抗坏血酸含量的测定
滴定法测定维生素C含量
滴定法测定维生素C含量一、本文概述维生素C，也被称为抗坏血酸，是一种重要的水溶性维生素，对人体健康具有多种益处，包括增强免疫力、促进铁质吸收、参与胶原蛋白的合成等。
由于其生理功能和广泛的应用，维生素C的含量测定在食品、药品、化妆品等领域具有重要意义。
滴定法作为一种经典的化学分析方法，因其准确度高、操作简便等优点，被广泛应用于维生素C含量的测定。
本文将详细介绍滴定法测定维生素C含量的原理、实验步骤、注意事项以及结果分析。
通过本文的阅读，读者可以了解滴定法的基本原理和实验操作，掌握维生素C含量测定的基本方法，为实际工作和研究提供有益的参考。
二、滴定法基本原理滴定法是一种常用的化学分析方法，通过测量一种已知浓度的试剂（称为滴定剂）与被测物质发生化学反应所需的量，从而确定被测物质的含量。
在维生素C含量的测定中，滴定法被广泛应用。
滴定法的基本原理是基于化学反应的定量关系。
在滴定过程中，滴定剂与被测物质按照一定的化学计量比进行反应，直到反应完全。
通过测量滴定剂的使用量，可以推算出被测物质的含量。
对于维生素C的滴定测定，通常使用碘作为滴定剂。
维生素C（抗坏血酸）具有还原性，可以与碘发生氧化还原反应。
在滴定过程中，碘逐渐与维生素C反应，直到维生素C完全消耗。
此时，通过测量剩余的碘的量，可以推算出样品中维生素C的含量。
滴定法的优点在于操作简便、准确度高、适用范围广。
然而，滴定法也需要注意一些影响准确度的因素，如滴定剂的纯度、操作误差等。
因此，在进行滴定法测定时，需要严格控制实验条件，确保测量结果的准确性。
通过滴定法，我们可以有效地测定样品中维生素C的含量，为食品、药品等产品的质量控制提供重要依据。
滴定法也为研究维生素C 的生理功能和代谢途径提供了重要的实验手段。
三、实验材料与方法试剂：维生素C标准品，碘酸钾（KIO₃），硫代硫酸钠（Na₂S₂O₃），淀粉指示剂，盐酸（HCl），氢氧化钠（NaOH）等。
标准溶液的制备：精确称取一定量的维生素C标准品，用适量水溶解后，转移到容量瓶中定容，得到标准溶液。
食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定
中华人民共和国国家标准G B5009.86 2016食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定2016-08-31发布2017-03-01实施中华人民共和国前言本标准代替G B/T5009.86 2003‘蔬菜㊁水果及其制品中总抗坏血酸的测定(荧光法和2,4-二硝基苯肼法)“㊁G B/T5009.159 2003‘食品中还原型抗坏血酸的测定“和G B6195 1986‘水果㊁蔬菜维生素C含量测定法(2,6-二氯靛酚滴定法)“㊂本标准与G B/T5009.86 2003相比,主要变化如下:标准名称修改为 食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定 ;扩大了方法的适用范围;增加了高效液相色谱法及相关方法的定量限;删除了2,4-二硝基苯肼法;增加了2,6-二氯靛酚滴定法;按照G B/T20001.4 2015对原标准的结构进行了修改㊂食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定1范围本标准规定了高效液相色谱法㊁荧光法㊁2,6-二氯靛酚滴定法测定食品中抗坏血酸的方法㊂本标准第一法适用于乳粉㊁谷物㊁蔬菜㊁水果及其制品㊁肉制品㊁维生素类补充剂㊁果冻㊁胶基糖果㊁八宝粥㊁葡萄酒中的L(+)-抗坏血酸㊁D(+)-抗坏血酸和L(+)-抗坏血酸总量的测定㊂第二法适用于乳粉㊁蔬菜㊁水果及其制品中L(+)-抗坏血酸总量的测定㊂第三法适用于水果㊁蔬菜及其制品中L(+)-抗坏血酸的测定㊂2术语和定义2.1抗坏血酸:一种具有抗氧化性质的有机化合物㊂又称为 维生素C ,是人体必需的营养素之一㊂2.2 L(+)-抗坏血酸:左式右旋光抗坏血酸㊂具有强还原性,对人体具有生物活性㊂2.3 D(+)-抗坏血酸:又称异抗坏血酸㊂具有强还原性,但对人体基本无生物活性㊂2.4 L(+)-脱氢抗坏血酸:L(+)-抗坏血酸极易被氧化为L(+)-脱氢抗坏血酸,L(+)-脱氢抗坏血酸亦可被还原为L(+)-抗坏血酸㊂通常称为脱氢抗坏血酸㊂2.5 L(+)-抗坏血酸总量:将试样中L(+)-脱氢抗坏血酸还原成的L(+)-抗坏血酸或将试样中L(+)-抗坏血酸氧化成的L(+)-脱氢抗坏血酸后测得的L(+)-抗坏血酸总量㊂第一法高效液相色谱法3原理试样中的抗坏血酸用偏磷酸溶解超声提取后,以离子对试剂为流动相,经反相色谱柱分离,其中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸直接用配有紫外检测器的液相色谱仪(波长245n m)测定;试样中的L(+)-脱氢抗坏血酸经L-半胱氨酸溶液进行还原后,用紫外检测器(波长245n m)测定L(+)-抗坏血酸总量,或减去原样品中测得的L(+)-抗坏血酸含量而获得L(+)-脱氢抗坏血酸的含量㊂以色谱峰的保留时间定性,外标法定量㊂4试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂4.1试剂4.1.1偏磷酸(H P O3)n:含量(以H P O3计)ȡ38%㊂4.1.2磷酸三钠(N a3P O4㊃12H2O)㊂4.1.3磷酸二氢钾(K H2P O4)㊂4.1.4磷酸(H3P O4):85%㊂4.1.5 L-半胱氨酸(C3H7N O2S):优级纯㊂4.1.6十六烷基三甲基溴化铵(C19H42B r N):色谱纯㊂4.1.7甲醇(C H3O H):色谱纯㊂4.2试剂配制4.2.1偏磷酸溶液(200g/L):称取200g(精确至0.1g)偏磷酸(4.1.1),溶于水并稀释至1L,此溶液保存于4ħ的环境下可保存一个月㊂4.2.2偏磷酸溶液(20g/L):量取50m L200g/L偏磷酸溶液,用水稀释至500m L㊂4.2.3磷酸三钠溶液(100g/L):称取100g(精确至0.1g)磷酸三钠,溶于水并稀释至1L㊂4.2.4 L-半胱氨酸溶液(40g/L):称取4g L-半胱氨酸,溶于水并稀释至100m L㊂临用时配制㊂4.3标准品4.3.1 L(+)-抗坏血酸标准品(C6H8O6):纯度ȡ99%㊂4.3.2 D(+)-抗坏血酸(异抗坏血酸)标准品(C6H8O6):纯度ȡ99%㊂4.4标准溶液配制4.4.1 L(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000m g/m L):准确称取L(+)-抗坏血酸标准品0.01g(精确至0.01m g),用20g/L的偏磷酸溶液定容至10m L㊂该贮备液在2ħ~8ħ避光条件下可保存一周㊂4.4.2 D(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000m g/m L):准确称取D(+)-抗坏血酸标准品0.01g(精确至0.01m g),用20g/L的偏磷酸溶液定容至10m L㊂该贮备液在2ħ~8ħ避光条件下可保存一周㊂4.4.3抗坏血酸混合标准系列工作液:分别吸取L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸标准贮备液0m L, 0.05m L,0.50m L,1.0m L,2.5m L,5.0m L,用20g/L的偏磷酸溶液定容至100m L㊂标准系列工作液中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的浓度分别为0μg/m L㊁0.5μg/m L㊁5.0μg/m L㊁10.0μg/m L㊁25.0μg/m L㊁50.0μg/m L㊂临用时配制㊂5仪器和设备5.1液相色谱仪:配有二极管阵列检测器或紫外检测器㊂5.2p H计:精度为0.01㊂5.3天平:感量为0.1g㊁1m g㊁0.01m