实验一高效液相色谱法测定萘
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
２. 样品： 井水直接取4.00ml稀释至100ml；河水过滤 后取10ml，稀释至100ml。
３. 仪器检测条件
元 光 灯电 波长 通 火焰 燃烧器高
素源 流
带
度
Mg Mg 1.０ 285.2 2A 乙炔／ ５～６
灯 mA nm
空气 mm
按照上述条件，根据仪器操作步骤依次从低 到高浓度测定标液和样液。
二实验原理将样品试液吸入空气乙炔火焰中在火焰的高温下镁化合物离解为镁基态原子基态原子蒸气对镁空心阴极灯发射的特征谱线产生吸收
实验 一 高效液相色谱法测定萘
一、实验目的
1. 认识高效液相色谱仪, 掌握高效液相色谱仪的 基本操作；
2. 掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的 原理；
3. 掌握外标法进行定量分析的方法。
4. 测定 依次从低到高浓度测定标液和样液（最佳条件
选择方法见说明书）。
5. 关机 ⑴“状态检查（工作选择）”置“T（能量）”，
吸喷蒸馏水1min，清洗燃烧器；
⑵依次关乙炔钢瓶总阀、分阀和主机燃气针阀； ⑶依次关空压机、辅助气和助燃气针阀； ⑷关灯电源、总电源，其它复原。
6. 注意事项 ⑴仪器废液管应加水封，换灯或调试时，“状
2. 试剂:甲醇：色谱纯；二次蒸馏水；萘：AR 级。
四、实验步骤
1.色谱操作条件： 色谱柱：C18柱； 流动相：甲醇：水＝80：20 流速：1mL/min 检测波长：254nm 柱温：40℃； 进样量：20μL。
2. 标准溶液配制； 3. 样品溶液的配制； 4. 进样并记录色谱图
五、数据处理与分析
三、仪器与试剂 １、仪器：TAS-986型/GGX-Ⅱ型原子吸收分光
光度计 ２、试剂：10µg/ml Mg标准液
四、实验步骤
１. 配制Mg标准系列 取10µg/ml Mg标准液0.50、1.00、0.50、 2.00、2.50ml，分别置于5个50ml容量瓶 中，用蒸馏水稀释至刻度摇匀，得Mg标准 系列。
或“自吸”扣背景，并输入适当的氘灯电流 或
窄脉冲电流，在能量窗口再进行调节和能量 自动平衡。若不进行背景校正，本步可省去。
７. 击“参数”按钮→在常规界面输入“测量重 复次
数”、“采样间隔”、及“采样延时参数”； 在显
示界面输入“吸光度显示范围”及“页面更 新时
８.击“样品”按钮→选择“校正方法”、“曲 线方
选 择）”检查负高压与±15V电源是否正常。
3. 点火 ⑴关紧主机上各气体调节针阀，将“空气-笑 气” 钮旋至“空气”，开排废气装置； ⑵开空压机，调空气输入压为2～3kg·cm-2； ⑶打开助燃气针阀，开大至限压开关被启动 后，调助燃气流量； ⑷依次打开乙炔钢瓶总阀、分阀，调节乙炔 输出压力0.8 kg·cm-2，调燃气流量后点火。
Pi(%)A Asi ms100
实验 二 内标法测定联苯
一、实验目的
1. 进一步熟悉高效液相色谱仪的基本构造与一 2. 般使用方法；
2. 理解内标法的测定原理和优点；
3. 初步学会设计色谱法进行样品测定的实验步 骤，并以萘为内标物测定样品中联苯的含量。
二、实验原理
在一定的色谱操作条件下，每种物质有一定 的保留时间，而响应值与进样量成线性关系。 内标法也叫5nm处有最大吸收峰，其吸光度与 浓度的关系服从朗伯－比尔定律。
三、仪器与试剂
1.仪器： UV1600紫外分光光度计；10mL容量
2.
