PPD试剂说明书

结核菌素纯蛋白衍生物（p p d）：
适用范围：胸片检查异常的患者；涂阳肺结核病人密切接触者；涂阴病人和需与其他疾病鉴别诊断的病人皮内注射法
1．注射部位和注射方法：选择在左侧前臂掌侧中上部1/3处，一般常用0.1ml含5个结核菌素单位的纯蛋白衍生物（ppd）皮内注射，使之形成直径6-10mm的皮丘；若患者结核变态反应强烈如患疱疹性结膜炎，结节性红斑或一过性多发性结核过敏性关节炎等，宜用1个结核菌素单位的ppd试验，以防局部的过度反应及可能的病灶反应。

（注意：在注射前应询问患者以前曾否做过该试验，如做过应问清时间、部位，以免引起促进反应。

）2．注射量和皮丘的关系
准确地向皮内注射0.1毫升液体，形成的丘疹直径在6-10mm左右，这个大小程度在儿童较成人小（平均7mm左右），成人女子也略小于男子（9mm与8mm之比）。

3．注射的深度
同样注射在皮内，观察其各种深度变化所出现反应的差别，结核菌素反应直径不因深度出现差异。

然而深的注射与浅的注射相比，深的注射反应的分散度大。

如果过深达皮下程度，结核菌素迅速被吸收出现的反应就小。

因此应当十分注意必须做浅层皮内注射
4．结果观察
于试验后48—72小时观察和记录结果，测量时以硬结（横径+纵径/2）大小为主，不以红晕大小作为判断标准。

因为硬结为特异性变态反应，而红晕为非特异性反应。

但一般情况下硬结和红晕大小一致。

注意：在见到双重同心圆状红润（双圈）时，测外层的红润直径。

不要将因注射造成的内出血误认为结核菌素反应。

结核菌素反应的红润指压暂时褪色，出血的红润指压不褪色。

结果判定
硬结直径≤5mm为阴性
5～9mm为阳性（+）（提示分支杆菌感染，也包括非典
型分支杆菌感染）
10～19mm为中度阳性（++）
≥20mm为强阳性（+++）
局部有硬结外，还有水泡、破溃、淋巴管炎及双圈反应等为强阳性反应（++++）
结核菌素使用时注意事项
1、注射器及针头应当专用，不可作其它注射之用。

2、安瓿开启后在半小时内使用。

3、安瓿有裂纹，制品内有异物者不可使用。

4、结核菌素试剂应于2～8℃避光保存及运输。

结核菌素试验的禁忌症
1、各种传染病的恢复期，结素试验可能发生不良反应，使病情加重。

2、有器质性病变，如心血管、肾脏病、胃肠病的急性期。

3、有过敏反应史者，特别是对其它预防注射有过敏史及免疫缺陷的婴儿。

4、体弱及严重衰竭者。

5、高热患者。

结核菌素试验的临床意义
1、ppd试验阴性的临床意义
（1）未受结核菌感染，非结核病人；
（2）已受结核菌感染但处于结核感染早期（4—8周）；
（3）老年人；
（4）营养不良、hiv感染、尿毒症、恶性肿瘤接受放、化疗者等免疫功能低下者（免疫系统受干扰）；
（5）使用肾上腺皮质激素的患者；
（6）有发高热的急性传染病（麻疹、猩红热、水痘）或粟粒型肺结核、结核性脑膜炎患者；
（7）技术误差或结核菌素失效。

2、ppd试验阳性的临床意义
（1）接种卡介苗后；
（2）结核病病人；
（3）无明显临床症状仅呈一般阳性反应，表示曾感染过结核杆菌；
（4）婴幼儿尤其是未接种卡介苗者，阳性反应多表示体内有新的结核病灶。

年龄愈小，活动性结核可能性愈大；
（5）强阳性反应者，表示体内有活动性结核病；
（6）由阴性反应转为阳性反应，或反应强度由原来小于10mm增至大于10mm，且增幅超过6mm时，表示新近有感染。

