食品中五种合成着色剂的测定
高效液相色谱法测定蜜饯中的合成着色剂
关键 词 ： 高效 液相 色谱 ； 极 管 阵列 法 ； 二 蜜饯 ； 成 着 色剂 合
论 文 编 码 ： ｉ１ ． ９ ９ ｊ ｉｓ ． ６ ３—９ ２ ． ０ ０ ０ ． ２ Ｄｏ ： ０ ３ ６ ／． ｓ ｎ １ ７ ３ ９ ２ １ ． ３ ２
合 成 着色 剂 即人 工合 成 的色 素 ， 为 食 品添加 作
２ ０ ７ ０ｎ 扫 描 ； 度 洗 脱 ， ０ ０ ｍ 梯 甲醇 ：０ ／ ３ ， ２ ～ ５ ９ ６
３ ；５ ～ ８ ， ；０ ， ｒｉ ； 样 量 １ Ｌ ３ ０ ／ ９ ８ ５ ｎ 进 ９ ６ ａ Ｏ ．
１ ３ 试 样 处 理 ．
剂 广泛 用 于各 类食 品 ， 国家对 其使 用有 明确 的限量 标准． 合成 着 色剂 的滥 用会 对 人体 造 成不 同程 度 的
危 害 ， 括 一 般 毒性 、 泻性 、 突性 与致 癌 作 用 ． 包 致 致
国 标 ＧＢ Ｔ ５ ０ ． ５—２ ０ ／ ０ ９３ ０ ３中 介 绍 了 饮 料 、 制 酒 配
ａ 按 ＧＢ Ｔ ５ ０ ． ５—２ ０ ． ／ ０ ９ ３ ０ ３聚 酰 胺 吸 附 法 进
行 处 理＿． ＿ 】 Ｊ
家标 准溶 液配 制 成 ５ ． ｇ ｍＬ 的混标 ， 稀 释成 Ｏ ０ｔ ／ Ｌ 并
１ ０ ，． ０ １ ． ０ ２ ． ０ ５ ． ０ｔ ／ ． ０ ５ ０ ， ０ ０ ， ０ ０ ，０ ０ ｇ ｍＬ 的 标 准 系 ｌ
Ｗ ａｅｓ高 效 液 相 色 谱 Ａｌ ａ ｃ 系 统 （ ２ ９ 、 ｔｒ ｌｎｅ ｉ Ｅ ６ ５ ２ ９ ＤＡ 检 测 器 ） Ｅ ｏ ｒ２软 件 ， 声 波 清 洗 ９ ８Ｐ ， ｍｐ ｗｅ 超 器 ， 空 泵 ． Ｏ 乙 醇 一氨 水 溶 液 （ ９ １ ， 酸 铵 真 ２ ９＋ ）乙
液相色谱法检测糕点中五种合成着色剂的条件优化
萃取柱（dikma，150 mg/6 mL）。 1.4 仪器条件
检 测 波 长 430、483、510 nm， 流速 1 mL/min，进样量 20 μL，梯度 洗脱程序见表 1。
表 1 梯度洗脱程序表
时间（min）
1 4 8 10 15
乙腈（%）
5 12 20 5 5
0.02 mol/L 乙酸铵 （%）
0.0
2.5
3.3 流动相的选择 本次研究采用了（a）0.02 mol/L 乙
酸 铵 - 甲 醇、（b）0.05 mol/L 磷 酸 氢 二 铵 - 甲 醇、（c）0.05 mol/L 磷 酸 氢 二铵 - 乙腈、（d）0.02 mol/L 乙酸铵 乙腈流动相体系。结果表明，b、c 体 系中柠檬黄、苋菜红、胭脂红不能出 峰，日落黄、诱惑红出峰但响应很低。 a、d 体系中 5 种目标物均能完全出峰， 响应值良好。但是在 a 体系中胭脂红、 日落黄、诱惑红响应时间间隔较近， 易受到杂峰干扰。对于极性物质乙腈 的溶解洗脱能力比甲醇强，且实际 进样过程中乙腈体系柱压比甲醇体系 小 15%，对色谱柱损耗较小，因此采 用 0.02 mol/L 乙酸铵 - 乙腈体系进行 洗脱。 3.4 流动相梯度选择
水浴条件下氮吹近干，加入 3 mL 甲醇
溶解待用。 2.2 过柱步骤
活 化： 依 次 用 5 mL 甲 醇、5 mL 10% 甲酸水活化；上样：加入待净化 液，弃去流出液；淋洗：加入 5 mL 甲 醇，弃去流出液；洗脱：加入 15% 氨 水甲醇溶液，收集流出液，在 40 ℃条 件下氮吹至干，用初始流动相定容至 1 mL，供分析。 3 结果与分析 3.1 标准曲线与检出限
95 88 80 95 95
2 试验方法
2.1 前处理方法
食品中人工合成着色剂检测解决方案
食品中人工合成着色剂的测定解决方案（参考GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》）合成色素以苯、甲苯、萘等化工产品为原料，经过磺化、硝化、卤化、偶氮化等一系列有机反应制成合成着色剂，合成着色剂有一定毒性，过多食用会危害人体健康，但由于人工合成着色剂成本低、色泽鲜艳、着色力强、色调多样，故被广泛使用；合成着色剂有严格的控制使用范围和最大使用量，因此食品中合成色素的准确测定具有重要意义。
对于食品中合成着色剂的检测目前可借鉴国标GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》，分别采用高效液相色谱法，薄层色谱法，示波极谱法进行定性定量分析，其中高效液相色谱法前处理采用聚酰胺吸附法或液-液分配法进行色素提取。
迪马科技在参考国标的基础上，推出食品中人工合成着色剂的解决方案，该方案前处理采用聚合物基质亲水亲脂平衡反相固相萃取柱ProElut PLS进行色素的提取，比国标方法更简便易行，提取效率更高，净化效果更好；同时对高效液相色谱检测方法进行了改进，分别采用迪马科技Inspire和Diamonsil两款反相色谱柱，梯度洗脱检测食品中人工合成着色剂，分离效果更优异，增加定性定量的准确性。
该方案特别适用于食品中柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红和亮蓝等人工合成着色剂的检测。
以下为迪马科技开发的食品中人工合成着色剂的检测解决方案，供您参考！1 样品准备1.1 可乐样品取1 g可乐(加热超声驱除二氧化碳)，40 μL甲酸于试管中，摇匀，作为上样液待净化。
1.2 红薯粉样品(1) 取2 g样品与20 mL提取剂*混合，涡旋2 min，超声提取10 min，6000 rpm 下离心3 min，收集上清液；(2) 将下层残留物依次用10 mL、10 mL提取剂重复提取两次，合并三次提取上清液；(3) 将上清液在45℃水浴条件下，减压蒸馏至6 mL，再加入80 μL甲酸，混匀，待净化。