瓶7个；20 mL、5 mL吸量管各1支。
2. 试剂: 0.1mol•L-1NaOH溶液;苯甲酸钠(AR); 蒸 馏水。
四、实验步骤
1. 苯甲酸钠贮备液的配制：称量经过干燥的苯 甲酸钠适量于1000mL容量瓶中，用水溶 解，并定容。
实验 四
原子吸收光谱法测定 井水、河水中镁
一、实验目的 １.学会原子吸收光谱法测定金属元素的原理与
方法；
２.了解原子吸收分光光度计的基本构造，初步 熟悉其操作方法；
３.掌握火焰法测镁的条件选择。
二、实验原理 将样品试液吸入空气–乙炔火焰中，在火焰的高 温下，镁化合物离解为镁基态原子，基态原子蒸 气对镁空心阴极灯发射的特征谱线产生吸收。将 测得的试样溶液的吸光度扣除试剂空白的吸光度， 利用标准曲线法，确定试液中的镁含量。
1.00
定容（mL)
10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
10.0
C（ppm）
0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0
X1
X2
五、数据处理与分析
1. 标准曲线的绘制：以苯甲酸钠系列标准溶液 的吸光度为纵坐标，相应的浓度为横坐标， 绘制作A-C标准曲线。
2. 样品溶液中苯甲酸钠含量计算：从A-C标准 曲线上查出X值，从而求出样品中苯甲酸的 含量。
程”、“ 浓度单位”→“下一步”→选择 “标准系列样品个数”，输入“标准系列
样品
浓度值” →“下一步”→选择“未知样品 个数”
→ “完成”。
９.顺序打开空压机“风机开关”→ “工作开 关”，
10.打开乙炔钢瓶总阀，检查并调节出口压力为 0.05 ~ 0.09 Mpa之间（推荐压力0.06 Mpa）。
2. 苯甲酸钠工作溶液的配制：取20.00mL贮备 液稀释定容至1000mL。
3. 苯甲酸钠系列标准溶液的配制：分别取苯甲 酸钠工作溶液0-5.00 mL按下表配制。
容量瓶编号
123456
7
8
工作液（mL）
0 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 4.00
4.00
加入NaOH（mL） 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
2. 标准溶液配制； 3. 样品溶液的配制； 4. 进样并记录色谱图
五、数据处理与分析
P i(% A A iis )m m ism m iisA A iis100
实验 三 紫外吸收光谱法测定苯甲酸
一、实验目的
1. 了解紫外吸收光谱仪的基本构造与一般使用 2. 方法；
2. 能用于测定样品中苯甲酸的含量。
五、数据处理 采用标准曲线法处理，样品稀释倍数。
附一
TAS-986 原子吸收分光光度计火焰法操作规程
１.正确连接仪器及计算机各连线和插头，确认 仪器电源开关处于“关”位，再开启稳压器
电 源。
２.顺序打开打印机、显示器、计算机电源开 关，等待计算机处于“Windows”界面。
３.装上待测元素空心阴极灯，并记下灯位。打 开TAS-986主机电源开关，双击“AAwin”软
三、仪器与试剂
1.仪器:Shimadzu LC-10ATvp高效液相色谱仪；
2.
紫外吸收检测器（254mm）；C18柱，
3.
25cm×4.6mm；微量注射器；超声波
清
4.
洗器1台；溶剂过滤器1套。
2. 试剂:甲醇：色谱纯；二次蒸馏水；萘、联 苯：AR级。
四、实验步骤
1.色谱操作条件： 色谱柱：C18柱； 流动相：甲醇：水＝90：10 流速：1mL/min 检测波长：254nm 柱温：40℃； 进样量：20μL。
二、实验原理
在一定的色谱操作条件下，每种物质有一定 的保留时间，而响应值与进样量成线性关系。 外标法也叫标准曲线法。
三、仪器与试剂
1.仪器:Shimadzu LC-10ATvp高效液相色谱仪；
2.
紫外吸收检测器（254mm）；C18柱，
3.
25cm×4.6mm；微量注射器；超声波
清
4.