由于广泛推行卡介苗接种，结核菌素试验的诊断价值受到一定限制。

接种卡介苗与自然感染阳性反应的主要区别见表1；
（7）技术误差及其他原因引起的假阳性反应
接种卡介苗与自然感染阳性反应的主要区别
ppd试验注意事项
（1）有活动的结核病灶或发热者，不宜做此实验，以免发生严重的过敏反应或导致病情加重。

（2）注射部位不能用手抓、擦，以免感染；也不能涂抹任何药物，包括花露水、风油精、肥皂等，以免影响结果判断。

（3）试验后在原地休息片刻，无不适感觉再离开；特别是过敏体质者，要注意有无过敏反应。

（4）密切观察试验后反应。

曾患过重度结核病或过敏体质者，局部可能出现水疱、浸润或溃疡，有的出现不同程度的发热；一般能自行消退或自愈；严重者应及时到医院作局部消炎或退热处理。

（5）试验后48-72小时看反应结果，提前或推迟规定时间会影响结果判断的准确性。

(6) 尽可能避免使用激素类的药物。

篇二：疫苗说明书
卡介苗(皮内注射用卡介苗)
【药品名称】
通用名称：皮内注射用卡介苗英文名：bcg vaccine for intradermal injection 汉语拼音：pinei zhusheyong kajiemiao
【成份和性状】
成品外观为白色疏松体或粉末，接规定量加入稀释液后，应于3分钟内完全溶解成均匀悬液。

【接种对象】
出生3个月以内的婴儿或用5iu ppd试验阴性的儿童（ppd试验后48-72小时局部硬结直径在5mm以下者为阴性）。

【作用与用途】
本疫苗接种后，可使机体产生细胞免疫应答。

用于预防结核病。

【规格】
5人份(0.25mg)/支
【免疫程序和剂量】
1.疫苗稀释用灭菌的1ml注射器将随制品附发的稀释液定量加入冻干皮肉注射用卡介苗安瓿中，放置
约1分钟，摇动安瓿使之溶解后，用注射器来回抽取数次，使充分混匀。

每支安瓿自稀释时起，必
须在半小时内用完，以防污染。

2.接种方法：先用75%酒精消毒上臂外侧三角肌中部略下处的皮
肤，然后用灭菌的1ml蓝芯注射器(25-26号针头)吸取摇匀的疫苗，皮内注射0.1ml。

【禁忌】
凡患有结核病、急性传染病、肾炎、心脏病、湿疹、免疫缺陷症或其他皮肤病者均不予接种。

【注意事项】
1.严禁皮下或肌内注射。

2.安瓿有裂纹或过期失效者不可使用。

3.接种对象必须详细登记姓名、性
别、年龄、住址、疫苗批号及亚批号、制造单位和接种日期。

4.接种卡介苗的注射器应专用，不得用作其他注射，以防止产生化脓反应。

5.使用时制品注意避光。

【贮藏】
于2-8℃避光保存和运输。

【包装】
小包装：10支/盒；大包装：1000支/箱。

【药品名称】
通用名称：重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)
【成份】
本品系由重组酵母表达的乙型肝炎表面抗原（hbsag）经纯化、加佐剂吸附后制成
【适应症】
乙肝易感者，包括婴幼儿、儿童和因职业关系可能接触乙肝病毒的成年人。

