结核病的实验室诊断方法及评价
三种肺结核实验室诊断方法评估
三种肺结核实验室诊断方法评估发布时间：2023-02-24T03:39:06.796Z 来源：《医师在线》2022年32期作者：赵静2 田敏敏1 邓淑文1 李金方3 赵蓉芬1*[导读] 目的阐明LAMP技术联合痰涂片和培养检测在肺结核确诊诊断的价值，为制定和完善本区肺结核的防控指南提供依据.方法收集送检疑似肺结核患者痰标本563份，进行直接涂片镜检、固体培养和环介导恒温扩增检测（LAMP）检测。
赵静2 田敏敏1 邓淑文1 李金方3 赵蓉芬1*1苏州高新区人民医院检验科江苏苏州 2151292苏州市第五人民医院临床检验中心江苏苏州2151313苏州高新区疾病预防控制中心疾控科江苏苏州215011【摘要】：目的阐明LAMP技术联合痰涂片和培养检测在肺结核确诊诊断的价值，为制定和完善本区肺结核的防控指南提供依据.方法收集送检疑似肺结核患者痰标本563份，进行直接涂片镜检、固体培养和环介导恒温扩增检测（LAMP）检测。
结果检测563份结核门诊送检痰标本中，257份来自临床诊断肺结核病例痰标本，三种检测方法阳性率由高到低依次为：分子检测LAMP阳性率最高（53.7%），培养阳性率次之（47.5%），直接涂片阳性率最低（15.2%）；35例临床诊断肺结核患者三种方法检测同时阳性，占13.6%，培养和LAMP检测同时阳性率64例，最高（24.9%）；306份临床诊断非肺结核病例痰标本，272例三种检测方法检测未检到结核分枝杆菌，实验室检查阴性率占88.9%，假阳性率由高到低分别为LAMP检测5%，培养4.2%，涂片1%。
结论 LAMP（环介导恒温扩增）技术可以作为培养方法的替代技术，帮助临床医生早期诊断，确诊肺结核，并进行抗结核治疗。
【关键词】肺结核；涂片；固体培养；lamp2020 年苏州高新区发病率为 49.13/10 万，肺结核仍居苏州市法定报告甲、乙类传染病首位，防控形势仍旧严峻。
急需快速、准确、简便的诊断技术和预防结核病感染新疫苗、新药品的出现［1］。
结核病实验室检查
结核病实验室检查结核病是一种严重的传染病，通常由结核分支杆菌引起。
这种病菌会侵入肺部并引起肺结核，而也可以通过血液传播到其他部位，如淋巴、骨髓和肝脾等。
在许多地方，特别是在发展中国家，结核病仍然是一种普遍的疾病，因此及早诊断和治疗至关重要。
结核病实验室检查是确诊结核病的一种重要方法。
结核病实验室检查通常涉及多种类型的检测，例如：1.酸杆菌检测结核分支杆菌是酸杆菌，因此酸杆菌检测是一种常用的实验室检查方法。
该方法不需要复杂的设备并且具有高度的特异性和灵敏度。
患者的样本可以是咳嗽的痰液、唾液或肺组织，也可以通过胃镜获得胃肠液。
如果酸杆菌检测呈阳性，则可以确诊结核病。
但是，该方法也存在一些局限性，例如在一些情况下不能检测出结核分支杆菌，如某些菌株可以耐受某些药物。
2. 结核抗体检测结核抗体检测是另一种可以用于诊断结核病的实验室检查方法。
该方法通常使用ELISA（酶联免疫吸附试验）或其他类似方法检测患者的血清中是否存在结核抗体，如果测试结果呈阳性，则表示患者可能感染了结核分支杆菌。
但是，结核抗体检测的结果可能会出现假阳性或假阴性的情况，这限制了其在临床实践中的应用。
3.结核病PCR检测PCR检测是检查抗原核酸序列的一种方法。
由于PCR技术可以扩增极微量的DNA，并且非常特异和灵敏，因此可以检测出非常小的感染量。
在结核病中，PCR检测可以用于检测结核分支杆菌的DNA，以确认病原体的存在。
但是，该方法对样本中的DNA污染非常敏感，因此必须进行严格的实验室操作和质量控制。
总之，结核病实验室检查是确诊结核病的一种重要方法。
这些测试方法都具有不同的优缺点，并且结果可能受到许多因素的影响。
因此，必须在临床实践中综合考虑这些方法的结果和临床表现，以取得最佳的诊断结果。
同时，实验室技术人员必须受过专业培训，严格遵守操作规程，以确保准确诊断和最佳治疗效果。
结核病实验室诊断技术介绍
