时后可明显观察到培养基内有微生物生长，则证明此培养基合格。
原则上无论是采用脱水培养基还是按相关处方配制的培养基，一旦制成成品培养基，则应对每个配制批号培养基进行促菌生长（灵敏度检查）试验，以考察培养基的质量。
按脱水培养基的生产批号做灵敏度检查是基于培养基的灭菌程序已经经过验证。
如果实验室使用的是商购的成品培养基，供应商应随培养基提供相应批次的培养基质量检测报告，报告包括培养基的PH值、无菌检查结果和促菌生长（灵敏度）试验结果等项目。
建议在使用某一新的成品培养基（新供应商或新培养基品种）时，应至少考察三个不同批次的培养基质量，只有三批质量均合格方可使用该培养基。
微生物限度检查用成品培养基一旦初试确认合格后，可审查供应商的质检报告，而不必每批再作无菌检查和灵敏度检查，但半年应至少检查一次，以复核其质量。
用于无菌检查试验的每批培养基，均必须按规定进行灵敏度检查试验，此规定同样适用于实验室自行配制的培养基。
培养基质量检查方法
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。
5．记录保存：
质检部保管5年。
6.相关操作规程
6.1．电热鼓风干燥箱操作规程
6.2．HWS-12型电热恒温水浴锅操作规程
6.3．生化培养箱操作规程
6.4．YX手提式压力蒸汽消毒器操作规程
6.5．净化工作台操作规程
7．相关记录
7.1.微生物检验用培养基性能试验记录
编制：
日期：
审批：
日期：
批准：
日期：
有限公司
文件编号
版号
A.0
微生物检验用培养基性能试验方法
页次
生效日期
2020/01/02
液，孢子洗脱，然后吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每毫升含孢子数小于100 cfu的孢子悬液。
4.3.3培养基接种
取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支,分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、枯草芽孢杆菌菌片各2支,每支接种量为1ml(含菌10～100 cfu)，另1支不接种作为空白对照，30～35℃培养3天；取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支,分别接种白色念珠菌、黑曲霉各2支,每支接种量为1ml(含菌10～100 cfu)，另1支不接种作为空白对照，23～28℃培养5天。逐日观察结果。
(5)白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98001〕
(6)黑曲霉(Aspergillus niger)〔CMCC(F)98003〕
4.3.2菌液制备
接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，23～28℃培养24～48小时；上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每毫升含菌数小于100 cfu（菌落形成单位）的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.9%无菌氯化钠溶
无菌检验方法验证
无菌检验方法验证无菌检查方法是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的试验方法！至于无菌检查具体有哪些验证方法呢？下面就随店铺一起来了解下吧！无菌检验方法验证无菌检查方法验证一般分为前验证和再验证两种。
前验证，也称预验证，指在无菌分析方法正式使用前，按照预定验证方案进行的验证。
如果没有充分的理由，任何检查方法必须进行前验证。
再验证，指某一检查方法经过验证并在使用一段时间后进行的，旨在证实已验证状态没有发生飘移而进行的重新验证及对检查方法进行修订、改变时进行的验证。
通常一个无菌产品的检查流程为：首先基于产品的剂型、溶解度等性质，按照药典的要求确定是否需要进行前处理;然后根据产品的特性是否有抑菌性，确定是否需要增加去除产品抑菌性的方法;最后验证整个检查方法中用到的一切及试验过程中的每一个环节包括样品的预处理方式、检查过程、培养条件等均不影响样品中微生物的生长。
前处理方法直接影响后续步骤的效果和重现性，应是验证的重点。
供试品中抑菌活性的去除是当前验证工作的重点，尤其强调应充分验证供试品本身对微生物生长的影响。
