14种中药乙醇提取物对大肠杆菌的体外抑菌试验
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麦康凯琼脂培养基院 取麦康凯琼脂粉末 12.5g袁加入装有 250mL 蒸馏水的锥形瓶中袁加热 煮沸溶解并搅拌袁121℃高温灭菌 20min 后备用遥 未冷却凝固时分别倒入 12 个灭菌干燥的培养皿 中袁等待琼脂冷却凝固遥 冷却后 4℃冷藏备用遥
MH 肉汤培养液院MH 肉汤粉末 7.5g袁 加入装 有 250mL 蒸馏水的锥形瓶中加热煮沸溶解并搅 拌袁121℃高温灭菌 20min 后备用遥 冷却后 4℃冷 藏备用遥 1.2.2 菌液的制备 取冷冻保存的塑料冻存管袁立即放置在 38~40 ℃ 水浴中快速复苏并适当摇动遥 直到内部结冰完全 溶解为止袁一般约 50~100s袁开启塑料冻存管袁吸 取菌液移植于麦康凯琼脂培养基上袁37 ℃恒温培 养 18~24h遥 挑取该麦康凯琼脂培养基上的单个菌
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落接种至另一麦康凯琼脂培养基上进行菌种复
圆园17 年第 5 期（总第 198 期）
上袁室温干燥 5min 后袁用无菌打孔器打孔袁以无
苏遥 采用平板计数法进行细菌计数袁勾取平板上 菌落 1~2 个袁 置于 MH 肉汤中袁37 ℃恒温振荡培
在人和家畜的生活环境中存在着各种细菌袁 而长期使用化学药物会导致药物毒副作用尧细菌
试 耐药性尧 药物残留所致的畜产品安全等问题袁且 验 抗生素渐渐不能满足畜产品无公害化生产的要 研 求遥 而中草药是我国特有的中医药理论和实践的 究 产物袁价格低廉袁药源广泛袁具有广泛的发展潜
力袁它主要是通过调整机体功能状态来实现抗菌 作用[1]遥 大部分中草药具有毒副作用小尧无残留尧 无耐药性的特点[2]袁中药作为替代化学药物解决 药残和抗药性的重要途径袁越来越受到重视遥 为 了寻求抗菌作用强的药物袁我们对十四种中药进 行了体外抑菌试验遥 1 材料与方法 1.1 试验材料
菌针头挑出孔内琼脂遥 滴少量的未凝固的琼脂于 孔内封底袁防止药液从孔底流走遥 以无水乙醇为
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
养至对数生长期后进行细菌计数遥 菌液 4 ℃冰箱
溶剂对照袁每个孔滴药液 100μL袁重复 2 或 3 次袁
保存备用袁临用前稀释为 106CFU窑mL-1遥
放置 30min 后袁37℃培养箱中培养 18~24h 后观
1.2.3 中药提取物的制备
察抑菌圈大小袁求平均值遥
1.2.3.1 白芍尧乌梅尧苦参尧蒲公英药材各称取 10g袁
1.4 结果判定标准
粉粹成粉末袁70%乙醇加热回流提取袁 合并提取
打孔法院抑菌圈直径≥20mm 为极敏袁抑菌圈
液遥 取滤渣后袁50~60℃下旋转蒸发至膏状物[3]袁用
直径在 15～19mm 为高敏袁抑菌圈直径在 10～14
圆园17 年第 5 期（总第 198 期）
14 种中药乙醇提取物
对大肠杆菌的体外抑菌试验
中图分类号院 S853.74
南苹瑶袁王小莺 *
渊江西农业大学动物科技学院袁江西南昌 330045冤
文献标识码院B
文章编号院1003-8655 渊2017冤 05-0006-03
摘要院目的院丁香等 14 味中药对大肠埃希菌 ATCC25922 的体外抑菌试验遥 方法院选用 14 种中药渊白芍尧乌梅尧苦参尧蒲公英尧 丁香尧黄连尧山楂尧黄柏尧大黄尧连翘尧柴胡尧穿心莲尧郁金尧白芷冤袁分别采用乙醇回流法制备出生药浓度为 1g/L遥前 4 种中药提 取出膏状物全部用无水乙醇溶解袁后 10 种中药精密称取两份分别用无水乙醇尧70%乙醇溶解袁通过琼脂打洞法测定不同中 药对大肠杆菌的抑制作用遥 结果院连翘尧柴胡尧穿心莲尧郁金尧白芷的中药提取物对大肠杆菌几乎没有抑菌作用袁白芍尧乌梅尧 苦参尧蒲公英的中药提取物用无水乙醇溶解在琼脂打洞法中平均抑菌圈分别为 17.7mm尧26.0mm尧16.7mm尧12.0mm袁丁香尧黄 连尧 山楂尧 黄柏尧 大黄的中药提取物用无水乙醇溶解对大肠杆菌的平均抑菌圈为 17.0mm尧10.5mm尧21.5mm尧15.5mm尧 17.5mm曰用 70%乙醇溶解所测平均抑菌圈分别为 21.5mm尧23.5mm尧23.0mm尧21.5mm尧21.5mm遥 结论院9 种中药的乙醇提取物 对大肠杆菌的体外抑菌强度大小为乌梅＞山楂＞白芍＞大黄＞丁香＞苦参＞黄柏＞蒲公英＞黄连曰 中药膏状物提取物用 70%乙醇溶解可以获得更大的抑菌圈袁说明溶解于水中的中药提取物也含有抑菌成分不容忽视遥 关键词院中药曰大肠杆菌曰乙醇提取曰琼脂打洞法
无水乙醇以生药浓度为 1g/L 在超声波下溶解配
为中敏袁抑菌圈直径＜10mm 为低敏袁无抑菌圈为
成药液遥 过滤除菌袁置冰箱 4℃冷藏保存遥 1.2.3.2 丁香尧黄连尧山楂尧黄柏尧大黄尧连翘尧柴胡尧
耐药[5]遥 2 结果与分析
穿心莲尧郁金尧白芷药材各称取 10g袁分别粉粹成
2.1 无水乙醇溶解中药提取物体外抑菌试验
方向为兽医药理学及毒理学袁
E-mail:2280425155@. 通讯作者院王小莺渊1969-冤袁女袁江西省袁硕士袁副教授袁
E-mail:wangxiaoying6969@.