1．结核分枝杆菌鉴定方法1. 1萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为普遍的方法，其操作简单快捷，特异性高，设备要求低，但是灵敏度较低，不能及时发现病人。
1.2 发光二极管荧光显微镜（LED荧光显微镜）发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源，延长了显微镜使用寿命，不需要暗室，且价格低廉，可以提高涂片的阳性检出率。
目前在国内应用评估结果显示灵敏度较明场显微镜明显提高，已在部分区县开始使用。
1.3 交叉引物恒温扩增结核病诊断技术在恒定温度下，特殊的引物和特异性探针在酶的作用下，反应体系在一个密闭的反应管内反应。
扩增反应一般不超过一个小时，最短半小时。
目前应用玻璃化试剂，稳定性好，便于运输。
目前在国内区县级应用评估。
1.4 夹层杯结核病诊断方法将痰标本（或其它标本）用专用消化灭活液充分消化，完全暴露并保留抗酸杆菌，通过自动离心涂片机（或半自动制片染色机）对消化后的标本进行充分集菌。
直接在夹层杯装置中进行抗酸染色，取出基片或膜片置于普通显微镜进行观察。
夹层杯法操作方便快捷，便于标准化操作，通过消化灭活，安全性改善，阳性检出率也比直接涂片法大大提高。
夹层杯的装置有沉降式和虑过式，适用于不同工作量的医疗机构。
1.5 环介导等温扩增方法采用2对引物在等温条件下即可完成DNA的扩增，扩增结果通过肉眼观察荧光进行判定，诊断是否为结核病。
同时整个反应体系采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染，整个反应过程只需一个小时即可完成，通过肉眼观察荧光判读结果。
2．结核分枝杆菌培养方法2.1 固体培养培养是结核病诊断的精标准，也是获得分离菌株开展耐药检测的前提，我国结核病实验室最常用的是固体罗氏培养法，包括简单法和中和离心法。
虽然培养是诊断的精标准，但是花费时间长，需要4-8周时间。
2.2 液体培养液体培养通过添加生长刺激剂，改变检测方法提高检测灵敏度等方式缩短了阳性报告时间。
结核病实验室诊断技术
GenoType MTBDR and 诊断结核感染及对利福 MTBDRplus；INNO- 平和异烟肼药物敏感性 LiPA Rif.TB
Frane; LW Scientific; Zeiss
诊断结核患者
Cepheid GeneXpert
诊断结核感染及对利福 平的耐药性
WHO推荐的结核新诊断技术
方法 DNA微阵列芯片法
有前景的几种新技术
❖ 分子诊断技术:GeneXpert（Cepheid公司） ❖ 分子线性探针技术:INNO-LIPA（Innogenetics公司） ❖ 反向点杂交技术:GenoType MTBDR （Hain Lifescience）
分枝杆菌菌种鉴定试剂盒（亚能生物） ❖ 基因芯片技术：微阵列芯片法（博奥生物） ❖ 细胞免疫学技术：T-SPOT.TB（Oxford Immunotec公司）
目前诊断方法回顾
细菌学检测方法 ： 涂片、常规培养、快培 其他辅助检查方法：皮试、结核抗体
目前诊断方法的局限性
涂片的缺点： 敏感性低； 特异性差； 无法区别死菌与活菌
培养的缺点： 耗时久，一般需4~8周； 阳性率低，约30%~50%；特异性差， 无法区别MTB与NTM
皮试的缺点： 敏感性低特异性差 抗体检测缺点：敏感性低特异性差
新型诊断技术产品比较
企业 美国 Cepheid
比利时 Innogenetics 德国 Hain Lifescience 中国 亚能生物
中国 博奥生物
英国 Oxford Immunotec
方法
产品特点
GeneXpert
同时检测MTBC和判断利福平耐药； 快速；简便；安全
线性探针杂交法 （INNO-LIPA）
➢ 新的实验诊断技术可弥补传统方法的不足，提高诊 断的灵敏度和特异性，但各有缺点或不足，难以完 全满足临床检测需求，因此，新型结核杆菌诊断技 术及产品的研发势在必行。
结核病实验室诊断技术2017.10.13
• 绝对浓度法 • 比例法
• 液体培养法
基于固体培养基；时间：4周 多种药物