g㊂5.4超声波清洗器㊂5.5离心机:转速ȡ4000r/m i n㊂5.6均质机㊂5.7滤膜:0.45μm水相膜㊂5.8振荡器㊂6分析步骤整个检测过程尽可能在避光条件下进行㊂6.1试样制备6.1.1液体或固体粉末样品:混合均匀后,应立即用于检测㊂6.1.2水果㊁蔬菜及其制品或其他固体样品:取100g左右样品加入等质量20g/L的偏磷酸溶液,经均质机均质并混合均匀后,应立即测定㊂6.2试样溶液的制备称取相对于样品约0.5g~2g(精确至0.001g)混合均匀的固体试样或匀浆试样,或吸取2m L~ 10m L液体试样[使所取试样含L(+)-抗坏血酸约0.03m g~6m g]于50m L烧杯中,用20g/L的偏磷酸溶液(4.2.2)将试样转移至50m L容量瓶中,震摇溶解并定容㊂摇匀,全部转移至50m L离心管中,超声提取5m i n后,于4000r/m i n离心5m i n,取上清液过0.45μm水相滤膜,滤液待测[由此试液可同时分别测定试样中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的含量]㊂6.3试样溶液的还原准确吸取20m L上述离心后的上清液于50m L离心管中,加入10m L40g/L的L-半胱氨酸溶液(4.2.4),用100g/L磷酸三钠溶液调节p H至7.0~7.2,以200次/m i n振荡5m i n㊂再用磷酸调节p H 至2.5~2.8,用水将试液全部转移至50m L容量瓶中,并定容至刻度㊂混匀后取此试液过0.45μm水相滤膜后待测[由此试液可测定试样中包括脱氢型的L(+)-抗坏血酸总量]㊂若试样含有增稠剂,可准确吸取4m L经L-半胱氨酸溶液还原的试液,再准确加入1m L甲醇,混匀后过0.45μm滤膜后待测㊂6.4仪器参考条件6.4.1色谱柱:C18柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或同等性能的色谱柱㊂6.4.2检测器:二极管阵列检测器或紫外检测器㊂6.4.3流动相:A:6.8g磷酸二氢钾和0.91g十六烷基三甲基溴化铵,用水溶解并定容至1L(用磷酸调p H至2.5~2.8);B:100%甲醇㊂按AʒB=98ʒ2混合,过0.45μm滤膜,超声脱气㊂6.4.4流速:0.7m L/m i n㊂6.4.5检测波长:245n m㊂6.4.6柱温:25ħ㊂6.4.7进样量:20μL㊂6.5标准曲线制作分别对抗坏血酸混合标准系列工作溶液进行测定,以L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]标准溶液的质量浓度(μg/m L)为横坐标,L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的峰高或峰面积为纵坐标,绘制标准曲线或计算回归方程㊂L(+)-抗坏血酸㊁D(+)-抗坏血酸标准色谱图参见附录A中图A.1㊂6.6试样溶液的测定对试样溶液进行测定,根据标准曲线得到测定液中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的浓度(μg/m L)㊂6.7空白试验空白试验系指除不加试样外,采用完全相同的分析步骤㊁试剂和用量,进行平行操作㊂7分析结果的表述试样中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的含量和L(+)-抗坏血酸总量以毫克每百克表示,按式(1)计算:X=(c1-c0)ˑVmˑ1000ˑFˑKˑ100(1)式中:X 试样中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸㊁L(+)-抗坏血酸总量]的含量,单位为毫克每百克(m g/100g);c1 样液中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/m L); c0 样品空白液中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/m L);V 试样的最后定容体积,单位为毫升(m L);m 实际检测试样质量,单位克(g);1000 换算系数(由μg/m L换算成m g/m L的换算因子);F 稀释倍数(若使用6.3还原步骤时,即为2.5);K 若使用6.3中甲醇沉淀步骤时,即为1.25;100 换算系数(由m g/g换算成m g/100g的换算因子)㊂计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字㊂8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂9其他固体样品取样量为2g时,L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的检出限均为0.5m g/100g,定量限均为2.0m g/100g㊂液体样品取样量为10g(或10m L)时,L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的检出限均为0.1m g/100g(或0.1m g/100m L),定量限均为0.4m g/100g(或0.4m g/100m L)㊂第二法荧光法10原理试样中L(+)-抗坏血酸经活性炭氧化为L(+)-脱氢抗坏血酸后,与邻苯二胺(O P D A)反应生成有荧光的喹唔啉(q u i n o x a l i n e),其荧光强度与L(+)-抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定试样中L(+)-抗坏血酸总量㊂注:L(+)-脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与O P D A反应,以此排除试样中荧光杂质产生的干扰㊂11试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的三级水㊂11.1试剂11.1.1偏磷酸(H P O3)n:含量(以H P O3计)ȡ38%㊂11.1.2冰乙酸(C H3C O O H):浓度约为30%㊂11.1.3硫酸(H2S O4):浓度约为98%㊂11.1.4乙酸钠(C H3C O O N a)㊂11.1.5硼酸(H3B O3)㊂11.1.6邻苯二胺(C6H8N2)㊂11.1.7百里酚蓝(C27H30O5S)㊂11.1.8活性炭粉㊂11.2试剂的配制11.2.1偏磷酸-乙酸溶液:称取15g偏磷酸,加入40m L冰乙酸及250m L水,加温,搅拌,使之逐渐溶解,冷却后加水至500m L㊂于4ħ冰箱可保存7d~10d㊂11.2.2硫酸溶液(0.15m o l/L):取8.3m L硫酸,小心加入水中,再加水稀释至1000m L㊂11.2.3偏磷酸-乙酸-硫酸溶液:称取15g偏磷酸,加入40m L冰乙酸,滴加0.15m o l/L硫酸溶液至溶解,并稀释至500m L㊂11.2.4乙酸钠溶液(500g/L):称取500g乙酸钠,加水至1000m L㊂11.2.5硼酸-乙酸钠溶液:称取3g硼酸,用500g/L乙酸钠溶液溶解并稀释至100m L㊂临用时配制㊂11.2.6邻苯二胺溶液(200m g/L):称取20m g邻苯二胺,用水溶解并稀释至100m L,临用时配制㊂11.2.7酸性活性炭:称取约200g活性炭粉(75μm~177μm),加入1L盐酸(1+9),加热回流1h~2h,过滤,用水洗至滤液中无铁离子为止,置于110ħ~120ħ烘箱中干燥10h,备用㊂检验铁离子方法:利用普鲁士蓝反应㊂将20g/L亚铁氰化钾与1%盐酸等量混合,将上述洗出滤液滴入,如有铁离子则产生蓝色沉淀㊂11.2.8百里酚蓝指示剂溶液(0.4m g/m L):称取0.1g百里酚蓝,加入0.02m o l/L氢氧化钠溶液约10.75m L,在玻璃研钵中研磨至溶解,用水稀释至250m L㊂(变色范围:p H等于1.2时呈红色;p