毛细管气相色谱法测定米氮平原料药中的有机溶剂残留量

毛细管气相色谱法测定米氮平原料药中的有机溶剂残留量
霍建富;申云飞;连建科;张慧兰
【摘要】建立了米氮平原料药中乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N，N-
二甲基甲酰胺等有机溶剂残留量毛细管气相色谱测定法。

采用 HP-1毛细管柱（30 m×0.53 mm，3μm），以二甲基亚砜为溶剂，氮气为载气，FID检测器进
行检测。

结果表明：以上5种有机溶剂的浓度（μg·mL-1）分别在100.008～1000.080、12.124～121.244、1.202～12.016、14.433～144.328、17.659～176.592的范围内与峰面积的线性关系良好，检出限（μg·mL-1）分别为1.03、0.83、0.47、0.32、1.04；平均回收率分别为99.21％、98.72％、99.38％、99.03％、99.29％；精密度实验相对标准偏差（RSD）均小于1％。

该方法灵敏、准确，可用于米氮平原料药中有机溶剂残留量的测定。

%To determine content
of residual organic solvents of ethanol,dichloromethane,chloroform,tetra-hydrofuran,N,N-dimethylformamide in mirtazapine,the capillary gas chromatography method was established. HP-1 capillary column (30
m×0.53 mm,3μm)was selected,the solvent was dimethyl sulfoxide,the carrier gas was nitrogen,and FID detector was used.The five kinds of organic solvents had good linear relationship at ran-ges of 100.008~1 000.080μg·mL-1,12.124~121.244μg·mL-1,1.202~12.016μg·mL-
1,14.433~144.328μg·mL-1 ,17.659~176.592μg·mL-1 ,respectively;the minimum detectable quantity were 1.03μg· mL-1,0.83μg·mL-1,0.47μg·mL-1,0.32μg·mL-1,1.04μg·mL-1,respectively;the average recoveries were
99.21%,98.72%,99.38%,99.03%,99.29%,respectively;the precision RSD was
all less than 1%.This method is sensitive and accurate,which can be used to determine the residual organic solvents in mirtazapine.
【期刊名称】《化学与生物工程》
【年(卷),期】2014(000)010
【总页数】4页(P74-77)
【关键词】米氮平;有机溶剂残留量;毛细管气相色谱法
【作者】霍建富;申云飞;连建科;张慧兰
【作者单位】山西康宝生物制品股份有限公司，山西长治 046011;山西康宝生物制品股份有限公司，山西长治 046011;山西康宝生物制品股份有限公司，山西长治 046011;山西康宝生物制品股份有限公司，山西长治 046011
【正文语种】中文
【中图分类】O657.71
米氮平是全球首个对去甲肾上腺素能和特异性5-羟色胺能受体双重阻滞作用的的抗抑郁药(NaSSA)。

由于该药在合成过程中使用了乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺，而这5种有机溶剂都是《中国药典》(2010年版)中规定控制限量的溶剂，有必要对其残留量进行检测。

作者根据溶剂的性质和初步分离的结果，建立了毛细管气相色谱法测定米氮平原料药中上述5种有机溶剂的残留量。

1 实验
1.1 试药、试剂与仪器
米氮平原料药(批号：110801、110901、110902)，自制。

二甲基亚砜、二氯甲烷、三氯甲烷，上海阿拉丁化学试剂有限公司；N,N-二甲基
甲酰胺(DMF)，天津北科化学品有限公司；四氢呋喃、乙醇，天津凯通化学试剂有限公司；以上试剂均为色谱纯。

GC2010 Plus型气相色谱仪，日本岛津公司；GA-380A型低噪音空气泵、GH-300型高纯氢发生器，北京中兴江利科技发展有限公司；F-502型顶空进样器，北京北分瑞利分析仪器有限责任公司；HP-1型毛细管色谱柱(30 m×0.53 mm，
3 μm)，FID检测器。

1.2 方法
1.2.1 色谱条件
HP-1毛细管柱(30 m×0.53 mm，3 μm)。

程序升温：40 ℃保持8 min；以
7 ℃·min-1的速率升温至120 ℃，保持5 min；再以30 ℃·min-1的速率升温至200 ℃，保持2 min。

进样口温度200 ℃；检测器温度250 ℃；载气为高纯氮气，流速3 mL·min-1；分流比1∶15；顶空瓶平衡温度90 ℃，平衡时间30 min。

顶空进样。

1.2.2 对照品溶液的配制
分别精密称取适量乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺，
用二甲基亚砜稀释成每毫升约含乙醇500 μg、二氯甲烷60 μg、三氯甲烷6 μg、四氢呋喃72 μg、N,N-二甲基甲酰胺88 μg的溶液，作为对照品溶液。