基于液体培养基，时间：4-12天 INH/RFP/SM/EMB/PZA
结核分枝杆菌药物敏感试验
不同药敏方法的差异
三者在临界药物浓度接种菌量、结果判读方法等方面都有一定差 别，导致结果有很少一部分不相符
比例法和绝对浓度法检测结果的一致率4 药均高达96 %以上,对于 结核分支杆菌,二种方法测试 SM INH RFP EMB的耐药率均无显著 性差异
涂片显微镜检查的敏感性
观察到的AFB
AFB估计数量 涂片阳性的可能性(%)
数量
( /ml)
• 0 in ≥100 fields
< 1,000
<10
• 1-2 in 300 fields 5,000 – 10,000
50
• 1-9 in 100 fields about 30,000
80
• 1-9 in 10 fields
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
利用固体罗氏鉴别培养基的鉴别：
中性罗氏 培养基
+
噻吩-2-羧酸 肼TCH
+
对硝基苯 甲酸PNB
+
菌型鉴定 NTM
+
+
-
人型Mtb
+
-
-
牛型Mtb
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
• 原理：硝基苯甲酸还原酶机制
绝大部分非结核分枝杆菌能将对硝基-苯甲酸（PNB ）还原为细菌能够利用的对氨基-苯甲酸（PABA），而 绝大部分（98%以上）MTBC缺乏对硝基-苯甲酸（PNB ）还原酶活性，为对氨基-苯甲酸（PABA）将对硝基苯甲酸（PNB）还原为细菌能够利用的对氨基-苯甲酸 （PABA） • 局限：鉴定周期长15天-30天，特异性不高
结核病检查方法有什么
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢结核病检查方法有什么导语：结核病是一种常见而且难以彻底治愈的传染病之一，其中主要的症状有咳嗽，咳痰以及咯血、胸痛等表现方式，所以当我们出现比较类似的症状时需结核病是一种常见而且难以彻底治愈的传染病之一，其中主要的症状有咳嗽，咳痰以及咯血、胸痛等表现方式，所以当我们出现比较类似的症状时需要引起重视，及早的接受检查治疗，那么结核病检查方法有什么呢？下面我来和大家一起分享吧。
(1) 痰涂片镜检法是全世界的结核病实验室外都在使用的最基本的细菌学检查方法，其特点是简单、快速和价廉，当天出结果，但无法辨别死菌活菌;敏感性低，通常需5000-10000条菌/ml才能够得到阳性结果;特异性差，各种抗酸杆菌均可着色，需要通过进一步试验才可确定是否为结核菌，有关这一方法的改进研究和评价很多，但由于检测原理的限制，不可能出现突破性的进展。
(2) 痰结核菌常规培养法：是鉴定死菌活菌的可靠方法，被誉为“黄金标准”。
缺点是时间长，需求周才能报出结果，且敏感性低，涂片阳性标本只有约80%培养阳性;特异性差，各种分枝杆菌均可生长，需结合药物敏感性试验和分枝杆菌菌种鉴定，才可确定是否为结核菌。
(3) 药物敏感性试验：用于鉴定结核菌对抗菌素结核药物的敏感性水平。
这项试验通常是在痰结核菌培养的基础上进行的，故需时更长。
(4) 分枝杆菌菌种鉴定：是根据不同分枝杆菌的理化特性，以生物化学的方法为主。
可以精确地鉴定分枝杆菌的不同菌种，但操作复杂，且个别试验使用的药品，有一定的危险性。
(5) 痰结核菌快速培养系统：20世纪70年代发展的一种新的结核病细菌学检查方法——痰结核菌快速培养、药敏系统。
该方法将阳性检出预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏。
结核病实验室检测流程标准
结核病实验室检测流程标准结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，其传染性强，严重威胁人类健康。
为了及时发现和诊断结核病，实验室检测是必不可少的一环。
本文将从标本采集、实验室检测和结果判读三个方面，介绍结核病实验室检测流程标准。