(一)具体的验证方法如下：1. 菌种的选择无菌检查方法验证中通常选择以下6种试验中常用的控制菌的标准菌株，它们分别代表不同类型的菌种：枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]代表药品中常见的污染菌——芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]代表革兰阳性菌、生孢梭菌 [CMCC(B)64 941]代表厌氧菌、大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]代表革兰阴性菌、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]代表酵母菌、黑曲霉菌 [CMCC(F)98 003]代表霉菌。
2. 菌液的制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30~35 ℃培养18~24h;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，23~28℃培养24~48h，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。
培养基的灵敏度测试
培育基的灵敏度测试培育基的灵敏度测试是其质量掌握的一个重要检测部分。
方法如下：1.用于菌数计数的半固体琼脂培育基促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培育基均应进行灵敏度检查（促菌生长检查）。
取预先制备好的琼脂培育基平皿3~5个，用表面涂布法每块平板表面接种30~100个试验菌，同时用已知质量保证的同型号培育基平皿3~5个（如较闻名的如MERCK,DIFICoL产品）做对比试验，待培育基表面的菌液被琼脂培育基吸干或风干后，将培育皿倒置于培育箱的使用温度下培育48~72小时，（也可采纳浇碟法进行）取出培育后的平皿点计菌落数。
样品培育基上的微生物数量应不得低于对比培育基上微生物生长数量的70%。
否则，需重新检查，或该培育基被视为不符合促生长要求。
2.用于掌握菌检查的富集培育基的促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培育基均应进行灵敏度检查。
每100ml培育基内分别接入试验菌小于100cfu,每个菌种接种两瓶培育基，将接过种的培育基置于指定条件下培育。
应在16~18小时后可明显观看到培育基内有微生物生长，则证明此培育基合格。
原则上无论是采纳脱水培育基还是按相关处方配制的培育基，一旦制成成品培育基，则应对每个配制批号培育基进行促菌生长（灵敏度检查）试验，以考察培育基的质量。
按脱水培育基的生产批号做灵敏度检查是基于培育基的灭菌程序已经经过验证。
假如试验室使用的是商购的成品培育基,供应商应随培育基供应相应批次的培育基质量检测报告，报告包括培育基的PH值、无菌检查结果和促菌生长（灵敏度）试验结果等项目。
建议在使用某一新的成品培育基（新供应商或新培育基品种）时，应至少考察三个不同批次的培育基质量，只有三批质量均合格方可使用该培育基。
微生物限度检查用成品培育基一旦初试确认合格后，可审查供应商的质检报告，而不必每批再作无菌检查和灵敏度检查，但半年应至少检查一次，以亚核其质量。
用于无菌检查试验的每批培育基，均必需按规定进行灵敏度检查试验，此规定同样适用于试验室自行配制的培育基。
培养基灵敏度检验记录
空 （白 不对 接 种）
白色念珠 菌
黑曲霉
空白对照 （不接种）
1
2
3
4
备注: 培5 养结 果阳性用“+”
培养皿编号 24H菌落数 48测试
1
2
3
结果判定(Result):
检 测/
复核/日 期:
生效日期：2016年05月18日
2.2
取每管装量9ml的TSB培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空 白对照，培养5天，逐日观察结果并记录.
3. 培养情况
培养仪器 培养箱编号
生化培养箱
校验有效期至
培养温度
30℃～35℃
23℃～28℃
天数
菌种 金黄色葡萄球 菌
铜绿假单胞 菌
枯草芽孢杆 菌
生孢梭 菌
KANGGU
嘉兴康谷医用材料有限公司
产品描述
培养基灵敏度检查记录
批号
QMR-098-00
数量
生产商
检测依据
2010版中国药典
检测日期
1. 检金测黄用色菌葡种萄球 菌
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌 生孢梭菌
白色念珠菌
黑曲霉
2. 程序
2.1
取每管装量为12ml的TSB培养基9支，分别接种小于100cfu 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢 杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天，逐日观察结果并记录.