微生物菌种保藏中心遥 仪器与设备院旋转蒸发器渊RE5298A,上海亚
荣生化仪器厂冤曰粉碎机(DFT-100袁温岭市林大机 械有限公司)曰 双人单面净化工作台渊SW-CJ-2D, 苏州净化设备有限公司冤曰生化培养箱渊韶关市泰 宏医疗器械有限公司冤曰 立式压力蒸汽灭菌器 渊LDZX-50KBS,上海申安医疗器械厂冤曰数显恒温 水浴锅渊HH-4袁国华电器有限公司冤曰移液枪遥 1.2 方法 1.2.1 培养基的制备
药材院选用白芍尧乌梅尧苦参尧蒲公英尧丁香尧 黄连尧山楂尧黄柏尧大黄尧连翘尧柴胡尧穿心莲尧郁 金尧白芷 14 种中药袁均购于江西农业大学医院遥
菌种院 大肠埃希菌 ATCC25922 购于广东省
基金项目院江西省科技厅重点研发计划项目
渊20161BBF60088冤 作者简介院南苹瑶渊1995-冤袁女袁山西省袁硕士研究生袁研究
粉末袁70%乙醇加热回流提取袁合并滤液袁精密量
白芍尧乌梅尧苦参尧蒲公英乙醇提取物对大肠
取 2 份分别用无水乙醇尧70%乙醇溶解袁生药浓度
MH 肉汤培养液院MH 肉汤粉末 7.5g袁 加入装 有 250mL 蒸馏水的锥形瓶中加热煮沸溶解并搅 拌袁121℃高温灭菌 20min 后备用遥 冷却后 4℃冷 藏备用遥 1.2.2 菌液的制备 取冷冻保存的塑料冻存管袁立即放置在 38~40 ℃ 水浴中快速复苏并适当摇动遥 直到内部结冰完全 溶解为止袁一般约 50~100s袁开启塑料冻存管袁吸 取菌液移植于麦康凯琼脂培养基上袁37 ℃恒温培 养 18~24h遥 挑取该麦康凯琼脂培养基上的单个菌
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落接种至另一麦康凯琼脂培养基上进行菌种复
圆园17 年第 5 期（总第 198 期）
上袁室温干燥 5min 后袁用无菌打孔器打孔袁以无
苏遥 采用平板计数法进行细菌计数袁勾取平板上 菌落 1~2 个袁 置于 MH 肉汤中袁37 ℃恒温振荡培
在人和家畜的生活环境中存在着各种细菌袁 而长期使用化学药物会导致药物毒副作用尧细菌
试 耐药性尧 药物残留所致的畜产品安全等问题袁且 验 抗生素渐渐不能满足畜产品无公害化生产的要 研 求遥 而中草药是我国特有的中医药理论和实践的 究 产物袁价格低廉袁药源广泛袁具有广泛的发展潜
力袁它主要是通过调整机体功能状态来实现抗菌 作用[1]遥 大部分中草药具有毒副作用小尧无残留尧 无耐药性的特点[2]袁中药作为替代化学药物解决 药残和抗药性的重要途径袁越来越受到重视遥 为 了寻求抗菌作用强的药物袁我们对十四种中药进 行了体外抑菌试验遥 1 材料与方法 1.1 试验材料
菌针头挑出孔内琼脂遥 滴少量的未凝固的琼脂于 孔内封底袁防止药液从孔底流走遥 以无水乙醇为
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
养至对数生长期后进行细菌计数遥 菌液 4 ℃冰箱
溶剂对照袁每个孔滴药液 100μL袁重复 2 或 3 次袁
保存备用袁临用前稀释为 106CFU窑mL-1遥
放置 30min 后袁37℃培养箱中培养 18~24h 后观
1.2.3 中药提取物的制备
察抑菌圈大小袁求平均值遥
1.2.3.1 白芍尧乌梅尧苦参尧蒲公英药材各称取 10g袁
1.4 结果判定标准
粉粹成粉末袁70%乙醇加热回流提取袁 合并提取
打孔法院抑菌圈直径≥20mm 为极敏袁抑菌圈