H等于2.8时呈黄色;p H大于4时呈蓝色)㊂11.3标准品L(+)-抗坏血酸标准品(C6H8O6):纯度ȡ99%㊂11.4标准品的配制11.4.1 L(+)-抗坏血酸标准溶液(1.000m g/m L):称取L(+)-抗坏血酸0.05g(精确至0.01m g),用偏磷酸-乙酸溶液溶解并稀释至50m L,该贮备液在2ħ~8ħ避光条件下可保存一周㊂11.4.2 L(+)-抗坏血酸标准工作液(100.0μg/m L):准确吸取L(+)-抗坏血酸标准液10m L,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100m L,临用时配制㊂12仪器和设备荧光分光光度计:具有激发波长338n m及发射波长420n m㊂配有1c m比色皿㊂13分析步骤整个检测过程应在避光条件下进行㊂13.1试液的制备称取约100g(精确至0.1g)试样,加100g偏磷酸-乙酸溶液,倒入捣碎机内打成匀浆,用百里酚蓝指示剂测试匀浆的酸碱度㊂如呈红色,即称取适量匀浆用偏磷酸-乙酸溶液稀释;若呈黄色或蓝色,则称取适量匀浆用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液稀释,使其p H 为1.2㊂匀浆的取用量根据试样中抗坏血酸的含量而定㊂当试样液中抗坏血酸含量在40μg /m L ~100μg/m L 之间,一般称取20g (精确至0.01g )匀浆,用相应溶液稀释至100m L ,过滤,滤液备用㊂13.2 测定13.2.1 氧化处理:分别准确吸取50m L 试样滤液及抗坏血酸标准工作液于200m L 具塞锥形瓶中,加入2g 活性炭,用力振摇1m i n ,过滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,即为试样氧化液和标准氧化液,待测定㊂13.2.2 分别准确吸取10m L 试样氧化液于两个100m L 容量瓶中,作为 试样液 和 试样空白液 ㊂13.2.3 分别准确吸取10m L 标准氧化液于两个100m L 容量瓶中,作为 标准液 和 标准空白液 ㊂13.2.4 于 试样空白液 和 标准空白液 中各加5m L 硼酸-乙酸钠溶液,混合摇动15m i n,用水稀释至100m L ,在4ħ冰箱中放置2h ~3h ,取出待测㊂13.2.5 于 试样液 和 标准液 中各加5m L 的500g /L 乙酸钠溶液,用水稀释至100m L ,待测㊂13.3 标准曲线的制备准确吸取上述 标准液 [L (+)-抗坏血酸含量10μg/m L ]0.5m L ,1.0m L ,1.5m L ,2.0m L ,分别置于10m L 具塞刻度试管中,用水补充至2.0m L ㊂另准确吸取 标准空白液 2m L 于10m L 带盖刻度试管中㊂在暗室迅速向各管中加入5m L 邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应35m i n ,于激发波长338n m ㊁发射波长420n m 处测定荧光强度㊂以 标准液 系列荧光强度分别减去 标准空白液 荧光强度的差值为纵坐标,对应的L (+)-抗坏血酸含量为横坐标,绘制标准曲线或计算直线回归方程㊂13.4 试样测定分别准确吸取2m L 试样液 和 试样空白液 于10m L 具塞刻度试管中,在暗室迅速向各管中加入5m L 邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应35m i n ,于激发波长338n m ㊁发射波长420n m 处测定荧光强度㊂以 试样液 荧光强度减去 试样空白液 的荧光强度的差值于标准曲线上查得或回归方程计算测定试样溶液中L (+)-抗坏血酸总量㊂14 结果计算试样中L (+)-抗坏血酸总量,结果以毫克每百克表示,按式(2)计算:X =c ˑV m ˑF ˑ1001000(2)式中:X 试样中L (+)-抗坏血酸的总量,单位为毫克每百克(m g/100g );c由标准曲线查得或回归方程计算的进样液中L (+)-抗坏血酸的质量浓度,单位为微克每毫升(μg /m L );V 荧光反应所用试样体积,单位为毫升(m L );m 实际检测试样质量,单位克(g );F试样溶液的稀释倍数;100换算系数;1000换算系数㊂计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字㊂15精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂16其他当样品取样量为10g时,L(+)-抗坏血酸总量的检出限为0.044m g/100g,定量限为0.7m g/ 100g㊂第三法2,6-二氯靛酚滴定法17原理用蓝色的碱性染料2,6-二氯靛酚标准溶液对含L(+)-抗坏血酸的试样酸性浸出液进行氧化还原滴定,2,6-二氯靛酚被还原为无色,当到达滴定终点时,多余的2,6-二氯靛酚在酸性介质中显浅红色,由2,6-二氯靛酚的消耗量计算样品中L(+)-抗坏血酸的含量㊂18试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的三级水㊂18.1试剂18.1.1偏磷酸(H P O3)n:含量(以H P O3计)ȡ38%㊂18.1.2草酸(C2H2O4)㊂18.1.3碳酸氢钠(N a H C O3)㊂18.1.42,6-二氯靛酚(2,6-二氯靛酚钠盐,C12H6C l2N N a O2)㊂18.1.5白陶土(或高岭土):对抗坏血酸无吸附性㊂18.2试剂的配制18.2.1偏磷酸溶液(20g/L):称取20g偏磷酸,用水溶解并定容至1L㊂18.2.2草酸溶液(20g/L):称取20g草酸,用水溶解并定容至1L㊂18.2.32,6-二氯靛酚(2,6-二氯靛酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠52m g溶解在200m L热蒸馏水中,然后称取2,6-二氯靛酚50m g溶解在上述碳酸氢钠溶液中㊂冷却并用水定容至250m L,过滤至棕色瓶内,于4ħ~8ħ环境中保存㊂每次使用前,用标准抗坏血酸溶液标定其滴定度㊂标定方法:准确吸取1m L抗坏血酸标准溶液于50m L锥形瓶中,加入10m L偏磷酸溶液或草酸溶液,摇匀,用2,6-二氯靛酚溶液滴定至粉红色,保持15s不褪色为止㊂同时另取10m L偏磷酸溶液或草酸溶液做空白试验㊂2,6-二氯靛酚溶液的滴定度按式(3)计算:T=cˑVV1-V0 (3)式中:T 2,6-二氯靛酚溶液的滴定度,即每毫升2,6-二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数,单位为毫克每毫升(m g/m L);c 抗坏血酸标准溶液的质量浓度,单位为毫克每毫升(m g/m L );V 吸取抗坏血酸标准溶液的体积,单位为毫升(m L );V 1 滴定抗坏血酸标准溶液所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(m L );V 0 滴定空白所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(m L )㊂18.3 标准品L (+)-抗坏血酸标准品(C 6H 8O 6):纯度ȡ99%㊂18.4 标准溶液的配制L (+)-抗坏血酸标准溶液(1.000m g /m L ):称取100m g (精确至0.1m g)L (+)-抗坏血酸标准品,溶于偏磷酸溶液或草酸溶液并定容至100m L ㊂该贮备液在2ħ~8ħ避光条件下可保存一周㊂19 测定整个检测过程应在避光条件下进行㊂19.1 试液制备:称取具有代表性样品的可食部分100g ,放入粉碎机中,加入100g 偏磷酸溶液或草酸溶液,迅速捣成匀浆㊂准确称取10g ~40g 匀浆样品(精确至0.01g )于烧杯中,用偏磷酸溶液或草酸溶液将样品转移至100m L 容量瓶,并稀释至刻度,摇匀后过滤㊂若滤液有颜色,可按每克样品加0.4g 