一、标本采集结核病的标本采集是实验室检测的第一步，其质量直接影响后续检测结果的准确性。
标本采集应在严格的无菌条件下进行，采集的标本应包括痰液、胸腔积液、尿液、脑脊液等。
在采集痰液时，应让患者深呼吸数次，然后咳出痰液，避免口腔分泌物的污染。
采集胸腔积液时，应在穿刺前进行消毒，并在穿刺后立即将标本送至实验室。
采集尿液时，应让患者在清晨第一次排尿时采集，避免尿液的稀释。
采集脑脊液时，应在穿刺前进行消毒，并在穿刺后立即将标本送至实验室。
二、实验室检测结核病的实验室检测主要包括涂片法、培养法、PCR法等。
涂片法是最常用的检测方法，其操作简单、快速，但灵敏度较低。
培养法是检测结核分枝杆菌的“金标准”，其灵敏度高，但需要较长的培养时间。
PCR法是一种新兴的检测方法，其灵敏度高、特异性强，但需要较高的技术水平和设备支持。
实验室检测应在严格的无菌条件下进行，避免标本污染和交叉感染。
检测结果应及时记录和报告，确保患者能够及时接受治疗。
三、结果判读结核病的实验室检测结果应根据临床表现和其他检查结果进行综合判读。
涂片法和PCR法的阳性结果可以初步诊断结核病，但需要进一步的确认。
培养法的阳性结果可以确诊结核病，但需要排除其他细菌感染。
实验室检测结果应及时通知临床医生，以便制定合理的治疗方案。
综上所述，结核病实验室检测流程标准包括标本采集、实验室检测和结果判读三个方面。
标本采集应在严格的无菌条件下进行，实验室检测应遵循相应的操作规范，结果判读应综合考虑临床表现和其他检查结果。
只有严格按照标准操作，才能确保结核病的及时发现和诊断，保障人民群众的健康。
结核病的实验室诊断方法及评价
耐多药结核病的实验室诊断条件：因耐多药结核分枝杆菌的生物危险性，1）需P2及以上实验室，目前我院实验室条件基本具备即将投入运行，2）日常培养及涂片用的生物安全柜滤膜已超出使用年限，工作人员生物安全得不到保障，应定期予以更换。
耐多药结核分枝杆菌主要以结核分枝杆菌体外药物敏感性测定作为其诊断依据。
因此其基础是培养，只有培养出阳性结核分枝杆菌才能进一步通过结核分枝杆菌体外药物敏感性测定诊断是否为耐多药结核分枝杆菌。
1.已进人临床常规应用的测定方法:目前包括绝对浓度法、比例法及应用BACTEC460、BACTEC 960、BacT/ ALERT 3D、ESPII等仪器系统快速检测结核分枝杆菌的药物敏感性。
其中:绝对浓度法以最低抑菌浓度或以无生长为终点作为判断标准，是我国目前普遍采用的方法;比例法以是否能够抑制99%的细菌生长作为判断标准，是世界卫生组织推荐使用的方法;后四种仪器方法则是比例法的特化，其特点是以细菌的代谢过程指示细菌生长状况。
2.处于研究探索阶段的测定方法:此类方法很多，抗性比例法、Etests法、噬菌体生物扩增法、液体变色培养基测定法、荧光素酶测定法、硝酸盐还原试验等。
3分子生物学方法对结核分枝杆菌耐药性检测已有一些进入临床检测。
基因突变是引起抗结核药物耐药性的最主要的原因。
多种以PCR为基础的分子生物学技术用于检测与耐药相关基因的突变，作为快速耐药性检测方法在实验室或临床得到开展。
这些方法具体包括：主要是DNA序列分析法，聚合链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP），另外还包括基因芯片技术、异质性双链构象分析、变性梯度凝胶电泳、线性探针杂交技术、RNA/RNA错配检测技术和分子灯塔技术等。
由于结核分枝杆菌的耐药性与基因突变的确切关系未完全阐明，检测耐药相关基因的分子生物学方法虽然能快速准确地检测到耐药相关基因的突变，但由于判断药物敏感性时存在固有的缺陷，检测结核分枝杆菌耐药性的基因型鉴定法不能完全替代表型鉴定法。
结核病的诊断方法
结核病的诊断方法结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染性疾病，可以感染人体的多个器官，以肺结核最为常见。
及早发现和诊断结核病对于控制疾病的传播、减少并发症和提高治疗成功率至关重要。
本文将介绍结核病的常见诊断方法。