药品无菌检查法——培养基灵敏度检查法
药品无菌检查法培养基灵敏度检查法1•菌种(1)藤黄微球菌(Micrococcus Luteus)[CMCC(B)28001](2)生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B)64941](3)白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001]2•操作(1)取藤黄微球菌的营养琼脂斜面和白色念珠菌的真菌培养基琼脂斜面的新鲜培养物,分别用0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液；将生孢梭菌不含琼脂的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，吸入无菌离心管，离心，弃去上清液, 菌体用0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液。
分别取上述菌悬液，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至与细菌浊度标准管相同的浓度，然后作10倍系列稀释，制成1ml中含10~ 100个菌并计数。
(2)将藤黄微球菌、生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基的新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液作10倍系列稀释,制成1ml中含10~100个菌并计数。
将藤黄微球菌的上述(1)或(2)的稀释菌液各1ml,分别接种至每管装量为9ml的需气菌、厌气菌培养基3管，生孢梭菌的上述(1)或(2)的稀释菌液各1ml,分别接种至每管装量为12ml的需气菌、厌气菌培养基3管，白色念珠菌的上述(1)或(2)的稀释菌液各1ml,接种至每管装量为9ml的真菌培养基3管,以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天并逐日记录结果。
3.结果判定以每株菌接种后的培养基不得少于2管呈现生长，即该培养基的灵敏度检查符合要求。
对照用菌液1.金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)菌液取金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］的营养琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内, 在30〜35C培养16〜18小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10〜100个菌。
2.生孢梭菌(Clostridium sporogeneS菌液取生孢梭菌［CMCC(B)64941］的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物1白金耳，接种至相同培养基内，在30~35C培养18〜24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10〜100个菌。
培养基灵敏度试验
计数培养基适用性检查记录
环境温度
C 湿度
%
仪器型号及编号： 立式灭菌器
型号：LMQ.R 3260B 编号：H085
霉菌培养箱 型号：MJ-160B-Z 编号:
电热恒温干燥箱 型号：202-3AB 编号：H001 菌液制备： 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，
置30~35C 培养24~48小时后，用0.9%无菌氯化
钠溶液制成每1ml 含菌数为50~100cfu 的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养
若被检培养基上的平均菌落数与对照培养基上的平均菌落数相比大于
70%,且菌落形态大小应与
对照培养基上的菌落一致，判该培养基适用性检查符合规定。
结论：
复核人:
基上，置 20~25 C 培养5~7天加入3~5ml 含0.05% 孢子洗脱。
然后，吸出孢子悬液至无菌试管中，用含 溶液制成每
1ml 含孢子数50~100cfu 的孢子悬液。
阳性对照菌液：
白色念珠菌[CMCC (F ) 98 001] 编号： 检查方法：
取5个无菌平皿，吸取白色念珠菌、黑曲霉菌各 种菌作为空白对照， 立即倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基 同时，用被检培养基同法操作。
(ml/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将 0.05% ( ml/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠 黑
曲霉[CMCC(F)98 003] 编号：
检验人:。
培养基灵敏度及适用性检查操作规程
1. 目的：通过培养基适用性检查，确保购买的培养基符合实验要求。
2. 范围：本规程适用于技术质量部实验员对培养基适用性的检查。
