临床微生物检验采集手册

微生物标本采集
第一章微生物样本采集及要求
1.患者准备（采集前）
1.1.采集标本前,采样人员根据检验申请单检验项目的要求，确认采样计
划并进行适当的准备工作，包括核对医嘱、打印条形码、选择合适的标
本容器、粘贴条形码及指导患者做好采样前的准备工作等。

1.2.样本采集依检验项目的申请，检验申请单提供的信息包括：
●a) 患者姓名；
●b) 患者性别；
●c) 患者年龄或出生日期；
●d) 患者唯一性标识，如病历号；
●e) 就诊病区和病房；
●f) 检验申请者姓名；
●g) 检验申请者科室；
●h) 标本类型；
●i) 标本采集部位；
●j) 检验项目；
●k) 标本采集日期和时间；
●l) 临床诊断和主要临床表现；
●n) 患者和检验申请者的联系电话。

1.3.认真核对患者、标本容器和检验申请是否一致，严防出现差错。

1.4.住院患者
1.4.1.申请单开具：分泌物、脓液、关节液、痰液等开“细菌涂片+培
养”，尿液标本开“尿培养及菌落计数”，血培养开“无菌体液
细菌培养”（血培养需要开一对，也就是两个医嘱），怀疑厌氧
菌开“厌氧菌涂片+培养”。

1.4.
2.检验人员接种标本后，当日报告涂片结果（尿液标本不涂片），
以接收标本之日起3-5天报告培养结果，如有特殊情况需要延长
检测时间，将与临床沟通。

1.4.3.如样本培养阳性，需要后续检测，则由检验人员开具“细菌鉴定
+药敏”并扣除相应费用。

1.5.门诊患者
1.5.1.申请单开具：分泌物、脓液、关节液、痰液等开“细菌涂片+培
养”，尿液标本开“尿培养及菌落计数”，血培养开“无菌体液
细菌培养”（血培养需要开一对，也就是两个医嘱），怀疑厌氧
菌开“厌氧菌涂片+培养”。

1.5.
2.门诊标本在送达医学检验中心时应留下患者或家属的常用联系
方式，检验人员接种标本后，当日报告涂片结果（尿液标本不涂
片），以接收标本之日起3-5天报告培养结果，如有特殊情况需
要延长检测时间，将与临床沟通。

1.5.3.如样本培养阳性，需要后续检测，则由检验人员通知主治大夫后，
联系患者前往医学检验中心开具“细菌鉴定+药敏”并扣除相应费
用。

1.6.标本标识
标签宜由放入冰箱后仍能粘牢的材料制成。

标签贴在容器上,而非容器盖上。

标签上提供的信息至少包括（但不限于）下列内容：
a) 患者姓名、患者唯一性标识；
b) 标本采集日期和时间；
c) 检验项目；
d) 标本类型；
e) 急查标本相应的标识（适用时）。

2.采集容器：
2.1.采样拭子：用于采集含病原微生物标本的拭子，由两部分组成：①
涂抹棒：柄部常为塑料，柄部的一端是具有吸附作用的采样头，采样
头材质包括脱脂棉、合成聚酯纤维、聚酰胺纤维、人造丝和泡沫聚氨酯
等；②手柄：位于柄部的另一端，也可作为转运装置（容器或管）的
帽。