接种对象应为乙
肝病毒表面抗原阴性和转氨酶正常者。

【用法用量】
5 g/次，注射部位为上臂三角肌内，第一针注射后，于1个月和6个月后重复注射，总共3次。

【不良反应】
偶见注射部位红肿或疼痛、发热和头痛
【禁忌】
患有发热、急性或慢性严重疾病者及对酵母成分过敏者禁止使用
【注意事项】
1注射于上臂三角肌内。

2应备有肾上腺素，在过敏反应时使用。

3用前摇匀，有摇不散的块状物不得使用。

4另有乙肝基因工程疫苗为中国仓鼠卵巢细胞分泌的乙肝表面抗原加佐剂氢氧化铝制成，每支
10&mu；g，用法同本品。

【药物相互作用】
暂不明确
【药理作用】
1.基因工程疫苗能诱导抗体产生，通过主动免疫方式使人体获得对乙肝病毒的抵抗力。

临床上证明本疫
苗所产生的抗体几何平均滴度远高于有效保护水平（>10 miu/ml）。

2.用每支5 μg的剂量，经三次接种，即可达到满意的免疫效果，保护率在95%以上，母婴阻断率达
85%以上，能有效降低乙型肝炎的感染和病毒携带率，为控制乙肝传播的重要手段和预防肝细胞癌的有效方法之一。

3.基因工程疫苗完全不同于血源乙肝疫苗，不需要乙肝病毒携带者的血浆作为生产原料，因此更安全、
高效。

本品是一种乙型肝炎表面抗原亚单位疫苗，系采用现代生物技术将乙肝病毒表面抗原基因，
克隆进入酵母菌中，通过培养这种重组酵母菌来获取乙型肝炎表面抗原。

【贮藏】
密封保存
【批准文号】
国药准字s1*******
【生产企业】
企业名称：深圳康泰生物制品股份有限公司
生产地址：深圳市南山区科技工业园科发路6号
联系电话：86-755-26988688 如有问题可与生产企业联系疫苗(糖丸)
药品名称:
商品名称：脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸
通用名称：脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸（人二倍体细胞）
英文名称：poliomyelitisvaccineindrageecandy(humandiploidcell),live
规格:
每粒糖丸重1g。

成分:
本品系用脊髓灰质炎病毒减毒株接种于人二倍体细胞。

贮藏:
-20℃以下避光保存和运输。

适应症:
主要为2个月龄以上的儿童。

全年均适宜接种。

用法用量:
基础免疫为3次。

首次免疫从2月龄开始，连续口服3次，每次间隔4－6周，4岁再加强免疫1次，
每1次人用剂量1粒。

其他年龄组在需要时也可以服用。

禁忌:
1、、患急性传染病者。

2、患免疫缺陷症、接受免疫抑制剂治疗者。

3、妊娠期妇女。

注意事项:
1、本品只供口服，禁止注射。

2、本品系活疫苗，应使用37℃以下的温水送服，切勿用热水送服。

3、本品为减毒活疫苗，不推荐在该疾病流行季节使用。

不良反应:
口服后一般无副反应，个别人有发热、恶心、呕吐、腹泻和皮疹，一般不需特殊处理，必要时可对症治疗。

批准文号:
国药准字s1*******
生产企业:北京天坛生物制品股份有限公司
吸附无细胞百白破联合疫苗说明书通用名称：
吸附无细胞百白破联合疫苗
【功能主治】：
本疫苗接种后，可使机体产生免疫应答，用于预防百日咳、白喉、破伤风。

【用法用量】：
1.臀部外上方1/4处或上臂外侧三角肌附着处皮肤经消毒后肌内注射。

2.免疫程序与剂量
基础免疫自3月龄开始，至12月龄完成3针免疫，每次0.5ml，每针间隔4～6周；加强免疫通常在
基础免疫后18～24月龄内进行，注射剂量为0.5ml。

