液相色谱柱维护保养及仪器冲洗

液相色谱柱维护保养及仪器冲洗
注意：每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书
色谱柱维护保养是很重要的，关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性，所以任何人用过色谱柱之后，一定要对色谱柱进行保养，管理人员和使用者互相监督。

总的原则是色谱柱要轻拿轻放，避免损坏填料；另外没有使用的情况下，一定要保证两端的堵头封好。

对于具体的色谱柱，下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项，以便使用者参考。

对于未启用的新的色谱柱，先用甲醇或乙腈以小流速（0.2ml/min缓慢升高到
0.5ml/min ）不接检测器冲洗色谱柱30分钟后，将色谱柱与检测器连上，流速调为
1.0 ml/min冲洗色谱柱60分钟，然后不断降低有机相的比例（如80%、50%、 10%甲醇或乙腈）各冲洗至少 30分钟。

若色谱柱暂时不用，则将色谱柱保存在高比例有机相中（如80%甲醇或乙腈，或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中）；色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂（将缓冲盐溶液换成水）冲洗色谱柱15分钟，然后再换成流动相进行样品分析。

样品分析完后，色谱柱维护与保养方法：
流动相中若含酸、碱、盐类物质，则要先用10%甲醇或乙腈冲洗，1.0ml/min 的流速冲洗至少30min,再用80%甲醇或乙腈冲洗至少30min,柱子保存在80% 甲醇或乙腈里（具体问题具体分析，洗脱程序可以是梯度洗脱程序，注意如果最后色谱柱保存的是高有机相，第二天用之前一定要用高水相过渡一下，再换成流动相）。

如柱子长时间未用，则柱子保存在 100%的甲醇或乙腈里。

对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等，柱子应采用梯度洗脱，一般用乙腈-水系统（水：90-10；乙腈：10-90）冲洗时间要稍长些，然后保存于90%乙腈。

需要特别强调的是，目前所有的C18柱均不能用纯水进行长时间（1小时以上）冲洗，除非有专门耐水的专用柱，否则，用纯水长时间冲洗色谱柱，会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷，损坏色谱柱。

大多数反相色谱柱的 pH 稳定范围是2~8，有的 pH 稳定范围会宽，具体 pH 稳定范围参照色谱柱说明书，当分析条件的 pH 值偏小或偏大时，可选择 pH 稳定范围宽的柱子进行分析，否则，会损坏色谱柱。

在每次进行样品分析时，要保证流动相（包括盐、缓冲盐、酸等）与色谱系统及柱内的保存液要互溶，如不能互溶，则需要用一定比例的有机溶剂（不低于10% ）或与分析流动相相当的有机溶剂对柱子进行过渡，否则，流动相中的盐会在系统与柱内析出，影响样品分析或损坏柱子。

硅胶柱、正相手性色谱柱【包括 AS-H 、 AD-H 、OD-H 系列， 5DMB 、 5TBB 系列，OA系列（如 OA-3100、OA-3300 ）】
对于未启用的新的色谱柱，在保证系统是正相的情况下，可先用异丙醇小流速（流速为 0.1~0.3ml/min 】冲洗色谱柱约 15 分钟，然后换上正相流动相平衡进行色谱分析。

硅胶柱及正相手性柱不能过水相（对于 sepax 系列的硅胶柱，可以过低比例的水相（有机相不低于 50% 】】，接上色谱柱之前要保证液相色谱系统中的所有管路为正相流动相【如是不含盐的反相溶液（如水 /乙腈；水 /甲醇】，先用异丙
醇冲洗所有管路，然后用正相流动相冲洗所有管路，最后再接上色谱柱；若反相流动相中含有缓冲盐（如缓冲盐 /乙腈；缓冲盐 /甲醇】，先用纯水冲洗 HPLC 系统，然后用异丙醇冲洗所有管路，最后用正相流动相冲洗，再接上色谱柱。

】使用结束后，先用异丙醇冲洗色谱系统与色谱柱，再用色谱级的正己烷冲洗色谱柱，（或者直接用正己烷－异丙醇（ 90：10 】冲洗，并保存在正己烷－异丙醇
（ 90： 10 】中】。