3. 职责：质量部实验员负责执行此规程。
4. 内容：4.1 检验依据：《中华人民共和国药典》2015版4.2 试验用具：烧杯、三角瓶、酒精灯、接种环、平皿、试管、吸管、移液枪、滴管、电子天平、电热恒温培养箱、生化培养箱或恒温恒湿培养箱、单人净化工作台、高压蒸汽灭菌器、微生物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查用培养基等。
4.3 无菌培养基适用性检查：本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。
4.3.1 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。
4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
a) 0.1%无菌蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。
b) pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，无水磷酸氢二钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。
c) 根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%无菌氯化钠溶液）。
如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。
4.3.3 无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。
4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；b) 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48小时，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。
生物制品无菌检验规程
生物制品无菌试验规程生物制品不得含有杂菌（有专门规定者除外），灭活菌苗、疫苗不得含有活的本菌、本毒。
在制造过程中应由制造部门按各制品制造及检定规程规定进行无菌试验，分装后的制品须经质量检定部门做最后检定。
各种生物制品的无菌试验除有专门规定者外，均应按照本规程的规定进行。
1抽样1.1原液及半成品原液及半成品应每瓶分别进行无菌试验，其抽样量应至少为0.1%，但不得少于1.0ml。
1.1.1大罐稀释的制品抽样数量不得少于10ml。
1.1.2原液及半成品每开瓶一次，应如上法抽验。
1.2成品每亚批均应进行无菌试验，样品应随机抽取，应具有代表性（包括分装过程的前、中、后样品）。
1.2.1分装量在100支（瓶）或以下者抽检不少于5支，101～500支（瓶）者抽检不少于10支（瓶），501～100支（瓶）者抽检不少于20支（瓶，10001支（瓶）以上者抽检40支（瓶）。
1.2.2每瓶装量20ml以上的冻干血液制品，每柜冻干200瓶以下者抽检2瓶，200瓶及以上者抽检4瓶。
6～20ml抽检量加倍。
5ml和5ml以下者按1.2.1项抽检。
1.3凡规定需作支原体检查的制品，均应在半成品时按亚批进行检查，成品可不再做。
2无菌试验用培养基（培养基处方可附录1）2.1检查制品中本菌是否存活应采用适于本菌发育生长的培养基（在半成品时检查，有专门规定者除外）。
2.2检查需氧性和厌氧性杂菌应采用硫乙醇酸盐培养基。
检查不含汞类防腐剂制品中的需氧性和厌氧性杂菌时，该培养基中可不加硫乙醇酸盐。
检查霉菌和腐生菌应采用改良xx培养基。
检查混浊制品可采用不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基。
检查活菌苗时可加大琼脂含量，做成斜面。
2.3检查支原体应采用猪胃消化液半固体或牛心消化液半固体培养基。
2.4生物制品无菌试验用培养基亦可用经检定合格的干燥培养基配制。
2.5无菌试验培养基的灵敏度，乙型溶血性链球菌（32210株）应达到10-8，短芽胞杆菌（7316株）和生孢子梭状芽胞杆菌（64941株）应达到10-7，白色念珠菌（ATCc 10231）和腊叶芽枝霉应达到10-6。
无菌检查法及其验证
无菌检查法及其验证
第8页
培养基储存
• 制备好培养基应该保留在2-25℃、避光环 境，若保留于非密闭容器中，普通在3周内 使用；若保留于密闭容器中，普通可在1年 内使用。
※应结合实际情况进行验证，以确定培养基 使用期。
无菌检查法及其验证
第9页
培养基适用性检验
本检验可在供试品无菌检验前或与供试品 无菌检验同时进行。 • 无菌性检验
无菌检查法及其验证
第24页
阳性对照试验
• 目标：①验证供试品经灭活后或用其它方式（稀 释、冲洗等）处理后是否仍有抑菌或杀菌作用， 确保检验条件符合要求，预防出现假阴性。②培 养条件是否符合要求。
• 应依据供试品特征选择阳性对照菌。 ①无抑菌及抗革兰阳性-金黄色葡萄球菌 ②抗革兰阴性-大肠埃希菌
③抗厌氧菌-生孢梭菌 ④抗真菌-白色念珠菌
无菌检查法及其验证
第28页
• 对无菌检验试验所用设备及环境微生物监控结果不 符合无菌检验法要求；