1.2.3 供试品溶液的配制
取米氮平适量(约1 000 mg)，精密称定，置于10 mL量瓶中，用二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

1.2.4 贮备溶液的配制
分别精密称取适量乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺，
用二甲基亚砜稀释成每毫升中约含乙醇5 000.40 μg、二氯甲烷606.22 μg、三氯甲烷60.08 μg、四氢呋喃721.64 μg、N,N-二甲基甲酰胺882.96 μg的溶液，作为贮备溶液。

2 结果与讨论
2.1 专属性实验
取空白溶剂二甲基亚砜及乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲
酰胺分别进样。

结果发现，二甲基亚砜、乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺峰的保留时间分别为18.925 min、3.995 min、5.843 min、9.780 min、10.500min、17.003 min。

取空白溶剂二甲基亚砜及乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲
酰胺混合物进样，色谱图如图1所示。

Ⅰ.乙醇Ⅱ.二氯甲烷Ⅲ.三氯甲烷Ⅳ.四氢呋喃Ⅴ.N,N-二甲基甲酰胺Ⅵ.二甲基亚砜图1 混合有机溶剂的气相色谱Fig.1
Gas chromatogram of mixed organic solvent
由图1可以看出，各溶剂间分离度良好。

空白溶剂对测定无干扰。

2.2 检出限实验
取各溶剂精密称定，用二甲基亚砜逐步稀释，按信噪比3∶1进行实验。

结果表明，乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺的检出限(μg·mL-1)分别为1.03、0.83、0.47、0.32、1.04。

2.3 精密度实验
取对照品溶液重复进样6次，测得乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-
二甲基甲酰胺峰面积的RSD值分别为0.70％、0.91％、0.30％、0.23％、0.45％。

表明该检测方法的精密度良好。

2.4 线性关系
精密量取贮备溶液0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL，分别置于
10 mL量瓶中，用二甲基亚砜稀释，得到含不同浓度(μg·mL-1)乙醇(100.008、250.020、500.040、750.060、1 000.080)、二氯甲烷(12.124、30.311、
60.622、90.933、121.244)、三氯甲烷(1.202、3.004、6.008、9.012、12.016)、四氢呋喃(14.433、36.082、72.164、108.246、144.328)、N,N-二甲基甲酰胺(17.659、44.148、88.296、132.444、176.592)的溶液。

按色谱条件顶空进样，以峰面积(A)对浓度(c)进行线性回归。

线性方程及相关系数见表1。

表1 线性关系实验结果Tab.1 The results of linear relationship experiment 溶剂线性方程相关系数R乙醇A=1062 3c-41970 9991二氯甲烷A=198
9c+174 680 9994三氯甲烷A=787 93c+80 1230 9986四氢呋喃
A=993 6c+534 930 9993N，N⁃二甲基甲酰胺A=692 53c-3294 50 9981
由表1可知，乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺的浓
度(μg·mL-1)分别在100.008～1 000.080、12.124～121.244、1.202～12.016、14.433～144.328、17.659～176.592范围内与峰面积的线性关系良好。

2.5 回收率实验
取适量(约0.5 g)米氮平原料药(批号：110801)共9份，精密称定，置于5 mL量
瓶中，先用适量二甲基亚砜溶解，再分别加入各贮备溶液0.4 mL、0.5 mL、
0.6 mL，用二甲基亚砜定容，摇匀，作为高、中、低3个档次浓度的供试品溶液。

按色谱条件顶空进样，计算回收率及相对标准偏差，结果见表2。

由表2可看出，乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺的平
均回收率分别为99.21％、98.72％、99.38％、99.03％、99.29％，相对标准偏
差(RSD)均小于1％。

2.6 样品检测
取3批米氮平原料药样品(批号110801、110901、110902)按上述方法测定有机溶剂残留量，结果见表3。

2.7 讨论
(1)在人用药物注册技术要求国际协调会(ICH)的有机溶剂残留量指导原则中，规定二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺为第二类应该限制使用的溶剂，本实验参照《中国药典》(2010年版)二部的指标要求，规定溶剂的限度为：二氯甲烷0.06％、三氯甲烷0.006％、四氢呋喃0.072％、N,N-二甲基甲酰胺0.088％。