洗器1台；溶剂过滤器1套。
18. 整理实验室卫生、检查实验室水、气、电安 全。
附二 GGX-Ⅱ型原子吸收分光光度计操作规程
1. 开机前准备 ⑴将主机各操作钮置于适当位置； ⑵安装空心阴极灯。
2. 开机 ⑴依次开稳压器、总电源、调灯电流后预热 15～20分钟； ⑵选择分析线及狭缝宽度后，调灯及燃烧器 的位置，调负高压，用“状态检查（工作
“测量元素”、“样品名称”、“分析
15. 在测量表格上击右键→选择“表格设置” →
选择所需显示和打印的项目→在任务栏击 “打印”按钮→选择所需打印的内容→击 “确 定”打印相应内容。
16. 关闭乙炔钢瓶总阀，烧去管路中余气，待 火焰熄灭后按空压机“放水阀”放水→关
闭
17. 退出AAWin操作软件→关闭TAS-986主机 电源→关闭打印机、计算机、稳压器电源。
态
检查（工作选择）”应置“T（能量）”； ⑵临时停电，须先关闭燃气，再将各开关恢复
４.自检完成后，设定和选择工作灯和预热灯 → “下一步” →修改或输入正确的灯电流、 分光带宽、燃气流量、燃烧器高度和位置 → “下一步“寻峰”→ “下一步”→“完
成”。
５.在任务栏击“仪器”，选择“燃烧器参数”， 调 节火焰原子化器的前后、上下及角度位 置，其对准光路。
６.击“仪器”→选择“扣背景方式”→选择 “氘 灯”
11.击“点火”按钮点火→吸喷蒸馏水1 ~ 2 分钟 →
吸喷标准系列空白溶液击“校零”按钮自动调 零。
12.击“测量”按钮→顺序吸喷标准系列溶液并在 测
13. 吸喷未知样品溶液，击“开始”按钮测 量未
知样品。全部未知样品测量完毕后击 “终
止”按钮退出测量→吸喷蒸馏水1 ~ 2 分 钟清洗燃烧器。
14. 击“应用”按钮→选择“实验记录” → 输入
３. 仪器检测条件
元 光 灯电 波长 通 火焰 燃烧器高
素源 流
带
度
Mg Mg 1.０ 285.2 2A 乙炔／ ５～６
灯 mA nm
空气 mm
按照上述条件，根据仪器操作步骤依次从低 到高浓度测定标液和样液。
二实验原理将样品试液吸入空气乙炔火焰中在火焰的高温下镁化合物离解为镁基态原子基态原子蒸气对镁空心阴极灯发射的特征谱线产生吸收
实验 一 高效液相色谱法测定萘
一、实验目的
1. 认识高效液相色谱仪, 掌握高效液相色谱仪的 基本操作；
2. 掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的 原理；
3. 掌握外标法进行定量分析的方法。
4. 测定 依次从低到高浓度测定标液和样液（最佳条件
选择方法见说明书）。
5. 关机 ⑴“状态检查（工作选择）”置“T（能量）”，
吸喷蒸馏水1min，清洗燃烧器；
⑵依次关乙炔钢瓶总阀、分阀和主机燃气针阀； ⑶依次关空压机、辅助气和助燃气针阀； ⑷关灯电源、总电源，其它复原。
6. 注意事项 ⑴仪器废液管应加水封，换灯或调试时，“状
2. 试剂:甲醇：色谱纯；二次蒸馏水；萘：AR 级。
四、实验步骤
1.色谱操作条件： 色谱柱：C18柱； 流动相：甲醇：水＝80：20 流速：1mL/min 检测波长：254nm 柱温：40℃； 进样量：20μL。
2. 标准溶液配制； 3. 样品溶液的配制； 4. 进样并记录色谱图
五、数据处理与分析
三、仪器与试剂 １、仪器：TAS-986型/GGX-Ⅱ型原子吸收分光
光度计 ２、试剂：10µg/ml Mg标准液
四、实验步骤
１. 配制Mg标准系列 取10µg/ml Mg标准液0.50、1.00、0.50、 2.00、2.50ml，分别置于5个50ml容量瓶 中，用蒸馏水稀释至刻度摇匀，得Mg标准 系列。
或“自吸”扣背景，并输入适当的氘灯电流 或
窄脉冲电流，在能量窗口再进行调节和能量 自动平衡。若不进行背景校正，本步可省去。
７. 击“参数”按钮→在常规界面输入“测量重 复次
数”、“采样间隔”、及“采样延时参数”； 在显
示界面输入“吸光度显示范围”及“页面更 新时
８.击“样品”按钮→选择“校正方法”、“曲 线方
选 择）”检查负高压与±15V电源是否正常。