2.2.转运容器：用于盛放转运培养基和送检标本的容器。

该容器应无菌、
无消毒剂及防腐剂、无污染、密封性好及透明以便于从外部观察。

当采
样装置具备密闭功能，且能有效保护样本不被污染时，可作为转运容器
运送标本。

例如，无菌尿杯、痰盒。

2.3.血培养瓶：分为需氧瓶和厌氧瓶，分别注入血液进行需氧和厌氧培
养。

3.采集时机
3.1.在抗微生物药物治疗之前或者在起始治疗后立即采集标本，治疗中
为评估治疗效果或治疗后为评估结局可以进行采样。

3.2.应当尽快在疾病初发时采集首份标本。

3.3.须避免感染部位周围以及感染部位附近皮肤或黏膜定植菌群的污染。

3.4.对于有多种细菌定植的部位，宜选择合适的方法检验特定的病原菌，
并防止非致病定植菌群的污染。

3.5.普通拭子标本不宜用于厌氧菌培养。

3.6.除了血液标本外，其他所有标本进行培养前均应进行革兰染色（尿
培养及菌落计数除外）。

无菌体液（例如胸水、滑膜液、心包液和脑脊
液）宜放入无菌管送检，也可注入一定量（最好10 mL）的样品到血培
养瓶中进行增菌培养。

3.7.外科手术标本，宜送液体或组织做涂片和培养，拭子标本仅用于特
殊情况。

3.8.采集静脉血时，应首先采集血培养标本，再采集用于其他检验的标
本。

4.采集部位
适于进行普通细菌、厌氧菌检验的标本类型见下表：
特定解剖部位中适合/不适合普通细菌培养的标本类型
5.采集方法
5.1.血液
5.1.1.采血时间：在抗菌药物治疗前，于发热初期或高峰时抽血。

5.1.2.采血频率：对于怀疑菌血症的成年患者，推荐同时在不同部位采
集2〜3套（每套包括一瓶需氧瓶、一瓶厌氧瓶或者2瓶需氧瓶）；
对于感染性心内膜炎和真菌血症则应多次采集。

5.1.3.采血量：以培养基的1/10为宜，成人一次采血8〜10 ml。

5.1.4.标本保存：采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置于室
温，切勿放入冰箱。

冬季血培养瓶在送检过程中应采取一定的保
暖措施。

5.1.5.血培养采集指征
可疑感染患者出现以下任一指征时，可考虑采集血培养：
a )体温＞38℃或＜36℃;
b )寒战；
c ）外周血白细胞计数增多（计数＞10.0×109/L，特别有“核左移”时）或
减少（计数＜4.0×109/L);
)<32 mmHg ;
d ）呼吸频率＞20次／ min 或动脉血二氧化碳分压（ PaCO
2
e )心率＞90次／ min ;
f )皮肤黏膜出血；
g )昏迷；
h ）多器官功能障碍；
i )血压降低；
j )炎症反应参数如 C 反应蛋白、降钙素原（ PCT )、1,3-β-D ﹣葡聚糖（G 试验）升高等。

血培养适应证及采集套数
血培养推荐的采血量
5.2.上呼吸道标本
鼻咽标本：将鼻咽拭子缓缓地伸进鼻孔直至鼻咽喉部（注意：不可用力），轻轻转动，并于该深部停留20〜30 s,然后迅速地抽出（注意：避免受口或咽喉中细菌的污染）。

5.3.下呼吸道标本
5.3.1.痰：采集标本以晨痰为好。

支气管扩张症患者清晨起床后进行体
位引流，可采集大量痰标本。

5.3.2.自然咳痰法：在留取痰之前，用清水反复漱口，从气管深部咳出
痰，吐入无菌容器内。

5.3.3.支气管镜下采集法：在病灶附近用导管吸引或用支气管刷直接取
得标本。

5.3.4.气管穿刺法：在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本,适用于厌氧
菌培养。

5.4.穿刺液标本
5.4.1.采用无菌方法采集体内可疑感染部位的液体约 2 ml，注入无菌
试管或直接送检针管（注意锐器防护），或抽取穿刺液2〜5 ml
注入血培养瓶，混匀，立即送检。