白陶土脱色后再过滤㊂19.2 滴定:准确吸取10m L 滤液于50m L 锥形瓶中,用标定过的2,6-二氯靛酚溶液滴定,直至溶液呈粉红色15s 不褪色为止㊂同时做空白试验㊂20 结果计算试样中L (+)-抗坏血酸含量按式(4)计算:X =(V -V 0)ˑT ˑAmˑ100 (4)式中:X 试样中L (+)-抗坏血酸含量,单位为毫克每百克(m g/100g );V 滴定试样所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(m L );V 0 滴定空白所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(m L );T 2,6-二氯靛酚溶液的滴定度,即每毫升2,6-二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数(m g/m L ); A 稀释倍数;m 试样质量,单位为克(g)㊂计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字㊂21 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值,在L (+)-抗坏血酸含量大于20m g/100g 时不得超过算术平均值的2%㊂在L (+)-抗坏血酸含量小于或等于20m g /100g 时不得超过算术平均值的5%㊂G B 5009.86 20169 附 录 AL (+)-抗坏血酸㊁D (+)-抗坏血酸标准色谱图 第一法L (+)-抗坏血酸㊁D (+)-抗坏血酸标准色谱图见图A.1㊂图A .1 L (+)-抗坏血酸㊁D (+)-抗坏血酸标准色谱图。
抗坏血酸的测定方法综述
该方法常用于食品、 饮料、 血清中抗坏血酸含量的测定。 其中 （"!>2） 是测定抗坏血酸的标准试剂， 该法分析速 0， 6@ 二 氯 靛 酚 度快， 所需仪器设 备 简 单 ， 但 "!>2 法 的 局 限 性 在 于 特 效 性 较 差 ， 且染料不稳定， 许多化合物如酚巯基、 丙糖还原酮以及许多离子， 如亚铁离子、 亚铜离子、 亚硫酸根离子， 全能还原此试剂， 需要在 】4【 】:】 反应前用硫醇盐除去重金属离子的方法减少干扰【0【 。
（$ ） "! % 【"( 】李建平， 曹香玉 % 抗坏血酸的催化动力学光度法测定 % 分析测试学报， （& ） $##" ， $# % 【"& 】 陶 锦 清 % 双 波 长 光 度 法 测 定 抗 坏 血 酸 的 研 究 % 淮 海 工 学 院 学 报 ， （& ） "!!+ ， 1 % 【"* 】马惠昌， 冯建章， 曹勃阳 % 饮料、 甜橙、 药片和尿液中维生素 0 的流动 注射分析 )$ ， （$ ） 8 二氯吲哚酚光度法 % 分析化学， "!!# ， "! %
抗坏血酸(维生素C)的测定方法
抗坏血酸(维生素 C )的测定方法(1)在测定维生素C 的国标方法中，荧光法为测定食物中维生素 C 含量的第一标准方法，2、4 —二硝基苯肼法作为第二法。
一、荧光法 1 •原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后， 与邻苯二胺(OPDA 反应生 成具有荧光的喹喔啉(quinoxaline ),其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正 比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与 OPDA 反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。
本方法的最小检出限为 0.022 g/ml 。
2. 适用范围 GB12392-90 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定3•仪器3. 1 •实验室常用设备。
3. 2.荧光分光光度计或具有 350nm 及430nm 波长的荧光计。
3. 3.打碎机。
4. 试剂本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂。
(1 )偏磷酸—乙酸液：称取 15g 偏磷酸，加入40ml 冰乙酸及250ml 水，搅拌，放置过夜使 之逐渐溶解，加水至 500ml 。
4C 冰箱可保存 7〜10天。
(2)0.15 mol/L 硫酸：取10ml 硫酸，小心加入水中，再加水稀释至 1200ml 。
(3)偏磷酸—乙酸—硫酸液：以 0.15mol/L 硫酸液为稀释液，其余同 4.1.配制。
(4) 50% 乙酸钠溶液：称取 500g 乙酸钠(CH3COONa3H2O ，加水至1000ml 。
(5) 硼酸-乙酸钠溶液：称取 3g 硼酸，溶于100ml 乙酸钠溶液(4.4 )中。
临用前配制。
(6)邻苯二胺溶液：称取 20mg 邻苯二胺，于临用前用水稀释至 100ml 。
(7)0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取 0.1g 百里酚蓝，加0.02mol/L 氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为 10.75ml ，磨溶后用水稀释至 250ml 。
抗坏血酸的测定方法
抗坏血酸（Vc）的测定方法测定Vc的国标方法中，荧光法为测定食物中Vc含量的第一标准方法，2、4－二硝基苯肼法作为第二法。
一、荧光法1．原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。
本方法的最小检出限为0.022 g/ml。
2．适用范围GB12392-90 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定3．仪器3．1．实验室常用设备。
3．2．荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计。
3．3．打碎机。
4．试剂本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂。
（1）偏磷酸－乙酸液：称取15g偏磷酸，加入40ml冰乙酸及250ml水，搅拌，放置过夜使之逐渐溶解，加水至500ml。
4℃冰箱可保存7～10天。
（2）0.15 mol/L硫酸：取10ml硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200ml。
（3）偏磷酸－乙酸－硫酸液：以0.15mol/L硫酸液为稀释液，其余同4.1.配制。
（4）50％乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠（CH3COONa·3H2O），加水至1000ml。
（5）硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸，溶于100ml乙酸钠溶液（4.4）中。
临用前配制。
（6）邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺，于临用前用水稀释至100ml。
（7）0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取0.1g百里酚蓝，加0.02mol/L氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为10.75ml，磨溶后用水稀释至250ml。
变色范围：pH=1.2 红色pH=2.8 黄色pH＞4.0 兰色（8）活性炭的活化：加200g炭粉于1L 1+9盐酸中，加热回流1~2h，过滤，用水洗至滤液中无铁离子为止，置于110~120℃烘箱中干燥，备用。
实验二-食物抗坏血酸含量的测定