虽然乙醇为第三类溶剂，毒副作用很小，但还是应该控制，规定限度为0.5％。

表2 回收率实验结果Tab.2 The results of recovery experiment贮备溶液样品质量/g样品中的溶剂量/μg溶剂加入量/μg溶剂测定总量/μg回收率/％平均回收率/％RSD/％0 500502000 282012 21100 600 502302000 281967 0598 340 501102000 281973 3498 650 503102500 352490 5399 61乙醇0 504002500 352459 3198 3699 210 800 500902500 352495 2899 800 501803000 422997 4699 900 502203000 422969 8098 980 503103000 422961 0298 690 50050243 00237 7197 820 50230243 00240 3198 900 50110243 00241 8999 540 50310303 75301 2099 16二氯甲烷0 50400303 75295 7197 3598 720 750 50090303 75299 1698 490 50180364 50361 2099 090 50220364 50362 5899 470 50310364 50359 4998 630 5005024 04824 02199 890 5023024 04823 68498 480 5011024 04823 97799 700 5031030 06029 97399 71三氯甲烷0v5040030 06029 91099 5099 380 460 5009030 06029 85499 320 5018036 07235 75099 110 5022036
07235 70098 970 5031036 07235 98799 760 50050288 36285 0898 860 50230288 36283 1298 180 ******** 36286 7999
460 50310360 45356 9299 02四氢呋喃0 50400360 45357 4599 1799 030 430 50090360 45356 1098 790 50180432 54427
4398 820 50220432 54430 4099 500 50310432 54430 0499
420 50050353 44349 5898 910 50230353 44348 0998 490 50110353 44353 4299 990 50310441 80439 1099 39N，N⁃二甲基甲酰胺0 50400441 80440 4299 6999 290 510 50090441 80441 3299 890 50180530 16524 4898 930 50220530 16526 7499
350 50310530 16524 9099 01
表3 样品中有机溶剂残留量测定结果/％Tab.3
The detection results of the residual organic solvents in sample/％批号乙醇二氯甲烷三氯甲烷四氢呋喃N，N⁃二甲基甲酰胺1108010 016未检出未检出未检出未检出1109010 016未检出未检出未检出未检出1109020 016未检出未检出未检出未检出
(2)本实验采用HP-1毛细管色谱柱，通过程序升温使5种有机溶剂得到完全分离。

40 ℃保持8 min，使沸点低的溶剂乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃先分离；然后以7 ℃·min-1的速率升温至120 ℃，保持5 min，使沸点高的溶剂N,N-二
甲基甲酰胺、二甲基亚砜分离，并尽可能地保证基线平稳；再以30 ℃·min-1的
速率升温至200 ℃，保持2 min，使沸点更高的杂质溶剂分离，以确保测量准确。

(3)本实验选用二甲基亚砜作溶剂，其与样品和被测的5种有机溶剂均能互溶，且
不干扰被测组分的测定。

(4)要确保供试品溶液气-液相达到平衡，顶空时间不易过长，一般为30～45 min。

过长可能导致顶空瓶的气密性变差，过短达不到平衡效果。

本实验选择的顶空时间
为30 min。

3 结论
建立了米氮平原料药中乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰
胺等有机溶剂残留量毛细管气相色谱测定法。

结果表明：以上5种有机溶剂的含
量(μg·mL-1)分别在100.008～1 000.080、12.124～121.244、1.202～12.016、14.433～144.328、17.659～176.592的范围内与峰面积的线性关系良好，检出
限(μg·mL-1)分别为1.03、0.83、0.47、0.32、1.04；平均回收率分别为99.21％、98.72％、99.38％、99.03％、99.29％；精密度实验相对标准偏差(RSD)均小于1％。

该方法灵敏、准确，可用于米氮平原料药中有机溶剂残留量的测定。

参考文献：
[1]吉同琴，赵砚荣，魏佳，等.顶空毛细管气相色谱法测定替加环素中的残留溶剂[J].西北药学杂志，2012,27(2)：123-124.
[2]赵会娟，史义静，刘琨.抗抑郁药种类概述及发展趋势[J].河北化工,2010，33(2)：24-26.
[3]陈安兰，熊方武.抗抑郁药米氮平[J].国外医药——合成药物生化药制剂分
册,1997,18(6):335-337.
[4]孙振晓，于相芬，孙波.米氮平的临床应用及其不良反应[J].精神医学杂志，2012,25(4):310-313.
[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].2010年版.北京:中国医药科技
出版社，2010:31-32，61-65.。