1. 病史询问和体格检查：医生会详细询问患者的病史，包括接触史、症状出现的时间、症状的严重程度等。
体格检查主要包括肺部听诊、淋巴结检查等。
2. 结核菌素皮肤测试：结核菌素皮肤测试是一种常用的结核病筛查方法。
医生会在患者的前臂皮肤注射一定量的结核菌素，一般为0.1 mL。
48-72小时后，医生会观察注射部位的皮肤反应，并测量红斑直径。
如果红斑直径达到一定尺寸（一般为5mm以上），则说明患者曾经感染过结核分枝杆菌。
但是这个结果并不能确定是否患有结核病。
3. X射线检查：胸部X射线是诊断肺结核的重要工具。
在胸部X射线片上，如果发现肺部有阴影、结节、空洞或其他的异常病变，结合患者的病史和临床症状，可以初步判断是否患上肺结核。
如果怀疑肺外结核，还可以使用CT扫描、MRI 等其他影像学检查。
4. 痰涂片检查：这是一种简便、快速的结核病初筛方法。
医生会要求患者在早晨空腹时咳嗽并采集痰液。
然后痰涂片会在实验室进行染色和显微镜观察，以检测痰中是否有结核分枝杆菌。
这种方法虽然简单方便，但是灵敏度较低，只有大量结核菌存在时才能检测出来。
5. 结核菌培养：结核菌培养是用来检测结核菌是否存在以及对抗生素的敏感性的标准方法。
医生一般会用采集到的标本（如痰液、尿液、脑脊髓液等）进行培养和鉴定，一方面可以确定结核菌的存在，另一方面可以测试其对抗生素的反应。
这种方法需要较长的时间，一般需要几周甚至几个月。
6. 分枝杆菌DNA检测：分枝杆菌DNA检测是一种新的诊断方法，可以更快速和准确地检测结核分枝杆菌的存在。
常用的分子生物学方法包括PCR（聚合酶链反应）、LAMP（等温扩增）等。
这些方法可以从痰液、尿液、脑脊髓液等标本中检测结核菌的DNA，从而判断是否感染结核分枝杆菌。
肺结核实验室诊断方法创新研究
肺结核实验室诊断方法创新研究肺结核是一种严重的传染病，对于其及时准确的实验室诊断方法研究具有重要意义。
目前常用的肺结核实验室诊断方法主要包括痰涂片检查、痰培养、结核菌DNA检测等。
这些方法存在着一些局限性，包括操作复杂、时间较长、敏感性和特异性不高等问题，有必要开展肺结核实验室诊断方法的创新研究。
可以研究新型检测技术，如免疫法、核酸检测法、质谱技术等，用于肺结核的实验室诊断。
这些新技术具有检测快速、敏感性高、特异性强等优点，可以提高肺结核的早期诊断率，减少误诊率。
可以开展新型标记物的研究，以提高肺结核的诊断准确性。
通过研究肺结核相关蛋白、抗原和荧光探针等，开发新型的生物标记物，用于肺结核的实验室诊断。
这些标记物具有较高的特异性和灵敏度，可以用于肺结核的早期诊断和预后判断。
可以开展基因检测和基因组学研究。
通过对肺结核相关基因的筛选和分析，可以发现新的标志物和遗传因素，为肺结核的实验室诊断提供新的方法和依据。
基因组学研究还可以揭示肺结核的发病机制和抗药性的形成机制，为肺结核的诊断和治疗提供新的思路和方法。
可以结合人工智能等新的技术，开展肺结核实验室诊断的创新研究。
通过机器学习和数据挖掘技术，将大量的肺结核相关数据进行分析和整合，建立肺结核的预测模型和诊断模型，提高肺结核的诊断准确性和效率。
肺结核实验室诊断方法的创新研究具有重要的意义。
通过研究新的检测技术、标记物、基因检测和基因组学等方面，可以提高肺结核的实验室诊断水平，促进肺结核的早期诊断和治疗。
结合人工智能等新的技术，可以进一步提高肺结核的诊断准确性和效率，为肺结核的防控提供有力支持。
结核病的实验室诊断方法
结核病的实验室诊断方法结核病实验室检查主要有；涂片染色显微镜检查、分枝杆菌分离培养、分枝杆菌药物敏感性试验、分枝杆菌菌种鉴定、分枝杆菌基因分型、分枝杆菌血清学及核酸扩增检测等。
细菌学检查细菌学检验结果的准确性首先取决于标本的质量。
正确地采集、转送标本，是直接影响检验结果的重要因素和取得准确结果的前提。
各种标本(痰液、血液、伤口分泌物和各种感染等)采集时应充分考虑到选择恰当合理的时问，考虑到可能存在的病原菌的性质，按要求采集标本，这样可使标本包含细菌，并为后续检验步骤打下良好的基础。
合格的痰标本在低倍镜视野里上皮细胞应10个，白细胞数应25个。