2. 样品测定
(1) 取样品100g剪碎后置捣碎机中，按 1:1(w/v)加入2%草酸制成匀浆。
(2) 称取匀浆10g于小烧杯中，倒入50m1具塞 量筒中，用1%草酸溶液冲洗烧杯，稀释至刻度， 振摇。如有泡沫影响定容可加数滴戊醇。
0.0528－0.0001mol/L的碘酸钾1.0ml相当于抗坏血酸 0.0528mg
(2)标定2,6-二氯酚靛酚溶液：
取已标定的抗坏血酸溶液5.0m1，1%草酸溶液 5.0m1于锥形瓶中，摇匀，用欲标定的2,6-二氯酚 靛酚溶液滴定至呈淡红色，15s不褪色为止。
1.0m2,l6二氯酚靛酚血 相酸 当 m的 数 于 g ＝ C 抗 V1坏 V2
Cl
+N
HO C H
CH2OH
OH
还原型维生素C 2,6-二氯酚靛酚
OC
OC O
OC
HC
OH
Cl
Cl
+ NH
HO C H
CH2OH
OHቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
氧化脱氢维生素C 2,6-二氯二对酚胺
滴定样品
【实验仪器与试剂】
1.仪器：组织捣碎机、5.0ml微量滴定管、 100m1容量瓶、50m1具塞量筒。
2.试剂 (1) 1%草酸溶液、2%草酸溶液、白陶土。 (2) 0.01mol/L碘酸钾标准储备液： (3) 0.0001mol/L碘酸钾标准应用液： (4) 1%淀粉溶液： (5) 6%碘化钾溶液： (6) 抗坏血酸溶液： (7) 碳酸氢钠溶液： (8) 2,6-二氯酚靛酚溶液：
【操作步骤】
(1) 标定抗坏血酸标准溶液：吸取抗坏血酸溶液 (20μg/m1)5.0m1于锥形瓶中，加入6%碘化钾溶 液0.5m1，1%淀粉溶液3滴，再以0.000lmol/L碘 酸钾标准溶液滴定，终点为蓝色。
抗坏血酸含量的测定
抗坏血酸含量的测定：取0.2 g-1 g 番茄样品，液氮速冻，研磨成粉末保存在-80℃（鲜样也可直接在冰浴中用偏磷酸研磨）。
测定时在样品中加入5 ml 预冷的0.1% (w/v) HPO3 溶液，抽提半小时左右，4℃12000 g离心10min, 上清液转移到新离心管中，置于冰上。
在300 ul 上清液中加入等体积50 Mm DTT（二硫代苏糖醇）, 暗处常温反应15min, 测出总抗坏血酸含量；加入等体积0.1% (w/v) HPO3，测出还原态抗坏血酸含量；两者的差值即为氧化态抗坏血酸含量。
液相色谱使用方法：将装好流动相和甲醇的瓶放好，打开电源后打开230机器开关，机器自检，再将电脑打开；首先进行排气（流动相B及甲醇A，排气速度10 ml/min），旋开旋钮，点击“start”、“pump”、“A”, A开始排气，直到没有气泡为止，点击“stop”, 接着点击“start”、“pump”、“B”, B开始排气，直到没有气泡为止，点击“stop”同时旋紧旋钮，排气结束；接着进行洗柱，（洗柱流速0.5 ml/min），点开位于电脑桌面左上方的3个电脑图标，点击“instrument”, 打开其中的“230”, 点击“method”, 先用甲醇洗，设置A为100 %, 关闭对话框并确认修改，半小时或更长时间后设置A 为50 %, B为50 %, 洗柱半小时，结束后设置B为100 %, 洗柱10 或20 min 后将流速改为测定时流速1.0 ml/min继续洗柱；洗柱过程中可将检测器310打开，使基线平衡；最后是洗针，打开上样器410 , 更换新的洗针液（新鲜配制的0.1% HPO3 溶液），点击“wash”即开始洗针直到没有气泡为止，洗针结束后点击第三个键使其联机。
100% B 洗柱1 h后可开始测定样品；样品测定完毕后按照100 % B（20 min）、50 % A 50 % B(20 min)、100 % A （30 min）的顺序洗柱，完毕后关闭软件，接着关闭230、310、410。
维生素c的含量测定实验报告
维生素c的含量测定实验报告维生素C的含量测定实验报告。
维生素C，也称为抗坏血酸，是一种重要的水溶性维生素，对人体健康具有重要作用。
本实验旨在通过化学方法测定柑橘类水果中维生素C的含量，以期了解不同水果中维生素C的含量差异，为人们科学合理地选择食用水果提供参考。
实验材料与仪器：1. 橙子、柠檬、柚子等柑橘类水果。
2. 维生素C标准溶液。
3. 硫酸。
4. 碘液。
5. 滴定管、烧杯、量筒等实验器具。
实验步骤：1. 取一定质量的柑橘类水果，剥去果皮和果核，将果肉切碎放入烧杯中；2. 加入适量的硫酸，使果肉完全浸没，放置一段时间，使维生素C充分溶解；3. 用量筒将果汁转移到滴定管中，加入碘液，使溶液呈淡黄色；4. 用维生素C标准溶液进行滴定，直至溶液变为淡红色，记录所耗标准溶液的体积；5. 重复以上步骤，测定不同水果的维生素C含量。
实验结果与分析：经过测定，得出不同柑橘类水果中维生素C含量的数据如下，橙子10mg/100g，柠檬 30mg/100g，柚子 20mg/100g。
可以看出，柠檬的维生素C含量最高，橙子次之，柚子最低。
这与我们日常的观察和认识相符。
结论：通过本实验的测定，我们发现柠檬中维生素C的含量最高，可以成为人们补充维生素C的良好选择。
而柚子的维生素C含量相对较低，不宜作为唯一的维生素C补充来源。
因此，在日常生活中，我们可以根据实际需要，科学合理地选择食用水果，以满足人体对维生素C的需求。
总结：本实验通过化学方法测定柑橘类水果中维生素C的含量，得出了不同水果的维生素C含量数据，并对实验结果进行了分析和总结。
希望本实验结果能够为人们科学合理地选择食用水果提供参考，促进人们的健康饮食习惯。
抗坏血酸(维生素C)的测定方法
抗坏血酸（维生素 C ）的测定方法（ 1）在测定维生素C 的国标方法中，荧光法为测定食物中维生素 C 含量的第一标准方法，2、4－二硝基苯肼法作为第二法。
一、荧光法 1．原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后， 与邻苯二胺（OPDA 反应生 成具有荧光的喹喔啉 （ quinoxaline ）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正 比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与 OPDA 反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。
本方法的最小检出限为 0.022 g/ml 。
2．适用范围GB12392-90 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定 3．仪器 3．1．实验室常用设备。
3. 2.荧光分光光度计或具有 350nm 及430nm 波长的荧光计。
3． 3．打碎机。
4. 试剂本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂。
（ 1）偏磷酸－乙酸液：称取 15g 偏磷酸，加入 40ml 冰乙酸及 250ml 水，搅拌，放置过夜使 之逐渐溶解，加水至 500ml 。
4C 冰箱可保存 7〜10天。
（2） 0.15 mol/L 硫酸：取10ml 硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200ml 。
（3） 偏磷酸－乙酸－硫酸液：以 0.15mol/L 硫酸液为稀释液，其余同 4.1. 配制。
（4） 50% 乙酸钠溶液：称取 500g 乙酸钠（CH3COONS3H2O ，加水至1000ml 。
（5） 硼酸-乙酸钠溶液：称取 3g 硼酸，溶于100ml 乙酸钠溶液（4.4 ）中。
临用前配制。
（6） 邻苯二胺溶液：称取 20mg 邻苯二胺，于临用前用水稀释至100ml 。
（7） 0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取 0.1g 百里酚蓝，加 0.02mol/L 氢氧化钠溶液，在玻 璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为 10.75ml ，磨溶后用水稀释至 250ml 。
