2,6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
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（三）器具
1、锥形瓶（50~100毫升）
2、移液管（1毫升，10毫升）
3、容量瓶（100毫升）
4、微量滴定管（3毫升或5毫升）
四、操作步骤
（一）提取
水洗净新鲜的水果，用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎，加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤，弃去最初几毫升滤液。
三、材料、试剂与器具
（一）新鲜的水果
（二）试剂
1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。
2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。
3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。
4、0.01% 2,6一二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6一二氯酚靛于300毫升含有104克NaHCO3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。
维生素C是具有L系糖构型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。
维生素C（抗坏血酸）具有很强的还原性，能将染料2，6一二氯酚靛酚还原成无色，而抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸。
氧化型2，6一二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，当用此染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸未全部氧化前，则滴下染料立即被还原成无色，一旦溶液中的抗坏血酸全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时为滴定终点，即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被氧化完全，从滴定时2，6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。
式中：V1为滴定样品液所用去染料体积（ml）;
V2为滴定空白所用去染料体积（ml）;
V3为样品测定时所用滤液体积（10ml）;
V为样品提取液的总体积；
K为1毫升染料能氧化维生素C的量（mg）;
W为称取样品重量(g )。
五、注意事项
1.滴定时速度要尽可能快，因样品内一般都含有一些能将2，6一二氯酚靛酚还原的其它物质，尽管它们还原比染料的能力一般较维生素C弱。
5.在生物组织内和组织提取物内，抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。它们同样地具有维生素C的生理作用，但不能将2，6一二氯酚靛酚还原脱色。
6.在生物组织提取物中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成困难。应加入适量白陶土乳液进行脱色过滤后再滴定。
六、实验报告
保留每次测定的有效数据，计算样品维生素C的含量并讨论分析结果的准确性，科学ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ。
2.滴定所用染料要在1~4ml之间，否则须增减样品量或将提取液适当稀释。
3.抗坏血酸易溶于水，也极易被氯化，故提取抗坏血酸时，须抑制组织中氧化酶活性。2%草酸可抑制该酶，1%草酸则不能，三氯醋酸、偏磷酸、盐酸有同样功效。Fe2+能还原二氯酚靛酚，如用醋酸（8%即可）则Fe2+不会很快与染料起作用。
4.样品提取液应避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化。
2、样品的测定：
取50ml锥形瓶2个，分别加入滤液10ml，用已标定的2，6一二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min，空白滴定方法同前，记录两次滴定所得的结果，求平均值。
（三）结果计算
根据实验数据计算出每100g样品的维生素C含量：
维生素C（mg/100g样品）= ×100
七、思考题
1、要测得准确的维生素C值，实验过程中应注意哪些操作步骤，为什么？
2、在测定过程中，样品的草酸提取液为什么不能暴露在光下？
3、试简述维生素C的生理意义。
讲解法
讲解法
演示法
实践法
实 施
情 况
小 结
教研室主任签名：2013年月日
成都医学院教案续页
教学过程、内容及时间分配
教学方法与手段
2，6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
一、目的
1．学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法。
2．掌握微量滴定法的基本操作技术。
二、原理
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。
教学重点
难点及其
解决方案
重点：定量测定维生素C的原理和方法
难点：滴定终点的判断
解决方案：通过实验让学生了解定量测定维生素C的原理和方法，并能采取过滤等方法排除影响判断滴定终点的干扰因素。
参 考
资 料
人民卫生出版社出版，梁康主编《卫生理化检验技术》
华中科技大学出版社出版，运珞珈、朱业湘主编《卫生理化检验与微生物学检验》
成都医学院教案首页
2012-2013年第2学期2010级预防医学本科专业任课教师：杨威特
课程
卫生学检测技术
题目
2，6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
学时
讲授
实验
5
练习
行课时间
2013年6月7日第1至5节
课次
第8次
教材
自编教材
教 具
电子课件
教学
目的
要求
掌握：定量测定维生素C的原理和方法
熟悉：微量滴定法的基本操作技术
（二）滴定
1、标定2，6一二氯酚靛酚溶液的浓度：
量取标准维生素C溶液1ml,加9ml 1%草酸加入50ml锥形瓶中，同时量取10ml草酸加入另一个50ml锥形瓶中作空白对照，用已标定的2，6一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。记录所用的毫升数，计算每毫升2，6一二氯酚靛酚所能氧化维生素C的毫克数（K）。
氧化型26一二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色在中性或碱性溶液中呈蓝色当用此染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时在抗坏血酸未全部氧化前则滴下染料立即被还原成无色一旦溶液中的抗坏血酸全部被氧化时则滴下的染料立即使溶液显示粉红色此时为滴定终点即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被氧化完全从滴定时26一二氯酚靛酚标准液的消耗量可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量