• 回顾无菌试验过程，发觉有可能引发微生物污染原 因；
• 供试品管中生长微生物经判定后，确证有微生物生 长是因无菌试验中所使用物品和（或）无菌操作技 术不妥引发。
无菌检查法及其验证
第29页
试验若经确认无效，应重试。重试时，重 新取同量供试品，依法重试，若无菌生长， 判供试品符合要求，若有菌生长判供试品 不符合要求。
2支
1 ml 5天
※其中硫乙醇酸盐及改良马丁培养基都有 1支不接种作为空白 ※接种量 ＜100cfu（不能多）
无菌检查法及其验证
第14页
培养基适用性检验
⑤结果判断
• 空白对照应无菌生长，若加菌培养 基管均生长良好，判该培养基灵敏 度检验符合要求。
无菌检验方法验证报告
编码：无菌检验方法验证报告药业有限公司1. 概述：无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
本公司的无菌检查只是针对于灭菌注射用水的无菌检查。
灭菌注射用水灭菌工艺采用121℃30min过度杀菌法，按照2005年版《中国药典》的规定，注射剂的无菌检查应采用薄膜过滤法。
制定的《无菌检查法标准操作规程》（SOP-B）应经过验证后，才能批准使用。
2.验证目的：验证所采用的方法和条件是否适合于供试品的无菌检查。
即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性以被充分消除到可以忽略不计。
3. 验证范围：适用于灭菌注射用水无菌检查法的验证。
4. 验证人员及职责质量部负责该验证方案的起草及组织实施；验证小组负责验证方案的审批；质量部参与验证的实施及监督。
5.文件准备和培训检查验证所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。
6.验证条件.无菌检查室空气净化系统已经过验证并合格，仪器安装完成；仪表量器经过校验合格，且在有效期内。
. 供试品：3批，批号：批号：批号：. 培养基及试剂：.1.试剂试液：氯化钠:临用前配成0.9%浓度的溶液，配制记录见附件1。
冲洗液：0.1%蛋白胨水溶液，配制记录见附件2。
.2.培养基硫乙醇酸盐流体培养基生产厂家：批号：改良马丁培养基生产厂家：批号：营养肉汤培养基生产厂家：批号：改良马丁琼脂培养基生产厂家：批号：蛋白胨生产厂家：批号：培养基配制记录见附件3。
. 验证用菌株：金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】生孢梭菌【CMCC（B）64941】白色念珠菌【CMCC（F）98001】黑曲霉【CMCC（F）98003】购自：各验证用菌种传代记录见附件4。
.无菌检验仪器及相关设备：压力蒸汽灭菌器型号：生产厂家：校验日期：有效期：生化培养箱（细菌培养）型号：生产厂家：校验日期：有效期：生化培养箱（霉菌培养）型号：生产厂家：校验日期：有效期：7.验证内容：7.1. 培养基无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支，培养14天，应无菌生长。
无菌试验方法验证方案
无菌试验方法验证方案一、方案目的二、方案方法1.文献调研：通过查阅相关文献，了解无菌试验方法的原理、步骤和要求，确保验证方案与国际标准和法规相符合。
2.试验设计：根据文献调研结果，设计验证试验，包括试验目标、样品选择、试验参数和试验步骤等。
3.实验操作：按照试验设计的要求，进行实验操作。
包括准备无菌工作区、取样品、进行稀释等。
4.正负对照：设立正负对照组，以比较验证试验的准确性和可靠性。
正对照组应为已知无菌品，而负对照组为已知含有微生物的样品。
5.数据分析：对试验结果进行统计和分析，验证试验方法的灵敏度、特异性和重复性等指标。
6.结果判读：根据数据分析的结果，对试验方法的有效性进行判读，判断试验方法是否合格，进而确定是否需要对试验方法进行进一步优化或修改。
三、方案步骤以下是无菌试验方法验证的具体步骤：1.确定试验方法：根据国际标准和法规，选择适用的试验方法。
例如，可以选择滴定法、过滤法、涂布法等。
2.设计验证试验：根据试验方法的原理和要求，设计合适的试验方案。
包括样品的选择、试验参数的确定，以及试验步骤的规定等。
3.准备验证样品：准备无菌产品及相关样品，包括正对照组和负对照组。
正对照组为已知无菌产品，负对照组为已知微生物污染的样品。
4.实验操作：按照试验方案的要求，进行实验操作。
包括取样品、进行稀释、进行培养等。
5.结果分析：对试验结果进行统计和分析。
比较正对照组和负对照组的结果，计算验证试验的灵敏度、特异度、准确性等指标。
6.结果判读：根据结果分析的结果，判读试验方法的有效性。
如果验证试验结果与预期结果一致，并且达到规定的标准，则认为试验方法合格。
7.结果报告：将验证试验的结果进行记录和总结，并撰写验证报告。
报告中应包括试验方法的详细描述、试验步骤、结果数据和分析等内容。
四、方案要点1.样品选择：选择适当的样品进行验证，确保验证结果能够准确地反映真实情况。
2.试验参数：准确地确定试验方法的参数，包括培养时间、培养条件、培养基成分等。
无菌检查培养基灵敏度检查记录
无菌检查培养基灵敏度检查记录
2、实验用仪器设备
□立式压力蒸汽灭菌器型号：编号：
□净化工作台型号：编号：
□生物安全柜型号：编号：
□电热恒温培养箱型号：编号：
