中药牛膝化学成分的分离与鉴定

16619
5214 4317 2316 2311 2118
8102 (1 H ,s)
16814
(to be continued)
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环 (酪氨酸 - 亮氨酸) [ cyclo2(2Tyr2Leu) ] 。
据一致 ,验证了上述推论 。进一步文献检索 ,一得
化合物 2 : 白色针晶 ( MeOH) , mp 24610 ～ 自海洋真菌中的单体化合物的波谱数据与该化合
24710 ℃,茚三酮反应呈阴性 ,6 mol·L - 1 盐酸水 物波谱数基本一致[8 ] ,为同一结构的化合物 。综
同时在1 H21 H COS Y 谱中可以观察到这 2 个质子 间的偶合信号 ,以及二者与 δ4105 (1 H ,m , Tyr -
同时还可以观察到 δ3174 (1 H ,br1s ,Leu - αH) 与 1143 (1 H ,m ,Leu - βH) 、1160 (1 H ,m ,Leu - βH )
牛膝 ( A chy rant hes bi dent at a Bl1) 为苋科多年 生草本植物 ,药材为其干燥的根 ,又名百倍 、怀牛 膝 、鸡 胶 骨 。其 味 甘 苦 酸 , 性 平 , 入 肝 、肾 经 [1 ] 。 《中华人民共和国药典》记载其功能为 :补肝肾 ,强 筋骨 ,逐瘀通经 ,引血下行 。前期曾报到了牛膝中 植物甾酮类 、三萜皂苷类等化合物的研究[2 - 4 ] 。 作者利用反复硅胶吸附柱色谱 ,继续从牛膝中分 离得到 5 个化合物 。通过理化性质及 NMR 、MS 等波谱手段 ,分别鉴定为 : 环 (酪氨酸 - 亮氨酸) [cyclo2(2Tyr2Leu) , 1 ] 、环 ( 亮氨酸 - 异亮氨酸) [ cyclo2(2Leu2Ile) ,2 ] 、杜鹃花酸 ( nonanedioic acid , 3) 、琥珀酸 ( succinic acid ,4) 、正丁基 - β- D - 吡 喃果 糖 苷 ( n2butyl2β2D2f ructopyranoside , 5 ) 。其 中化合物1～3为首次从牛膝中分离得到 。
柱色谱硅胶 (71～50μm ,青岛海洋化工厂) 。 柱色谱试剂 (分析纯 ,康科德科技有限公司) ,石油
醚 (沸程 60～90 ℃,康科德科技有限公司) 。
2 提取分离
牛膝饮片经体积分数为 70 %乙醇回流提取 3 次 ,每次3 h 。提取液减压回收乙醇 。浓缩过的 药液经大孔树脂脱糖后 ,用体积分数为 95 %乙醇 洗脱 ,洗脱液回收溶剂 、浓缩 ,浓缩得水溶液依次 用石油醚 、乙酸乙酯 、正丁醇分步萃取 。乙酸乙酯 萃取物经硅胶吸附柱色谱氯仿 - 甲醇梯度洗脱 , 流分 2 (体积比 100∶2) 经硅胶吸附柱色谱 ,乙酸乙 酯 - 甲醇体积比 30∶1 部分得到化合物 1 ,体积比 20∶1 部分得到化合物 2 ,石油醚 - 丙酮 - 乙酸乙 酯体积比 6∶1∶1 部分得到化合物 3 ;流分 9 (体积 比 100∶9) 得到化合物 4 ;流分 10 (体积比 100∶10) 经硅胶吸附柱色谱 ,氯仿 - 乙酸乙酯 - 甲醇体积 比 9∶1∶1 洗脱 ,得到化合物 5 。
高场区给出 δ3100 (1 H , br1d , J = 1318 Hz , Tyr β′H) 、2169 (1 H , br1d , J = 1318 Hz , Tyr - β′H) ,
Leu - δ1 H ) 、0185 ( 3 H , br1s , Leu - δ2 H ) 均 与 δ1185 (1 H , m ,Leu - γH) 的质子信号发生偶合 ,
16613
5213 4318 2310 2219 2114
8103 (1 H ,s)
16715
Position
Leucine CO NH α β γ δ1 δ2 Isoleucine CO NH