不良反应：
注射本品一般无反应，有的接种部位有轻度红晕、痒感或有低热，一般不须特殊处理，即行消退，如有严重反应及时诊治。

【禁忌】：
1.有癫痫、神经系统疾病及抽风史者禁用。

2.急性传染病(包括恢复期)及发热者，暂缓注射。

生产企业:武汉生物
麻疹疫苗说明书
接种对象
1、8月龄以上的易感者：初免年龄为8月龄，再免疫年龄为7周岁。

也可8月龄初免，1.5-2岁再免
疫1针以减少初免失败的易感者。

2、病例发生后的应急接种：其对象是病人活动范围的易感者。

流行地区应在95%以上。

接种时间愈早愈好，在首代病例出现后疫情尚未蔓延之前接种完毕。

麻疹的潜伏期一般为7-14天，最长可达21天。

接种疫
苗后7-12天就可产生抗体，比感染后产生抗体的时间短，因此对易感者进行应急接种可控制疫情蔓延或终止
流行。

对麻疹潜伏期的儿童接种疫苗
后一般没有不良反应，在麻疹感染后1-2天内接种疫苗可阻止病毒血症的产生，使感染者的临床症状减轻。

没有注射过麻疹疫苗而又与麻疹患者密切接触的易感者和不宜接种疫苗者，可应用丙种球蛋白，但这种免疫力一般只能维持2-3周，此后如再接触麻疹患儿又可再次感染。

因此，若以后无禁忌的8月龄以上儿童必须接种各种麻疹疫苗。

4使用方法编辑冻干麻疹活疫苗：按瓿签所示用量加灭菌注射用水待完全溶解后使用。

注射部位及剂量：上臂外侧三角肌附着处皮肤用75%乙醇消毒，待干后皮下注射0.5ml。

儿童和成人剂量相同。

5接种反应和
禁忌
接种反应
常见的接种反应是在注射部位出现短时间的烧灼感及刺痛,个别受种者可在接种疫苗5~12日出现发热(38.3℃或以上)或皮疹。

罕见的接种反应包括一些轻度的局部反应，如红斑、硬结和触痛、喉痛及不适、恶心、呕吐、腹泻等，极其罕见的有过敏反应、一过性的关节炎和关节痛。

禁忌症
妊娠期的妇女。

对青霉素和鸡蛋有过敏史或类过敏反应者。

伴有发热的呼吸道疾病、活动性结核、血液病、恶病质和恶性肿瘤等。

接种对象
接种对象： a群流脑疫苗主要用于6月龄～15周岁的儿童。

3注射部位
上臂外侧三角肌附着处皮下注射。

4接种程序
接种程序： a群流脑疫苗接种4剂，儿童自6月龄接种第1剂，第1、2剂为基础免疫，2剂次间隔不少于3个月；第3、4剂次为加强免疫，3岁时接种第3剂，与第2剂间隔时间不少于1年；6岁时接种第4剂，与第3剂接种间隔不少于3年。