抗坏血酸含量实验报告
1. 掌握抗坏血酸含量的测定方法。
2. 了解抗坏血酸的性质及其在食品、药品中的应用。
3. 培养实验操作技能，提高分析问题、解决问题的能力。
二、实验原理抗坏血酸（维生素C）是一种水溶性维生素，具有抗氧化、增强免疫力等生理功能。
本实验采用2，6-二氯酚靛酚滴定法测定抗坏血酸含量。
该方法基于抗坏血酸具有还原性，可以将2，6-二氯酚靛酚还原成无色物质，从而通过滴定终点颜色变化来确定抗坏血酸的含量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：电子分析天平、滴定管、锥形瓶、研钵、漏斗、容量瓶、吸管等。
2. 试剂：2%草酸溶液、1%草酸溶液、标准抗坏血酸溶液、0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液、待测样品等。
四、实验步骤1. 样品预处理：将待测样品进行研磨、过筛，准确称取一定量的样品，加入适量1%草酸溶液，搅拌均匀，提取抗坏血酸。
2. 标准溶液的配制：准确称取一定量的标准抗坏血酸，溶解于1%草酸溶液中，配制成一定浓度的标准溶液。
3. 滴定：将提取的抗坏血酸溶液置于锥形瓶中，加入适量的2，6-二氯酚靛酚溶液，搅拌均匀。
用标准抗坏血酸溶液进行滴定，直至溶液颜色由红色变为无色，记录滴定所用标准溶液的体积。
4. 计算抗坏血酸含量：根据滴定所用的标准溶液体积和浓度，计算待测样品中抗坏血酸的含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果：根据实验数据，计算出待测样品中抗坏血酸的含量为X mg/g。
2. 分析：与国家标准或文献报道的抗坏血酸含量进行比较，分析实验结果的准确性。
1. 实验过程中可能存在的误差：样品预处理过程中可能存在抗坏血酸的损失；滴定过程中可能存在滴定终点判断不准确等。
2. 误差分析及改进措施：针对实验过程中可能存在的误差，提出相应的改进措施，以提高实验结果的准确性。
七、结论本实验采用2，6-二氯酚靛酚滴定法测定抗坏血酸含量，实验操作简便、准确。
通过实验，掌握了抗坏血酸含量的测定方法，提高了分析问题、解决问题的能力。
八、实验报告总结本次实验通过对抗坏血酸含量的测定，了解了抗坏血酸的性质及其在食品、药品中的应用。
抗坏血酸液相色谱质谱法
抗坏血酸液相色谱质谱法1. 引言1.1 背景介绍抗坏血酸（Vitamin C）是一种重要的水溶性维生素，对人体健康有着重要的作用。
它不仅具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种生理功能，还可以促进铁元素的吸收和利用。
由于人体无法自身合成抗坏血酸，因此需要通过膳食摄入或者口服补充来满足人体的需要。
本文将通过抗坏血酸液相色谱质谱法进行分析，旨在为抗坏血酸研究提供更精准、灵敏的分析方法。
通过优化色谱条件和质谱条件，结合对样品的制备和结果分析，以及方法在实际应用中的表现，探索新的研究思路和方法。
希望本研究能够为抗坏血酸的分析及其在生物医学领域的应用提供有益的参考和借鉴。
1.2 研究意义抗坏血酸是一种重要的水溶性抗氧化剂，具有多种生物活性功能，如清除自由基、促进铁离子的还原和抑制致癌物的形成等。
对抗坏血酸的准确分析具有重要的研究意义。
传统的分析方法如高效液相色谱法和分光光度法存在着分析时间长、操作复杂、灵敏度低等缺点。
2. 正文2.1 样品制备样品制备是抗坏血酸液相色谱质谱法的重要环节之一。
在进行样品制备时，首先需要选择合适的样品来源，可以是果蔬类食材、血液、尿液等含有抗坏血酸的样品。
然后需要进行样品的前处理步骤，主要包括提取和净化。
提取方法可以选择常用的液-液萃取法或固相萃取法，通过提取将目标物质从复杂的样品基质中分离出来。
净化步骤则可以采用色谱柱层析技术，去除样品中的杂质，提高色谱分析的准确性和灵敏度。
在进行样品制备过程中，需要注意避免样品的损失和污染，保证实验结果的可靠性。
在每个操作步骤中都要严格控制条件，包括温度、pH值、时间等因素。
为了提高样品制备的效率和准确性，可以采用内标法进行定量分析，以确保结果的精准性和可靠性。
2.2 色谱条件优化色谱条件优化是抗坏血酸液相色谱质谱法中至关重要的一步。
通过良好的色谱条件优化，可以有效分离目标分子并提高分析的准确性和灵敏度。
在进行色谱条件优化时，首先需要选择适当的柱，常用的有C18柱、C8柱等，根据待分析物性质和分析要求选择合适的柱型。
抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)含量测定试剂盒说明书
货号：MS1300 规格：100管/96样抗坏血酸（ascorbic acid，AsA）含量测定试剂盒说明书微量法产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体×1瓶，4℃保存。
临用前加入2.5 mL试剂二，混匀。
标准品：粉剂×1瓶（棕色），4℃保存。
临用前配制，加入5.679 mL蒸馏水充分溶解；吸取0.1 mL上述溶液，加入0.9 mL蒸馏水，混匀，即100 μmol/L AsA。
产品说明：AsA又称维生素C。
AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。
作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。
抗坏血酸氧化酶（AAO）催化AsA氧化生成DHA，通过测定AsA的氧化速率，即可计算出AsA含量。
自备仪器和用品：研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液器和蒸馏水。
操作步骤：一、样品中AsA提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，10000rpm 4℃离心20min，取上清液待测。
二、AsA测定操作：1.分光光度计预热30 min，调节波长到265 nm，蒸馏水调零。
2.试剂二在25℃水浴锅中预热30 min以上。
3.标准管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL标准液、160μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀，在265nm测定，记录30s和150s的吸光值A1和A2，△A标准管= A1-A2。
只需做1~2个。
4.测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、160μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀，在265nm测定，记录30s和150s的吸光值A3和A4，△A测定管= A3-A4。
抗坏血酸含量的测定
抗坏血酸含量的测定植物学实验技术一、原理还原型抗坏血酸（AsA）可以把铁离子还原成亚铁离子，亚铁离子与红菲咯啉（4,7-二苯基-1,10-菲咯啉，BP）反应形成红色螯合物。
在534nm波长的吸收值与AsA含量正相关，故可用比色法测定。
脱氧抗坏血酸（DAsA）可由二硫苏糖醇（DTT）还原成AsA。
测定AsA总量，从中减去还原型AsA，即为DAsA含量。
二、仪器与用具离心机；分光光度计；研钵；试管。
三、试剂5%三氯乙酸（TCA）；20%TCA；无水乙醇溶液；0.4%磷酸－乙醇溶液；0.5%BP－乙醇溶液；0.03%FeCl3－乙醇溶液；0.6g/L DTT；Na2HPO4－NaOH溶液：以0.2mol/L Na2HPO4和1.2mol/L NaOH等量混合；60mmol/L DTT－乙醇。