提取剂*：氨水+70%乙醇（1+99，体积比）。
食品中合成着色剂的测定色素提取讲解材料
6. 上机测定 3000rpm离心5min，取上层10μL进高效液相色谱。
7. 结果分析 （1）保留时间 （2）含量计算
X——试样中着色剂含量（g/kg） V2——进样体积（mL） m——试样质量（g）
A——样液中着色剂含量（μg） V1——试样稀释总机体（mL） 结果保留两位有效数字
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检测器：二极管阵列检测器
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3.结果分析 保留时间（定性）：根据样品中各物质被 洗脱至检测器的时间差异来进行定性分析； 峰面积（定量）：根据样品峰面积与标准 品峰面积的比较来进行定量分析。
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二、试剂与器材
器材： 烧杯、玻棒、吸管、移液管、G3漏斗、抽滤瓶*2、 针筒、温度计、5mL玻璃离心管 电子天平、水浴锅
加热脱气
抽滤过程注意 搅拌、倒废液
G3漏斗抽滤 70℃ PH4水，20mL，洗3次
Hale Waihona Puke 甲醇-甲酸，20mL，洗3次
目标物
70℃ PH4水，400mL洗涤 更换抽滤瓶
乙醇-氨水-水，洗三次，5ml、10mL、5mL
收集滤液，80℃水浴至2mL
清洗漏斗：自来水-盐酸-蒸馏水
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乙酸调PH至6，离心管定容至5mL，冰箱保存
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合成色素：用人工合成的方法从煤焦油中制取，或以苯、 甲苯、萘等芳香烃化合物为原料合成的有机色素。包括苋 菜红、柠檬黄、亮蓝、日落黄、诱惑红、赤鲜红等等。
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合成着色剂的潜在危害——致泻性、致癌性
国际：JECFA制定各种合成着色剂的ADI 我国：食品安全国家标准、食品添加剂使用标 准（GB2760-2011）
食品实验 食品中合成着色剂的测定 4.28
2. 2 高效液相色谱法 高效液相色谱法（HPLC）：是色谱法的
一个重要分支，以液体为流动相，采用高压 输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不 同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装 有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后， 进入检测器进行检测，从而实现对试样的分 析。
检测器：二极管阵列检测器
高效、高速、高灵敏度、高自动化
现状：超量使用，使用工业色素、染料色素
4
方便、快速、准确地检测食品中合成着色 剂，是对其进行有效管理的必要手段。
测定手段（GB/T 5009.35-2003）： 1. 高效液相色谱法 2. 薄层色谱法 3. 示波极谱法 4. 其他：纸上层析、分光光度法
5
亮蓝、柠檬黄、日落黄
6
合成着色剂在饮料中的最大使用量
合成着色剂：用人工合成的方法从煤焦油中制取，或以苯、 甲苯、萘等芳香烃化合物为原料合成的有机色素。包括苋 菜红、柠檬黄、亮蓝、日落黄、诱惑红、赤鲜红等等。
3
合成着色剂的潜在危害——致泻性、致癌性
国际：JECFA制定各种合成着色剂的ADI 我国：食品安全国家标准、食品添加剂使用标 准（GB2760-2011）。
PH 4的水（70℃） 水+柠檬酸溶液，调至PH=4， 加热
调PH 洗涤
甲醇-甲酸溶液
60mL甲醇+40mL甲酸
洗涤
无水乙醇-氨水-水 70mL乙醇+20mL氨水+10mL水 解吸附
乙酸铵溶液
合成着色剂标准溶 液
1.54g乙酸铵，纯水定容至 1000mL，乙酸调PH至4
浓度0.05mg/mL
流动相 定量分析
14
3. 除杂质 组装好G3漏斗，将样品倒入漏斗，抽滤； PH4的水（70℃）洗涤3次，每次20mL（洗涤沉淀物）； 甲醇-甲酸洗涤3次，每次20mL（洗涤天然色素）； 400mL PH4的水洗涤至PH为4。
食品中着色剂之检验方法
食品中著色劑之檢驗方法101年11月19日署授食字第1011903531號公告1. 適用範圍：本檢驗方法適用於食品中著色劑之檢驗。
2. 檢驗方法：檢體經萃取及毛線染色後，以濾紙層析（paper chromatograph, PC）、薄層層析（thin layer chromatograph, TLC）及高效液相層析儀（high performance liquid chromatograph, HPLC）分析之方法。
2.1. 檢體之調製：2.1.1. 試藥：乙醇、醋酸、乙醚、石油醚、氨水（25%）及氯化鈉均採用試藥級；去離子水（比電阻於25℃可達18 M‧cm以上）。
2.1.2. 試劑之調製：2.1.2.1. 80%乙醇溶液：取乙醇與去離子水，以80：20（v/v）之比例混勻。
2.1.2.2. 70%乙醇溶液：取乙醇與去離子水，以70：30（v/v）之比例混勻。
2.1.2.3. 含1%氨水之70%乙醇溶液：取氨水4 mL，加70%乙醇溶液使成100 mL。
2.1.2.4. 含1%醋酸之70%乙醇溶液：取醋酸1 mL，加70%乙醇溶液使成100 mL。