□霉菌培养箱型号：编号：
□电热鼓风干燥箱型号：编号：
备注:培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
4、实验
空白对照管应无菌生长，加菌的培养基管均生长良好。
5、结论：本次所检培养基空白对照管生长，加菌的培养基管,该培养基灵敏度检查规定。
检验人: 复核人：。
中检所无菌检查和微生物限度检查操作规范
中检所无菌检查和微生物限度检查操作规范无菌检查和微生物限度检查操作规范（中国药品生物制品检定所）一、无菌室的要求：无菌室是无菌检查、微生物限度检查的重要设备，面积不小于6平米，高度2.4-2.8m为宜。
建筑材料要光洁，不吸潮，无凸起，耐腐蚀，易清洗。
无菌室内部应六面光滑，无缝隙，里面连接处应呈凹凸形，不留死角。
操作间和缓冲间的门不应直对，缓冲间两个。
无菌室内采光面积要大，照明灯应镶嵌在天花板内，光照应分布均匀，光照度不低于300lux，电源开关应设在室外。
无菌室、缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯，每立方米2-2.5瓦，距实验台高度不超过1米，并应定期检查辐射强度，距1米处应不低于70微瓦/平方厘米，无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及调温装置，控制温度18-26℃，相对湿度40%-60%，操作间或净化工作台的洁净空气应保持与相临环境形成正压，不低于4.9帕。
操作区洁净度100级，操作间洁净度10000级，洁净度定期检查。
无菌室及缓冲间不得存放其他杂物，如培养箱。
用消毒液清洁无菌室操作台面，开启无菌室紫外灯和层流空气过滤30分钟以上。
无菌室的无菌程度，常用的沉降菌测定方法为：取营养肉汤琼脂平板3个，置无菌室的操作区台面左、中、右位置上，开盖暴露30分钟，在30-35℃培养2天后，计算菌落数。
用于无菌检查的无菌室或微生物限度检查的无菌室，细菌总数应小于3个，浮游菌每立方米应小于5个，否则，不能用于无菌检查和微生物限度检查。
二、培养基的准备1、培养基的制备：配制培养基的蒸馏水或去离子水应符合规定。
再称取需气菌、厌气菌培养基、真菌培养基的干燥培养基，加水溶化后，调节PH值，使灭菌后需气菌、厌气菌培养基的PH值为7.0-7.3，真菌培养基的PH值为6.2-6.6，分装、盖塞、灭菌，待用。
2、培养基灵敏度试验：培养基是无菌试验的基准物质，关系到无菌试验结果的科学、准确、可信度，因此，培养基灵敏度试验是无菌试验的重要组成部分。
无菌检查用培养基适用性验证报告
有限公司文件文件编号：VR-03-49页码：0/8无菌检查用培养基适用性验证报告审核批准表O方案经下列部门审核和批准后生效项目职责姓名签字日期起草质保部质保部审核质保部长批准质量副总1.验证目的：为证明硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适合于细菌，真菌的无菌检查，总结本验证报告。
2.参照标准：《中国药典》 2010版二部附录XI H无菌检查法。
3.验证项目：硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适用性检查。
4.验证小组姓名部门职责质保部负责对验证进行总结和评价批准方案及报告质保部负责制定确认方案及报告的编制质保部负责确认过程的相关检测，确保检验结论正确可靠质保部负责确认过程的相关检测，确保检验结论正确可靠4.试验材料：4.1. 被验证培养基：品名：硫乙醇酸盐流体培养基规格：批号：生产厂家：品名：营养肉汤培养基规格：批号：生产厂家：品名：改良马丁培养基规格：批号：生产厂家：4.2. 仪器设备：4.2.1. 压力蒸汽灭菌器：型号：编号：4.2.2. 双人净化工作台：型号：编号：4.2.3.电热鼓风干燥箱：型号：编号：4.2.4.生化培养箱 (23～28℃)：型号：编号：4.2.5.恒温培养箱(30～35℃)型号：编号：4.3. 稀释剂： 0.9%无菌氯化钠溶液4.4. 验证用培养基：4.5. 验证用菌株：5.菌液制备：5.1.取经培养18～24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤新鲜培养物1ml 加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu ∕ml 的菌悬液备用。
5.2.取经培养24～48小时的白色念珠菌的改良马丁培养物1ml 加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu ∕ml 的菌悬液备用。
6.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）分别取上述制备的金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml 加入培养皿，每种菌液平行做2皿，注入不超过45℃营养琼脂培养基15～20ml ，置30～35℃培养箱培养二天，取上项制备的白色念珠菌菌液1ml 加入培养皿，平行做2皿，注入不超过45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15～20ml ，置23～28℃培养箱培养三天。