3. 点火 ⑴关紧主机上各气体调节针阀，将“空气-笑 气” 钮旋至“空气”，开排废气装置； ⑵开空压机，调空气输入压为2～3kg·cm-2； ⑶打开助燃气针阀，开大至限压开关被启动 后，调助燃气流量； ⑷依次打开乙炔钢瓶总阀、分阀，调节乙炔 输出压力0.8 kg·cm-2，调燃气流量后点火。
Pi(%)A Asi ms100
实验 二 内标法测定联苯
一、实验目的
1. 进一步熟悉高效液相色谱仪的基本构造与一 2. 般使用方法；
2. 理解内标法的测定原理和优点；
3. 初步学会设计色谱法进行样品测定的实验步 骤，并以萘为内标物测定样品中联苯的含量。
二、实验原理
在一定的色谱操作条件下，每种物质有一定 的保留时间，而响应值与进样量成线性关系。 内标法也叫5nm处有最大吸收峰，其吸光度与 浓度的关系服从朗伯－比尔定律。
三、仪器与试剂
1.仪器： UV1600紫外分光光度计；10mL容量
2.
瓶7个；20 mL、5 mL吸量管各1支。
2. 试剂: 0.1mol•L-1NaOH溶液;苯甲酸钠(AR); 蒸 馏水。
四、实验步骤
1. 苯甲酸钠贮备液的配制：称量经过干燥的苯 甲酸钠适量于1000mL容量瓶中，用水溶 解，并定容。
实验 四
原子吸收光谱法测定 井水、河水中镁
一、实验目的 １.学会原子吸收光谱法测定金属元素的原理与
方法；
２.了解原子吸收分光光度计的基本构造，初步 熟悉其操作方法；
３.掌握火焰法测镁的条件选择。
二、实验原理 将样品试液吸入空气–乙炔火焰中，在火焰的高 温下，镁化合物离解为镁基态原子，基态原子蒸 气对镁空心阴极灯发射的特征谱线产生吸收。将 测得的试样溶液的吸光度扣除试剂空白的吸光度， 利用标准曲线法，确定试液中的镁含量。
1.00
定容（mL)
10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
10.0
C（ppm）
0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0
X1
X2
五、数据处理与分析
1. 标准曲线的绘制：以苯甲酸钠系列标准溶液 的吸光度为纵坐标，相应的浓度为横坐标， 绘制作A-C标准曲线。
2. 样品溶液中苯甲酸钠含量计算：从A-C标准 曲线上查出X值，从而求出样品中苯甲酸的 含量。
程”、“ 浓度单位”→“下一步”→选择 “标准系列样品个数”，输入“标准系列
样品
浓度值” →“下一步”→选择“未知样品 个数”
→ “完成”。
９.顺序打开空压机“风机开关”→ “工作开 关”，
10.打开乙炔钢瓶总阀，检查并调节出口压力为 0.05 ~ 0.09 Mpa之间（推荐压力0.06 Mpa）。
2. 苯甲酸钠工作溶液的配制：取20.00mL贮备 液稀释定容至1000mL。
3. 苯甲酸钠系列标准溶液的配制：分别取苯甲 酸钠工作溶液0-5.00 mL按下表配制。
容量瓶编号
123456
7
8
工作液（mL）
0 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 4.00
4.00
加入NaOH（mL） 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
2. 标准溶液配制； 3. 样品溶液的配制； 4. 进样并记录色谱图
五、数据处理与分析
P i(% A A iis )m m ism m iisA A iis100
实验 三 紫外吸收光谱法测定苯甲酸
一、实验目的
1. 了解紫外吸收光谱仪的基本构造与一般使用 2. 方法；
2. 能用于测定样品中苯甲酸的含量。
五、数据处理 采用标准曲线法处理，样品稀释倍数。
附一
TAS-986 原子吸收分光光度计火焰法操作规程
１.正确连接仪器及计算机各连线和插头，确认 仪器电源开关处于“关”位，再开启稳压器
电 源。
２.顺序打开打印机、显示器、计算机电源开 关，等待计算机处于“Windows”界面。
３.装上待测元素空心阴极灯，并记下灯位。打 开TAS-986主机电源开关，双击“AAwin”软
三、仪器与试剂
1.仪器:Shimadzu LC-10ATvp高效液相色谱仪；
2.