1、锥形瓶（50~100毫升）
2、移液管（1毫升，10毫升）
3、容量瓶（100毫升）
4、微量滴定管（3毫升或5毫升）
四、操作步骤
（一）提取
水洗净新鲜的水果，用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎，加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤，弃去最初几毫升滤液。
三、材料、试剂与器具
（一）新鲜的水果
（二）试剂
1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。
2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。
3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。
4、0.01% 2,6一二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6一二氯酚靛于300毫升含有104克NaHCO3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。
维生素C是具有L系糖构型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。
维生素C（抗坏血酸）具有很强的还原性，能将染料2，6一二氯酚靛酚还原成无色，而抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸。
氧化型2，6一二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，当用此染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸未全部氧化前，则滴下染料立即被还原成无色，一旦溶液中的抗坏血酸全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时为滴定终点，即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被氧化完全，从滴定时2，6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。
式中：V1为滴定样品液所用去染料体积（ml）;
V2为滴定空白所用去染料体积（ml）;
V3为样品测定时所用滤液体积（10ml）;
V为样品提取液的总体积；
K为1毫升染料能氧化维生素C的量（mg）;
W为称取样品重量(g )。
五、注意事项
1.滴定时速度要尽可能快，因样品内一般都含有一些能将2，6一二氯酚靛酚还原的其它物质，尽管它们还原比染料的能力一般较维生素C弱。
5.在生物组织内和组织提取物内，抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。它们同样地具有维生素C的生理作用，但不能将2，6一二氯酚靛酚还原脱色。
6.在生物组织提取物中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成困难。应加入适量白陶土乳液进行脱色过滤后再滴定。
六、实验报告
保留每次测定的有效数据，计算样品维生素C的含量并讨论分析结果的准确性，科学ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ。
2.滴定所用染料要在1~4ml之间，否则须增减样品量或将提取液适当稀释。
3.抗坏血酸易溶于水，也极易被氯化，故提取抗坏血酸时，须抑制组织中氧化酶活性。2%草酸可抑制该酶，1%草酸则不能，三氯醋酸、偏磷酸、盐酸有同样功效。Fe2+能还原二氯酚靛酚，如用醋酸（8%即可）则Fe2+不会很快与染料起作用。
4.样品提取液应避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化。
2、样品的测定：
取50ml锥形瓶2个，分别加入滤液10ml，用已标定的2，6一二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min，空白滴定方法同前，记录两次滴定所得的结果，求平均值。
（三）结果计算
根据实验数据计算出每100g样品的维生素C含量：
维生素C（mg/100g样品）= ×100
七、思考题
1、要测得准确的维生素C值，实验过程中应注意哪些操作步骤，为什么？
2、在测定过程中，样品的草酸提取液为什么不能暴露在光下？
3、试简述维生素C的生理意义。
讲解法
讲解法
演示法
实践法
实 施
情 况
小 结
教研室主任签名：2013年月日
成都医学院教案续页
教学过程、内容及时间分配
教学方法与手段
2，6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
一、目的
1．学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法。
2．掌握微量滴定法的基本操作技术。
二、原理
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。
教学重点
难点及其
解决方案
重点：定量测定维生素C的原理和方法
难点：滴定终点的判断
解决方案：通过实验让学生了解定量测定维生素C的原理和方法，并能采取过滤等方法排除影响判断滴定终点的干扰因素。
参 考
资 料
人民卫生出版社出版，梁康主编《卫生理化检验技术》
华中科技大学出版社出版，运珞珈、朱业湘主编《卫生理化检验与微生物学检验》
成都医学院教案首页
2012-2013年第2学期2010级预防医学本科专业任课教师：杨威特
课程
卫生学检测技术
题目
2，6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
学时
讲授
实验
5
练习
行课时间
2013年6月7日第1至5节
课次
第8次
教材
自编教材
教 具
电子课件
教学
目的
要求
掌握：定量测定维生素C的原理和方法
熟悉：微量滴定法的基本操作技术
（二）滴定
1、标定2，6一二氯酚靛酚溶液的浓度：
量取标准维生素C溶液1ml,加9ml 1%草酸加入50ml锥形瓶中，同时量取10ml草酸加入另一个50ml锥形瓶中作空白对照，用已标定的2，6一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。记录所用的毫升数，计算每毫升2，6一二氯酚靛酚所能氧化维生素C的毫克数（K）。
氧化型26一二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色在中性或碱性溶液中呈蓝色当用此染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时在抗坏血酸未全部氧化前则滴下染料立即被还原成无色一旦溶液中的抗坏血酸全部被氧化时则滴下的染料立即使溶液显示粉红色此时为滴定终点即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被氧化完全从滴定时26一二氯酚靛酚标准液的消耗量可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量