2.1.2.5. 10%氨水溶液：取氨水40 mL，加去離子水使成100 mL。
2.1.2.6. 25%氯化鈉溶液：稱取氯化鈉25 g ，加去離子水溶解使成100 mL。
2.1.2.7. 6%醋酸溶液：取醋酸6 mL，加去離子水使成100 mL。
2.1.3. 試驗溶液之調製：2.1.3.1. 液狀檢體（酒精飲料、清涼飲料及液狀調味品等）：依著色程度稱取檢體20～200 mL，加適量去離子水作為試驗溶液，檢體含乙醇者，先中和呈中性後，置於水浴上去除乙醇，再加去離子水至原容量作為試驗溶液。
2.1.3.2. 糖果、糕餅及農產品：依著色程度稱取檢體20〜200 g ，研碎或切碎，按下列方法製成試驗溶液。
2.1.3.2.1. 糖果等製品：檢體加入約5倍量之熱去離子水，溶解後作為試驗溶液，檢體僅表面著色時，取著色部分調製之。
食品中合成着色剂的测定方法
食品中合成着色剂的测定方法食品中合成着色剂主要是以人工方法进行化学合成的有机色素类，按其化学结构不同可分为偶氮类色素和非偶氮类色素，偶氮类色素按溶解性不同又可分为油溶性和水溶性两类。
合成类色素中还包括色淀。
食品中合成着色剂的种类很多，国际上允许使用的有30余种，我国允许使用的主要有苋菜红、胭脂红、赤藓红、新红、玫瑰红、柠檬黄、日落黄、亮蓝、靛蓝、牢固绿等。
6.1高效液相色谱法1)原理食品中的合成着色剂经聚酰胺吸附法或液一液分配法提取后，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。
利用高效液相色谱法测定食品中合成着色剂的最小检出量为：新红5ng、柠檬黄4ng、苋菜红6ng、胭脂红8ng、日落黄7ng、赤藓红18ng、亮蓝26ng。
当进样量为0.025g样品时，最低检出浓度分别为0.2、0.16、0.24、0.32、0.28、0.72、1.04mg／kg。
2)仪器和试剂(1)仪器高效液相色谱仪，带紫外检测器。
(2)试剂⑴正己烷。
分析纯。
⑵盐酸。
分析纯。
⑶乙酸。
⑷甲醇：经滤膜(0.45μm)过滤。
⑸聚酰胺粉(尼龙6)：过200目筛。
⑹乙酸铵溶液(0.02mol／L)：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜(0.45μm)过滤。
⑺氨水：量取氨水2mL，加水至100mL，混匀。
⑻甲醇一甲酸(6+4)溶液：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。
⑼柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸(C6H8O7•H2O)，加水至100mL，溶解混匀。
⑽无水乙醇一氨水一水(7+2+1)溶液：量取无水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL，混匀。
⑾三正辛胺正丁醇溶液(5％)：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。
⑿饱和硫酸钠溶液。
⒀pH6的水：水加柠檬酸溶液调pH到6。
⒁合成着色剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.1000g，置100mL容量瓶中，加pH6的水到刻度。
食品中合成着色剂测定
食品中合成着色剂的测定摘要:食品中合成着色剂高效液相色谱的测定。
方法采用c18(10?%em,4.6mm??50mm)不锈钢色谱柱，流动相为乙酸铵+甲醇，流速1.0ml/min，检测波长254nm，柱温设为23℃，进样量20?%el。
本检测方法对gb/t5009.35-2003食品中合成着色剂的测定进一步细化，使用着色剂小柱代替gb/t5009.35-2003食品中合成着色剂的测定中色素提取，检测时间缩短，检测结果精确度提高，具有一定的实践指导作用。
关键词:食品合成着色剂1、前言食品中合成着色剂是一种已知的有害物质，其随食物被摄入人体内后,很快被肠道吸收。
由于着色剂在人体中具有累积作用,长期过量摄入直接危害到人们的健康特别是对少年儿童的健康危害更为严重，孩子的肝脏解毒和代谢功能都比较脆弱，如果摄入过多的人工合成色素，会加重肝脏及胃肠道的负担，干扰体内正常的代谢反应，出现不同程度的食欲不振、消化不良、腹痛、腹泻等症状2、原理样品经水溶解，通过活化的着色剂小柱吸附色素，用洗脱试剂洗脱，用高效液相色谱分离，紫外检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
3、试验部分3.1所用试剂3.1.1水：符合gb/t6682规定的一级水要求3.1.2 甲醇：色谱纯。
3.1.3 氨水：分析纯3.1.4乙酸铵溶液（0.02mol/l）：称取1.54g乙酸铵加水至1000ml 溶解，经0.45?%em滤膜过滤3.1.5标准品：柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红、亮蓝3.1.6氨化甲醇5%：95ml甲醇加5ml氨水3.2仪器与设备3.2.1高效液相色谱仪3.2.2色谱工作站3.2.3紫外检测器3.2.4 c18(10?%em,4.6mm??50mm)不锈钢色谱柱3.2.5固相萃取装置3.2.6着色剂小柱3.2.7氮吹仪3.2.8漩涡混合器3.2.9高速离心机3.3方法3.3.1合成着色剂标准溶液浓度的配制准确称取标准品着色剂各100mg,置于100 ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,该贮备液浓度1mg/ml。
食品中着色剂含量的测定