5.4.2.标本保存：采集标本后立即送到实验室，若不能及时送检可置于
室温，放置时间不应超过2 h。

5.5.尿
5.5.1.女性：先以肥皂水清洗外阴部，再以无菌水冲洗，用无菌纱布擦
拭，以手指将阴唇分开排尿，弃去前段尿，留取中段尿5-7 ml于
无菌尿杯内。

5.5.2.男性：翻转包皮，用肥皂水清洗尿道口，用清水冲洗，留取中段
尿。

5.5.3.儿童、婴儿：先以无菌生理盐水棉球洗净其外阴部或外生殖器，
将无菌尿杯或瓶口对准尿道口，以胶布固定于皮肤上，待尿排出
后送检。

5.5.4.膀胱穿刺：此法用于厌氧菌培养。

耻骨上皮肤经碘酊消毒后，再
以75%乙醇擦拭，用无菌注射器行膀胱穿刺，吸取尿液后排去注射
器内的空气，针头插于无菌橡皮塞上及时送检，2 h内进行接种。

5.6.脓及创伤标本
5.6.1.封闭性脓肿：消毒局部皮肤或黏膜表面后，用无菌注射器抽取，
用无菌手术刀切开粟粒状脓肿（miliary abscess），使用无菌注
射器和针头采集露出的标本。

将脓液注入多功能培养瓶或无菌试
管内送检。

疑为厌氧菌感染时，应做床边接种或置厌氧运送培养
基内送检。

5.6.2.开放性脓肿和脓性分泌物：用无菌盐水或75%乙醇擦去表面渗出
物，用拭子深入溃疡深处采集2支拭子，1支为涂片检查用，1支
为培养用。

5.6.3.未引流的脓肿：使用无菌注射器和针头，按无菌操作技术，从中
采集脓性物。

用无菌手术刀切开粟粒状脓肿，使用无菌注射器和
针头采集露出的标本。

6.特殊标本——厌氧菌培养
6.1.采集要求：
6.1.1.采集原则：避开正常菌群的污染，避免在有需氧菌寄生的部位采
集标本。

应从无正常菌群寄生的部位，如胸腔和腹腔或深部脓肿
等部位采集厌氧菌检验标本。

6.1.2.严格消毒，避免污染：经皮肤黏膜组织采集标本时，须严格消毒，
以防止皮肤黏膜表面正常菌群的污染。

6.1.3.厌氧菌标本的采集多采用无菌针筒穿刺法，抽取深部脓液或体液。

6.1.4.尽量避免接触空气。

6.2.采集部位
适合或不适合厌氧菌培养的标本类型
6.3.采集方法：
6.3.1.血液：怀疑菌血症、败血症或厌氧菌感染时，可抽取血液做厌氧
菌培养。

采血时间为抗菌药物治疗前，寒战前、寒战时或寒战后
lh内采血可获得高的阳性率。

为提高厌氧菌培养的阳性率，应多
次采血培养，并增加采血的量（成人一次采血8—10 ml）。

6.3.2.深部脓肿：封闭性脓肿用注射器抽取脓肿边缘靠近正常组织的脓
液做厌氧菌培养。

已破溃者，应用无菌棉拭去除表面的脓液和痂
壳，取深部分泌物做检查。

6.3.3.呼吸系统：怀疑支气管和肺部厌氧菌感染时,应从环甲膜以下抽
取肺部分泌物，或直接肺穿刺抽取分泌物，也可用带有保护取样
刷不被口咽部正常菌群污染的套管，通过纤维支气管镜从肺部抽
取痰液或分泌物。