无菌检查方法验证方案
无菌检查方法验证方案无菌检查是用来验证产品的无菌性的方法。
无菌性是指产品中不存在可繁殖的微生物。
无菌检查的目的是确保产品的安全性和质量，避免由于微生物污染而引起的感染或降低产品的有效性。
1.检测方法的选择：根据产品的特性和要求，选择合适的无菌检测方法。
常用的无菌检测方法包括微生物限度试验、膜过滤法、直接刨片法和填充法等。
2.样品准备：根据产品的特性和要求，合理选择样品的采集方法和数量。
样品的采集应在无菌条件下进行，以避免外部微生物的污染。
样品的存储和运输也需要符合无菌条件。
3.控制样品：准备一批已知无菌的样品作为正对照，以验证无菌检测方法的准确性和灵敏度。
正对照的准备应在无菌条件下进行，并进行相关记录。
4.负对照：准备一批已知含有可繁殖的微生物的样品作为负对照，以验证无菌检测方法的特异性和无菌性。
5.实验操作：根据选定的无菌检测方法，进行实验操作。
实验操作应在无菌条件下进行，包括无菌操作台、无菌培养基和无菌器具的使用。
所有操作人员都应接受相关的培训和认证。
6.试验结果的解释和判定：根据实验结果，判断样品是否无菌，并根据相应的标准和规范进行判定。
试验结果的解释和判定应由经过培训和认证的人员进行。
7.系统的记录和存档：对于每一次无菌检测，应记录实验过程、实验结果和相关的数据。
实验记录应具备可追溯性，便于审核和查找。
所有记录和相关数据应进行适当的存档，以备将来参考。
8.系统的验证：根据无菌检测方法验证方案的内容和要求，对整个无菌检测系统进行验证，包括设备、物料和人员。
验证应由专业的第三方机构进行，确保验证结果的客观性和可靠性。
验证结果和报告应进行适当的存档，以供将来参考。
以上就是一个完整的无菌检查方法验证方案。
通过合理的无菌检查方法验证方案的制定和实施，可以确保无菌检测的准确性和可靠性，保证产品的质量和安全性。
无菌检查用培养基灭菌后的保存有效期的验证方法
无菌检查用培育基灭菌后的保存时限验证方法1.工程描述质量掌握部无菌检查用培育基为硫乙醇酸盐流体培育基及胰酪大豆胨液体培育基，此两种培育基均为商品化的脱水培育基。
依据《中国药典》2023 版规定，无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培育基和胰酪大豆胨液体培育基等应符合培育基的无菌性检查及灵敏度检查的要求，制备好的培育基假设不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在 2～25℃、避光的环境下保存，并在阅历证的保存期内使用。
因此，拟对胰酪大豆胨液体培育基及硫乙醇酸盐流体培育基在灭菌后的保存期进展验证，验证方法为：培育基灭菌后冷处保存〔冰柜保存 2～10℃〕，确认在保存期内两种培育基的 pH 值、无菌性及灵敏度是否符合要求；每种培育基应进展三个配制批次验证；分别确认培育基在灭菌后保存 0 天、1 天、2 天、3 天、4 天、5 天的 pH 值、无菌性检查及灵敏度检查是否符合要求；依据验证结果，确认硫乙醇酸盐流体培育基和胰酪大豆胨液体培育基在灭菌后的保存时限。
2.目的对无菌检查用培育基灭菌后的保存时限进展验证，确认无菌检查用培育基灭菌后在保存有效期内的 pH 值、无菌性检查及灵敏度检查是否符合要求。
3.范围本验证文件的范围仅适用于质量掌握部无菌检查用培育基制备好后的保存时限的验证，验证工程包括：先决条件确认、试验设备及器材确认、培育基确认、灭菌效果确认、包装贮存确认、培育基 pH 值确认、培育基无菌性检查确认及培育基灵敏度检查确认。
4.职责4.1质量掌握部职责：负责验证方案、报告的起草；负责依据批准的方案进展验证操作；负责对验证数据进展收集、整理、分析；负责记录在确认过程中全部发生的偏差及变更；负责针对偏差及变更，并提出解决方案，以实行订正行动；负责验证过程中的相关检验工作；负责验证结果的总结、分析评价工作；负责人负责审核文件。
4.2质量保证部职责：负责监视整个验证活动，确保验证按打算进度进展；负责过验证工程的验证；负责对验证数据进展收集、整理、分析；负责变差、变更的调查和处理，偏差调查报告及变更状况上报审批；负责人负责审核文件。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
××公司
无菌检查用培养基适用性验证资料
文件编号：YZ-GC -004
1.验证目的：为证明硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适合于细菌，真菌的无菌检查，特制定本验证方案。
2.参照标准：2005版中国药典二部附录XI H无菌检查法。
3.验证项目：
硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基灵敏度检查。
4.验证小组
4.试验材料：
4.1. 被验证培养基：
品名：硫乙醇酸盐流体培养基
规格：批号：生产厂家：
品名：营养肉汤培养基
规格：批号：生产厂家：
品名：改良马丁培养基
规格：批号：生产厂家：
4.2. 仪器设备：
4.2.1. YM50立式压力蒸汽灭菌器
4.2.2. SW-CJ-2F双人净化工作台
4.2.3. JC101型电热鼓风干燥箱
4.2.4.JY-B型生化培养箱(23～28℃)
4.2.