食品中着色剂含量的测定一、实验原理：水溶性酸性合成着色剂在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下被解吸附，再用纸色谱或薄层色谱法进行分离后，与标准比较定性定量，最低检出量为5ug，点样量为1g，样品最低检出含量约为50mg/kg。
二、实验原料：果冻三、仪器与试剂：聚酰胺粉（尼龙6），乙醇（50%），乙醇氨溶液，PH=6的水，柠檬酸溶液（200g/L），正丁醇—无水乙醇—氨水（1%）（6+2+3），着色剂混合标准液，烧杯，吸管等四、实验步骤：1、样品处理：称取10g已粉碎的样品，加30ml水，温热溶解，若样液PH较高，用柠檬酸溶液（200g/L）调PH到4左右。
2、吸附分离：将处理后所得的溶液加热到70℃，加入1g聚酰胺粉充分摇匀，用柠檬酸溶液（200g/L）调PH=4。
使着色剂完全被吸附，若溶液还有颜色可再加一些聚酰胺粉。
将吸附着色剂的聚酰胺粉全部转入漏斗中过滤，用PH=4的70℃的水反复洗涤，每次20ml，边洗边搅拌。
若含有天然着色剂，再用甲酸—甲醇溶液洗涤1~3次，每次20ml至溶液无色为止，再用70℃的水多次洗涤至流出液为中性，洗涤过程中必须充分搅拌。
然后用乙醇—氨溶液分3次解吸全部着色剂，收集全部解吸液于水浴上除氨。
将上述溶液置水浴上浓缩至2ml后移入10ml容量瓶中，用乙醇（50%）洗涤容器，洗液转移入容量瓶中并稀释至刻度10ml。
3、定性：取色谱用纸，在距底边2cm起始线上分别点3~10ul样品溶液，1~2ul着色剂标准液分别盛有正丁醇—无水乙醇—氨（1%）和正丁醇—吡啶—氨水（1%）展开剂的层析缸中，用上行洗展开，待溶剂前沿展至15cm处，将滤液取出，于空气中晾干与标准斑比较定性，也可取样0.5ml样液在起始线上从左至右点成条状，纸的左边点着色剂标液，依次展开，晾干后定性，靛蓝在碱性条件下易褪色，可用甲乙酮—丙酮—水作展开剂。
五、思考题：1、为什么在用聚酰胺吸附时要用柠檬酸将PH调至4？2、为什么要用70℃热水流至流出液到中性？。
食品中合成着色剂的测定标准操作规程
目录Table of Contents一、目的Objective -------------------------------------------------------------------------------------------2二、适用范围Scope -----------------------------------------------------------------------------------------2三、职责Responsibilities -----------------------------------------------------------------------------------2四、工作程序Contents --------------------------------------------------------------------------------------2五、相关文件Related Documents -------------------------------------------------------------------------3六、相关记录Related Records -----------------------------------------------------------------------------3七、历史修订记录Revisions ------------------------------------------------------------------------------3八、附录Appendix ------------------------------------------------------------------------------------------4文件审批记录Review And Approval1 目的为了规范食品中合成着色剂的检测。
液相色谱法测定食品中合成着色剂苋菜红、胭脂红结果的不确定度评定
胭 脂 红 的 浓 度 ，mg /L；V － 样 品 定 容 体
积，mL；m－样品的称样量，g。
1.3.2 相对标准不确定度
u = u + u + u 2 rel(x)
2 rel(C)
2 rel(V )
2 rel(m)
（2）
2 不确定度分量的主要来源
由测定过程及数学模型可知，食品
中人工合成色素苋菜红，胭脂红测量结果
10- 4/℃ ，玻 璃 的 膨 胀 系 数 为 1.5 ×
确定度；②由标准曲线求浓度C时产生的 10- 5/℃ 。 在 实 验 中 ，实 验 水 温 T=
不确定度；③称量样品引入的不确定度； 25 ℃，在 95%置信概率下的正态分布
④样品定容体积引入的不确定度。 3 不确定度分量的评定 3.1 由标准曲线得出试样中胭脂红、 苋菜红浓度 C 的不确定度
关关键键词词：：高高效效液液相相色色谱谱法法；；人人工工合合成成色色素素；不；不确确定定度度；评；评定定
人工合成着色剂是以煤焦油为原 料制成，因成本低且色泽鲜艳，被人们 广泛使用。许多人工合成着色剂除本 身或其代谢产物具有毒性外，在生产过 程中还可能混进其他有害物质。因此 食品中合成着色剂是食品安全的重点 监测指标。测量不确定度是评定检测 结果的可靠性和准确性的重要依据。 本文依据《测量不确定度评定与表示》 （JJF 1059.1—2012）用高效液相色谱 法对食品中胭脂红 、苋菜红不确定度 进行分析评定 ，确定了分析结果的报 告值[1] 。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂
差 为 ± 0.020
mL，
u = ′ 1.1(v5)
0.02 3
=
1.15 × 10-2 。 重 复 性 读 数 误 差 为 ±
食品中合成着色剂的测定
食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定1范围本标准规定了饮料㊁配制酒㊁硬糖㊁蜜饯㊁淀粉软糖㊁巧克力豆及着色糖衣制品中合成着色剂(不含铝色锭)的测定方法㊂本标准适用于饮料㊁配制酒㊁硬糖㊁蜜饯㊁淀粉软糖㊁巧克力豆及着色糖衣制品中合成着色剂(不含铝色锭)的测定㊂2原理食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取,制成水溶液,注入高效液相色谱仪,经反相色谱分离,根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量㊂3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂3.1试剂3.1.1甲醇(C H3O H):色谱纯㊂3.1.2正己烷(C6H14)㊂3.1.3盐酸(H C l)㊂3.1.4冰醋酸(C H3C O OH)㊂3.1.5甲酸(H C O O H)㊂3.1.6乙酸铵(C H3C O O N H4)㊂3.1.7柠檬酸(C6H8O7㊃H2O)㊂3.1.8硫酸钠(N a2S O4)㊂3.1.9正丁醇(C4H10O)㊂3.1.10三正辛胺(C24H51N)㊂3.1.11无水乙醇(C H3C H2O H)㊂3.1.12氨水(N H3㊃H2O):含量20%~25%㊂3.1.13聚酰胺粉(尼龙6):过200μm(目)筛㊂3.2试剂配制3.2.1乙酸铵溶液(0.02m o l/L):称取1.54g乙酸铵,加水至1000m L,溶解,经0.45μm微孔滤膜过滤㊂3.2.2氨水溶液:量取氨水2m L,加水至100m L,混匀㊂3.2.3甲醇-甲酸溶液(6+4,体积比):量取甲醇60m L,甲酸40m L,混匀㊂3.2.4柠檬酸溶液:称取20g柠檬酸,加水至100m L,溶解混匀㊂3.2.5无水乙醇-氨水-水溶液(7+2+1,体积比):量取无水乙醇70m L㊁氨水溶液(3.2.2)20m L㊁水10m L,混匀㊂3.2.6三正辛胺-正丁醇溶液(5%):量取三正辛胺5m L,加正丁醇至100m L,混匀㊂3.2.7饱和硫酸钠溶液㊂3.2.8p H6的水:水加柠檬酸溶液调p H到6㊂3.2.9p H4的水:水加柠檬酸溶液调p H到4㊂3.3标准品3.3.1柠檬黄(C A S:1934-21-0)㊂3.3.2新红(C A S:220658-76-4)㊂3.3.3苋菜红(C A S:915-67-3)㊂3.3.4胭脂红(C A S:2611-82-7)㊂3.3.5日落黄(C A S:2783-94-0)㊂3.3.6亮蓝(C A S:3844-45-9)㊂3.3.7赤藓红(C A S:16423-68-0)㊂3.4标准溶液配制3.4.1合成着色剂标准贮备液(1m g/m L):准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄㊁日落黄㊁苋菜红㊁胭脂红㊁新红㊁赤藓红㊁亮蓝各0.1g(精确至0.0001g),置100m L容量瓶中,加p H6的水到刻度㊂配成水溶液(1.00m g/m L)㊂3.4.2合成着色剂标准使用液(50μg/m L):临用时将标准贮备液加水稀释20倍,经0.45μm微孔滤膜过滤㊂配成每毫升相当50.0μg的合成着色剂㊂4仪器和设备4.1高效液相色谱仪,带二极管阵列或紫外检测器㊂4.2天平:感量为0.001g和0.0001g㊂4.3恒温水浴锅㊂4.4 G3垂融漏斗㊂5分析步骤5.1试样制备5.1.1果汁饮料及果汁㊁果味碳酸饮料等:称取20g~40g(精确至0.001g),放入100m L烧杯中㊂含二氧化碳样品加热或超声驱除二氧化碳㊂5.1.2配制酒类:称取20g~40g(精确至0.001g),放入100m L烧杯中,加小碎瓷片数片,加热驱除乙醇㊂5.1.3硬糖㊁蜜饯类㊁淀粉软糖等:称取5g~10g(精确至0.001g)粉碎样品,放入100m L小烧杯中,加水30m L,温热溶解,若样品溶液p H较高,用柠檬酸溶液调p H到6左右㊂5.1.4巧克力豆及着色糖衣制品:称取5g~10g(精确至0.001g),放入100m L小烧杯中,用水反复洗涤色素,到巧克力豆无色素为止,合并色素漂洗液为样品溶液㊂5.2色素提取5.2.1聚酰胺吸附法:样品溶液加柠檬酸溶液调p H到6,加热至60ħ,将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状,倒入样品溶液中,搅拌片刻,以G3垂融漏斗抽滤,用60ħp H为4的水洗涤3次~5次,然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3次~5次(含赤藓红的样品用5.2.2法处理),再用水洗至中性,用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3次~5次,直至色素完全解吸,收集解吸液,加乙酸中和,蒸发至近干,加水溶解,定容至5m L㊂经0.45μm微孔滤膜过滤,进高效液相色谱仪分析㊂5.2.2液-液分配法(适用于含赤藓红的样品):将制备好的样品溶液放入分液漏斗中,加2m L盐酸㊁三正辛胺-正丁醇溶液(5%)10m L~20m L,振摇提取,分取有机相,重复提取,直至有机相无色,合并有机相,用饱和硫酸钠溶液洗2次,每次10m L,分取有机相,放蒸发皿中,水浴加热浓缩至10m L,转移至分液漏斗中,加10m