注射部位：上臂外侧三角肌附着处皮下注射。

储存与运输： a群流脑疫苗应在2℃～8℃条件下运输和避光保存。

5接种反应
接种后反应：
接种本疫苗后，反应轻微，一般无严重的局部反应和全身反应。

个别儿童接种后，局部出现红晕、硬结，全身反应有低热，偶有过敏反应。

大多数接种者在接种后10～24小时出现，一般1～2天自行恢复，必要时可对症治疗。

6禁忌症
禁忌症：有下列情况者不能接种本疫苗。

1）患有神经系统疾患如癫痫、抽风、脑部疾患等，及有过敏史者；
2）发热、急性疾病；
3）肾脏病、心脏病及活动性肺结核等慢性疾病的活动期。

接种反应：接种本疫苗后，反应轻微，一般无严重的局部反应和全身反应。

个别儿童接种后，局部出现红晕、硬结，全身反应有低热，偶有过敏反应。

大多数接种者在接种后10～
24小时出现，一般1～2天自行恢复，必要时可对症治疗。

7注意事项
接种时注意事项：
1）启开疫苗瓶后，每支加入所附5ml稀释液溶解，摇匀后立即使用；
2）安瓿破裂、瓶内有异物者不得使用。

应急接种：在流脑流行的情况下，可扩大年龄组进行应急接种，接种疫苗后产生抗体较快，5天左右可起保护作用，以达到控制该病流行和续发病例的发生。

3）本疫苗使用后，偶有短暂低热，局部稍有压痛感，一般可自行缓解。

如有严重反应及时诊治。

4）接种完毕后，留观15-30分钟。

8其他事项编辑
1、接种流程：（1）接诊处开处方、接种登记；（2）划价；（3）取疫苗；（4）注射室接种疫苗。

2、接种收费：疫苗费19元、接种费3元，共计22元。

3、接种间隔：与a群流脑疫苗基础免疫间隔不小于3个月，与加强免疫间隔不小于1年。

4、如为学龄前儿童接种，请家长将接种的a流脑疫苗名称和接种日期，填写在儿童的免疫接种证中的空白栏内，以便当地预防保健科核查。

5、被接种者应保存好医生开与的处方。

乙型脑炎减毒活疫苗说明书
? 成都生物制品研究所
通用名称：
乙型脑炎减毒活疫苗
功能主治：
接种本疫苗后，可刺激机体产生抗乙型脑炎病毒的免疫力，用于预防流行性乙型脑炎。

用法用量：
1.按标示量加入疫苗稀释液，待完全复溶后使用。

2.于上臂外侧三角肌下缘附着处皮下1次注射。

3.8月龄儿童首次注射0.5ml；分别于2岁和7岁再各注射0.5ml，以后不再免疫。

不良反应：
少数儿童可能出现一过性发热反应，一般不超过2天，可自行缓解。

偶有散在皮疹出现，一般不需特殊处理，必要时可对症治疗。

禁忌：
1.发热，患急性传染病、中耳炎、活动性结核、心脏、肾脏及肝脏等疾病者。

2.体质衰弱、有过敏史或癫痫史者。

3. 先天性免疫缺陷者，近期或正在进行免疫抑制剂治疗者。

4. 妊娠期妇女。

冻干甲型肝炎减毒活疫苗
【药品名称】
通用名称：冻干甲型肝炎减毒活疫苗
英文名称：hepatitis a (live) vaccine,freeze-dried
【成份】篇三：真核表达载体ppdgf-nep的构建及表达
真核表达载体ppdgf-nep的构建及表达
一、真核表达载体ppdgf-nep的构建
（一）、材料
各种taq酶、t4dna连接酶、限制性内切酶、所有dna marker及凝胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒均购自大连takara公司；全血基因组dna提取试剂盒购自上海生工生物工程技术服务有限公司。

质粒psimple-19 ecorⅴ/bap载体购自大连takara公司；真核表达质粒pegfp-1、质粒
pcdna3.1(+)、质粒pcsc-sppw-net由山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所保存。

（二）、方法
2.1.pdgf启动子的获取
用全血基因组dna提取试剂盒提取人外周血基因组dna，根据genbank上的pdgf基因全序列（genbank：hsn 10c 3,2782bp,该序列中含有一个ecorⅰ酶切位点）设计多对引物，并在上下游外引物f/r上分别加入bsp106及kpnⅰ酶切位点。

第一步先以基因组dna为模板，分别使用内引物f0/r1、f1/r 进行分段pcr扩增，获得pcr产物1和pcr产物2。

第二步以pcr产物1和pcr产物2为模板，以外引物f/r进行pcr扩增，扩增产物即为2782bp的pdgf启动子序列。

第三步将上一步获得的pcr产物通过酶切插入至psimple-19 ecorⅴ/bap载体中构建psimple-19-pdgf，并进行酶切、测序鉴定和扩增（实验步骤见图1）。

各引物序列：
f0：5’-cttacgggctgtgtgacctt-3’；
f：5’-atcgatagcatggagaggctacaggtagagt-3’；
f1：5’-tctctgccactgtgccacgct-3’；
r：5’-ggtaccggcagtcgatggttcgtcttcactc-3’；
r1：5’-agcgtggcacagtggcagaga-3’。