5.PHX-DHS-40x50恒温培养箱(35～37℃)
4.3. 稀释剂：
0.9%无菌氯化钠溶液
4.4. 验证用培养基：
4.5. 验证用菌株：
5.菌液制备：
5.1.取经培养18~24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。
5.2.取经培养24~48小时的白色念珠菌的改良马丁培养物1ml加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。
6.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）
分别取上述制备的金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml加入培养皿，每种菌液平行做2皿，注入不超过45℃营养琼脂培养基15~20ml，置30～35℃培养箱培养二天，取上项制备的白色念珠菌菌液1ml加入培养皿，平行做2皿，注入不超过45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15~20ml，置23～28℃培养箱培养三天。
7.无菌培养基的无菌性检查
7.1培养基的配制
硫乙醇酸盐流体培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基29.25g，加1L蒸馏水，加热煮沸使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml。
营养肉汤培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基18g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml。
改良马丁培养基的配制：取改良马丁培养基28.5g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全
溶解，摇匀分装到到试管中，每只试管装量9ml。
7.2培养基的培养
硫乙醇酸盐流体培养基和营养肉汤培养基置于30~35℃的培养箱中培养14天；改良马丁培养基置于23~28℃的培养箱中培养14天℃，每天观察培养基浑浊情况。
表1培养基的无菌性检查表
注：“+”为生长，“-”为不生长
7.培养基灵敏度检查
7.1.硫乙醇酸盐流体培养基等灵敏度检查至少应进行3次独立的平行试验。
7.2培养基的配制
硫乙醇酸盐流体培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基29.25g，加1L蒸馏水，加热煮沸使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml。
营养肉汤培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基18g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml。
改良马丁培养基的配制：取改良马丁培养基28.5g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全溶解，摇匀分装到到试管中，每只试管装量9ml。
7.3.培养基接种
取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu/ml的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu/ml的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。
逐日观察结果。
7.4.结果判断
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。
表2培养基灵敏度检查表
注：“+”为生长，“-”为不生长
8 验证周期：同种培养基的不同批号，不同生产厂家均应进行适用性验证9结论：
无菌检查用培养基适用性验证报告书
无菌培养基的适用性检查记录
培养基：1.硫乙醇酸盐流体培养基批号：_______________ 检验日期：
2.硫乙醇酸盐流体培养基批号：_______________ 检验日期：
3.改良马丁培养基批号：_______________ 检验日期：
一、培养基的无菌性检查
培养温度：硫乙醇酸盐流体培养基℃改良马丁培养基℃
注：“+”为生长，“-”为不生长
二、培养基的灵敏度检查
1.菌液制备：
（1）金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003] 第___代0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml （2）枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501] 第代0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml （3）铜绿假单胞菌[CMCC(B) 10104] 第___代0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml （4）白色念珠菌[CMCC(F)98001] 第代0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml （5）黑曲霉[CMCC(F)98003] 第代0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml
2. 检查结果
细菌培养温度____℃ 3天霉菌及酵母菌培养温度____℃ 5天
注：“+”为生长，“-”为不生长
三、结论：
本品按《中华人民共和国药典2005年版（二部）》附录无菌检查法培养基的适用性检查，结果_______________。
检查人/日期：复核人/日期：。