液遥 取滤渣后袁50~60℃下旋转蒸发至膏状物[3]袁用
直径在 15～19mm 为高敏袁抑菌圈直径在 10～14
圆园17 年第 5 期（总第 198 期）
14 种中药乙醇提取物
对大肠杆菌的体外抑菌试验
中图分类号院 S853.74
南苹瑶袁王小莺 *
渊江西农业大学动物科技学院袁江西南昌 330045冤
文献标识码院B
文章编号院1003-8655 渊2017冤 05-0006-03
摘要院目的院丁香等 14 味中药对大肠埃希菌 ATCC25922 的体外抑菌试验遥 方法院选用 14 种中药渊白芍尧乌梅尧苦参尧蒲公英尧 丁香尧黄连尧山楂尧黄柏尧大黄尧连翘尧柴胡尧穿心莲尧郁金尧白芷冤袁分别采用乙醇回流法制备出生药浓度为 1g/L遥前 4 种中药提 取出膏状物全部用无水乙醇溶解袁后 10 种中药精密称取两份分别用无水乙醇尧70%乙醇溶解袁通过琼脂打洞法测定不同中 药对大肠杆菌的抑制作用遥 结果院连翘尧柴胡尧穿心莲尧郁金尧白芷的中药提取物对大肠杆菌几乎没有抑菌作用袁白芍尧乌梅尧 苦参尧蒲公英的中药提取物用无水乙醇溶解在琼脂打洞法中平均抑菌圈分别为 17.7mm尧26.0mm尧16.7mm尧12.0mm袁丁香尧黄 连尧 山楂尧 黄柏尧 大黄的中药提取物用无水乙醇溶解对大肠杆菌的平均抑菌圈为 17.0mm尧10.5mm尧21.5mm尧15.5mm尧 17.5mm曰用 70%乙醇溶解所测平均抑菌圈分别为 21.5mm尧23.5mm尧23.0mm尧21.5mm尧21.5mm遥 结论院9 种中药的乙醇提取物 对大肠杆菌的体外抑菌强度大小为乌梅＞山楂＞白芍＞大黄＞丁香＞苦参＞黄柏＞蒲公英＞黄连曰 中药膏状物提取物用 70%乙醇溶解可以获得更大的抑菌圈袁说明溶解于水中的中药提取物也含有抑菌成分不容忽视遥 关键词院中药曰大肠杆菌曰乙醇提取曰琼脂打洞法
无水乙醇以生药浓度为 1g/L 在超声波下溶解配
为中敏袁抑菌圈直径＜10mm 为低敏袁无抑菌圈为
成药液遥 过滤除菌袁置冰箱 4℃冷藏保存遥 1.2.3.2 丁香尧黄连尧山楂尧黄柏尧大黄尧连翘尧柴胡尧
耐药[5]遥 2 结果与分析
穿心莲尧郁金尧白芷药材各称取 10g袁分别粉粹成
2.1 无水乙醇溶解中药提取物体外抑菌试验
方向为兽医药理学及毒理学袁
E-mail:2280425155@. 通讯作者院王小莺渊1969-冤袁女袁江西省袁硕士袁副教授袁
E-mail:wangxiaoying6969@.
微生物菌种保藏中心遥 仪器与设备院旋转蒸发器渊RE5298A,上海亚
荣生化仪器厂冤曰粉碎机(DFT-100袁温岭市林大机 械有限公司)曰 双人单面净化工作台渊SW-CJ-2D, 苏州净化设备有限公司冤曰生化培养箱渊韶关市泰 宏医疗器械有限公司冤曰 立式压力蒸汽灭菌器 渊LDZX-50KBS,上海申安医疗器械厂冤曰数显恒温 水浴锅渊HH-4袁国华电器有限公司冤曰移液枪遥 1.2 方法 1.2.1 培养基的制备
药材院选用白芍尧乌梅尧苦参尧蒲公英尧丁香尧 黄连尧山楂尧黄柏尧大黄尧连翘尧柴胡尧穿心莲尧郁 金尧白芷 14 种中药袁均购于江西农业大学医院遥
菌种院 大肠埃希菌 ATCC25922 购于广东省
基金项目院江西省科技厅重点研发计划项目
渊20161BBF60088冤 作者简介院南苹瑶渊1995-冤袁女袁山西省袁硕士研究生袁研究
粉末袁70%乙醇加热回流提取袁合并滤液袁精密量
白芍尧乌梅尧苦参尧蒲公英乙醇提取物对大肠
取 2 份分别用无水乙醇尧70%乙醇溶解袁生药浓度