图1 神经特异性启动子pdgf promoter的调取
2.2.nep基因的获取
根据ncbi genbank提供nep、β-actin的基因序列，β-actin：
f 5’-acactgtgcccatctacgagggg-3’，
r 5’-atgatggagttgaaggtagtttcgtggat-3’；
从质粒pcsc-sppw-net上用apaⅰ切出含nep片段，同时将质粒pegfp-1用apaⅰ酶切，线性化，用碱性磷酸酶处理防止载体自身环化，然后电泳回收nep片段和线性化的质粒pegfp-1，用t4dna连接酶过夜连接，转化，挑单克隆在培养液中培养，提质粒，酶切测序鉴定正反向，用bamhｉ、kpnⅰ切下nep片段，得到两端带有kpnⅰ、bamhｉ酶切位点的nep片段。

同时用bamhｉ、notⅰ双酶切质粒pcdna3.1(+)，胶回收
小片段适配子和带有kpnⅰ、bamhｉ酶切位点的nep片段，用t4dna连接酶过夜连接，最后得到两端带有
kpnⅰ，notⅰ酶切位点的目的基因片段。

取一小部分整片段电泳鉴定以及酶切鉴定正确后，待用。

2.3.ppdgf-egfp的构建
使用bsp106和kpnⅰ双酶切质粒psimple-19-pdgf获得pdgf启动子片段，用hindⅲ和kpnⅰ双酶切质粒p-egfp -1获得载体大片段。

将上述获得的两个片段与两端含有hind
ⅲ和bsp106末端的适配子进行3片段连接，构建真核表达载体ppdgf-egfp。

适配子序列： f：5’-agcttcgaattctgcagtcgacggtaccgcgggcccgat；
r：5’-cgatcgggcccgcggtaccgtcgactgcagaattcga。

2.4.ppdgf-nep的构建
使用kpnⅰ和notⅰ双酶切质粒ppdgf-egfp获得含启动子pdgf的大片段，将含启动子pdgf的大片段
和带有kpnⅰ，notⅰ酶切位点的目的基因nep片段，用t4dna连接酶过夜连接，最后得到真核表达载体
ppdgf-nep。

二、检测重组载体ppdgf-nep的神经组织特异性表达情况
（一）、材料
rna提取试剂盒（trizol试剂）、所有dna marker及凝胶回收试剂盒均购自大连rakara公司；质
粒提取试剂盒、脂质体lipofectaminetm2000购自invitrogen公司；nep多克隆抗体系美国santa cruz生物公司产品；β-actin单克隆抗体由美国cell signaling公司提供；抗nep、β-actin辣根过
氧化酶标记的二抗系北京中杉金桥生物技术有限公司生产；ecl（增强化学发光检测系统）试剂盒购自美国santa cruz生物公司。

细胞人神经母细胞瘤细胞sk-n-sh、人胚肾上皮细胞293、卵巢癌细胞skov3、血管内皮细胞ecv及大肠癌细胞ht-29均由山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所保存
（二）、方法
将质粒ppdgf-nep分别转染细胞人神经母细胞瘤细胞sk-n-sh、人胚肾上皮细胞293、卵巢癌细胞
skov3、血管内皮细胞ecv及大肠癌细胞ht-29。

取六孔板进行细胞培养，正常对照组：①人神经母细胞瘤细
胞sk-n-sh、实验组：转染后的②人神经母细胞瘤细胞sk-n-sh、③人胚肾上皮细胞293、④卵巢癌细胞
skov3、⑤血管内皮细胞ecv、⑥大肠癌细胞ht-29。

2.5.1、rt-pcr法
按trizol(invitrogen)说明书分别提取各组细胞总rna，逆转录按revertaid first strand cdna svnthesis kit说明书进行，反应体系为20μl（总rna 2μl），pcr反应体系为50μl（模板2μl，taq酶2.5 u，10×buffer 5μl，2 mmol/l dntp mixture 2μl，nep引物上下游各1μl，β-actin
引物上下游各lμl，去离子水36．5μl），反应条件：94℃预变性
3.min，94℃45 s，53℃45 s，72℃1 min，30个循环后，72℃延长10 min。