涂片染色显微镜检查根据我国结核病防治规划的要求，对咳嗽、咳痰13周或有咯血或血痰的肺结核可疑症状者，应留取3份痰标本(夜间痰、清晨痰和即时痰)进行痰涂片抗酸染色检查。
即时痰为病人就诊时咳出的痰液：清晨痰为清晨深咳出的痰液；夜间痰为就诊前1天晚睡前咳出的痰液。
留取的痰液标本常规涂片后，进行要尔－尼尔逊氏染色法(ziehl-Neelsen)染色。
分枝杆菌分离培养结核分枝杆菌是兼性需氧菌，最适生长温度为37℃，最适pH为6.5～7.2。
分枝杆菌分离培养检查法，是结核病确诊最可靠的方法。
是获得纯培养物进行菌种鉴定、药物敏感性试验以及其他生物学研究的基础。
当前，我国普遍采用改良L-J(改良罗氏)培养基来分离培养结核分枝杆菌。
通常情况下，当每1ml标本中微生物含量达10<sup>2～3</sup> CFU(菌落形成单位)时，即可培养阳性。
分枝杆菌快速培养检查是使用分枝杆菌快速培养仪(MIGT、BacT/A1err、ESP)，通过测定细菌生长代谢检测分枝杆菌生长情况的方法。
在进行分枝杆菌快速培养检查时，标本接种前的祛污染处理，必须严格按照系统说明书中给定的方法进行。
孵育检测过程中系统报告阳性时，相应标本的培养液必须首先进行抗酸染色镜检，发现抗酸菌后方可发出阳性报告。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
结核病的实验室诊断方法及评价耐多药结核病的实验室诊断条件：因耐多药结核分枝杆菌的生物危险性，1）需P2及以上实验室，目前我院实验室条件基本具备即将投入运行，2）日常培养及涂片用的生物安全柜滤膜已超出使用年限，工作人员生物安全得不到保障，应定期予以更换。
耐多药结核分枝杆菌主要以结核分枝杆菌体外药物敏感性测定作为其诊断依据。
因此其基础是培养，只有培养出阳性结核分枝杆菌才能进一步通过结核分枝杆菌体外药物敏感性测定诊断是否为耐多药结核分枝杆菌。
1.已进人临床常规应用的测定方法:目前包括绝对浓度法、比例法及应用BACTEC460、BACTEC 960、BacT/ ALERT 3D、ESPII等仪器系统快速检测结核分枝杆菌的药物敏感性。
其中:绝对浓度法以最低抑菌浓度或以无生长为终点作为判断标准，是我国目前普遍采用的方法;比例法以是否能够抑制99%的细菌生长作为判断标准，是世界卫生组织推荐使用的方法;后四种仪器方法则是比例法的特化，其特点是以细菌的代谢过程指示细菌生长状况。
2.处于研究探索阶段的测定方法:此类方法很多，抗性比例法、Etests法、噬菌体生物扩增法、液体变色培养基测定法、荧光素酶测定法、硝酸盐还原试验等。
3分子生物学方法对结核分枝杆菌耐药性检测已有一些进入临床检测。
基因突变是引起抗结核药物耐药性的最主要的原因。
多种以PCR 为基础的分子生物学技术用于检测与耐药相关基因的突变，作为快速耐药性检测方法在实验室或临床得到开展。
这些方法具体包括：主要是DNA序列分析法，聚合链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP），另外还包括基因芯片技术、异质性双链构象分析、变性梯度凝胶电泳、线性探针杂交技术、RNA/RNA错配检测技术和分子灯塔技术等。
由于结核分枝杆菌的耐药性与基因突变的确切关系未完全阐明，检测耐药相关基因的分子生物学方法虽然能快速准确地检测到耐药相关基因的突变，但由于判断药物敏感性时存在固有的缺陷，检测结核分枝杆菌耐药性的基因型鉴定法不能完全替代表型鉴定法。
结核病的实验室诊断方法及评价(一)标本的采集1．痰标本采集新发病人应在抗结核药物治疗前留取痰标本。
治疗中的病人应停药2～3天后留取痰标本。
病人于清晨漱口后，留取3～5ml合格的痰标本(深咳后吐出的黏液痰、脓样痰、干酪样痰、褐色血样痰或含少量新鲜血液的血痰)，遇到唾液或口永，应重新留取。
至少采集3次。
WHO推荐的采集容器为国际通用的螺旋盖痰瓶、可密封塑料盒或蜡纸盒。
痰容器上应标明病人姓名、编号、检查项目和容器序号。
