分析方法验证方案

异烟肼含量测定分析法验证案验证原因：验证类型：
新工程验证再验证
其它
预验证
回忆性验证转移验证
法描述：
本分析法为中国药典2021版二部法。

为确保其检测结果准确，对该分析法的专属性、精细度〔系统精细度、法精细度、中间精细度〕、线性和围、准确度、耐用性进展评价。

验证依据：
中国药典2021年版分析法〔295页〕
验证时间：
2010年07月09日～2010年07月10日
验证工程组成员及职责：
验证容:-
验证前准备：
a)人员培训：
b)仪器设备、标准品和试剂：
仪器设备
标准品和试剂
c)样品
验证过程：
色谱条件
色谱条件
色谱柱：agilent ODS-2 长度：250cm ，径：4.6mm ，填料C18 ，填料粒度：5µm 检测波长：262nm，带宽30
柱温：25℃
进样量：20µl
流速：1.0ml/min
流动相A：0.02mol/l磷酸氢二钠溶液〔用磷酸调pH至6.0〕，流动相B：甲醇
A:B=85:15
停顿时间：12min
1.系统精细度
1.1.溶液配制
系统精细度溶液：取异烟肼10mg，置100ml容量瓶中，精细称量，用水溶解并稀释至刻度。

1.2验证过程及结果
系统精细度溶液连续进样6次，记录其异烟肼峰面积、保存时间。

可承受标准：异烟肼峰面积RSD≤2.0%,保存时间RSD≤2.0%。

结论：
2.重现性试验〔法精细度〕
2.1.溶液配制
2.1.1.对照溶液：取异烟肼工作标准品10mg，精细称量，置100ml容量瓶中，用水溶解并
稀释至刻度。

2.1.2.法精细度溶液：取异烟肼样品10mg置100ml容量瓶中，精细称定，用水溶解并稀
释至刻度。

用此法配置同一批号的样品溶液6份。

2.2.验证程序及结果
工作标准品溶液进2针，样品溶液各进2针。

记录异烟肼峰面积，计算样品含量。

可承受标准：异烟肼含量的RSD≤2.0%。

结论：
3.线性和围
3.1.溶液配制
3.1.1.a供试品溶液：取异烟肼50mg，置100ml容量瓶中，精细称量，用水溶解并稀释至
刻度，混匀，即得。

3.1.2.线性点溶液：精细移取a供试品溶液5ml、2ml、1ml、分别置10ml容量瓶中，用水
稀释至刻度，得到浓度约为50ug/ml〔d供试品溶液〕、100ug/ml〔c供试品溶液〕、250ug/ml〔b供试品溶液〕、500ug/ml 〔a供试品溶液〕的线性点溶液，再精细移取1ml b供试品溶液1ml置100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，得到浓度约为2.5ug/ml 〔e供试品溶液〕。

3.2.验证程序及结果
按色谱条件分别对线性点溶液进展分析，每个溶液进样1次。

以浓度为X轴，主峰峰面积平均值为Y轴，画出线性图，求出回归程，计算线性相关系数R。

可承受标准：R≥0.999
结论：
4.准确度
4.1.溶液配制
4.1.1.对照溶液：取异烟肼10mg，置100ml容量瓶中，精细称量，用水溶解并稀释至刻度，
混匀，即得。

4.1.2.准确度溶液：以对照溶液浓度为100%，配置80%、100%和120%浓度的准确度溶液。

即分别取同一批异烟肼样品8mg、10mg、12mg至100ml容量瓶中，精细称量，用水
溶解并稀释至刻度。

每个浓度的准确度溶液配制3份。

4.2.验证程序及结果
按照色谱条件分别对对照溶液和准确度溶液进展分析，每个溶液各进2针，按外标法计算准确度溶液中异烟肼含量，计算其回收率。

可承受标准：该定量法的回收率应为98.0%～102.0%。

回收率RSD≤2.0%。

结论：
5.耐用性
5.1.溶液配制
5.1.1.混合溶液：精细称取10mg异烟酸和10mg异烟肼样品置100ml容量瓶中，用水溶解
并稀释至刻度，混匀，即得。

5.2.验证过程及结果
按以下条件改变法，原条件溶液和改变色谱条件的顺序进样，计算异烟肼的理论塔板数,拖尾因子。

计算相对保存时间RRT偏差绝对值。

a.改变柱温为23℃和27℃
b.改变流速为0.9ml/min和1.1ml/min。

c.改变0.02mol/l磷酸氢二钠溶液(磷酸调pH至6.0)与甲醇配比为87:13和83:17。

d.选用同一填料的两个不同色谱柱比较
可承受标准：理论塔板数大于4000，拖尾因子在0.9～1.4之间。

别离度R＞1.5，相对保存时间RRT偏差绝对值不大于20％。

结论：
验证结论：验证结果见表
偏差及处理：
分析法验证过程中出现的所有偏差都要记录并有效评估和处理。

再验证
再验证期为3年。