L正己烷,混匀,加氨水溶液提取2次~3次,每次5m L,合并氨水溶液层(含水溶性酸性色素),用正己烷洗2次,氨水层加乙酸调成中性,水浴加热蒸发至近干,加水定容至5m L㊂经0.45μm微孔滤膜过滤,进高效液相色谱仪分析㊂5.3仪器参考条件5.3.1色谱柱:C18柱,4.6mmˑ250mm,5μm㊂5.3.2进样量:10μL㊂5.3.3柱温:35ħ㊂5.3.4二极管阵列检测器波长范围:400n m~800n m,或紫外检测器检测波长:254n m㊂5.3.5梯度洗脱表见表1㊂表1梯度洗脱表时间m i n流速m L/m i n0.02m o l/L乙酸铵溶液%甲醇%01.095531.0653571.00100101.0010010.11.0955211.09555.4测定将样品提取液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪,根据保留时间定性,外标峰面积法定量㊂6分析结果的表述试样中着色剂含量按式(1)计算:X=cˑVˑ1000mˑ1000ˑ1000(1)式中:X 试样中着色剂的含量,单位为克每千克(g/k g);c 进样液中着色剂的浓度,单位为微克每毫升(μg/m L);V 试样稀释总体积,单位为毫升(m L);m 试样质量,单位为克(g);1000 换算系数㊂计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留两位有效数字㊂7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂8其他方法检出限:柠檬黄㊁新红㊁苋菜红㊁胭脂红㊁日落黄均为0.5m g/k g,亮蓝㊁赤藓红均为0.2m g/k g (检测波长254n m时亮蓝检出限为1.0m g/k g,赤藓红检出限为0.5m g/k g)㊂。
食品着色剂含量的测定
第五，紫外检测器，254nm 波长。
100mL，混匀。
三、食品着色剂含量的测定方法
4.食品着色剂含量的测定方法。
6.氨水—乙酸铵溶液（0.02mol/L 量取
1.样品处理方法。
取相同体积样液和合成着色剂标准
氨水 0.5mL），加乙酸铵溶液（0.02mol/L 至
第一，橘子汁、果昧水、果子露汽水 使用液，分别注入高效液相色谱仪，保留时
第二，流动相。甲醇—乙酸铁溶液
2.甲醇：经 0.5μm 滤膜过滤。
溶液加水稀释 20 倍，经 0.45μm 滤膜过 （pH - 4，0.02mol/L）。
3.聚酰胺粉(尼龙 6)：过 200 目筛。 滤，配成每毫升相当于 50.0μg 的合成着
第三，梯度洗脱：甲醇：20% - 35%，
4.乙酸铵 溶液(0.02mol/L)：称 取 1.54g 色剂。
难满足日益发展的食品工业的需要；人工 匀。
第三，硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等。称
合成的色素，主要来源于煤焦油及其副产
9.无水乙醇—氨水—水（7+2+1）溶液： 5.00g - 10.00g 粉碎样品，放入 100mL 小烧
品，资源十分丰富、稳定性较好、价格可接 量取无水乙醇 70mL、氨水 20mL、水 10mL， 杯中，加水 30mL，温热溶解，如果样品溶液
1000mL），混匀。
等，称取 20.0g~40.0g，放入 100mL 烧杯中， 间定性。
窑窑
（作者单位：勃利县市场监督检验检测中心）
受、使用时方便、应用较为广泛。而人工合 混匀。
pH 较高，用柠檬酸溶液调 pH 到 6 左右。
成色素有一定的毒性，具有较大的安全隐
10.三正辛胺正丁醇溶液（5%）。量取三
食品中五种合成着色剂的测定
食品中五种合成着色剂的测定冯婷(北京北分瑞利分析仪器集团公司色谱中心，北京，100095)摘要：参照国标GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》方法，采用SY-8000系列高效液相色谱仪对柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄和亮蓝这五种常用着色剂进行测定。
关键词：合成着色剂 SY-80001 引言食用合成着色剂主要指用人工化学合成方法所制得的有机化合物，按其化学结构可分为偶氮化合物和非偶氮化合物两大类。
前者如：柠檬黄、日落黄、胭脂红、酸性红、苋菜红等；后者如：赤藓红、亮蓝等。
近年来食品安全越来越引起人们的关注，大量的研究报告指出，几乎所有的合成色素都不能向人体提供营养物质，某些合成色素甚至会危害人体健康。
因此对于食品中添加着色剂的含量测定成为必须，高效液相色谱法以其操作简单，分析结果准确成为首选方法。
2 实验部分2.1仪器与试剂SY-8000系列高效液相色谱仪，配有紫外可见光检测器(北京北分瑞利分析仪器集团有限责任公司)；手动进样阀（7725i）；SY-8000反控色谱工作站(北京北分瑞利分析仪器集团有限责任公司)；PHS-3型精密数显酸度计（上海天达）；色谱纯甲醇（天津试剂二厂），乙酸铵（A.R.），双蒸水。
2.2仪器条件色谱柱：Zorbax SB-C18， 3.5 μm， 4.6mm×150mm流动相：梯度洗脱条件见表1A： 0.02mol/L 乙酸铵溶液 pH=4B：甲醇流速: 1mL/min；检测波长：254nm；表1 梯度条件时间（min）B%0 205.0 3512.0 9818.0 982.3 结果与讨论谱图（图1）显示五种常用合成色素在该条件下15分钟内得到良好的分离结果。
出峰顺序为：柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄和亮蓝。
二元高压系统流量精度高，保留时间重复性好，紫外检测器性能稳定。