Compound 2
δH
δC
8114 (1 H ,s) 3174 (1 H ,br1s) 1143 ,1162 (1 H ,m) 1185 (1 H ,m) 0188 (3 H ,d) 0185 (3 H ,br1s)
Table 1 The 1 H2NMR and 13 C2NMR chemical shifts of compounds 1 and 2( in DMSO2 d6)
Position
Leucine CO NH α β γ δ1 δ2 Tyrosine CO NH
Compound 1
δH
δC
8103 (1 H ,s) 3147 (1 H ,br1s) 0112 ,0174 (1 H ,m) 1141 (1 H ,m) 0164 (3 H ,d ,J = 610 Hz) 0163 (3 H ,d ,J = 610 Hz)
第 25 卷 第 5 期 2008年5月
沈 阳 药 科 大 学 学 报 Journal of Shenyang Pharmaceutical University
文章编号 : 1006 - 2858 (2008) 05 - 0360 - 04
Vol125 No15 May 2008 p1360
α′H) 氢 信 号 的 偶 合 关 系 , 指 出 分 子 中 存 在 之间的偶合信号 ,以及 δ1143 与 δ1160 之间的偕
—CH2 —CH —基团 ; HMBC 谱中 ,δ2169 与苯环 偶信号 ;将该化合物的13C2NMR 与化合物 1 相比
上 δ13113 碳信号存在远程相关 ,由此 ,推断分子 较 ,发现其与化合物 1 的亮氨酸片段具有相同碳
m , Ile - γ′2 H , Ile - δ′H) 的 2 个甲基信号分别与 δ1123 ( 1 H , m , Ile - β′H ) 、1144 ( 1 H , m , Ile γ′1 H) 的质子信号发生偶合 ,δ1144 与 1121 (1 H ,
δ0112 ( 1 H , m ,Leu - βH) 与 0174 ( 1 H , m ,Leu βH) 间的偶合信号以及 δ0112 与 3147 (1 H ,br1s ,
中药牛膝化学成分的分Байду номын сангаас与鉴定
孟大利1 , 张 毅2 , 李 宁1 , 刘治国1 , 李 铣1
(11 沈阳药科大学 中药学院 ,辽宁 沈阳 110016 ; 21 重庆市药品检验所 ,重庆 401121)
摘要 : 目的 对牛膝 ( Achy ranthes bidentata Bl1) 的化学成分进行分离 、鉴定 。方法 采用硅胶吸附柱 色谱 ,HPLC 等分离手段对牛膝进行分离 ;利用理化性质 、理化反应以及 NMR 、MS 等波谱技术对 化合物进行鉴定 。结果 分离得到 5 个化合物 ,分别鉴定为环 (酪氨酸 - 亮氨酸) [ cyclo2(2Tyr2Leu) , 1 ] 、环 (亮氨酸 - 异亮氨酸) [ cyclo2(2Leu2Ile) , 2 ] 、杜鹃花酸 ( nonanedioic acid ,3) 、琥珀酸 ( succinic acid ,4) 、正丁基 - β - D - 吡喃果糖苷 ( n2butyl2β2D2fructopyranoside ,5) 。结论 化合物 1～3 为首次 从牛膝中分离得到 。首次对化合物 1 和 2 进行了碳谱数据归属 。 关键词 : 牛膝 ; 化学成分 ; 环二肽 ; 有机酸 中图分类号 : R 914 ; R 932 文献标志码 : A
1 仪器与材料
ARX - 300 型核磁共振仪 ( TMS 内标 ,瑞士 Bruker 公司) ,MP - S3 显微熔点测定仪 (温度未 校正 ,日本 Yanaco 公司) , GC - MS 5050A 型质谱 仪 (日本 Shimadzu 公司) 。