2.胃冲洗液幼儿不会吐痰，常将痰液咽下，故可用清晨空腹胃洗出液，直接涂片染色或进行结核杆菌培养，连续作三次可提高培养阳性率。
胃液结核杆菌检出率以浸润性肺结核和干酪性肺炎为最高，其次为粟粒型肺结核。
胃液、痰液或其他分泌物中结核杆菌检查，有时对诊断有决定性意义。
3.支气管肺泡灌洗和支气管冲洗支气管肺泡灌洗和支气管冲洗液至少5ml并以无菌容器盛装，以用于检验。
4.病灶组织或干酷块等先用组织研磨器磨碎后再行涂片。
5．尿液留全量夜尿，静置4或5小时后，弃上清液，取沉淀部分尿液10ml，3000rpm．离心30min，取沉渣涂片。
6.体液或脑脊液无菌操作收集体液或脑脊液，放置冰箱或室温24h，待薄膜形成后涂片。
也可将脑脊液离心沉淀，3000rpm，离心30min，弃上清液，取沉淀物涂片。
(二)试验方法及评价1．细菌学诊断方法(1)涂片检查法：包括直接涂片法、荧光染色涂片法和集菌涂片珐。
痰液、脓液可直接涂片。
用萋尔-尼尔逊染色法(Ziehi-Neelsen)简称萋尼染色法，若镜检找到抗酸性杆菌，则可能是结核杆菌。
此法简便、快速，技术要求低，无需特殊仪器且能当天出结果，十分经济，符合我国国情。
但其敏感性差，一般需5000～10000条菌／ml才能得到阳性结果；特异性差，各种分枝杆菌均可着色，要进一步鉴定是否为结核分枝杆菌；不能区分死菌与活菌。
【萋尼氏染色法】①涂片：取经95％乙醇擦拭脱脂过的干燥、清洁、无油污、无划痕的新玻璃片(玻片不能重复使用)，于玻片背面的左端1／3处以蓝色或黑色记号笔(玻璃铅笔)编号。
用接种环挑取痰标本的脓样，干酪样部分约0.05～0.1ml，于玻片正面的右侧2／3处，均匀涂沫成10mm×20mm的卵圆形痰膜，自然干燥后待检。
②试剂：⊙碱性复红乙醇染色储存液：碱性复红液：8克碱性复红溶于95％乙醇100ml中。
5％石碳酸水溶液：5克石碳酸溶于100ml蒸馏水中。
③染色步骤；【荧光染色法】①试剂：染色剂z金胺“O”0．1g溶于95％乙醇10ml，加5％石炭酸90ml。
脱色剂：3％盐酸乙醇液。
复染剂：0.5％高锰酸钾水溶液。
②染色步骤：③镜检与报告方式：在暗色背景下，抗酸杆菌呈黄绿色或橙色荧光。
必须用40×物镜确认菌体形态，应具有萋-纳氏抗酸染色镜经检验后，方可应用荧光染色法，注意勿过读或漏判。
荧光染色后涂片应在24h内检查，遇需隔夜时，置4℃保存，次日完成镜检。
物镜20×检查结果按下列标准报告：阴性(-)：0条／50视野可疑(+)；1～3条／50视野阳性(1+)：l1～99条／50视野(2+)：1～9条／每视野(3+)：10～99条／每视野(4+)：≥100条／每视野物镜40×检查细菌细胞形态。
(2)常规培养法：结核分枝杆菌培养阳性是确诊结核病的“金标准”。
改良罗氏培养法是目前较为成熟的分离培养方法，根据结核杆菌生长缓慢，菌落干燥、颗粒状、乳酪色像菜花状，菌体染色抗酸性强等特点判断是否为结核杆菌。
如菌落、菌体染色都不典型,则可能为非典型分枝杆菌，应进一步作鉴别试验。
此法培养时间长，不适于快速检测结核杆菌，且阳性率也只有30％～40％，使大量结核病人漏诊或误诊。
同时各种分枝杆菌均可生长，也需进一步鉴定是否为结核分枝杆菌。
⊙培养结果报告方式：抗酸杆菌培养阴性：斜面无菌落生长。
抗酸杆菌培养阳性(1+)：菌落生长占斜面面积的1／4。
抗酸杆菌培养阳性(2+)：菌落生长占斜面面积的1／2。
抗酸杆菌培养阳性(3+)：菌落生长占斜面面积的3／4。
抗酸杆菌培养阳性(4+)：菌落生长布满全斜面。
抗酸杆菌培养阴性应以“(培养阴性)”报告。
菌落生长不足以斜面面积1／4时，实报菌落数。
(3)快速培养法：①BactecMGIT960分枝杆菌快速培养、药敏检测系统的基本原理是，其所使用的培养瓶底部含有包被于树脂上的荧光显示剂，由于该显示剂为氧抑制性，当分枝杆菌生长使氧消耗后，荧光显示剂被激活而发出荧光。
检测系统每隔60分钟连续测定培养管内荧光强度，来判断管内分枝杆菌生长情况。
②BacTALERT3D培养系统：是另一类分枝杆菌快速培养、药敏检测系统，也可用于普通细菌的培养。