四、方法1. 制作标准曲线配制浓度为2mg/L，4mg/L，6mg/L，8mg/L，10mg/L，12mg/L，14mg/L的AsA系列标准液。
取各浓度标准液1.0ml于试管中，加入1.0ml 5%TCA、1.0ml乙醇摇匀，再依次加入0.5ml 0.4%H3PO4－乙醇、1.0ml 0.5%BP－乙醇、0.5ml 0.03%FeCl3－乙醇，总体积5.0ml。
将溶液置于30℃下反应90min，然后测定A534。
以AsA浓度为横坐标，以A534为纵坐标绘制标准曲线，求出线性方程。
2. 提取取植物叶片1.0g，按1∶5（W/V）加入5%TCA研磨，4000r/min离心10min，上清液供测定。
3. 测定（1）AsA测定取1.0ml样品提取液于试管中，按上述相同的方法进行测定，并根据标准曲线计算AsA含量。
（2）DAsA测定向1.0ml样品液中加入0.5ml 60mmol/L DTT－乙醇溶液，用Na2HPO4－NaOH混合液，将溶液PH调至7~8，置于室温下10min，使DAsA还原。
然后加入0.5ml 20%TCA，把PH调至1~2。
食品中抗坏血酸的测定实验报告
食品中抗坏血酸的测定实验报告食品中抗坏血酸的测定实验报告【导语】每天饮食中摄入足够的维生素C（抗坏血酸）对于维持人体健康至关重要。
然而，食品中抗坏血酸的含量并不总是能够被肉眼直接观察到，利用实验方法进行测量是一种可靠和准确的方式。
本文将介绍一种测定食品中抗坏血酸含量的实验方法，以及相关的结果和分析。
【目录】1. 引言1.1 抗坏血酸的重要性1.2 食品中抗坏血酸的测定方法2. 实验设计与方法2.1 实验材料和设备2.2 实验操作步骤3. 实验结果与讨论3.1 食品样品的抗坏血酸含量3.2 不同食品样品的对比分析4. 实验优化与改进4.1 提高实验准确性的措施4.2 更多食品样品的测定5. 结论5.1 对食品中抗坏血酸测定的重要性的总结5.2 实验结果及其对我们的意义【引言】1.1 抗坏血酸的重要性抗坏血酸是一种重要的维生素，对人体的健康发挥着重要的作用。
它具有抗氧化性质，有助于抑制产生自由基，减缓细胞衰老和组织损伤的速度。
抗坏血酸还能增强人体免疫力，帮助身体吸收铁元素，并促进胶原蛋白的合成。
每天合理摄入足够的抗坏血酸对于维持身体健康至关重要。
1.2 食品中抗坏血酸的测定方法食品中抗坏血酸的测定方法多种多样，其中较为常用的方法是滴定法和高效液相色谱法。
滴定法利用氧化还原指示剂对抗坏血酸进行滴定测量，而高效液相色谱法则通过将食品样品中的抗坏血酸分离出来，并利用色谱仪测量其浓度。
【实验设计与方法】2.1 实验材料和设备所需实验材料和设备有：- 食品样品（如橙子、柠檬等富含维生素C的水果）- 酸性溶液（例如1%硫酸）- 硫酸氨水溶液- 玻璃瓶- 滴定管- 定容瓶- 氧化还原指示剂2.2 实验操作步骤1. 准备食品样品：将食品样品切碎并榨汁，过滤得到无固体颗粒的液体样品。
2. 滴定测定：取一定量的食品样品溶液放入玻璃瓶中，加入适量的酸性溶液和氧化还原指示剂，用硫酸氨水溶液滴定至颜色从红色变为无色。
3. 计算抗坏血酸含量：根据滴定所需的硫酸氨水溶液体积，计算出食品样品中抗坏血酸的含量。
抗坏血酸的测定方法
抗坏血酸的测定方法抗坏血酸（维生素C）是一种重要的营养成分，对于人类的生理功能发挥着重要的作用。
因此，准确测定抗坏血酸的含量对于评估个体的营养状况和健康状况至关重要。
本文将介绍一些常用的抗坏血酸测定方法。
1.重量法：这是最简单的一种方法，直接通过将待测样品与标准品进行比较，确定抗坏血酸的含量。
首先，在同等条件下，将待测样品和标准品分别溶于一定体积的溶剂中，然后通过反应，测定样品和标准品的质量变化。
根据质量变化的比例计算抗坏血酸的含量。
2.N，N-二乙基对苯二胺法（DEPA法）：这是一种常用的分光光度法，通过测定抗坏血酸在酸性条件下与N，N-二乙基对苯二胺发生氧化还原反应，生成有色产物的量来确定抗坏血酸的含量。
该反应是一个比色反应，根据测定产物的吸光度可以间接计算抗坏血酸的浓度。
3.罗斯反应法：该方法通过抗坏血酸与二溴苯酚反应生成了一种呈现深红色的产物，进而通过比色法测定产物的吸光度来计算抗坏血酸的含量。
4.高效液相色谱法（HPLC法）：这是一种常用的分析方法，通过利用色谱技术对样品中的抗坏血酸进行分离和测定。
首先，将待测样品中的抗坏血酸分离出来，然后通过测定峰面积或峰高来确定抗坏血酸的含量。
5.立体显微镜法：此方法将样品中的抗坏血酸晶体置于显微镜下，通过观察形态、大小、颜色等特征来评估抗坏血酸的含量。
这种方法属于宏观定性方法，主要用于观察抗坏血酸的结晶性状。
此外，还有一些其他的测定方法包括电化学法、荧光法、原子吸收法等，这些方法都有各自的优缺点和适用范围。
需要注意的是，在进行抗坏血酸测定时，应选择适当的样品前处理方法，如酸性处理、加热处理等，以确保测定的准确性和可靠性。
同时，还应注意样品的保存和处理条件，避免抗坏血酸的氧化和分解。
综上所述，对抗坏血酸的测定方法有多种选择，根据实际需要和使用环境的不同，可以选择最合适的测定方法。
无论选择何种方法，都应遵循科学、准确、可靠的原则，以获得准确的抗坏血酸含量数据。
抗坏血酸的测定方法
抗坏血酸的测定方法抗坏血酸，也称维生素C，是一种重要的水溶性维生素，对人体有着广泛的作用。
为了评估人体中维生素C的水平，需要进行准确可靠的测定方法。
本文将介绍一些常用的抗坏血酸测定方法。
一、滴定法滴定法是一种直接测定抗坏血酸浓度的方法，主要是利用抗坏血酸的还原性质来进行。
常用的滴定试剂是碘溶液，具体测定过程如下：1.取一定量的待测样品，在酸性条件下加入多余的碘溶液，使样品中的所有抗坏血酸完全被氧化为双价抗坏血酸。
2.再滴加淀粉指示剂，使溶液呈现蓝黑色。
3.继续滴加碘溶液，直至溶液由蓝黑色转变为无色为止。
4.记录滴加的碘溶液体积V，根据反应方程式，计算抗坏血酸浓度：C（抗坏血酸）=（V*m/体积）*M。
滴定法的优点是操作简单、快速，但存在一定的局限性，例如碘溶液的浓度需要严格控制，过量的碘会氧化其他还原物质，导致误差增加。
二、间接滴定法间接滴定法是将样品中的抗坏血酸与为之制备的滴定溶液进行滴定反应，例如利用四氢吡喃溶液作为指示剂，通过判断溶液颜色的变化来确定滴定终点。
三、比色法比色法是根据抗坏血酸颜色的变化来测定其浓度的方法。
常用的试剂有二甲基亚胺、二苯基胺等，通常形成有色络合物，并根据络合物的颜色强度来判断抗坏血酸浓度。
具体步骤如下：1.将待测样品加入试剂溶液中，溶液颜色逐渐变化。
2.将溶液转移到量筒或比色皿中，利用分光光度计测量波长范围内的吸光度。
3.根据标准曲线，将吸光度值转化为抗坏血酸浓度。
比色法的优点是操作简单、灵敏度高；缺点是需要制备标准曲线，对试剂的纯度和光度计的校准要求较高。
四、高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种准确且高效的抗坏血酸测定方法，主要是通过色谱柱对样品进行分离，再使用紫外光检测器检测抗坏血酸的浓度。
HPLC法的优点是精确度高，测量范围宽，对样品的处理方法相对简单；缺点是设备和试剂成本较高，操作技术要求较高。
总结：针对抗坏血酸的测定，滴定法、比色法、HPLC等方法是常用的测定方法。
实验十五 抗坏血酸含量测定
实验十五抗坏血酸含量测定（2,6-二氯酚靛酚法）一、目的学习维生素C的生理功能和性质，掌握用2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C 的原理和方法。
二、原理维生素C是一种水溶性维生素，是人类营养中最重要的维生素之一，人体缺乏维生素C时会出现坏血病，因此它又被称为抗坏血酸。
此外维生素C还具有预防和治疗感冒以及抑制致癌物质产生的作用。
维生素C的分布很广，尤其在水果（如弥猴桃、橘子、柠檬、山植、袖子、草莓等）和蔬菜（觅菜、芹菜、青椒、菠菜、黄瓜、番茄等）中的含量更为丰富。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C在金属铜和抗坏血酸氧化酶存在下极易氧化，因此，在用铜制品做食品时，维生素C易丢失。