如长时间未用，则保存在正己烷中。

需要特别强调的是，冲洗硅胶柱时，不能用纯水或含水的有机溶剂或缓冲盐体系冲洗色谱柱，只能用纯有机溶剂冲洗色谱柱（对于 sepax 系列的硅胶柱可以用不低于 50% 有机相冲洗色谱柱】，最后保存在纯的有机溶剂中。

在进行样品分析前，一定要保证流动相与色谱系统及色谱柱柱内的保存液要互溶，如不互溶，则需要用异丙醇过度，否则，会影响色谱系统与损坏柱子。

反相手性色谱柱（如：CHIRALCEL OZ-3R ）:同C i8柱阴离子柱和阳离子柱：目前常见的阴子柱有 waters IC-Pak TM anion ,阳离子柱有磺酸基阳离子柱与waters 阳离子交换柱（钙型）。

对于 waters IC-Pak TM anion 和 waters 阳离子交换柱（钙型），新柱子使用前用高纯水小流速（ 0.2ml/min 缓慢升高到 0.5ml/min ）冲洗约 30 分钟，然后再换成流动相平衡色谱柱。

在冲洗色谱柱之前，要保证整个色谱系统为纯水相。

对于磺酸基阳离子柱（含有硅胶基柱的），使用前用甲醇或乙腈小流速冲洗30 分钟，然后高纯水替换系统冲洗，然后接上色谱柱。

分析完样品后，对于 waters IC-Pak TM anion 和 waters 阳离子交换柱（钙型）用高纯水冲洗色谱柱，色谱柱最后保存在纯化水中。

对于磺酸基阳离子柱，用50%的乙腈或甲醇冲洗色谱柱 30 分钟，最后保存在甲醇或乙腈中（参照柱子说明书）。

冲洗所用流速根据柱子耐压情况进行调整。

需要特别强调的是 waters IC-Pak TM anion 和 waters 阳离子交换柱（钙型）是不能过有机相（纯有机溶剂或有机溶液），否则会损坏色谱柱。

氨基柱、氰基柱、苯基柱及 C8 柱
目前所使用的氨基柱、氰基柱、苯基柱及 C8 柱基本都是使用反相系统，其操作方法与维护保养与 C18 相同。

对于新碰到的别的型号的色谱柱，如本规程没有说明时，要参照色谱柱说明书具体问题具体分析。

液相仪器的冲洗
1、冲洗色谱系统（具体情况具体分析，可针对缓冲盐浓度较高的流动相）
一般做完试验冲洗完色谱柱后，换上两通，将各通道放于 10%乙腈中冲洗至
少 30 分钟（若原色谱系统中流动相含盐，则用高纯水（有时候用温水效果更好）冲洗至少 30 分钟后再用 10%乙腈冲洗）。

若仪器长时间不用，则将仪器保存于 80%乙腈中。

2、清洗进样针、柱塞杆
洗针液应选择能较好溶解样品的溶剂（如该样品在 70%甲醇中溶解，则洗针
液应选择 70%甲醇或更高比例的甲醇）；清洗柱塞杆的溶剂（为了清洗流动相中析出的盐），一般选择低比例的有机相，如 10%甲醇或乙腈。

3、仪器的钝化色谱泵溶剂过滤头、进出口阀及管路（包括进样器和检测池）若被污染，系统应做清洗和钝化处理。

一般采用 30%磷酸水溶液作为清洗剂，用 6mol/L 硝酸作为钝化剂，先清洗再钝化。

清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢。

钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜。

30%磷酸水溶液制备：取 85%浓磷酸 35ml 与 65ml 水混匀。

6mol/L 硝酸的制备：取浓硝酸 40ml 与 60ml 水混匀。

方法：将色谱柱取下，用两通连接进样器和检测器，将所有吸滤头放入高纯水中，以 1.0ml/min 流速过渡（至少 30 分钟），待管路中有机溶剂洗脱干净；再换用 30%磷酸清洗系统（约 45分钟），再换高纯水冲洗，直至出口水 pH 值约为 6〜7（用pH试纸测试），清洗完成；然后换用6mol/L硝酸冲洗系统（约45分钟）, 再换高纯水冲洗，直至出口水pH值约为6〜7,钝化完成。

用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用。

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