取产物9μl，1.5%琼
脂糖凝胶电泳鉴定。

引物序列为见2.3。

预期实验结果如下图所示：
图2：6种不同细胞株内的nep表达rt-pcr检测预期结果
1：对照组：①未转染sk-n-sh
2：实验组：②转染后sk-n-sh
3：实验组：③293、④skov3、⑤ecv、⑥ht-29
3.1.2、western blot法
细胞长至80％~90％融合，弃上清，按ripa说明书提取细胞总蛋白，用bca法测定蛋白浓度，12％sds—page电泳。

电转移至硝酸纤维素膜，封闭液封闭1 h，加入(1/1000)一抗，震荡杂交1h，4℃杂交过夜，
tbsb洗涤3次，每次10min，加入辣根过氧化酶标记的二抗，震荡杂交1 h，tbsb洗涤3次，每次10min，用化学发光法检测蛋白质表达，保存结果。

预期实验结果如图3所示：
图3：6种不同细胞株内nep的表达western blot检测预期结果
1：实验组：③293、④skov3、⑤ecv、⑥ht-29
2：对照组：①未转染sk-n-sh
3：实验组：②转染后sk-n-sh
三、检测nep高表达对aβ促神经细胞凋亡的保护作用
（一）、材料
四甲基偶唑氮盐（mtt），大连takara公司产品；elisa试剂盒购自promega公司；β-淀粉样肽
（aβ25-35）： sigma公司产品。

用前处理：向aβ25-35中加入943ul灭菌的生理盐水，配成1mm的浓度，37℃孵育7天，使其老化变为聚集状态的aβ25-35。

4?c贮存备用，用时稀释。

工作浓度为20um，作用时间为48h。

（二）、方法
1.mtt法检测细胞活力
将细胞分为4组：①正常sk-n-sh细胞组，②ppdgf-nep+aβ组、③ppdgf-egfp+aβ组、④aβ组。

将
sk-n-sh细胞按5×103/孔接种于96孔板，培养至50%~60%丰度，分别将重组质粒ppdgf-nep和ppdgf-egfp转染至②、③细胞组，之后加入aβ25~35(20μmol/l)孵育，48ｈ后每孔加入10μl mtt溶液
(5mg/ml)，采用bio-rad酶标仪测570nm波长吸收值。

每组实验设6个复孔，重复3次。

图4 mtt检测细胞预期存活率
1、sk-n-sh细胞组
2、ppdgf-nep+aβ组
3、ppdgf-egfp+aβ组
4、aβ组
2.elisa
按照elisa试剂盒说明书操作，先做标准曲线。