紫外吸收检测器（254mm）；C18柱，
3.
25cm×4.6mm；微量注射器；超声波
清
4.
洗器1台；溶剂过滤器1套。
2. 试剂:甲醇：色谱纯；二次蒸馏水；萘、联 苯：AR级。
四、实验步骤
1.色谱操作条件： 色谱柱：C18柱； 流动相：甲醇：水＝90：10 流速：1mL/min 检测波长：254nm 柱温：40℃； 进样量：20μL。
二、实验原理
在一定的色谱操作条件下，每种物质有一定 的保留时间，而响应值与进样量成线性关系。 外标法也叫标准曲线法。
三、仪器与试剂
1.仪器:Shimadzu LC-10ATvp高效液相色谱仪；
2.
紫外吸收检测器（254mm）；C18柱，
3.
25cm×4.6mm；微量注射器；超声波
清
4.
洗器1台；溶剂过滤器1套。
18. 整理实验室卫生、检查实验室水、气、电安 全。
附二 GGX-Ⅱ型原子吸收分光光度计操作规程
1. 开机前准备 ⑴将主机各操作钮置于适当位置； ⑵安装空心阴极灯。
2. 开机 ⑴依次开稳压器、总电源、调灯电流后预热 15～20分钟； ⑵选择分析线及狭缝宽度后，调灯及燃烧器 的位置，调负高压，用“状态检查（工作
“测量元素”、“样品名称”、“分析
15. 在测量表格上击右键→选择“表格设置” →
选择所需显示和打印的项目→在任务栏击 “打印”按钮→选择所需打印的内容→击 “确 定”打印相应内容。
16. 关闭乙炔钢瓶总阀，烧去管路中余气，待 火焰熄灭后按空压机“放水阀”放水→关
闭
17. 退出AAWin操作软件→关闭TAS-986主机 电源→关闭打印机、计算机、稳压器电源。
态
检查（工作选择）”应置“T（能量）”； ⑵临时停电，须先关闭燃气，再将各开关恢复
４.自检完成后，设定和选择工作灯和预热灯 → “下一步” →修改或输入正确的灯电流、 分光带宽、燃气流量、燃烧器高度和位置 → “下一步“寻峰”→ “下一步”→“完
成”。
５.在任务栏击“仪器”，选择“燃烧器参数”， 调 节火焰原子化器的前后、上下及角度位 置，其对准光路。
６.击“仪器”→选择“扣背景方式”→选择 “氘 灯”
11.击“点火”按钮点火→吸喷蒸馏水1 ~ 2 分钟 →
吸喷标准系列空白溶液击“校零”按钮自动调 零。
12.击“测量”按钮→顺序吸喷标准系列溶液并在 测
13. 吸喷未知样品溶液，击“开始”按钮测 量未
知样品。全部未知样品测量完毕后击 “终
止”按钮退出测量→吸喷蒸馏水1 ~ 2 分 钟清洗燃烧器。
14. 击“应用”按钮→选择“实验记录” → 输入