红细胞凝集抑制试验影响因素的分析

鸡红细胞凝集抑制试验影响因素的分析
红细胞凝集试验和红细胞凝集抑制试验是兽医界相关实验室最为常用的实验之一。

由于其具有便于操作、快捷、成本较低的特点，是畜禽疫病诊断及免疫状态监测特别是禽流感、新城疫等重大动物疫病免疫监测最为重要的方法之一。

影响血凝抑制试验的因素：
1、对于试验器材及试验环境的要求
实验时应选用数字式单道和多道移液器，平时要做到移液器的效验及保养工作，这对保证移液器的准确性非常重要。

每次使用完毕，要将移液器量程调至最大刻度，以保证移液器内弹簧的最好灵敏性。

实验时所用的抗原应选用国家指定单位生产的标准抗原，这对于保证实验结果的准确性和各单位所做的实验结果的可对照性非常重要。

实验时的室内温度不宜过高或过低，应配备有温度控制设备或恒温箱。

96孔v型微量血凝板如不具备较好的洗涤设施时，建议使用一次性96孔v型微量血凝板。

2、1%红细胞悬液的配置
配置血凝抑制试验用的红细胞最好选用成年SPF公鸡，抗凝剂不要保存时间时间过长。

红细胞的浓度要尽量准确，一免不同实验室读出结果有较大差距。

如果红细胞配置浓度偏低，血凝价可能偏高，血凝抑制价可能偏低。

如果红细胞配置浓度偏高，血凝价可能偏低，血凝抑制价可能偏高。

红细胞离心洗涤结束后，要将洗头放入离心管的最底部来吸取红细胞进行稀释配制，如随意从红细胞液体上层吸取血
细胞进行稀释配制，将会造成配置的血细胞浓度偏低，因洗涤红细胞后弃去的PBS液或生理盐水会有一些残留在红细胞上层。

3、标准抗原对试验结果的影响
四单位标准抗原配置的准确与否是血凝抑制试验中非常重要的一环。

标准抗原血凝单位的高低对实验结果有很大影响，如果标准抗原血凝价偏高，测定的血清抗体效价将偏低，反之则待测定的血清的抗体效价偏高。

所以标准抗原配置及检测的准确性对实验结果将产生较大的影响。

使用过的标准抗原再次使用时，应重新进行检测。

未检测抗原血凝效价，即按前一次检测抗原的血凝单位进行配制标准抗原，这样的血凝抑制试验结果是不准确的。

因为抗原的凝集价和每次配制的红细胞的质量及浓度都存在着变化的因素，极有可能影响血凝试验的结果。

所以重新进行试验时，都要对抗原的血凝单位进行重新检测，再进行血凝抑制试验，才能消除此项影响试验的因素。

4、试验时操作的影响
(1)试验操作时要小心谨慎，对每一步骤的反应时间的严格控制。

（2）1%红细胞每次使用时要混匀。

（3）用移液器加液时要注意不要将液体加到反应孔外。

并要注意每一次加液和稀释时移液器吸取剂量的一致性。

（4）使用振荡器时，要注意不要过于剧烈以免使液体溢出。

（5）移液器有两个阻力档位，要正确使用移液器。

（6）操作时要注意滴头内液面的变化情况，并且每次加样时，移
液器滴头不要接触到孔内的液面。

5、试验结果的判定
试验时每批样品均需设立标准阳性血清、阴性血清和稀释液对照。

血凝试验结果要求对完全血凝的标准抗原最高稀释倍数为一个血凝单位，因此判定时，一定要严格按照对完全血凝的标准抗原最高稀释倍数的结果进行血凝单位的判定，才不至于出现标注抗原血凝单位检测误差，影响血凝抑制试验结果。

试验时稀释液对照孔凝集，或标准抗原孔不凝集，整个试验不成立。

当稀释液被细菌污染或血清受细菌污染变质时，会对试验结果产生较大的影响。

整个试验应该严格按照试验要求的时间来进行操作，抗原与抗体作用时间过长或过短对实验结果观察有影响，试验时间过短，结果不能判定也不准确；时间过长，红细胞易变性，超过判定结果时间判定或不到判定时间判定都会对结果产生较大影响。

准确的试验结果为疫病的防治提供重要的科学依据。

对畜禽的免疫状态进行监测，对于保护畜禽健康，防治重大动物疫病具有十分重要的作用。

对于达不到免疫保护要求的畜禽要及时进行补免，并查明原因以便对免疫计划进行及时的修改。