再进行细胞分组：①正常sk-n-sh细篇四：皮内注射用卡介苗说明书
皮内注射用卡介苗说明书
产品名称皮内注射用卡介苗
英文名称 bcg vaccine for intradermal injection
用途分类抗结核及麻风类/结核病
主要成份
系卡介菌种经培养收集菌膜混悬于灭菌保护液内经冻干而制成
用途
预防结核病接种对象为出生3个月以内的婴儿或用旧结核菌素试验阴性的儿童
用法用量
1.接种对象为出生3个月以内的婴儿或用5iu稀释旧结核菌素或5iu ppd（结核菌素蛋白衍化物）试
验阴性（结素或ppd试验后48～72小时局部硬结在5mm以下者）的儿童
2.菌苗稀释用灭菌的1ml注射器将随制品附发的稀释液定量加入冻干皮内注射用卡介苗安瓶中放置
约1分钟摇动安瓶使之溶化后用注射器来回抽动数次使充分混匀每支安瓶自稀释时起必须在半
小时内用完以防污染
3.接种方法先用75℅酒精消毒上臂外侧三角肌中部略下处皮肤然后用灭菌的1ml蓝心注射器（25～
26号针头）吸取摇匀的菌苗皮内注射0.1ml
产品说明
【药理作用】
1.结核菌是细胞内寄生菌因此人体抗结核的特异性免疫主要是细胞免疫接种卡介苗是用无毒卡介菌
(结核菌)人工接种进行初次感染经过巨噬细胞的加工处理将其抗原信息传递给免疫活性细胞使t
细胞分化增殖形成致敏淋巴细胞当机体再遇到结核菌感染时巨噬细胞和致敏淋巴细胞迅速被激活
执行免疫功能引起特异性免疫反应释放淋巴因子是致敏淋巴细胞免疫功能之一其中趋化因子(mcf)能吸引巨噬细胞及中性多核白细胞使其趋向抗原物质与致敏淋巴细胞相互作用的部位移动巨噬细胞
抑制因子(mif)能抑制进入炎症区的巨噬细胞和中性多核白细胞的移动使它们停留在炎症或病原体
聚集的部位利于发挥作用 mif可使巨噬细胞发生粘着并使吞噬反应显著增加巨噬细胞激活因子
(maf)主要作用是增加巨噬细胞的吞噬与消化能力并加强巨噬细胞对抗原进行处理的能力从而提高
抗原的免疫原性作用因此在结核菌侵犯的部位出现巨噬细胞的凝聚大量吞噬结核菌在分枝杆菌生长抑制因子的作用下还能抑制细胞内的结核菌生长及至消化最后消灭形成结核的特异性免疫在
卡介苗进入机体后引起特异性免疫反应的同时还产生了比较广泛的非特异性免疫作用这与t细胞
产生的淋巴因子 t细胞本身的直接杀伤作用及体液免疫因素相互作用有关 2 现用于治疗恶性黑色素瘤或在肺癌急性白血病恶性淋巴瘤根治性手术或化疗后作为辅助治疗均有一定疗效
3 死卡介苗还用于预防小儿感冒治疗小儿哮喘性支气管炎以及防治成人慢性气管炎
【不良反应】
接种2周左右出现局部红肿浸润化脓并形成小溃疡严重者宜采取适当治疗处理接种中偶可发生下列反应：
1.淋巴结炎症：接种后1-2个月左右颈部腋下锁骨上下等淋巴结肿大(大于1.0cm) 反应过强者
淋巴结肿大明显可形成脓疡或破溃或在接种处有小脓疤皮内注射者反应往往较划痕法者强另外旧结核菌素(ot)试验呈阳性者接种后也可产生较强反应
2.类狼疮反应：与结核菌菌株剩余毒力有关
3.疤痕：因丰富的肉芽组织形成疤痕突起有时呈疤痕瘤多见于不作ot试验而直接皮上划痕接种者
【禁忌症】
1.结核病急性传染病肾炎心脏病免疫缺陷症湿疹或皮肤病患者
2.急性疾病烧伤患者疾病恢复期(疾病结束及健康恢复之间) 近期接种天花疫苗泌尿道感染患者
(国外资料)
3.由于使用下列药物或治疗而致免疫应答抑制：烷化剂抗代谢药放射治疗类固醇 (国外资料)
4.由于下列疾病导致免疫应答降低：全身恶性肿瘤 hiv感染γ干扰素受体缺陷白血病淋巴瘤 (国
外资料)
5.由感染性疾病导致的发热或未知病因的发热不得使用卡介苗 (国外资料) 6 免疫力降低的婴儿或儿
童 (国外资料) 慎用
【注意事项】
1.安瓿有裂纹和过期失效者不可使用；
2.接种对象必须详细登记姓名、性别、年龄、住址，菌苗批号或亚批号、制造单位和接种日期；
3.接种的注射器应专用，不得用作其他注射，以防止产生化脓反应，使用时制品应注意避光。

4.接种后约２周局部出现红肿浸润、化脓、形成小溃疡，一般2-12周后结痂。

5 对患有结核病、急
性传染病、肾炎、心脏病、湿疹及其皮肤病、早产儿、难产儿禁用。

6 对已知免疫缺损或正在进行免疫抑制剂治疗及服用皮质类固醇、放射和抗代谢药物者不应接种。