检出限满足国标要求。
食品中着色剂的测定
食品中着色剂的测定一、目的与要求：1、明确测定各类色素的原理与方法。
2、通过此实验掌握纸层析定性法与提纯色素的定量法。
二、原理：聚酰胺是具有二极性的化合物，水溶性酸性染料在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法或薄层色谱法进行分离后与标准比较定性、定量。
三、试剂：1、聚酰胺粉(尼龙6)2、硫酸1：1 03、甲醇—甲酸溶液：6：44、甲醇5、20％柠檬酸溶液6、10％钨酸钠溶液7、石油醚：沸程60-90℃8、海砂：先用l：10盐酸煮沸15min，用水洗中性，再用5％氢氧化钠溶液煮沸15min，再于105℃干燥，贮于具玻璃塞的瓶中，备用。
9、乙醇-氨溶液：取1毫升氨水，加70％乙醇至100毫升。
10、50％乙醇溶液11、硅胶G。
12、PH6的水：用20％柠檬酸调节至PH 6。
13、盐酸: 1：1014、5％氢氧钠溶液15、碎瓷片：处理方法同海砂16、展开剂a、正丁醇-无水乙醇-1％氨水(6：2：3)：供纸色谱用。
b、正丁醇-吡啶-1％氨水(6：3：4)：供纸色谱用。
c、甲乙酮-丙酮-水(7：3：3)：供纸色谱用。
d、甲醇-乙二胺-氨水(10：3：2)：供薄层色谱用。
e、甲醇-氨水-乙醇(5：1：10)：供薄层色谱用。
f、2.5％柠檬酸钠-氨水-乙醇(8：1：2)供薄层色谱用。
17、色素标准溶液{以下商品作为标准以100％计。
胭脂红：纯度60％；苋菜红：纯度60％；柠檬黄：纯度60%；靛蓝：纯度40％；日落黄：纯度60％，亮蓝；纯度60％。
精密称取上述色素各0.100克，用PH6的水溶解，移入100毫升容量瓶中并稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于1毫克商品色素。
靛蓝溶液需在暗处保存。
18、色素标准使用液：用时吸取色素标准溶液各5.0毫升，分别置于50毫升容量瓶中，加PH6的水稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于0.1毫克商品色素。
四、仪器：1、分光光度计2、微量注射器或色素吸管3、展开槽，25 X 6 x 4cm4、层析缸5、滤纸、中速滤纸，纸色谱用6、薄层板：5 X 20em7、电吹风机8、水泵五、操作方法：1、样品处理A、果味水、果子露、汽水：吸取50.0毫升样品于100毫升烧杯中，汽水需加热驱除二氧化碳。
食品中合成着色剂测定色素提取
3.结果分析
保留时间（定性）：根据样品中各物质被 洗脱至检测器的时间差异来进行定性分析；
峰面积（定量）：根据样品峰面积与标准 品峰面积的比较来进行定量分析。
二、试剂与器材
试剂
配方
作用
聚酰胺粉
吸附柠檬酸溶液来自20g柠檬酸，100mL水溶解
调PH
PH 4的水（70℃） 水+柠檬酸溶液，调至PH=4， 洗涤 加热
器材： 烧杯、玻棒、吸管、移液管、G3漏斗、抽滤瓶*2、 针筒、温度计、5mL玻璃离心管 电子天平、水浴锅
三、实验步骤
1. 取样、脱气 称取饮料20g，倒入50mL烧杯，碳酸饮料用电炉加热除去
二氧化碳。（已脱气）。
2. 色素吸附 称取聚酰胺3g，用少许PH4的水（70℃）调成糊状，加入待
测样品，搅拌5min。
食品中合成着色剂的测定
——色素提取
2012.4.18
课程目的：
1. 掌握食品中合成着色剂的测定原理； 2. 了解高效液相色谱的工作原理及操作方法。
着色剂：通过使食品着色后改善其感官性状，增进食欲的 一类物质。
天然着色剂：辣椒红、甜菜红、红曲米、胭脂虫红、高粱 红、叶绿素铜钠、姜黄、栀子黄、胡萝卜素、藻蓝素、可 可色素、焦糖色素等等。
理化测定一般步骤：除杂质、收集目标物、 调整浓度、上机
2. 高效液相色谱法
高效液相色谱法（HPLC）：是色谱法的 一个重要分支，以液体为流动相，采用高压 输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不 同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装 有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后， 进入检测器进行检测，从而实现对试样的分 析。
甲醇-甲酸溶液
60mL甲醇+40mL甲酸
食品中人工合成着色剂的测定
食品中人工合成着色剂的测定序列号：DM-P1071、适用范围本方案适用于糕点、果酱、水果罐头、黑芝麻糊、果冻、冰淇淋、乳饮料、糖果和红酒中人工合成着色剂的检测；检出限：亮蓝是1.0 mg /kg，其他的是0.2 mg /kg；2、提取2.1 糕点、果酱(1) 取1.0 g样品，加入20 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取10 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；(2) 取下层残留物，加入10 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取15 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；(3) 将下层残留物用10mL提取液A* 按照步骤(2)重复提取一次，合并三次上清液；(4) 将上清液在40℃水浴条件下，减压蒸至约15 mL，再加入3 mL甲酸混匀，待净化。