牛膝药材购自沈阳市中药饮片厂 ,由本校中 药鉴定教研室许春泉高级工程师鉴定为牛膝 ( A chy rant hes bi dent at a Bl1) 。
3 结构鉴定
化合物 1 : 白色针晶 ( MeOH) , mp 29610 ～ 29710 ℃,茚三酮反应呈阴性 ,6 mol·L - 1 盐酸水 解后对茚三酮反应呈阳性 ,提示该化合物可能为 肽类化合物 。1 H2NMR (DMSO2 d6 ,300 M Hz) 中 , δ8103 (2 H ,s ,2 - N H) 的质子信号 ,结合13C2NMR (DMSO2 d6 ,75 M Hz) 谱 δ16715 、16613 的羰基碳 信号 ,推测分子中存在 2 个酰胺基团 ,提示该化合
解后对茚三酮反应呈阳性 ,提示该化合物可能为 合以上分析 ,鉴定该化合物为环 (亮氨酸 - 异亮氨
肽类化合物 。1 H2NMR (DMSO2 d6 ,300 M Hz) 谱 中 ,δ8114 (1 H ,s) 、8102 (1 H ,s) 的质子信号 ,结合
酸) [ cyclo2(2Leu2Ile) ] 。化合物 1 、2 的1 H2NMR 、 13C2NMR 谱数据见表 1 ,其化学结构式见图 1 。
m , Ile - γ′1 H) 同碳质子间的偕偶也可以同时观察 到 ,此外 ,还可以看到酰胺基团中 δ8102 的氨基
Leu - αH) 间的偶合信号 ,由此可以推断 ,分子中 活泼质子与 δ3168 (1 H ,br1s , Ile - α′H) 质子间的
的另一个氨基酸片段为亮氨酸片段 。根椐以上分 偶合 ,由此可以推断 ,分子中的另一个氨基酸片段
收稿日期 :2007 - 05 - 28 基金项目 :辽宁省科学技术基金资助项目 (20051026) 。 作者简介 :孟大利 (1976 - ) ,男 (汉族) ,辽宁阜新人 ,副教授 ,博士 ,主要从事天然药物的教学与新药研发工作 , Tel. 024 - 23986475 ,E2mail mengdl @1631com 。
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第5期
孟大利等 :中药牛膝化学成分的分离与鉴定
361
物可能是环二肽 。1 H2NMR 谱中 ,δ6188 (2 H , d , J = 817 Hz ,2′,6′- H) 、6163 (2 H ,d , J = 8171 Hz ,
13C2NMR ( DMSO2 d6 , 75 M Hz ) 谱 中 δ16814 、 16619 的羰基碳信号 ,推测分子中存在 2 个酰胺
3′,5′- H) 为 2 个对二取代苯环上的质子信号 , 基团 ,进一步提示该化合物可能是环二肽 。1 H2
δ 9121 (1 H ,s , —OH) 为苯环上的羟基质子信号 ; 1 H COS Y 谱中 ,高场区的质子信号 δ0188 (3 H ,d ,
中存在一个酪氨酸结构片段 。1 H2NMR谱中 ,高 信号 ,结合前面所述 ,可以推断该化合物中存在一
场区给出 2 个甲基质子信号 δ0164 ( 3 H , d , J = 个亮氨酸片段 。1 H21 H COS Y 谱中 ,δ0190 ( 6 H ,
610 Hz , Leu - δ1 H ) 、0163 ( 3 H , d , J = 610 Hz , Leu - δ2 H) ,在1 H21 H COS Y 谱中与 δ1141 ( 1 H , m ,Leu - γH) 的质子发生偶合 ,同时可以观察到
析 ,判断该化合物为环 (酪氨酸 - 亮氨酸) 。其1 H2 为异亮氨酸片段 。文献检索表明 ,该化合物分子
NMR 、13C2NMR 谱数据与文献 [ 5 ] 报道的环 (酪 中亮 氨 酸 和 异 亮 氨 酸 片 段 的 1 H2 NMR 和 13C2
氨酸 - 亮氨酸) 对照基本一致 ,故鉴定化合物 1 为 NMR 分别与文献[ 6 - 7 ]报道中这 2 个片段的数