其原理是所使用的培养瓶底部，有颜色感应器，当分枝杆菌在瓶中生长，有CO2产生时，颜色感应器由绿色变为黄色。
系统自动连续检测数据输入计算机，根据计算结果自动显示有无分枝杆菌生长。
此法无放射性，显著缩短培养时间，且操作简便、自动化强，还可进行快速菌型鉴定。
但液体培养基中不能观察菌落形态，仪器与试剂价格较贵。
(4)液体变色培养基(MBRedox系统)：该系统由改良米氏7H9培养基、促生长添加剂(血清、复合维生素等)、抗生素混合物PACT(多黏菌素B、两性霉素B、茶啶酸、甲氧苄胺嘧啶)和氧化还原显示器(即无色四鎓盐)组成。
促生长添加剂可加速分枝杆菌的生长和甲臜(formazan)的形成。
其原理是当分枝杆菌在此培养基生长时，通过氧化还原系统，使培养基中的无色四唑鎓盐还原成粉红色、红色或紫色甲臜。
由于甲臜不溶于水．以颗粒形式分泌到细胞表面，分枝杆菌菌落就变成了用肉眼可见的红或紫色，取培养液涂片，染色镜检。
此法操作简便，培养时间短，肉眼观察结果，无需特殊仪器，无放射性污染，还可用于分枝杆菌的药敏试验和菌种鉴定。
但阳性率还不够高，结果观察存在主观性。
(5)噬菌体裂解试验：由于耻垢分枝杆菌噬菌体是一种DNA病毒，能特异感染相应的活的分枝杆菌，并在菌体内迅速增殖?裂解菌体，释放出的子代噬菌体，又可感染随后加入的指示细胞(也是一种分枝杆菌)，并使指示细胞裂解，在培养平板上出现噬菌斑。
根据噬菌斑的有无，即可确定待检标本中是否含有相应的活的分枝杆菌。
此方法简便、快速，不需特殊仪器；特异性和灵敏度较高；检测的是活菌，但传染性小；可相对定量可测定药物敏感性。
其主要步骤为：①标本前处理：同常规培养法(若用菌株则勿需此步)，经前处理后的标本于Middlebrook7H9培养基中(含有改良的OADC营养添加剂)37℃温育24h。
②噬菌体浸染：取0.5ml上述处理后的样品(或菌液)，加入0．1ml分枝杆菌噬菌体，震荡混匀，37℃孵育1b。
③中止浸染：于上述浸染液中加人0.1ml杀毒剂，彻底混匀，室温作用5min，加入5mlMiddlebrook7H9培养液和1ml指示细胞。
④浇注平皿和培养：将上述混合培养液与5ml溶化的琼脂共同倾注于无菌平皿中，旋转混匀，静置成形后，于37℃培养18～24h。
每次检测同时设空白对照、嘴菌体对照、杀毒剂对照、指示细胞对照和阴性及阳性对照。
⑤结果观察：在各对照组结果正确的条件下，观察试验样品结果。
阳性结果可见有大小和数量不等的噬菌斑出现(彩图2)，或许多嘴菌斑相互融合成透明状；阴性结果可见指示细胞在琼脂培养基中均匀生长．无噬菌斑出现。
2．常用的免疫学诊断方法(1)酶联免疫吸附试验(enzymeLinkedimmunosorbentas-say，ELISA)：ELISA是结核抗体。
研究和应用报道最多的实验方法。
①ELISA间接法：其基本原理是吸附在固相载体上的结核抗原可与待检标本中的结核抗体结合，形成抗原-抗体复合物，后者与酶标记的抗人IgG结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，酶使底物显色。
颜色的深浅与待检标本中的结核抗体含量成正比。
本法主要用于测定结核抗体。
②双抗体夹心ELISA：其原理是吸附在固相载体上的结核抗体可与待检标本中的结核抗原结合，形成抗体-抗原复合物，后者与酶标记的结核抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，酶使底物显色，颜色的深浅与待检标本中的结核抗原含量成正比。
本怯主要用于特异性结核抗原的测定。
③抗原竞争ELISA：其原理是吸附在固相载体上的结核抗体，可与标本中的待检结核抗原及同时加入的酶标的结核抗原发生竞争结合，形成抗体抗原和抗体-酶标抗原两种复合物，后者可使酶作用的底物显色，颜色的深浅与待检标本中结核抗原的含量成反比。
本法主要用于小分子抗原的测定。
(2)生物素-亲和素-酶免疫测定法(biotin-avidin-system，BAS-酶免法)：基本原理类似于ELISA，只是用BAS来标记酶，而不是用抗体或抗原标记酶。