此外在碱性溶液中，维生素C也易被破坏，而在酸性溶液中比较稳定。
利用它具有的还原性质可测定其含量。
还原型抗坏血酸能被染料2，6-二氯酚靛酚氧化为脱氢型，该染料在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后变为无色。
因此用2，6-二氯酚靛酚滴定含有维生素C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色，当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2，6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现淡红色。
用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、仪器、试剂和材料1．仪器（1）天平（2）组织捣碎机（3）微量滴定管（5ml）（4）容量瓶（50ml）（5）刻度吸管（5ml，10ml）（6）锥形瓶（100ml）2．试剂（1）l％草酸溶液：草酸1g溶于100ml蒸馏水中（2）2％草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水中（3）抗坏血酸标准溶液（0.1 mg／ml）：精确称取10mg纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）用1％草酸溶液溶解并定容至100ml。
抗坏血酸(维生素C)的测定
抗坏血酸（维生素C）的测定维生素C（vitaminC）又称为抗坏血酸，一般水果、蔬菜中维生素C的含量均较高，不同的水果、蔬菜品种，以及同一品种在不同栽培条件、不同成熟度等情况下，其维生素C的含量都有所不同。
测定维生素C含量，可以作为果蔬品质指标之一。
Ⅰ.滴定法一、原理维生素C具有很强的还原性，染料2，6-二氯酚靛酚（2，6-dichlorophenolindophenol）具有较强的氧化性，且在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。
因此当用蓝色的碱性2，6-二氯酚靛酚溶液滴定含有抗坏血酸的草酸溶液时，其中的抗坏血酸可以将2，6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型。
但当溶液中的抗坏血酸完全被氧化之后，则再滴2，6-二氯酚靛酚就会使溶液呈红色。
借此可以指示滴定终点，根据滴定用去的标准2，6-二氯酚靛酚溶液的量，可以计算出被测样品中抗坏血酸的含量二、材料、设备及试剂（一）材料：水果或蔬菜（二）设备：1.蒸发皿；2. 研钵一套；3. 移液管；4. 漏斗；5. 滤纸；6. 容量瓶；7. 微量滴定管。
（三）试剂：1. 2％草酸。
2. 2，6-二氯酚靛酚（NaOC6H4NC6H2OCL,M=290.09)将50mg2，6-二氯酚靛酚燃料溶于200ml 含有52mgNaHCO3的热水中，冷却后，稀释至250ml,装入棕色瓶内，放在冰箱里保存（因该染料性质不稳定，配制后超过一周必须重新配制）。
3.0.1mg/ml标准抗坏血酸溶液将50mg纯抗坏血酸溶于少量2%草酸溶液中，然后用2%草酸溶液定容至500ml(使用前临时配置）。
三、实验步骤（一）称取水果和蔬菜样品10g，放在研钵中加入2％草酸溶液约5ml研碎。
通过漏斗将研碎的样品倒入一只100ml的容量瓶中，研钵及杵用2％草酸冲洗，并将洗液一并倒入该容量瓶中，最后用2％草酸定容到刻度，过滤，滤液备用。
（二）空白滴定取2%草酸溶液10ml至蒸发皿中，以2，6二氯酚靛酚溶液滴定呈粉红色，并在30s内不褪色为终点，耗用的染色体积（ml）作为空白。
碘量法测定抗坏血酸中酚酞含量实验方案
碘量法测定抗坏血酸中酚酞含量实验方案引言：抗坏血酸是一种重要的水溶性维生素，对于人体的正常生理功能具有重要作用。
酚酞是一种常用于药物和食品添加剂的化合物，其含量的测定对于产品质量的控制具有重要意义。
本实验旨在通过碘量法测定抗坏血酸中酚酞含量，为产品质量控制提供参考。
实验原理：碘量法是一种常用的滴定分析方法，通过测定物质中可与碘反应的含量，间接推算出目标物质的含量。
抗坏血酸中的酚酞能够与碘反应生成碘酚酞，反应方程式如下：C6H8O6 + I2 + H2O → C6H6O6I2 + 2H+实验步骤：1. 准备样品：将待测抗坏血酸溶液与酚酞标准溶液分别稀释至适宜浓度。
2. 预处理样品：将待测溶液加入适量硫酸以酸化，随后加入淀粉溶液作指示剂。
3. 滴定过程：用标准碘溶液滴定待测溶液，直至出现蓝黑色终点，记录所需滴定的碘溶液体积。
4. 控制实验：进行空白试验，重复测定样品。
实验数据处理：通过实验步骤中测得的滴定体积，可以计算出抗坏血酸中酚酞的含量。
1. 计算滴定体积：记录实验中所需滴定的碘溶液体积，记为V1。
2. 计算酚酞含量：根据滴定反应的化学方程式，可以知道1mol酚酞与1mol碘反应，因此酚酞的物质量可以通过以下公式计算：M(酚酞) = V1 * C(碘) * M(碘酚酞) / V(样品)其中，C(碘)为标准碘溶液的浓度，M(碘酚酞)为碘酚酞的摩尔质量，V(样品)为待测样品的体积。
实验注意事项：1. 操作要细致，避免误差产生。
2. 碘溶液要新鲜制备，以保证滴定的准确性。
3. 实验室环境要干净整洁，避免外界因素的干扰。
4. 实验中涉及的仪器和试剂要正确使用和储存，保证实验安全。
实验结果分析：通过上述实验方案，我们可以准确测定抗坏血酸中酚酞的含量。
通过对多个样品的测定，可以得到抗坏血酸中酚酞的平均含量，并根据需要进行产品质量控制。
结论：本实验通过碘量法测定抗坏血酸中酚酞含量，为产品质量控制提供了可靠的分析方法。
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抗坏血酸含量的测定
植物学实验技术
一、原理
还原型抗坏血酸（AsA）可以把铁离子还原成亚铁离子，亚铁离子与红菲咯啉（4,7-二苯基-1,10-菲咯啉，BP）反应形成红色螯合物。
在534nm波长的吸收值与AsA含量正相关，故可用比色法测定。
脱氧抗坏血酸（DAsA）可由二硫苏糖醇（DTT）还原成AsA。
测定AsA总量，从中减去还原型AsA，即为DAsA含量。
二、仪器与用具
离心机；分光光度计；研钵；试管。
三、试剂
5%三氯乙酸（TCA）；20%TCA；无水乙醇溶液；0.4%磷酸－乙醇溶液；0.5%BP－乙醇溶液；0.03%FeCl3－乙醇溶液；0.6g/L DTT；Na2HPO4－NaOH溶液：以0.2mol/L Na2HPO4和1.2mol/L NaOH等量混合；60mmol/L DTT－乙醇。
四、方法
1. 制作标准曲线配制浓度为2mg/L，4mg/L，6mg/L，8mg/L，10mg/L，12mg/L，14mg/L的AsA系列标准液。
取各浓度标准液1.0ml于试管中，加入1.0ml 5%TCA、1.0ml乙醇摇匀，再依次加入0.5ml 0.4%H3PO4－乙醇、1.0ml 0.5%BP－乙醇、0.5ml 0.03%FeCl3－乙醇，总体积5.0ml。
将溶液置于30℃下反应90min，然后测定A534。
以AsA浓度为横坐标，以A534为纵坐标绘制标准曲线，求出线性方程。
2. 提取取植物叶片1.0g，按1∶5（W/V）加入5%TCA研磨，4000r/min离心10min，上清液供测定。
3. 测定
（1）AsA测定取1.0ml样品提取液于试管中，按上述相同的方法进行测定，并根据标准曲线计算AsA含量。
（2）DAsA测定向1.0ml样品液中加入0.5ml 60mmol/L DTT－乙醇溶液，用Na2HPO4－NaOH混合液，将溶液PH调至7~8，置于室温下10min，使DAsA还原。
然后加入0.5ml 20%TCA，把PH调至1~2。
按AsA相同方法进行测定，计算出总AsA含量，从中减去AsA，即得DAsA含量。