2.2 水果罐头、黑芝麻糊(1) 取1.0 g样品，加入20 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取10 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；(2) 取下层残留物，加入10 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取15 min，6000 rpm下离心2 min，合并两次上清液；(3) 将上清液在40℃水浴条件下，减压蒸至约15 mL，再加入3 mL甲酸混匀，待净化。
2.3 冰淇淋(1) 取1.0 g样品，加入20 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取10 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；(2) 将上清液在40℃水浴条件下，减压蒸至约7 mL，再加入1.5 mL甲酸混匀，待净化。
2.4 果冻取1.0 g样品，加入10 mL水，40℃水浴超声提取15 min，加入5 mL甲醇和3 mL甲酸混匀，待净化。
2.5 乳饮料、糖果取1.0 g样品，加入10 mL水、5 mL甲醇和3 mL甲酸混匀，待净化。
2.6 红酒取1.0 mL样品，加入0.5 mL甲醇和0.3 mL甲酸混匀，待净化。
食品中合成色素的快速检测方法
食品中合成色素的快速检测方法我国允许使用的合成色素有柠檬酸、日落黄、胭脂红、苋菜红、诱惑红、赤藓红、新红、亮蓝、靛蓝、酸性红和喹啉黄等11种，这也是目前食品中最常检出的合成色素种类。
近年来，食品中曾经出现的非食用色素有苏丹红Ⅰ~Ⅳ、对位红、碱性橙、碱性玫瑰精(罗丹明B)、酸性橙Ⅱ、碱性嫩黄、铅铬绿、大红粉等。
由于色素种类众多，食品中还可能出现一些新的色素种类。
开展食品中合成色素检测，对规范食品中合成色素的使用具有重要意义，这已成为许多食品检测实验室最常开展的日常检验工作之一。
合成色素的种类众多，性质各不相同，相应的分析方法也多种多样。
重庆市食品安全工程技术研究中心朱永红等人在汉斯《食品与营养科学》2014年8月期刊上发表的文章指出，基于不同的分析原理，目前已发展了多种合成色素的快速检测方法。
1.酶联免疫吸附(ELISA)法：ELISA法具有较高的灵敏度，但一般一次只能检测1种或2—3种色素，难以同时检测多种色素。
此外，ELISA法还存在假阳性或假阴性结果，以及抗体试剂稳定性不理想等问题。
2.纸上扩散法：在一种纸上扩散能快速检测辣椒油样品中苏丹红的方法。
用一小块打印纸、一支钢笔和少量酒精，操作十分简便，但只适用于辣椒油样品，且其最低检测浓度较高，达800mg/L。
3.比色法：基于银纳米粒子的等粒子共振光散射法可视化检测苏丹红的方法。
该方法利用了苏丹红与硝酸银反应生成的银纳米粒子的光散射特性，借助激光笔或LED灯照射反应溶液，肉眼观察散射光强度，实现半定量可视化测定。
上述方法具有较高的灵敏度，但其抗干扰能力及实际检测效果需进一步验证。
4.红外光谱：采用红外光谱法可实现对目标化合物的快速识别，但需要专门的仪器及专业技术人员进行操作。
此外，由于食品基质复杂，基质成分的变化将导致光谱图发生较大的改变，从而限制了其在不同类型食品中的应用。
5.分光光度法：文中介绍了一种将纸色谱法和吸收光谱法联用快速定性食品中禁用色素的方法，即先对样品进行纸色谱分析，再对各色素组分的斑点洗脱后用分光光度计进行光谱扫描，确定待测色素各组分的最大吸收波长值和峰形，从而实现对待检色素更准确的定性。
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食品中五种合成着色剂的测定
冯婷
(北京北分瑞利分析仪器集团公司色谱中心，北京，100095)
摘要：参照国标GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》方法，采用SY-8000系列高效液相色谱仪对柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄和亮蓝这五种常用着色剂进行测定。
关键词：合成着色剂 SY-8000
1 引言
食用合成着色剂主要指用人工化学合成方法所制得的有机化合物，按其化学结构可分为偶氮化合物和非偶氮化合物两大类。
前者如：柠檬黄、日落黄、胭脂红、酸性红、苋菜红等；后者如：赤藓红、亮蓝等。
近年来食品安全越来越引起人们的关注，大量的研究报告指出，几乎所有的合成色素都不能向人体提供营养物质，某些合成色素甚至会危害人体健康。
因此对于食品中添加着色剂的含量测定成为必须，高效液相色谱法以其操作简单，分析结果准确成为首选方法。
2 实验部分
2.1仪器与试剂
SY-8000系列高效液相色谱仪，配有紫外可见光检测器(北京北分瑞利分析仪器集团有限责任公司)；手动进样阀（7725i）；SY-8000反控色谱工作站(北京北分瑞利分析仪器集团有限责任公司)；PHS-3型精密数显酸度计（上海天达）；色谱纯甲醇（天津试剂二厂），乙酸铵（A.R.），双蒸水。
2.2仪器条件
色谱柱：Zorbax SB-C18， 3.5 μm， 4.6mm×150mm
流动相：梯度洗脱条件见表1
A： 0.02mol/L 乙酸铵溶液 pH=4
B：甲醇
流速: 1mL/min；
检测波长：254nm；
表1 梯度条件
时间（min）B%
0 20
5.0 35
12.0 98
18.0 98
2.3 结果与讨论
谱图（图1）显示五种常用合成色素在该条件下15分钟内得到良好的分离结果。
出峰顺序为：柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄和亮蓝。
二元高压系统流量精度高，保留时间重复性好，紫外检测器性能稳定。
检出限满足国标要求。