6.3.4.泌尿系统：怀疑肾脏、输尿管或膀胱厌氧菌感染时，应从耻骨联
合上方经皮肤穿刺膀胱抽取尿液。

6.4.运送方法：
6.4.1.送检标本也必须保持在无氧条件下进行。

6.4.2.针筒运送法：针筒可用来运送各种液体标本，如血液、脓液和各
种穿刺液。

用无菌针筒抽取标本后，排除针筒内的空气，针尖插
入无菌橡皮塞，隔绝空气，尽快运送至实验室。

6.4.3.厌氧标本送至实验室后，应尽快处理、接种，一般应在20〜30 min
内处理完毕，最迟不得超过2h，否则大部分厌氧菌死亡。

运送、
处理和保存厌氧标本时室温即可，不主张冷藏，因低温对某些厌
氧菌不利，而且低温时氧气的溶解度增高。

7.标本采集量
采集足够量的标本用于常规细菌学检验，至少送检 0.5 mL 或者 0.5 g （除外特殊标本）。

当标本体积不足时，与临床沟通，并根据医嘱选择优先检验项目。

脑脊液标本通常2 mL～5 mL；胸水和腹水 10 mL； BALF 10 mL～20 mL （≥5 mL）；脓液 2 mL～5 mL；羊水、胆汁、关节穿刺液、心包液、胸水、滑膜液大于1 mL；腹透液50 mL；眼前房液大于0.1 mL，玻璃体洗液大于1 mL。

8.标本转运
8.1.标本的转运应由经过培训的专人负责。

8.2.标本采集后，应减少运送环节，在规定时间内运达实验室，并尽可
能缩短转运时间。

8.3.用于细菌学检验的标本：
8.3.1.用于普通细菌学检验的标本：宜在2 h内送到实验室。

如果转
运时间超过 2 h，宜使用转运培养基或在冷藏条件下转运；一般
而言，用于细菌培养的标本室温下保存不能超过 24 h；血培养
标本不可以冷藏转运。

8.3.2.标本量较少的体液标本（＜ 1 mL）或组织标本（＜ 1 cm3）：
宜在 30 min 内送到实验室。

大体积的标本或采集于保存培养基
中的标本，可以保存 24 h。

8.3.3.可能分离出对周围环境敏感细菌的标本：采集后立即送检。

对
周围环境敏感的细菌如百日咳鲍特菌、志贺菌属、淋病奈瑟菌、
脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和厌氧菌。

8.3.4.可能分离出对低温敏感细菌的标本：采集后不宜冷藏，如脑脊
液、生殖道、眼部、中耳及呼吸道标本。

对低温敏感的细菌如淋
病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌和肺炎链球菌。

8.3.5.用于厌氧菌培养的标本：在常温下转运，标本量较少的标本宜
在采集后 30 min 内送到实验室，转运过程中标本尽可能与空气
隔绝。

8.3.6.实验室间转运标本时，应按照国家有关生物安全标准标识、包
装标本，运送过程符合生物安全规范的要求。

运送者应接受培训，经考核合格后方可上岗，运送期间配备必要的保护屏障。

8.3.7.对于检验高致病性病原微生物标本的转运应当按照《可感染人类
的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》中的相
关要求进行。

微生物学实验室检验标本的采集、转运和储存
9.标本接收
9.1.标本到达实验室后记录接收时间和处理时间。

9.2.接收标本时仔细核对标本和检验申请单。

9.3.如果信息不全，实验室联系标本采集部门以获得缺失的信息。

9.4.如果标本标记错误或无患者姓名，重新采集标本；当标本不能重新
采集时，才允许对标记错误的标本进行重新标记；如果是重新标记的
标本，在检验结果报告中明确标出。

9.5.及时处理送检标本，并尽快将所出现的问题通知相关科室。

10.标本拒收
10.1.拒收标本标记错误或无患者姓名的标本。

10.2.拒收标本类型和申请检验项目不符的标本。

10.3.拒收容器破损的标本，拒收容器表面严重污染的标本，拒收使用不
符合专业规范容器采集的标本。

10.4.拒收质量评估不合格的标本，合格的标本需满足相应的质量判断方
法，如：痰（除用于军团菌和分枝杆菌检查的标本外）：鳞状上皮细
胞＜10/低倍视野。

10.5.采集部位、转运容器以及转运条件不符合要求，宜重新采集标本。

其他拒收原因及处理方法见下表。

10.6.标本拒收时应联系临床，向其解释拒收的原因并要求其重新采集合
格标本。

第三章微生物实验室检验项目
第四章微生物“危急值”项目血培养阳性、脑脊液涂片和培养阳性。